CT扫描与痰液肿瘤标志物检测对周围型肺癌的早期诊断价值

目的 :研究CT扫描与肺活检后痰液脱落细胞的端粒酶活性和p16甲基化检测对早期周围型肺癌的诊断意义。方法 :用PCR TRAP ELSA半定量及PCR TRAP银染定性法、甲基化相关的PCR法 ,前瞻性检测 5 5例经CT扫描而发现的肺部孤立性结节 (直径≤ 30mm)、并疑诊为早期周围型肺癌的患者 (T1N0 M0 ) ,行CT导向肺活检 (纤维支气管镜肺活检 33例 ,经皮肺针刺活检 2 2例 )后 2 4h内痰液脱落细胞端粒酶活性及p16甲基化状态 ,并将检测结果与组织病理进行对照研究。结果 :CT扫描对周围型肺癌诊断的敏感性为 10 0 % ,但特异性只有 6 1 8% (34/ 5 5 )。端粒酶活性的敏感性为 79 4 % ,特异性为 90 5 % ,准确性为 83 6 % ;p16甲基化的敏感性为 32 4 % ,特异性为 10 0 % ,准确性为 5 8 2 % ,3者联合检测的敏感性为 86 1% ,特异性为 90 5 % ,准确性为 87 3%。对照组端粒酶阳性率 9 5 % (2 / 2 1) ,无1例检测到p16甲基化。结论 :CT扫描与端粒酶活性、p16甲基化联合可弥补痰液的细胞学检查的不足 ,提高肺癌痰检的敏感性 ,有助于周围型肺癌早期诊断和肺部孤立性结节的鉴别诊断     

支气管肺泡灌洗液端粒酶活性检测对周围型肺癌诊断意义

目的　探讨支气管肺泡灌洗液 (BALF)脱落细胞端粒酶活性的检测 ,对周围型肺癌的诊断意义。方法　采用PCR TRAP ELISA半定量法及PCR TRAP银染定性法 ,检测 5 7例经螺旋CT扫描而发现并疑诊为周围型肺癌患者的纤维支气管镜BALF中脱落细胞端粒酶活性 ,并将检测结果与病理组织检查结果进行对照。结果　肺癌组BALF脱落细胞端粒酶活性检测的敏感性为 86.1% ,特异性为 90 .5 % ,准确性为 87.8%。结论　BALF脱落细胞端粒酶活性检测有助于对周围型肺癌的早期诊断     

肺癌脱落细胞端粒酶活性检测的临床意义

目的：探讨肺癌脱落细胞端粒酶活性检测的临床意义。方法：收集63例肺癌患者和31例非肺癌肺疾病患者的支气管肺泡灌洗液，同时行刷片和灌洗液细胞学检查；34例肺癌患者痰液，31例非肺癌肺疾病患者痰液；彩PCR－TRAP银染法检测端粒酶活性。结果：肺癌和非肺癌肺疾病支气管肺泡灌洗液端粒酶活性阳性率分别为76．2％（48／63）和6．5％（2／31），P＜0．01；肺癌支气管肺泡灌洗液端粒酶活性阳性率高于刷片细胞学阳性率（58．7％，37／63），P＞0．05；高于灌洗液细胞学阳性率（14．7％，9／63），P＜0．01。肺癌痰液和非肺癌肺疾病痰液端粒酶活性阳性率分别为29．4％（10／34），3．2％（1／31），P＜0．01。结论：肺癌端粒酶活性检测有较高的特异性和敏感性，可应用于肺癌的临床诊断。支气管肺泡灌洗液和痰液端粒酶检测能提高肺癌检出率。     

