核因子-kB在胚胎发育、分娩发动、妊娠高血压疾病中的作用

核蛋白因子NF—kB（Nnclear factor kappaB）是一种多效性转录因子，可以与多种基因启动子部位的kB位点发生特异性的结合而促进转录表达，受氧化应激、细菌脂多糖、细胞因子等多种刺激而活化后，能调控前炎症性细胞因子、细胞表面受体、转录因子、黏附分子的生成，进一步导致机体微循环障碍，血管内皮细胞的损伤。现就近年来NF—kB结构功能及其在女性生殖系统的研究进展作一综述。     

NK细胞表面受体及其研究进展

自然杀伤(NK)细胞是体内重要的免疫效应细胞,因其杀伤肿瘤细胞不受主要组织相容性复合物(MHC)限制、具有实现移植物抗白血病(GVL)效应与移植物抗宿主病(GVHD)分离等优势,在肿瘤过继免疫治疗中占有重要地位。研究表明,NK细胞受体众多,分别传递抑制性或活化性信号,两者间的平衡是决定NK细胞功能状态的关键因素,这为优化NK细胞过继免疫治疗提供了新思路。基于此,对于NK细胞受体的研究一直是近年来的研究热点。本文就人类NK细胞受体及临床研究进展作一综述。     

雌、孕激素受体检测与分娩发动的关系

关于人类分娩动因的研究仍是近年来学者们孜孜不倦探讨的课题。自1967年Jensen等在乳腺癌细胞浆内发现了雌激素受体(ER)，1973年Terenius等在乳腺癌细胞浆内又发现了孕激素受体(PR)以来，ER，PR水平的检测已日益受到人们的重视。70年代以来，雌，孕激素的测定已广泛应用于妇科肿瘤的检测和预后。子宫内膜异位症及正常月经周期子宫内膜的雌，孕激素水平的检测也多见文献报道。但对妊娠期子宫肌组织雌，孕激素水平与分娩发动关系的研究报道却较少见，雌，孕激素水平的变化是否通过其相应受体含量的变化而与分娩发动有关亦未明了。     

NK细胞、NKT细胞在病毒性肝炎中的作用

以自然杀伤（NK）细胞和NKT细胞为主的固有免疫系统在以HBV、HCV感染为代表的病毒性肝炎病毒复制的早期控制、炎症波动、肝细胞的免疫性损伤中发挥着重要作用。该文对近年来NK细胞和NKT细胞在病毒性肝炎中作用的研究进展作一综述。     

杀伤细胞免疫球蛋白受体配型在造血干细胞移植中的应用

自然杀伤(NK)细胞在造血干细胞移植(HSCT)对于移植物植入、抵抗感染,以及抗肿瘤效应方面均起着重要作用.杀伤细胞免疫球蛋白受体(KIR)作为NK细胞上的重要受体家族,具有基因组成多样性、等位基因多态性的特点.KIR与人类白细胞抗原(HLA)-Ⅰ类分子结合后,对移植后NK细胞增殖起重要调控作用.笔者从KIR家族基因系统,相应配体及对各类型HSCT的影响方面进行综述,旨在探讨KIR配型对HSCT的临床意义.     

孕激素受体A、B及其比值与胎膜早破早产的相关性研究

[目的]探讨孕激素受体亚型-A(PR-A)与孕激素受体亚型-B(PR-B)比值(PR-A/PR-B)的变化与胎膜早破早产的相关性.[方法]选择2011年4月至2012年4月在湖南省妇幼保健院住院分娩的60例产妇的胎盘绒毛组织样本,根据孕妇早产类型将其分为早产胎膜早破有宫缩组、早产胎膜早破无宫缩组、早产无产兆组(如胎儿宫内窘迫,妊高症行剖宫产)三组,每组各20例,采用免疫组化法检测胎盘绒毛组织中PR-A、PR-B,并比较其比值PR-A/PR-B变化情况.[结果]早产胎膜早破有宫缩组PRA阳性表达率显著高于早产胎膜早破无宫缩组、早产无产兆组,差异具体统计学意义(χ2=9.967,P<0.01);早产无产兆组PRB阳性表达率显著高于早产胎膜早破无宫缩组、早产胎膜早破有宫缩组,差异具体统计学意义(χ2=7.062,P<0.05).早产胎膜早破有宫缩组PR-A/PR-B>1所占比例显著高于早产胎膜早破无宫缩组、早产无产兆组,差异具有统计学意义(χ2=6.72,P<0.05);三组PR-A/PR-B=1、PR-A/PR-B<1所占比例比较,差异均无统计学意义(χ2=1.67,P>0.05;χ2=2.13,P>0.05).PR-A/PR-B比值与PR-A的表达水平呈明显正相关(P<0.05),PR-A/PR-B比值与PR-B的表达情况呈显著负相关(P<0.05).[结论]PR-A表达及PR-A/PR-B比值改变可能与早产胎膜早破及其分娩发动密切相关.     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血NKT细胞体外活化及相关细胞因子表达分析

