仙鹤草多糖的提取及其体外抗脑胶质瘤U251活性研究

目的:优化仙鹤草多糖的提取工艺并测定其对脑胶质瘤U251细胞生长的抑制作用.方法:采用正交设计实验方法对影响仙鹤草多糖得率的提取温度、提取时间、料液比等3因素进行优化;采用MTT比色法测定仙鹤草多糖对U251细胞株增殖的抑制率,应用倒置相差显微镜观察仙鹤草多糖对肿瘤细胞形态结构的影响.结果:仙鹤草多糖提取的最佳工艺条件为:提取温度90℃,提取时间3h,料液比1∶20,在此条件下,仙鹤草总多糖得率可达1.85％.仙鹤草总多糖对脑胶质瘤U251细胞株增殖具有明显的体外抑制作用(P＜0.01),且表现出浓度依赖关系,IC50为1.35 g·L-1.经仙鹤草多糖处理后,U251细胞显示典型的凋亡形态变化.结论:优选的提取工艺简便,高效;仙鹤草总多糖的抗肿瘤效果显著,其抗肿瘤机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关.     

白藜芦醇抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖及诱导其凋亡的实验研究

目的研究白藜芦醇对人脑胶质瘤细胞U251细胞生长抑制及诱导细胞凋亡的作用。方法采用MTT法检测白藜芦醇对U251细胞的增殖活性的影响,采用流式细胞仪检测白藜芦醇对U251细胞早期、晚期凋亡率的影响,用倒置显微镜观察不同浓度的白藜芦醇作用后U251细胞的形态学改变。结果白藜芦醇对U251脑胶质瘤生长有抑制作用,且具时间及剂量依赖性;白藜芦醇能诱导U251细胞早、晚期凋亡,且具时间及剂量依赖性。结论白藜芦醇能抑制U251脑胶质瘤的增殖并能诱导细胞凋亡。     

三氧化二砷对体外人胶质瘤细胞株U251的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对体外培养的人类成神经胶质瘤细胞株U251MG的作用及其机制。方法应用倒置相差显微镜、四甲基偶氮唑蓝法、流式细胞仪,分别对不同浓度加药组及对照组U251细胞的存活、形态学改变、细胞DNA含量的分布进行观察和测定。结果0.5～4μmol/L的As2O3可明显抑制U251的增殖。流式细胞仪分析显示,加药组在G1期细胞前均出现亚二倍体峰,且G0/G1期细胞减少,诱导细胞凋亡。结论As2O3能抑制体外人胶质瘤细胞株U251的增殖,有望用于神经胶质瘤的治疗。     

响应面法优化连钱草三萜酸类成分的超声辅助提取工艺

目的:采用响应面法优化超声辅助提取连钱草三萜酸类成分的工艺条件,提高连钱草中三萜酸类成分的得率。方法:以超声时间、液料比及乙醇浓度为主要因素,以齐墩果酸和熊果酸类成分得率为响应值,根据Box-Behnken原理,采用三因素三水平响应面试验设计进行优化。结果:液料比对连钱草中齐墩果酸和熊果酸的提取效果影响最大,其次是超声时间和乙醇浓度。响应面法优化超声辅助提取连钱草中三萜酸类成分的最佳工艺条件为:以88%乙醇为提取溶剂,超声时间为60 min,液料比为78 mL/g,在此条件下齐墩果酸和熊果酸的含量实测值分别为0.8504和1.7367 mg/g。经验证,并与同参数下热浸法、回流法的提取效果相比,超声提取效果最好,提取更为完全。结论:响应面法优化所得的连钱草三萜酸类成分提取工艺稳定可行,可用于连钱草的开发、利用及质量评价。     

白藜芦醇对U251脑胶质瘤细胞Bcl-2、Bcl-XL、CyclinD1和STAT-3蛋白表达的影响

探讨白藜芦醇对U251人脑胶质瘤细胞生长的抑制和相关蛋白的表达及其意义.采用MTT法检测白藜芦醇对U251细胞的增殖活性的影响;采用ABC免疫组化法检测相关Bcl-2、Bcl-XL、CyclinD1和STAT-3蛋白的表达.结果显示,白藜芦醇对U251脑胶质瘤细胞生长有抑制作用,且呈时间、剂量相关;白藜芦醇作用于U251脑胶质瘤细胞后Bcl-2、Bcl-XL、CyclinD1、STAT-3蛋白表达下降,同时细胞形态也发生改变.白藜芦醇能抑制U251脑胶质瘤细胞的增殖,能诱导细胞凋亡.     

