环氧树脂半薄切片的多色性染色方法

0　引言　现有的半薄切片多用甲苯胺蓝 [1 ] 及碱性复红染色 ,但在观察时往往组织结构、细胞核及细胞质分辨不够清楚 .此法是在半薄切片染色改良法 [2 ] 的基础上 ,经反复实验 ,进一步改进而成的 .本法操作简单 ,染色效果良好而且着色均匀 ,组织结构清晰 ,适用于电子显微镜超薄切片的准确定位 .1　材料和方法1.1　材料　 10 .2 m ol· L- 1 磷酸二氢钠缓冲液 10 0 m L ,用0 .1mol· L- 1 Na OH调 p H=7.2 . 2 10 g· L- 1 次甲基蓝溶液 :次甲基蓝 1g,加蒸馏水至 10 0 m L. 30 .5 g· L- 1 碱性复红溶液 :碱性复红 0 .0 5 g,硼砂 0 .2 5 …     

骨髓活检电镜样品制备方法

0　引言　用电镜观察骨髓活检标本是临床上诊断造血系统恶性疾病的重要手段之一 .为了获得准确而可靠的结果 ,既要求达到良好的固定 ,保存细胞原有的微细结构 ,又要求骨组织能迅速完全脱钙 ,便于切片 .为此我们摸索出一种较好的方法介绍如下 .1　材料和方法1.1　材料　收集西京医院 1997/ 1998送检我室的骨髓环钻活检标本 5例 ,其中白血病 3例 ,再障 2例 .固定脱钙液的配制 :首先量取多聚甲醛 2 g,双蒸水 2 5 m L ,加热溶解 ,待冷却后缓慢加入 10 0 mmol· L- 1 Na OH1～ 2滴至澄清 ,然后加入2 5 0 g· L- 1戊二醛 10 m L,2 0 mmol·L- …     

β-胡萝卜素对病毒转化细胞的影响

目的　探讨β-胡萝卜素 (β- C)对病毒转化细胞的抑制作用 .方法　体外培养人腺病毒转化的 2 93细胞和 EB病毒转化的 Raji细胞 ,培养时添加 0 ,10 ,5 0和 10 0 μmol· L- 1的β- C作用 2 4,48和 72 h后 ,进行细胞计数 ,测定细胞生长抑制率 ;EL ISA-结晶紫方法测定 A值 ,计算细胞存活量 ;采用快速 CPE(细胞病变 )方法测定复制缺陷型腺病毒在 2 93细胞上的病毒滴度 .结果　 10～ 10 0μmol· L- 1 的β- C对 2 93细胞和 Raji细胞均有抑制作用 ,细胞存活量减少 ,抑制率分别是15 .6 % ,10 .1% (10 μm ol· L- 1 ) ;19.7% ,2 2 .4% (5 0 μmol· L- 1 )和 33.6 % ,2 9.3% (10 0μmol· L- 1 ) ,P<0 .0 5 .快速CPE结果显示加入 β- C后 ,复制缺陷型腺病毒在其辅助细胞 -2 93细胞上的复制增殖能力明显下降 ,病毒滴度降低 ,空斑形成单位 (× 10 9pfu· L- 1 )分别为 98± 41(10μmol· L- 1 ) ,75± 2 9(5 0 μmol· L- 1 )和 6 3± 31(10 0 μmol· L- 1 ) ,与对照组 185±2 5 (0 μmol· L- 1 )相比 ,P<0 .0 5 .结论　 β- C对病毒转化的2 93细胞和 Raji细胞的生长增殖具有明显的抑制作用 ,对 2 93细胞内整合的腺病毒早期基因 E1的表达具有下调作用     