目的 分析与评价PBC患者外周血TCRVα24+Vβ11+NKT数量和功能状态及其与PBC发生的关系.方法 制备60例PBC患者(PBC组)和60名年龄及性别匹配健康人(健康对照组)PBMC,以FACS检测TCRVα24+Vβ11+NKT数量;以α半乳糖酰基鞘胺醇(α-galcer)和IL-2诱导PBMC中NKT的扩增活化,用ICS-FC检测细胞内表达IL-4和IFN-γ的NKT比值;用ELISpot和ELISA定量检测细胞内及上清液IL4和IFN-γ的表达量.结果 FACS检测PBC组和健康对照组TCRVα24+Vβ11+NKT扩增前后的比率分别为[0.16(0.11～0.26)]%、[0.82(0.61～0.89)]%、[0.33(0.27～0.38)]%、[27.40(23.52～33.87)]%,前组显著低于后组(Z值分别为6.563、7.707,P＜均0.01).扩增活化后PBC组和健康对照组TCRVα24+Vβ11+NKT的扩增倍数分别为扩增活化前的[96.05(80.50～100.27)]倍和[134.65(121.60～142.13)]倍,PBC组明显低于健康对照组(Z=6.462,P＜0.01).同时于活化后用ICS-FC检测细胞内细胞因子,PBC组和健康对照组IFN-γ+与TCRVα24+Vβ11+NKT比分别为[38.98(36.73～42.98)]%、[34.56(30.12～36.78)]%,前组显著高于后组(Z=3.158,P＜0.05);PBC组和健康对照组IL-4+与TCRVα24+Vβ11+NKT细胞比分别为[0.193(0.179～0.218)]%和[34.36(30.93～38.77)]%,前组显著低于后组(Z=6.476,P＜0.01).ELISpot和ELISA定量检测扩增活化后PBC组分泌IFN-γ的斑点形成细胞数(SFC)和上清液IFN-γ分泌量分别为[410(380～500)]SFC/1×106 PBMC、(67.21±11.27)ng/L,健康对照组[340(280～390)]SFC/1×106PBMC、(31.45±8.17)ng/L,前组的IFN-γ斑点形成细胞数及分泌量显著高于后组(Z=4.312,P＜0.05、t=27.25,P＜0.01);PBC组的IL-4斑点形成细胞数和分泌量分别为[73(60～100)]SFC/1×106PBMC、(12.65±4.17)μg/L,健康对照组[245(230～280)]SFC/1×106PBMC、(28.31±6.31)μg/L,PBC组IL-4却显著低于健康对照组(Z=5.112,P＜0.01、t=25.34,P＜0.01).结论 PBC组外周血TCRVα24+Vβ11+NKT数量较健康对照组明显减少,经α-galcer及IL-2体外活化后扩增倍数及分泌细胞因子IL-4的功能较健康对照组显著降低,而分泌IFN-γ能力却显著高于健康对照组,NKT数量的减少及免疫调节功能的紊乱可能是PBC发病的重要因素之一.     