正交设计法优化桦褐孔菌总三萜超声提取工艺

目的:在单因素试验的基础上,通过正交试验优化桦褐孔菌总三萜的超声提取工艺。方法:采用单因素试验和正交试验法考察提取溶剂、超声温度、时间及料液比对桦褐孔菌总三萜得率的影响,优化出最佳提取工艺条件。结果:各因素的影响依次为超声提取时间>提取温度>料液比,提取的最佳工艺条件为采用异丙醇做提取溶剂,料液比为1∶10,在50℃下,超声提取30 min。在此最佳条件下,总三萜得率为5.06%。结论:优化得到的桦褐孔菌总三萜超声提取工艺稳定,可行。     

山核桃蒲壳总生物碱提取方法的研究

目的:优化山核桃蒲壳总生物碱提取工艺。方法:采用传统浸提法、超声辅助提取法、微波辅助提取法进行比较,用正交实验设计,以总生物碱得率为指标,优化山核桃蒲壳提取总生物碱的工艺。结果:山核桃蒲壳总生物碱传统浸提法提取最佳条件:乙醇浓度60%,液料比10:1,浸提时间为1 d,浸提温度为70℃,生物碱得率为0.4860%。超声辅助法提取最佳条件:乙醇浓度60%,液料比10:1,超声时间为20min,超声温度为70℃,生物碱得率为0.8993%。微波辅助提取法最佳条件:乙醇浓度60%,微波时间7min,微波功率520w,微波温度为30℃,生物碱得率为0.9381%。结论:微波辅助提取法的效果最佳。     

重楼醇提物对三种神经胶质瘤细胞株的细胞毒性研究

目的:通过重楼醇提物对三种人神经胶质瘤细胞株(U251、U87、T98G)进行细胞毒性检测,观察重楼醇提物的抗肿瘤活性。方法:乙醇冷浸法对重楼饮片进行提取,采用聚酰胺柱层析分离划段获得重楼醇提物的不同部位,通过MTT法对所得部位进行细胞毒性检测。结果:重楼醇提物中有3个分离组分作用于人神经胶质瘤细胞IC50值小于10μg/m L,对神经胶质瘤细胞株表现出明显的细胞毒性作用。结论:重楼醇提物中存在抑制神经胶质瘤细胞株增殖的物质,值得进一步开展相关研究。     

甜叶菊渣中总黄酮的提取工艺优选

目的:优选甜叶菊渣中总黄酮提取工艺条件.方法:以总黄酮得率为指标,采用单因素试验考察乙醇体积分数、提取时间、料液比、提取温度及回流次数5个影响因素对甜叶菊渣中总黄酮得率的影响;在单因素试验基础上,选取乙醇体积分数、提取时间、料液比、提取温度为考察因素,采用正交设计法优化甜叶菊渣中总黄酮的提取工艺条件.结果:各因素对甜叶菊渣中总黄酮得率的影响顺序为料液比＞提取时间＞乙醇体积分数＞提取温度.最佳提取工艺条件为乙醇体积分数80％,提取时间2.5h,料液比1∶20,提取温度80℃,回流3次,总黄酮得率4.21％.结论:该优选工艺简单易行、成本低廉、安全可靠,有利于甜叶菊资源的合理利用.     

响应面法优化仙鹤草总黄酮的超声提取工艺

目的:优化仙鹤草总黄酮的最佳超声提取工艺。方法:以总黄酮得率为指标,采用响应面设计方法对影响总黄酮得率的乙醇体积分数、超声温度及料液比进行优化。结果:各因素对总黄酮提取率的影响大小依次为料液比-超声温度-乙醇体积分数。最佳工艺条件为72%乙醇,料液比1∶25,60℃下超声提取20 min。在此最佳条件下,总黄酮得率为9.02 mg.g-1,试验结果与模型预测值相符。结论:利用超声提取仙鹤草总黄酮工艺稳定可靠。     

赶黄草总黄酮超声提取工艺的响应面法优化及其体外抗氧化活性分析

目的:优化赶黄草总黄酮的超声提取工艺并分析其体外抗氧化活性.方法:以总黄酮得率为指标,在单因素试验基础上,采用响应面设计法对影响总黄酮得率的乙醇体积分数、超声时间及料液比进行优化,同时考察其体外抗氧化活性.结果:赶黄草总黄酮超声提取的最佳工艺条件为26倍量60％乙醇于50℃下超声提取20 min.在此条件下,总黄酮得率4.14％,试验结果与模型预测值相符.体外抗氧化活性研究表明,赶黄草总黄酮具有较强的还原力和总抗氧化能力,同时具有较强的清除羟基自由基和DPPH自由基能力.结论:该优选工艺方便、快捷、高效;赶黄草总黄酮具有较强的抗氧化活性,值得深入研究.     