替米沙坦对肾脏的保护作用

目的　探讨血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )受体拮抗剂 (ARB)替米沙坦和血管紧张素转换酶抑制剂 (A CEI)苯那普利对负鼠近端小管上皮细胞 (OK细胞 )增殖和Na+ K+ ATP酶活性的影响。方法　培养的OK细胞采用低渗方法制备细胞膜悬液 ,以BCA 10 0蛋白质定量测定试剂盒测定膜蛋白 ;Na+ K+ ATP酶活性采用孔雀绿比色分析法测定释放的无机磷 (Pi)含量 ,培养液中分别加入AngⅡ、AngⅡ +替米沙坦、AngⅡ +苯那普利 ,观察其对OK细胞Na+ K+ ATP酶活性的影响。结果　①对照组Na+ K+ ATP酶活性为 (0 .0 896± 0 .0 0 6 6 )μmol·mg蛋白质·L-1·h-1,1× 10 -10 mol/LAngⅡ组为 (0 .0 972± 0 .0 0 81) μmol·mg蛋白质·L-1·h-1,活性明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ;培养液中同时加入 1× 10 -10 mol/LAngⅡ和 1× 10 -9mol/L替米沙坦时为 (0 .0 6 2 3± 0 .0 0 5 3) μmol·mg蛋白质·L-1·h-1,较 1× 10 -10 mol/LAngⅡ组明显降低 (P <0 .0 5 ) ;培养液中同时加入1× 10 -10 mol/LAngⅡ和 1× 10 -9mol/L苯那普利为 (0 .10 2 7± 0 .0 0 17) μmol·mg蛋白质·L-1·h-1,与 1×10 -10 mol/LAngⅡ组的差异无显著性 (P >0 .0 5 )。②AngⅡ对OK细胞DNA合成有刺激作用 ,随着浓度的升高(1× 10 -10 ～ 1× 10 -6mol/L)作用     

鼠心肌成纤维细胞NOS活性的变化和AVP对NO合成的影响

目的　探讨在基础状态和精氨酸升压素 (AVP)干预下 ,心肌成纤维细胞 (CFs)一氧化氮合酶 -一氧化氮 (NOS-NO)系统活性的变化 .方法　胰酶消化法分离、培养新生 SD大鼠 CFs,采用硝酸还原酶法和分光光度法分别测定基础状态和 AVP干预下 CFs的 NOS活性和 NO含量 .结果　 1基础状态下 CFs的 36 h组 NO含量 (4 2± 5 ) μm ol· L- 1 和 NOS活性 (6 17± 83)μkat· L- 1 ,显著高于 6 h组 (14± 3)μmol·L- 1 ,(16 7± 6 7)μkat· L- 1 . 2 AVP干预下 36 h组 NO含量(6 2± 1) μm ol· L- 1和 NOS活性 (115 0± 10 0 ) μkat· L- 1也显著高于 6 h组 (34± 4) μmol· L- 1 ,(6 0 0± 33) μkat· L- 1 ,且AVP干预组的 NO含量和 NOS活性均高于同时间点基础状态组(P<0 .0 5 ) . 3CFs的 NO含量和 NOS活性随 AVP浓度的增高而增加 ,其中 10 - 6mol· L- 1 AVP组 (6 3± 6 ) μmol· L- 1 ,(110 0± 5 0 )μkat· L- 1 和 10 - 7mol· L- 1 AVP组 (6 9± 6 )μmol· L- 1 ,(12 0 0± 5 0 )μkat· L- 1 都显著高于对照组 (2 9± 5 )μmol· L- 1 ,(4 5 0± 83) μkat· L- 1 ,10 - 9mol· L- 1 AVP组(32± 2 )μmol· L- 1 ,(5 0 0± 133)μkat· L- 1 和 10 - 8mol·L- 1 AVP组 (37± 2 ) μmol· L- 1 ,(6 0 0     

显示小鼠肠肌间神经丛铺片的方法

1　材料和方法1.1　材料　健康成年雄性昆明小鼠 5只 ,体质量 2 0～ 30 g,ip肌松药后以颈椎脱臼法通过腹部正中切口暴露腹腔 ,暴露的消化道器官不断用温和的 0 .0 1mol· L- 1 PBS(p H7.0 )清洗保持湿度 .食管、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和结肠取材后用含尼莫地平 (10 - 6mol· L- 1 )的 0 .0 1m ol· L- 1 PBS冲洗 ,以 40 g· L- 1 的多聚甲醛充盈到最大程度后将各肠段两端扎紧 ,立即用 40 g· L- 1多聚甲醛液灌注固定 ,再放置其中固定6～ 8h(4℃ ) ,再移入 30 0 g·L- 1蔗糖液中 4℃过夜 .1.2　方法　各肠段沿肠系膜纵行剪开以 0 …     

