4型腺病毒载体的构建和β—半乳糖苷酶基因的表达

以４型腺病毒疫苗株感染Ａ５４９细胞，提取病毒ＤＮＡ，将ＥｃｏＲＩ消化的Ｄ片段克隆入ｐＵＣ１８质粒，得ｐＡｄ４质粒，质粒ｐＡｄ４和ｐＡｄ４Ｃ１－２５经酶切、系列亚克隆、加接头等方法得到大部分和部分缺失Ｅ３区的重组质粒。聚合酶链反应（ＰＣＲ）法获得ｐｏｌｙ（Ａ），构建约８００ｂｐ腺病毒晚期表达盒，在所构宾腺病毒重组质粒Ｅ３缺失区或Ｅ４与ＩＴＲ间插入表达盒，得到可同时表达２个或２个以上外源基因和保留了Ｅ     

恶性疟原虫保护性抗的复合基因——豆苗病毒重组活疫苗株的构建

将本实验室合成的一段编码恶性疟原虫不同发育阶段抗原表位基因，包括裂殖子表面怕ＭＳＡ１、ＭＳＡ２、环子孢子蛋白ＣＳＰ及环状体感染经细胞表面蛋白ＲＥＳＡ以及来自白细胞介素－１（ＩＬ－１）和破伤风类毒素（ＴＴ）上Ｔ细胞激活点等的抗原基因（ＨＧＦＳＰ）。先定向克隆人ＰＳＫ载体的ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ位点，后用ＥｃｏＲＩ单酶切，补平及用ＳａｃⅠ单酶切下手目的基因再定向克隆人痘苗病毒表面载体ＰＪ２－１６的Ｓｍ     

抗家鼠型HFRS病毒McAb13E2VH基因的克隆及序列分析

从分泌高亲和力抗家鼠型ＨＦＲＳ病毒型特异性ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系１３Ｅ２中提取细胞总ＲＮＡ，经逆转录合成ＣＤＮＡ，并以之为模板，用特异性引物进行ＰＣＲ，扩增出约３６０ｂｐ产物，将之克隆入ＰＵＣ１８质粒中。序列分析表明，所克隆的基因符合编码小鼠抗体ＶＨ的特征。１３Ｅ２ＶＨ基因由２６６个ｂｐ组成，编码１２２个氨基酸，隶属于小鼠重链ⅡＡ亚组。     

人单核细胞超化蛋白—1（MCP—1）基因的PCR扩增,克隆…

本文报道用植物血凝素（ＰＨＡ）诱导健康人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ，包括单核细胞和淋巴细胞），提取细胞总ＲＮＡ，反转录合成ｃＤＮＡ第一链，再以其为模板进行ＰＣＲ，得到了编码成熟单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的ｃＤＮＡ。该ｃＤＮＡ用ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ双酶切后，回收含ＭＣＰ－１基因的长约２８０ｂｐ的ＤＮＡ片段，插入到经ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ双酶切的ｐＵＣ１９载体中，进行序列分析。结果表明，ＭＣ     

HBsAg S与GM—CSF融合基因在L929细胞中的表达

将乙肝病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）主蛋白的编码基因Ｓ与人ＧＭ－ＣＳＦ基因融蛤 后,插入真核表达质粒ｐｃＤＮＡ１中,经质粒酶切鉴定及ＤＮＡ序列分析证明,目的基因插入ｐｃＤＮＡ１的ＣＭＶ启动子下降。以获得的重组质粒ｐＳＧＭ转染Ｌ９２９细胞,经ＲＴ－ＰＣＲ及细胞原位杂交证实目的基因的转录。     

人粒细胞集落刺激因子在家蚕细胞及幼虫中的高效表达

含信号肽序列的ｈＧ－ＣＳＦｃＤＮＡ基因克隆于Ｍ１３ｍｐ１８中，测序表明其基因序列与高活性ｈＧ－ＣＳＦｃＤＮＡ一致。将ｈＧ－ＣＳＦ基因插入家蚕核型多角体病毒（ＢｍＮＰＶ）转移载体ｐＢＥ２８４，经与野生型病毒ＤＮＡ共转染家蚕细胞后，通过体内同源重组的方式构建了重组病毒ＢｍＮＰＶ－Ｇ－ＣＳＦ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交表明重组病毒ＤＮＡ中含Ｇ－ＣＳＦ基因片段。重组病毒感染单层ＢｍＮ细胞后第四天表达量达１． ２×１０６ＣＦＵ／ｍｌ培养液，Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ分析可见分子量为１９×１０３左右一条带。家蚕幼虫感染重组病毒后第四天表达量达１．４×１０７ＣＦＵ／ｍｌ血淋巴（ｈｅｍｏｌｙｍｐｈ）。     

应用微卫星DNA单体型检测Wilson病症状前患者及杂合子

目的建立快速、准确、有效的Ｗｉｌｓｏｎ病（Ｗｉｌｓｏｎｄｉｓｅａｓｅ，ＷＤ）患者早期诊断及杂合子检测的基因诊断技术。方法应用Ｄ１３Ｓ３０１、Ｄ１３Ｓ３１６、Ｄ１３Ｓ２９６、ＡＦＭ２３８ｖｃ３、ＡＦＭ０８４ｘｃ５等５个微卫星ＤＮＡ（ｓｈｏｒｔｔａｎｄｅｍｒｅｐｅａｔ，ＳＴＲ），经聚合酶链反应（ＰＣＲ），扩增片段长度多态性－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＡＦＬＰ－ＰＡＧＥ），对２３个ＷＤ家系１２０名成员的ＤＮＡ进行单体型分析。结果２例拟诊患者得到确诊。在３１例ＷＤ同胞中，检出肯定症状前患者４例、杂合子８例、正常人１７例、可疑患者２例。结论ＳＴＲ单体型可提供高信息量的遗传诊断信息，为ＷＤ基因诊断提供了重要的新途径     