响应面法优化松花粉总酚的超声提取工艺

目的:优选松花粉中总酚的超声提取工艺.方法:以总酚得率为指标,采用单因素试验考察乙醇体积分数、超声时间、超声温度、料液比等因素对总酚得率的影响,在此基础上,运用响应面法优选总酚超声提取工艺.结果:松花粉总酚的最佳超声提取工艺条件为30倍量39％乙醇于51℃下超声提取24 min,在此条件下,总酚得率3.85 mg·g-1,实测值与模型预测值相符.结论:响应面分析法可较好地用于优化松花粉总酚超声提取工艺,且该优选工艺方便、快捷、高效.     

桑黄总多糖的提取及其单糖组成分析

目的:优化桑黄子实体总多糖的提取工艺并初步分析其单糖组成。方法:采用苯酚-硫酸法测定总多糖含量。以总多糖提取率为指标,通过单因素试验和正交试验考察提取时间、提取次数、料液比对桑黄子实体总多糖微波提取工艺的影响,利用TLC初步确定不同产地和树种桑黄总多糖的单糖组成。结果:最佳提取条件为加50倍量水提取5次,每次15 min。东北桑树、东北白桦树、甘肃桑树及湖南桑树桑黄中总多糖提取率分别为5.37%,2.21%,3.04%,3.35%,均含有半乳糖和葡萄糖;山东桑树桑黄总多糖提取率2.77%,含有木糖、半乳糖、葡萄糖和乳糖;未知来源桑树桑黄中总多糖提取率3.58%,含有葡萄糖。结论:微波提取法稳定性好、提取率高。东北桑树桑黄中总多糖含量较高,可初步确定桑黄子实体总多糖中均含有葡萄糖。     

正交设计优化野菊花总黄酮的超声提取工艺

优化超声提取野菊花总黄酮的最佳工艺条件。采用正交设计试验,以野菊花总黄酮得率为指标,对乙醇浓度、超声温度、超声时间、料液比等因素进行优化。结果表明,各因素对总黄酮提取率的影响大小依次为:超声时间>超声温度>乙醇浓度>料液比。最佳工艺条件为:采用质量分数60%乙醇,料液比1∶30(g/mL),在60℃下,超声提取40min,在此最佳条件下,总黄酮得率为4.60%。     

中药血散薯中总生物碱提取工艺优选

目的:优选血散薯总生物碱的提取工艺.方法:以总生物碱得率为指标,采用单因素和正交试验法考察乙醇体积分数、料液比、提取时间、pH对血散薯总生物碱得率的影响.结果:血散薯中总生物碱的最佳提取工艺为16倍量70％乙醇提取2.0h,pH2.0.结论:该优选工艺能较好的提取血散薯中的生物碱.     

南蛇藤茎提取物对人胶质母细胞瘤细胞株U251增殖和凋亡的影响及机制

目的:探讨南蛇藤茎乙酸乙酯提取物(Celastrus orbiculatus extract,COE)抗人胶质母细胞瘤U251细胞株的增殖和凋亡作用,研究COE抗肿瘤的分子机制,为寻找新的治疗胶质母细胞瘤药物提供依据。方法:以人胶质母细胞瘤细胞株U251为研究对象,设空白组和COE组,应用噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]比色法观察COE对细胞活力的抑制作用;5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxy uridine,Brd U)标记检测COE对U251细胞增殖的影响;Annexin V/碘化丙啶(PI)双标法检测COE对U251细胞凋亡的作用;透射电镜下观察经COE干预后U251细胞超微结构变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测COE对凋亡标志基因B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X,Bax)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达的影响。结果:与空白组比较,COE能够明显抑制U251细胞的增殖(P0.05);诱导U251细胞的早期凋亡,电镜下可见到凋亡小体,影响并改变U251细胞超微结构;COE能促进Caspase-3,Bax蛋白表达,降低Bcl-2,Bcl-2/Bax蛋白表达(P0.05)。结论:COE能有效抑制胶质母细胞瘤U251细胞株的增殖,促进肿瘤细胞凋亡,其作用机制与调节Bcl-2和Caspase-3表达有关。     

白金妇安颗粒中白芍和柴胡提取工艺优选

目的:优选白金妇安颗粒中白芍和柴胡的提取工艺.方法:以HPLC测定芍药苷提取量,分光光度法测定的柴胡总皂苷提取量,采用单因素试验法优选提取溶剂,正交试验法对白金妇安颗粒提取工艺条件进行优选.结果:以70％乙醇为溶剂时芍药苷苷提取量最多,乙醇体积分数＞50％时,柴胡总皂昔提取量基本不变;优选提取工艺白芍、柴胡粉碎成粗粉,分别加8,6倍量70％乙醇回流提取2次,每次2h.结论:优选工艺合理,有效成分提取率高.