兔骨髓间充质干细胞复合两种材料体外生物相容性的比较

[目的]探讨丝素蛋白和纳米晶羟基磷灰石胶原／骨体外生物相容性，为组织工程寻找理想的载体材料。[方法]体外培养兔骨髓间充质干细胞分别于丝素蛋白和纳米晶羟基磷灰石胶原／骨体外复合培养，应用扫描电镜、激光共聚焦显微镜，四唑盐比色试验（MTT法），观察材料上复合培养的细胞的生物学特性。[结果]兔骨髓间充质干细胞可以在丝素蛋白和纳米晶羟基磷灰石胶原／骨良好的黏附、增殖和生长。两种材料相比较其相容性没有明显的差异。[结论]丝素蛋白和纳米晶羟基磷灰石胶原／骨均具有良好的生物相容性，可以作为组织工程理想的载体材料。     

WO-1生物衍生骨支架与成骨细胞相容性的实验研究

目的 研究WO-1生物衍生骨复合材料与兔成骨细胞的相容性及体外附着规律，为进一步的体内试验提供基础研究。方法 应用同种异体骨、Ⅰ型胶原及WO-1制备WO-1生物衍生骨复合材料；取幼兔的颅顶骨成骨细胞，经培养液体外培养、扩增后，与WO-1生物衍生骨材料联合培养。通过扫描电镜和倒置相差显微镜观察WO-1生物衍生骨复合材料的形貌特征、细胞与材料的粘附和增殖情况。结果 WO-1生物衍生骨复合材料具有天然骨的三维结构；扫描电镜和倒置相差显微镜均显示复合培养的成骨细胞在材料表面和孔隙内生长良好。结论 WO-1生物衍生骨复合材料具有良好的细胞相容性。     

镁合金体内植入生物安全性的初步研究

[目的]采用体外检测与体内植入两种方法，分别检验镁合金的生物安全性。以此初步探讨镁合金作为一种新型的骨科内置物材料的可行性。[方法]取国际通用标准的L929小鼠成纤维细胞作为检验细胞。在体外培养扩增至5代后，应用镁合金浸提液作为培养液，行体外培养扩增，在光学倒置显微镜下观察细胞的形态和增殖情况。另外，应用MTT法检测细胞毒性。实验分为3组，即镁合金浸提液实验组和阳性阴性对照组，在培养1、3、5、7d后分别测量吸光度值，SPSS软件分析各组问吸光度值差异，间接判断细胞增殖情况。并计算细胞相对增殖率（RGR），评定各组毒性级别。体内植入实验则将镁合金棒横向植入大鼠左股骨干内，分别在术后5、9、18周时进行血生化指标检测，并于18周时处死大鼠，取肝、肾行病理分析，观察肝、肾病理形态改变。[结果]L929小鼠成纤维细胞正常，增殖活跃。MTT法经分析比较，实验组与阴性对照组的吸光度值无明显差异（P〉0．05），而与阳性对照组有显著差异（P〈0．05）。这说明镁合金浸提液对细胞生长无不良影响，同时RGR结果显示镁合金细胞毒性评级为0级，无细胞毒性作用。动物体内实验显示，大鼠植入镁合金后各时间段的生化指标未见明显波动，肝、肾病理分析未见明显异常。[结论]镁合金对L929小鼠成纤维细胞有良好的生物相容性，对植入的动物也未见不良的影响，具有良好的生物安全性。因此可以初步认为镁合金作为一种新型的，有潜力的骨科内置物材料是可行的。     

镁合金AZ31B对骨骼肌细胞黏附及增殖的影响

[目的]研究镁合金AZ31B对骨骼肌细胞黏附及增殖的影响.[方法]用扫描电镜明确镁合金AZ31B的表面形态,采用兔骨骼肌细胞与合金直接接触培养,研究其黏附率,采用扫描电镜研究其黏附情况.采用浸提液培养细胞,研究其1、3、5、7d的细胞相对增殖率,并采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.[结果]镁合金表面形态粗糙,有利于细胞的黏附,结果提示骨骼肌细胞在合金表面具有良好的黏附率,且随着培养时间的延长,黏附率逐渐增高,扫描电镜见到骨骼肌细胞在镁合金表面黏附良好.细胞增殖率结果提示镁合金促进骨骼肌细胞增殖,且未见明显细胞凋亡.[结论]镁合金AZ31B具有良好的生物相容性,适合于骨骼肌细胞的早期黏附,且促进骨骼肌细胞的增殖,为镁合金AZ31B适用于骨科置入材料提供了理论支持.     

成骨细胞在珍珠层复合人工骨表面的粘附和增殖

目的 评价人成骨细胞在珍珠层聚乳酸人工骨上的粘附能力。方法 将珍珠层聚乳酸人工骨与人成骨细胞体外复合培养，采用倒置相差显微镜、扫描电镜、透射电镜及流式细胞仪检测，观察人成骨细胞在珍珠层聚乳酸人工骨上的粘附能力。结果 珍珠层聚乳酸人工骨与人成骨细胞体外复合培养1周后，细胞通过伪足贴附于人工骨表面。透射电镜下成骨细胞形态正常，胞浆内有丰富的粗面内质网和线粒体，并可观察到细胞之间形成的连接。流式细胞仪检测结果显示，附着在珍珠层复合人工骨的成骨细胞增殖指数增高。结论 珍珠层复合人工骨材料有利于成骨细胞的粘附、增殖和分化。     