肺癌纤维支气管镜刷检标本端粒酶活性检测

背景与目的:年来研究表明,端粒酶激活在肺瘤发生中起重要作用,但端粒酶活性水平检测用于肺癌小标本研究尚不多。本实验旨在探讨纤维支气管镜检查刷检标本端粒酶活性检测对肺癌诊断的价值。方法：应用TRAP－PCR－ELISA方法和TRAP－PCR－银染法检测66例纤维支 管镜刷检标本端粒酶活性,并分析其对诊断肺癌的价值。结果：56例肺癌纤支镜刷检标本端粒酶活性测定,阳性检出率为78．6％（44／56）,高于细胞学检查阳性率46．4％（26／56）（P＜0．005）,两者联合实验诊断肺癌敏感性93．7％。中央型肺癌纤支镜刷检标本端粒酶活性阳性率82．5％（33／40）,高于周围型68．8％（11／16）,但差异无显著性（P＞0．05）。定性法测定端粒酶活性阳性率与定量法相近,但发现定量法检测ΔA值较低的定性检测为弱阳性,条带较少,且条带不清晰。结论：端粒酶活性是肺癌诊断的分子生物学标志物之一。与细胞学检查相结合可提高肺癌的早期诊断率。     

检测痰脱落细胞p16基因甲基化对周围型肺癌的诊断价值

目的　探讨检测痰脱落细胞p16基因甲基化对周围型肺癌的诊断价值。方法　应用甲基化特异性PCR(methylation specificPCR ,MSP)对 5 0例周围型肺结节患者及 2 0例正常人痰脱落细胞p16基因甲基化改变进行检测 ,将检测结果与术后病理报告相对照。结果　周围型肺癌痰脱落细胞 p16MSP阳性率( 2 7/ 44 ,61.4%)明显高于良性周围型肺结节 ( 1/ 6,16.7%)及正常人 ( 3 / 2 0 ,15 .0 %) ( χ2 值分别为 4.2 81和11.869,P <0 .0 5 ) ,良性周围型肺结节 p16MSP阳性率与正常人无显著性差异 ( χ2 =0 .13 6,P >0 .0 5 )。鳞癌和腺癌患者痰脱落细胞 p16MSP阳性率无显著性差异 ( χ2 =3 .416,P >0 .0 5 )。如果以痰脱落细胞 p16MSP阳性作为判断肺结节恶性的标准 ,其诊断周围型肺癌的阳性预测值为 96.4%,阴性预测值 2 2 .7%,灵敏度 61.4%,特异度 83 .0 %。结论　检测痰脱落细胞 p16基因甲基化对周围型肺癌具有辅助诊断价值     

甲基化特异性PCR检测肺癌p16基因甲基化及其临床意义

目的：探讨甲基化特异性聚合酶链反应(methylation—specific PCR，MSPCR)在肺癌临床诊断中的应用价值。方法：选取56例肺部疾病住院患者手术切除的病变肺组织和相应的支气管肺泡灌洗液(BALF)及痰标本，其中32例为肺癌．24例为良性肺部疾病。标本经一般处理，PCR扩增后，产物经电泳EB染色，紫外灯下观察。结果：32例肺癌组织标本中，14例(43．8％)在p16基因启动子区域呈现异常甲基化，其中9例(643％)在相应的BALF中检测出甲基化存在。5例(35．8％)在相应的痰标本中也检测出甲基化存在。24例良性肺部疾病，其中肺囊肿10例，肺结核14例。手术切除标本和BALF及痰标本中均未检测出p16基因甲基化存在。结论：MSPCR技术对肺癌患者BALF及痰标本中的异常甲基化检测具有高度特异性，是一项有潜力的肺癌早期诊断新技术。     

肺癌患者组织样品中p16基因的异常甲基化

目的 分析肺癌患者组织样品中p16基因启动子区域异常甲基化的改变情况,评价该指标作为辅助临床诊断的分子标记物的价值。方法 运用甲基化特异性PCR技术,检测51例原发性肺癌患者的肿瘤组织、外周血血浆和痰标本中p16基因启动子区域的异常甲基化改变。结果 在43例肿瘤组织、36例血浆和39例痰标本中检测到了p16基因异常甲基化。凡在肿瘤组织检出p16基因甲基化阳性的病例,其血浆和(或)痰标本也为阳性;而肿瘤组织p16基因甲基化阴性的病例,其血浆和痰标本也为阴性。将血浆和痰标本的p16甲基化分析与痰细胞学检查相结合,可以发现92．2％的肺癌病例。结论 利用半巢式甲基化特异性PCR进行的血浆和痰标本p16基因甲基化分析,有可能成为辅助肺癌诊断的分子生物学指标。     