足月妊娠分娩发动时孕妇蜕膜组织中TH1及TH2型细胞的变化

目的研究足月妊娠孕妇分娩前后蜕膜组织中Th1／Th2细胞因子的变化并探讨其在分娩发动中的作用。方法应用流式细胞技术检测孕晚期未临产组（剖宫产组）和临产组蜕膜组织中TH1TH2型细胞因子。结果足月妊娠孕妇蜕膜NK细胞胞内IFN—γ的表达率为临产组明显高于剖宫产组,而IL4的表达率为临产组明显低于剖宫产组,差异有显著性（P〈0．05）。结论分娩发动时,孕妇蜕膜组织中Th1和Th2型细胞发生变化,其机制复杂有待进一步研究。     

NKG2D介导正常人NK细胞对白血病细胞的杀伤作用

目的 探讨诱导白血病细胞NK细胞表面活性受体(NKG2D)配体表达增加,增强NKG2D与其配体相互作用介导的NK细胞对白血病细胞杀伤活性.方法 用羟基脲处理慢性髓性白血病细胞系OUN-1及白血病患者原代白血病细胞24 h,用流式细胞术检测培养前后其表面NKG2D配体的表达水平.取正常人外周血分离NK细胞并在含IL-2的培养液中培养72 h作为效应细胞,用羟基尿培养前后的OUN-1细胞作为靶细胞,用51Cr释放实验检测NK细胞对OUN-1 细胞的杀伤作用.结果 用羟基脲处理后的OUN-1细胞表面NKG2D配体MIC A/B 和ULBP2表达[平均荧光强度(MFI)值分别为23.5±3.4和33.5±4.8]较未处理的OUN-1细胞(MFI值分别为8.9±0.9和14.5±0.6)明显增加(P\%值分别为0.01和0.03),而ULBP1和ULBP3的表达无明显变化.羟基脲亦能诱导白血病患者原代白血病细胞表面NKG2D配体表达增加.正常人NK细胞对羟基尿处理过的OUN-1细胞杀伤作用明显增强[杀伤率为(62.0±5.6)%对(76.0±5.3)%,P\%=0.02],这种杀伤作用可以被抗NKG2D抗体部分抑制[(76.0±5.3)%对(46.0±4.5)%,P\%=0.00].结论 羟基脲可以诱导白血病细胞系OUN-1细胞表面NKG2D配体表达增加,从而增强NKG2D和其配体的相互作用介导的NK细胞对白血病细胞杀伤作用.     

急性髓系白血病患者NK细胞表达及功能变化研究

目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者自然杀伤(NK)细胞的抗原表达特征和功能标记物的表达特点。方法:采用多参数流式细胞术检测56例初诊AML患者临床样本以及24例健康对照样本中的NK细胞表面标记物以及其功能指标,包括激活性受体NKG2D、NKP46、DNAM-1和杀伤标记颗粒酶B、穿孔素。结果:56例AML患者参照WHO造血和淋巴组织肿瘤分类标准大致分为AML未分化型(M₁)、AML部分分化型(M₂)和急性粒/单核细胞白血病(M₄/M₅)3类,但3类患者的NK细胞并无差异,因而不再细分。NK细胞分为CD3^-CD56^hiCD16^-(简称CD56^hiNK)和CD3^-CD56^dimCD16⁺(简称CD56^dimNK)两个细胞群来分析。AML患者CD56^hiNK细胞群与CD56^dimNK细...     

沙利度胺对白血病细胞NKG2D配体表达及NK细胞杀伤敏感性的影响

目的:探究沙利度胺对白血病细胞自然杀伤细胞及活性受体D(natural killer cell group 2 member D,NKG2D)配体表达及自然杀伤细胞(natural killer,NK)杀伤敏感性的影响。方法:取对数生长期白血病细胞株HL-60、K562细胞,以不同浓度沙利度胺作用48h,并设置未经沙利度胺处理的细胞为对照组,采用细胞计数实验(cell counting kit-8,CCK-8)检测沙利度胺对细胞的半抑制浓度(half-inhibitory concentration,IC50),实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)和流式细胞术检测细胞NKG2D配体[MHC-I类链相关分子A(major histocompatibility complex classⅠchain-related protein A,MICA)、MICB]及人巨细胞病毒UL16蛋白的结合蛋白[(UL16-binding proteins,ULBPs:ULBP1、ULBP2、ULBP3)]表达情况,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放法检测沙利度胺对NK-92MI细胞的杀伤效率。结果:沙利度胺干预HL-60、K562细胞,IC50分别为30.06、31.95μg/mL,且随着沙利度胺浓度的升高,抑制作用越明显;与对照组比较,沙利度胺组MICB、ULBP1、ULBP2基因mRNA水平明显升高(P<0.05),但MICA和ULBP3 mRNA水平无明显变化(P>0.05);与对照组比较,沙利度胺组MICB、ULBP1、ULBP2表达明显升高(P<0.05),但MICA和ULBP3表达无明显变化(P>0.05);效靶比分别为1:1、5:1、10:1时,与对照组比较,沙利度胺组NK-92MI对细胞的杀伤效率明显升高(P<0.05)。结论:沙利度胺可能通过提高NKG2D配体MICB、ULBP1、ULBP2表达,提高HL-60、K562细胞对NK-92MI的杀伤敏感性。     