Ⅱ型胶原蛋白的提取纯化和鉴定

1　材料和方法1.1　材料　胃蛋白酶及 型胶原蛋白 (C )标准品购自美国Sigma公司 . Mr14 .4～ 97.4× 10 3低分子标准蛋白购自上海丽珠东风生化技术有限公司 .CS- 90 0 0薄层扫描仪购自日本岛津公司 .1:Protein marker;2 :C (Sigma) 2 g·L- 1 ;3 :C (Sigma) 1g·L- 1 ;4:C 1g· L- 1 ;5 :C 0 .5 g·L- 1 ;6:C 0 .2 5 g·L- 1 ;7:0 .12 5 g· L - 1 .图 1　 SDS- PAGE分析经 DEAE- 5 2纤维素柱层析纯化的 C 1.2　方法　新鲜牛软骨剥去骨膜 ,在液氮冷冻下磨成粉 ,称质量 ,用 10倍体积的 4 mol· L- 1 盐酸胍 - 0 .0 5 mmol· L…     

神经节苷脂对PC-12细胞的抗凋亡作用

目的　探讨神经节苷脂 (ganglioside GM1)对帕金森病 (Parkinson's disease,PD)的治疗机制 .方法　以左旋多巴(L - dopa)处理的 PC12 (大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤 )细胞为多巴胺 (Dopam ine,DA)神经元的细胞凋亡模型 ,应用透射电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪及免疫组化等技术 ,观察GM1对凋亡中的 PC12细胞的影响 .结果　 2 4h后空白对照组凋亡率为 2 .5 % ,2 0 0μm ol· L- 1 L - dopa处理组的凋亡率为 6 1.6 % ;10 0 ,5 0和 10μmol· L- 1 的 GM1各加 2 0 0μmol· L- 1L - dopa处理组 2 4h的凋亡率分别为 2 9.7% ,5 2 .3% ,5 5 .7% ,与 L - dopa处理组比较有显著差异 (P<0 .0 5 ) .结论　在一定浓度范围内的 GM1可抗 L- dopa诱导的 PC12细胞的凋亡 ,并提示 GM1抗凋亡作用可能在于其对神经细胞膜的保护     

腹水脯肽酶的鉴别诊断价值

1　材料和方法1.1　材料　选择住院腹水患者 5 4例 ,其中肝硬化 2 1例 ,原发性肝癌 15例 ,结核性腹膜炎 8例 ,恶性腹水 10例 (胃癌腹腔转移 6例 ,腹膜恶性间皮瘤 1例 ,来源不明腹腔恶性肿瘤 3例 ) .每例患者均于入院后未经化疗、抗痨等治疗前 ,常规方法抽取腹水 2 0 m L和血标本 ,腹水采集后离心 (2 5 0 0 r·min- 1 ,10 min)取上清液 - 2 0℃保存 ;血标本于清晨空腹安静状态下 ,抽取肘静脉血 10 m L,15 0 0 r· min- 1离心 5 min,-2 0℃保存备用 .肝硬化按 1990年全国肝硬化专题学术讨论会 (河北承德 )诊断标准确诊 ;原发性肝癌 (以下简称…     

胰岛素对大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的　探讨胰岛素对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响 .方法　体外进行大鼠血管平滑肌细胞的培养 ,以 5～ 10代细胞为实验对象 ,随机分成空白对照组和胰岛素组 ,胰岛素组又按浓度 1× 10 - 9、1× 10 - 8、1× 10 - 7和 1× 10 - 6 mol· L- 1分为 4小组 ,在加药后 2 4 h、4 8h和 72 h用 MTT法分析细胞增殖活力 ,免疫细胞化学观察细胞核增殖抗原 (PCNA)的表达 ,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的 d UTP缺口末端标记法检测 H2 O2 诱导的细胞凋亡 .结果　加药 4 8h后 ,1× 10 - 9mol· L- 1胰岛素组的 MMT A值 (0 .4 2± 0 .0 4 )高于空白组(0 .30± 0 .0 2 ) ,P<0 .0 5 ,低于 1× 10 - 6 mol· L- 1 胰岛素组(0 .5 2± 0 .0 5 ) ,P<0 .0 5 ;1× 10 - 9mol·L- 1胰岛素作用 4 8h后细胞的 MMT A值比空白组增加 4 0 % ,高于 2 4 h细胞的MMT A值增加率 (2 7% ) ,P<0 . 0 5 ;1× 10 - 9～ 1× 10 - 6mol· L- 1 胰岛素作用 4 8h后细胞 PCNA的表达率 (5 0 %～80 % )均高于空白对照组的 (30 % ) P<0 .0 5 ;加药 2 4 h后 ,1× 10 - 6 mol· L- 1胰岛素组细胞凋亡率 (30 % )低于空白组(70 % ) P<0 .0 5 .结论　胰岛素有明显促 VSMC(vascularsmooth m uscle cells)增殖的作用 ,并且这种作用时间和浓度依赖性 ;同时胰岛素