可注射性纳米组织工程骨的生物相容性

目的 以可注射性纳米材料与共培养的成骨细胞和血管内皮细胞复合,构建可注射性组织工程骨,并观察其体外实验的生物相容性.方法 将共培养的成骨细胞和血管内皮细胞与可注射性纳米材料体外复合培养,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞活性,检测碱性磷酸酶(ALP)活性,并行激光共聚焦显微镜及扫描电镜观察,进行形态学和功能测定.结果 细胞复合材料后保持正常的分裂增殖速度,细胞的ALP活性与单纯细胞培养的对照组差异无统计学意义(P>0.05).激光共聚焦显微镜及扫描电镜观察可见,细胞能在可注射性纳米材料上良好地增殖、生长,细胞的活性未受到材料的影响.结论 可注射性纳米材料具有良好的细胞相容性,可作为骨组织工程可注射性载体材料.     

新型医用镁合金材料的体外生物相容性研究

目的 通过体外实验对表面进行阶跃式阳极氧化技术改性后的镁合金材料(AZ-1和AZ-3)进行生物相容性评价. 方法用混合酶消化法分离SD大鼠颅盖骨成骨细胞并进行培养;将成骨细胞分别与上述新型材料体外复合培养,应用扫描电镜、四唑盐比色试验(MTT法)及碱性磷酸酶活性测定,对材料上复合堵养的细胞进行形态学和功能测定.利用新鲜兔血对材料进行溶血试验. 结果 成骨细胞在新型医用镁合金材料上可良好地黏附、增殖和生长.细胞的活性和碱性磷酸酶活性未受到材料的影响;溶血率小于5%,有良好的血液相容性. 结论 新型的医用镁合金材料(AZ-1和AZ-3)初步显示了良好的体外生物相容性,有望成为一种新的骨科内植物材料.     

镁合金AZ31B对兔骨骼肌细胞的生物学行为的影响

目的研究镁合金AZ31B对兔骨骼肌细胞生物学行为的影响。方法采用浸提液培养兔骨骼肌细胞,倒置显微镜观察细胞生长形态,CCK法研究其1、3、5、7 d的细胞增殖活性,荧光染色研究细胞活力,胞内总蛋白测定研究细胞蛋白表达情况。以钛合金浸提液为对照(对照组),设置镁合金浸提液组(镁合金组)及其pH值调节组。结果 3组骨骼肌细胞贴壁良好,随着培养时间的延长,细胞增殖活性逐渐增加,镁合金组细胞毒性为2级,pH值调节组未见细胞毒性,且可以促进骨骼肌细胞的增殖;荧光染色可见镁合金组存在部分细胞红染,提示镁合金组存在部分细胞毒性;蛋白检测提示镁合金组蛋白含量显著下降,pH值调节组蛋白含量则较正常升高。结论镁合金AZ31B对于兔骨骼肌细胞具有良好的生物相容性,且能促进兔骨骼肌细胞的增殖及蛋白含量的增加,为镁合金AZ31B用于骨科置入材料提供了理论支持。     

含SrCaP涂层镁合金ZK60对小鼠前成骨细胞功能的影响

目的探讨含锶钙磷（SrCaP）涂层镁合金ZK60对小鼠前成骨细胞黏附、增殖和成骨分化等功能的影响。方法制备含SrCaP涂层的镁合金ZK60材料,以不含SrCaP涂层的ZK60和钛合金材料作为对照,扫描电镜观察材料表面的超微结构;以小鼠MC3T3-E1细胞为对象,扫描电镜、荧光显微镜、MTT法、p-NPP法等观察上述材料对细胞黏附、增殖和成骨分化的影响。结果扫描电镜可见含SrCaP涂层镁合金ZK60表面的粗糙多孔结构。与ZK60组相比,前成骨细胞在该材料上铺展面积更大,黏附更好;死活细胞染色显示培养24 h时SrCaP-ZK60组活细胞数最多;浸提液培养5 d时SrCaP涂层镁合金组细胞增殖显著高于钛合金组（P＜0.05）;培养7 d后,SrCaP涂层镁合金表面成骨细胞碱性磷酸酶表达显著高于ZK60组及钛合金组（P＜0.05）。结论含SrCaP涂层镁合金ZK60具有良好的促成骨细胞黏附、增殖和成骨分化作用。     

兔骨髓基质细胞体外成骨分化鉴定及与煅烧骨复合培养的实验研究

目的研究兔骨髓基质细胞体外向成骨细胞分化的生物学特性及其与牛煅烧骨体外复合培养的生物相容性.方法将体外培养1周的兔骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化,于1、2、4周时提取RNA,采用RT-PCR技术检测ALP和I型胶原mRNA表达,并对培养2周的细胞行VonKossa染色观察钙结节形成;另制备细胞-煅烧骨复合物,继续培养1、7、14 d后取出,扫描电镜观察及X射线衍射仪检测.结果体外诱导培养2、4周后,兔骨髓基质细胞成功表达ALT和I型胶原,VonKossa染色可见钙结节形成.扫描电镜及X射线衍射分析证实细胞在煅烧骨表面大量贴附成活,14 d后细胞铺满支架表面,合成并分泌胶原纤维及钙盐.结论兔骨髓基质细胞体外可成功向成骨细胞诱导分化,成骨特性表达佳;与牛煅烧骨体外复合培养显示良好的生物相容性.