非小细胞肺癌病人痰标本p16和MGMT基因的异常甲基化

痰脱落细胞学检查以其方例、无创的特点成为目前诊断肺癌的最基本手段之一,然而它的敏感性比较差。近年来分子肿瘤学的理论和技术进展为我们提供了利用分子病理学标志物发现早期肺癌的可能。研究表明,某些基因的异常甲基化是肺癌中常见的分子水平改变;其包括p16INK4a(p16)和O^6甲基鸟嘌呤－DNA甲基转移酶（O^6-methyl-guanine-DNA methyltransferase,MGMT)。在这项研究中,我们从肺癌病人的痰标本脱落细胞中分离制备DNA,检测了p16和MGMT这两个基因的启动子区的甲基化状态。采用甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR,MSP)的方法,我们对71例非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC)病的痰标本进行了分析。所有被检NSCLC病人均有明确的组织病理学诊断,其中,肺鳞癌39例,肺腺癌25例,腺鳞癌7例。这71例病人的痰标本仅有31例（43．6％）被细胞学检查诊断为癌。我们的分析资料显示：在71例痰标本中p16基因的高甲基化检出率为83．1％（59／71）,MGMT的高甲基化检出率为59．2％（42／71）。在被测痰细胞DNA中,这两个基因（其中一个或两者）的启动子区异常甲基化的综合检出率高达90．1％（64／71）;而且与相应肿瘤组织中这两个基因的甲基化状态存在很好的符合率。这项研究结果表明,利用MSP技术检查痰脱落细胞DNA中p16和MGMT两基因的异常甲基化是一项敏感、无创、易行的方法。它将有助于非小细胞肺癌早期发现,以及肺癌高危人群的筛查。     

检测端粒酶活性在肺癌早期诊断中的价值

目的　探讨端粒酶作为肺癌肿瘤标记物的可能性 ,评价端粒酶活性对肺癌的早期诊断价值。方法　采用改良银染 -端粒重复序列扩增法 (TRAP)检测 40例原发性支气管肺癌手术标本及 40例CT扫描疑诊为肺癌患者的纤维支气管镜活检标本的端粒酶活性。结果　两组中小细胞肺癌端粒酶阳性率均为 10 0 % ,非小细胞肺癌分别为 84.8%、95 .7%。 40例手术切除肺癌组织的端粒酶阳性率为 87.5 % ( 3 5 /40 ) ,癌旁肺组织为7.5 % ( 3 /40 ) ,正常肺组织无表达 ( 0 /40 ) ,三组间比较有显著性差异 (P <0 .0 1)。 40例CT扫描疑诊为肺癌患者的纤维支气管镜肺活检标本的端粒酶阳性率为 82 .5 % ,肺癌检出的敏感度为 96.4% ,特异度为 71.4% ,准确性为 91.4% ;尤登指数 (Youden’sIndex)J =0 .678,SE(J) =0 .174。结论　端粒酶是灵敏的肺癌肿瘤标记物 ,对纤维支气管镜活检标本行端粒酶活性检测有助于肺癌的早期诊断。     