肿瘤患者自然杀伤细胞受体NKG2A和NKG2D的表达

目的通过研究肿瘤患者外周血自然杀伤（NK）细胞表面NKG2A和NKG2D的表达情况,探讨二者表达失衡与肿瘤免疫逃逸的关系。方法采用流式细胞术检测40例肿瘤患者和10名正常对照者外周血NK细胞表面NKG2A和NKG2D的表达情况。用全自动五分类血液分析仪测定各病例的血常规。结果肿瘤患者和正常对照组白细胞数值差异无统计学意义;肿瘤患者淋巴细胞比率低于对照组,而NK细胞明显高于对照组;肿瘤患者NK细胞表面抑制性受体NKG2A和活化性受体NKG2D均明显高于对照组,但肿瘤患者NKG2D荧光强度呈降低趋势。结论肿瘤患者NK细胞表面NKG2A／NKG2D表达失衡,可能是肿瘤免疫逃逸的机制之一。     

肝细胞癌NKG2D表达及对NK细胞细胞毒的影响

【目的】分析肝细胞癌NKG2D表达及对NK细胞细胞毒的影响。【方法】应用免疫荧光技术和流式细胞术 (FCM )分选 2 5例肝细胞癌 (HCC)、10例健康对照的外周血NK细胞 ,定量分析NKG2D蛋白表达。用MTT比色法检测抗NKG2DpAb加入前后NK细胞的细胞毒效应。【结果】HCC患者NK细胞的NKG2D蛋白表达量均低于正常对照 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。抗NKG2DpAb能显著抑制NK细胞对K5 6 2、HepG2细胞的细胞毒效应 ,使NK细胞对两种靶细胞的细胞毒效应分别下降了 6 .7和 4 .1倍。【结论】NK细胞NKG2D表达异常与肝细胞癌的发生发展可能相关。     

Cell surface organization of stress-inducible proteins ULBP and MICA that stimulate human NK cells and T cells via NKG2D

Cell surface proteins major histocompatibility complex (MHC) class I-related chain A (MICA) and UL16-binding proteins (ULBP) 1, 2, and 3 are up-regulated upon infection or tumor transformation and can activate human natural killer (NK) cells. Patches of cross-linked raft resident ganglioside GM1 colocalized with ULBP1, 2, 3, or MICA, but not CD45. Thus, ULBPs and MICA are expressed in lipid rafts at the cell surface. Western blotting revealed that glycosylphosphatidylinositol (GPI)-anchored ULBP3 but not transmembrane MICA, MHC class I protein, or transferrin receptor, accumulated in detergent-resistant membranes containing GM1. Thus, MICA may have a weaker association with lipid rafts than ULBP3, yet both proteins accumulate at an activating human NK cell immune synapse. Target cell lipid rafts marked by green fluorescent protein-tagged GPI also accumulate with ULBP3 at some synapses. Electron microscopy reveals constitutive clusters of ULBP at the cell surface. Regarding a specific molecular basis for the organization of these proteins, ULBP1, 2, and 3 and MICA are lipid modified. ULBP1, 2, and 3 are GPI anchored, and we demonstrate here that MICA is S-acylated. Finally, expression of a truncated form of MICA that lacks the putative site for S-acylation and the cytoplasmic tail can be expressed at the cell surface, but is unable to activate NK cells.     