96.非小细胞肺癌病人痰标本p16和MGMT基因的异常甲基化

痰脱落细胞学检查以其方便、无创的特点成为目前诊断肺癌的最基本手段之一,然而它的敏感性比较差。近年来分子肿瘤学的理论和技术进展为我们提供了利用分子病理学标志物发现早期肺癌的可能。研究表明,某些基因的异常甲基化是肺癌中常见的分子水平改变;其中包括p16INK4a(p16)和O6甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（O6-methyl-guanine-DNA methyltransferase,MGMT)。在这项研究中,我们从肺癌病人的痰标本脱落细胞中分离制备DNA,检测了p16和MGMT这两个基因的启动子区的甲基化状态。采用甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR,MSP)的方法,我们对71例非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）病人的痰标本进行了分析。所有被检NSCLC病人均有明确的组织病理学诊断,其中,肺鳞癌39例,肺腺癌25例,腺鳞癌7例。这71例病人的痰标本仅有31例（43.6％）被细胞学检查诊断为癌。我们的分析资料显示：在71例痰标本中p16基因的高甲基化检出率为83．1％（59/71）,MGMT的高甲基化检出率为59.2％（42／71）。在被测痰细胞DNA中,这两个基因（其中一个或两者）的启动子区异常甲基化的综合检出率高达90．1%（64／71）;而且与相应肿瘤组织中这两个基因的甲基化状态存在很好的符合率。这顶研究结果表明,利用MSP技术检查痰脱落细胞DNA中p16和MGMT两基因的异常甲基化是一项敏感、无创、易行的方法。它将有助于非小细胞肺癌早期发现,以及肺癌高危人群的筛查。     

联合应用CT和血清肿瘤标志物检测诊断小细胞肺癌的研究

目的：探讨CT扫描和血清肿瘤标志物（NSE、Cyfra 21-1)检测联合应用对小细胞肺癌（SCLC）的临床诊断价值。方法：①回顾性分析220例资料完整的SCLC的CT征象和病理基础；②前瞻性地研究经CT发现肺内病变并怀疑为“肺癌”的患者120例，手术或活检前1周之内采集外周血、采用酶联免疫吸附测定技术（ELISA）测定其血清中NSE、Cyfra 21-1含量，而后与临床病理结果（经病理学证实为SCLC 40例、NSCLC 60例；临床随访证实为良性病变20例）进行对照研究。结果：①SCLC的主要CT征象：中央型多见，纺锤形或茄形肿块、肺门纵隔淋巴结肿大，阻塞性肺改变相对较轻。②CT、NSE、Cyfra 21-1对SCLC诊断的敏感性为75％、72．5％、32．5％，特异性为73．75％、83．75％、48．75％，准确性为74．16％、81．67％、43．33％。③联合应用时，CT＋NSE有较高的敏感性（87．5％）和准确性（78．3％）。结论：SCLC的CT表现有一定的特征性，CT诊断SCLC的敏感性可达75％；如能结合外周血NSE检测，对SCLC诊断的准确性为78．3％，敏感性可达87．5％，具有较高的临床应用价值；与Cyfra 21-1联用对N SCLC的诊断有一定价值，并不能提高SCLC的临床诊断水平。     

痰标本p16和MGMT基因甲基化对肺癌的诊断价值

目的：分析肺癌患者痰标本中p16和MGMT基因启动子区甲基化的改变情况,评价该指标作为肺癌辅助诊断分子标志物的价值。方法：运用甲基化特异性PCR技术,检测77例原发性肺癌患者痰标本和部分对应肿瘤组织(53例),以及30例正常对照者痰标本中p16和MGMT基因启动子区域的甲基化改变。结果：49例(63．6%)肺癌患者痰标本中检测到了pi6基因异常甲基化,34例(44．2%)检测到了MGMT基因异常甲基化,77例患者痰标本中2个基因中至少有1个基因出现甲基化为64例(83．1%),对肿瘤的检出灵敏度较高。长期吸烟史是影响肺鳞状细胞癌痰标本p16(P=0．001)基因启动子区甲基化的因素。随TNM分期增高,肺鳞状细胞癌患者痰标本中p16基因甲基化比例增高(P=0．021)；随TNM分期增高,肺腺癌患者痰标本MGMT基因甲基化比例增高(P=0．023)。对照组正常人痰液标本未发现p16和MGMT基因启动子区甲基化。结论：痰标本中p16和MGMT基因甲基化是临床肺癌辅助诊断的有效生物标志物之一。     

端粒酶hTRT在原发性肺癌中的表达

目的：探讨原发性肺癌组织中端粒酶反转录酶（hTRT)的表达和端粒酶活性的关系以及在肺癌分子生物学诊断的临床意义。方法：用免疫组化和TRAP法分别观察54例原发性肺癌和10例正常肺组织，比较分析它们的相关性；结果：hTRT阳性率83％（45／54）端粒酶活性阳性率85％（46／54），在肺癌组中3例术前化疗患者hTRT表达2例呈弱阳性1例阴性，肺癌淋巴结转移的hTRT阳性率达92％，5例小细胞肺癌hTRT均为阳性，10例正常肺组织均为阴性。结论：抗hTRT抗体在肺癌中具有癌细胞的特征性，并与端粒酶活性呈正相关，可作为肺癌诊断的灵敏性和特异性的指标，用免疫组化法比TRAP法检测肺癌中端粒酶的活性将更为简便易行。     

肺癌纤维支气管镜标本端粒酶活性的检测

目的：探讨纤维支气管镜检查活检、刷检标本端粒酶活性检测对肺癌诊断的价值。方法：应用TRAP-PCR-ELISA方法检测39例纤维支气管镜活检标本、29例刷检标本端粒酶活性并分析其诊断肺癌的价值。结果：24例肺癌活检标本端粒酶活性水平与癌颖组相近,但明显高于炎症组。端粒酶活性的检测敏感性为83.3%,特异性为80.0%,准确性为82.1%。不同病理类型肺癌的端粒酶活性检出率差异无显著性。刷检标本中端粒酶活性阳性检出率58.3%,端粒酶活性阳性标本的端粒酶活性水平在不同病理分型间差异无显著性,而病理分级组间有显著差异。结论：端粒酶活性是肺癌诊断的分子生物学标志物之一。与组织细胞学检查相结合可提高肺癌的早期诊断率。     

NSCLC患者血清中p16、DAP基因甲基化的研究

目的：探讨p16、死亡相关蛋白激酶（death-associated protein kinase,DAP）基因的异常甲基化作为非小细胞肺癌（NSCLC）患者诊断的基因标志物的可行性。方法：采用甲基化特异性PCR（MSP）法检测30例NSCLC患者肿瘤组织及对应血清中p16、DAP基因的异常甲基化，结果：NCSLC肿瘤中60．0％（18／30）检测出至少一个基因启动子呈甲基化改变，在18例肿瘤组织检测到异常甲基化的患者中，50．0％的患者（9／18）在血清中检测到相应的改变。所有的癌旁组织、健康对照组的血清中及正常肺组织均未检测到p16、DAP的甲基化，结论：检测NSCLC患者血清中p16、DAP基因异常甲基化有可能成为肺癌诊断的分了标志物。     

肺癌端粒酶活性、p53、PCNA蛋白表达的联合检测及其临床意义

目的 探讨端粒酶活性p53基因和增殖细胞核抗原（PCNA）在肺癌发生发展中的作用，以及端粒酶与临床病理特点及p53,PCNA蛋白之间的关系。方法 TRAP法检测59例肺癌和35例癌旁正常组织中端粒酶活性，采用免疫组织化学法检测44例肺癌组织和35例癌旁正常组织中p53和增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白的表达，并对端粒酶活性与临床病理特征以及p53PCNA蛋白表达的关系进行分析。结果 肺癌组织端粒酶活性,p53和PCNA蛋白阳性率分别为81．3％（48／59）、77．2％（34／44）、79．5％（35／44）；癌旁正常组织端粒酶活性,p53和PCNA蛋白阳性率分别为20．0％（7／35）、8．6％（3／35）、14．3（5／35），肺癌组织显著高于癌旁正常组织，P＜0．01，肺癌组织不同的病理类型之间、TNM各期之间以及不同的细胞分化程度之间端粒酶活性的阳性率未发现明显的差异（P＞0．05）；端粒酶活性与p53,PCNA蛋白表达之间无明显相关性。结论 端粒酶活化参与各型、各期和不同分化程度肺癌的发生发展；端粒酶在肺癌组织高表达和正常肺组织低表达的特性，有望使端粒酶成为肺癌诊断的1种标志物；p53和PCNA均参与肺癌的发生发展过程；端粒酶与p53和PCNA无明显相关性，提示肺癌是由多基因参与的疾病。     