乙型肝炎病毒相关性肝硬化患者外周血NK和NKT细胞功能特点及意义

目的 探讨乙型肝炎病毒相关性肝硬化(HBV-LC)患者外周血自然杀伤细胞(NK)和自然杀伤T细胞(NKT)功能相关分子表达特点及意义.方法 收集代偿期HBV-LC患者(HBV-CLC)、失代偿期HBV-LC患者(HBV-DLC)和同期体检健康者(HC)各25例作为研究对象.流式细胞术检测各组外周血NK和NKT细胞比例、...     

Anti-NKG2C/IL-15/anti-CD33 killer engager directs primary and iPSC-derived NKG2C+ NK cells to target myeloid leukemia

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NKG2A、NKG2D在食管鳞癌不同病理分期的表达及其相关性分析

目的 分析不同病理分期食管鳞癌患者血清中自然杀伤细胞表面抑制性受体A(NKG2A)和自然杀伤细胞表面活化性受体D(NKG2D)表达水平的特点,探讨NKG2A和NKG2D在食管鳞癌不同病理分期的表达意义,并研究NK细胞、NKG2A、NKG2D与病理分期的相关性.方法 用流式细胞仪分析92例食管鳞癌患者及50例健康志愿者外周血NK细胞数量及其NKG2A和NKG2D的表达情况.结果 与正常对照组相比,食管鳞癌患者外周血NK细胞表达增加[(9.97±4.25)% vs.(16.22±8.91)%,t′=-5.646,P<0.01],NK细胞表面NKG2A的表达水平升高[(35.19±17.73)% vs.(47.35±18.88)%,t=-3.742,P<0.01],NKG2D的表达水平降低[(83.20±3.85)% vs.(80.60±9.09)%,t′=1.925,P=0.019];食管鳞癌患者NKG2A/NKG2D的比值与其病理分期呈正相关性(r=0.333,P<0.01),行线性回归分析得F=7.413,P=0.008,按α=0.05水准,回归方程为:Y(NKG2A/NKG2D的比值)=0.105X(食管鳞癌病理分期)+0.347;R2=0.276.结论 食管鳞癌患者机体NK细胞数目增多,NKG2A/NKG2D比值与食管鳞癌病理分期进展呈正相关;降低NKG2A,提高NKG2D的表达水平,能增强NK细胞对肿瘤的杀伤活性,从而为食管鳞癌的免疫治疗开创新的思路.     

NKG2D在NK细胞杀伤血液肿瘤细胞中的作用

本研究旨在探讨NKG2D在NK细胞杀伤血液肿瘤细胞时是否发挥作用。将多种血液肿瘤细胞株作为靶细胞,并在靶细胞中检测NKG2D相应配体的表达,而后进行杀伤实验。将靶细胞与羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)共孵育,同时将NK细胞系NK92MI分别与NKG2D特异性封闭抗体或同型对照抗体共孵育。之后将NK92MI分别与多种血液肿瘤细胞共同培养,2 h后用流式细胞分析方法检测靶细胞的凋亡率。结果显示:加入NKG2D特异性封闭抗体后,NK细胞对于急性髓系白血病细胞Kasumi-1的杀伤作用减弱约30%,而在其他血液肿瘤细胞株中封闭NKG2D并未明显影响NK细胞对于靶细胞的杀伤。结论:在NK细胞作用于某些靶细胞时,NKG2D促进NK细胞的杀伤作用。     

多发性骨髓瘤患者可溶性MICA和NK细胞NKG2D受体的检测

目的 检测多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者血清可溶性主要组织相容性复合物Ⅰ类相关链A（soluble MICA, sMICA）和天然杀伤（NK）细胞表面NKG2D（naturalkiller group 2,member D）受体表达的关系。 方法 ELISA法检测38例MM患者和40例健康人对照的血清sMICA含量,流式细胞术检测外周血NK细胞表面NKG2D受体的表达。 结果 MM患者血清sMICA为（458±207）pg/ml显著高于健康对照组（135±82）pg/ml(t=9.133,P<0.01);Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期MM患者血清sMICA(pg/ml)分别为258±126、489±191和585±163,Ⅱ期和Ⅲ期均高于Ⅰ期患者(t分别为3.377和5.172,P均<0.01)。回归分析显示MM患者血清sMICA含量与外周血NK细胞表面NKG2D受体水平呈负相关（r=-0.749,P<0.01）。 结论 MM患者血清sMICA含量变化与该病的发生及疾病活动性有一定关联。