p16基因CTCEA 联合检测对肺癌的诊断价值*

目的:探讨p16基因甲基化、CT 及血清CEA 联合检测对肺癌的诊断价值。方法:选择67例临床疑似肺癌的患者,同步进行p16基因的甲基化检测、CT检查、血清癌胚抗原（CEA ）测定。结果:67例患者最后确诊为肺癌42例,其余25例为良性病变。p16基因甲基化检测诊断肺癌的敏感性、特异性和准确性分别为52.4% 、96.0% 、68.7% ;CT检查为80.9% 、80.0% 、80.6% ;CEA 检测为54.8% 、76.0% 、62.7% 。三种方法联合检测为92.9% 、84.0% 、89.6% 。经统计学分析,三种检查联合与单独检测的敏感性相比差异有统计学意义（χ2=23.805,P=0.000）,联合检测优于三种方法单独检测（χ2=15.090,P=0.000;χ2=18.607,P=0.000;χ2=44.896,P=0.000）。结论:联合p16基因甲基化、CT和CEA 检查提高了在肺癌的诊断及良恶性病变鉴别中的价值。      

甲基化特异性PCR检测肺癌p16基因甲基化及其临床意义

目的:探讨甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSPCR)在肺癌临床诊断中的应用价值.方法:选取56例肺部疾病住院患者手术切除的病变肺组织和相应的支气管肺泡灌洗液(BALF)及痰标本,其中32例为肺癌,24例为良性肺部疾病.标本经一般处理,PCR扩增后,产物经电泳EB染色,紫外灯下观察.结果:32例肺癌组织标本中,14例(43.8%)在p16基因启动子区域呈现异常甲基化,其中9例(64.3%)在相应的BALF中检测出甲基化存在,5例(35.8%)在相应的痰标本中也检测出甲基化存在.24例良性肺部疾病,其中肺囊肿10例,肺结核14例,手术切除标本和BALF及痰标本中均未检测出p16基因甲基化存在.结论:MSPCR技术对肺癌患者BALF及痰标本中的异常甲基化检测具有高度特异性,是一项有潜力的肺癌早期诊断新技术.     

p16基因5′-CpG岛甲基化对肺癌的早期诊断价值

目的　检测 p16基因在肺癌患者癌组织及相应痰液脱落细胞中甲基化状态 ,以探讨其在肺癌早期诊断中的价值。方法　采用甲基化敏感的核酸内切酶 Sma 、Sac 酶切基因组 DNA,对 5 6份肺癌组织及相应痰液、6 0份非恶性病变肺组织及 2 8份痰液进行 PCR分析。结果　 p16基因在肺癌组织中甲基化率为 30 .4% (17/5 6 ) ,相应的痰液中为 2 8.6 % (16 /5 6 ) ,两组差异无显著性 (χ2 =0 .0 430 ,P=0 .836 )。 6 0份非恶性病变肺组织甲基化率为 3.3% (2 /6 0 ) ,2 8份痰液无 1份发现 p16基因甲基化。结论　肺癌组织及相应的痰液脱落细胞 p16基因 5′- Cp G岛甲基化率相似 ,即痰液脱落细胞 p16基因甲基化状态可以反映肺癌组织 p16基因甲基化状态。因此 ,检测痰液脱落细胞 p16基因甲基化状态有助于肺癌的早期诊断