全身性红斑狼疮病人C4基因组DNA限制性片段长度多态性的检测

以Ｃ４基因５＇ｃＤＮＡ片段为探针，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交法对２４例全身性红斑狼疮（ＳＬＥ）病人基因组ＤＮＡ的Ｃ４基因限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）进行了分析，并与６０例健康人资料进行了对比。结果显示，ＳＬＥ病人Ｃ４Ａ基因缺失的表型频率与基因型频率远较健康人为高，分别为２９．２％对６．７％（Ｘ＾２＝７．７５，Ｐ＜０．０１）及１８．７％对３．３％（Ｘ＾２＝１０．８，Ｐ＜０．００５）。在两名同合子     

4型腺病毒载体的构建和β－半乳糖苷酶基因的表达

以４型腺病毒疫苗株感染Ａ５４９细胞，提取病毒ＤＮＡ，将ＥｃｏＲＩ消化的Ｄ片段（７０．５－８３．０基因图谱单位）克隆入ｐＵＣ１８质粒，得ｐＡｄ４（７０．５－８３）质粒，质粒ｐＡｄ４（７０．５－８３）和ｐＡｄ４Ｃ１－２５经酶切、系列亚克隆、加接头等方法得到大部分和部分缺失Ｅ３区的重组质粒。聚合酶链反应（ＰＣＲ）法获得ｐｏｌｙ（Ａ），构建约８００ｂＰ腺病毒晚期表达盒，在所构建的腺病毒重组质粒Ｅ３缺失区或Ｅ４与ＩＴＲ间插入表达盒，得到可同时表达２个或２个以上外源基因和保留了Ｅ３区编码分子量为１９３００糖蛋白基因的３种Ａｄ４载体。将ｌａｃＺ基因插入载体表达区，与Ｂｅｌｌ消化的Ａｄ４ＤＮＡＡ片段共转染Ａ５４９细胞，ＯＮＰＧ法检测证实所构建的载体和表达盒功能良好。本项工作对于在国内研究口服活疫苗及开展基因治疗均具有重要意义。     

我国登革2型病毒E基因的克隆与表达研究

以我国登革２型病毒４３（Ｄ２－４３）株ＲＮＡ为模板，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增了Ｅ基因。扩增的ｃＤＮＡ片段约１２９０ｂＰ， 与预期大小相一致，经ＨｉｎｄⅢ酶切鉴定和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交证实了Ｅ基因片段的特异性。将Ｅ基因的扩增片段首先克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐtⅡＫＳ~＋质粒ＤＮＡ中，利用重组子中载体的酶切位点，将该基因片段再克隆到高效表达载体ｐＢＶ２２０中。用ＰＣＲ技术从２０个重组子中筛选出６个阳性克隆　，经ＳａｌⅠ和ＰｓｔⅠ酶切进一步鉴定，证明这６个重组质粒中均含有Ｅ基因片段。采用温控诱导，４小时表达的蛋白量约占菌体总蛋白的２０％。经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证明，表达的蛋白可与该病毒株的多克隆腹水抗体和登革２型病毒标准株的单克隆抗体起特异反应。     

汽车驾驶员腰椎保护带的振动防护效应测试及其生物力学作用分析

通过对汽车驾驶员腰部振动的测试 ,了解腰椎保护带对振动的防护效应并对其生物力学作用进行分析。以日本产五十铃八吨载重卡车 (TDG72 )为测试车型。在装载六吨货物以三种不同车速 (10、30、6 0 km/ h)行进在柏油公路时 ,分别在佩带和不佩带腰椎保护带的情况下 ,对驾驶员腰椎部位垂直振动和水平纵向振动进行实时测量 (传感器安置于裤腰带和保护带的背外侧 )。结果显示 :1驾驶员腰部振动频率多为 10 Hz以下 ,属低频振动 ;2垂直振动大于水平纵向振动 ;3系腰椎保护带时的振动测量值大于不系腰椎保护带的测量值。由于腰椎保护带改变了脊柱的生物力学和振动特性 ,从而起到了保护腰椎的作用。我们认为它是防治汽车驾驶员腰痛的良好方法之一。     

心音图运动试验的精密度和准确度的分析

“心音图运动试验”(PCGET)是新近提出的一项心肌收缩能力以及心血管病人和健康人的心力储备评估方法。为了验明 PCGET方法的可信度 ,我们进行了该方法的精密度和准确度的研究。对 30个志愿者进行了PCGET,不同检查者对同一受试者同一心动周期中 S1幅值测量时 ,检查者 A的一组数据的 x± s=5 .0 5 0 .0 45 1,检查者 B的一组数据的 x± s=4.95± 0 .0 34 6 ,F=1.6 99,P>0 .0 5。不同检查者对同一受试者同一心动周期测量时 ,检查者 A的一组数据的 x± s=0 .789± 0 .0 0 18,检查者 B的一组数据的 x± s=0 .787± 0 .0 0 17,F=1.16 7,P>0 .0 5。对 PCGET运动前后心脏变力性状态评估的准确度为 10 0 %。结果表明 ,PCGET的精密度和准确度高 ,可作为心力储备的无伤性、简便、经济的量化测评方法。     

微电脑前列腺脉冲式水囊按摩药渗仪的研制及应用

目的介绍微电脑前列腺脉冲式水囊按摩药渗仪的研制及临床应用.方法根据慢性细菌性前列腺炎的病理特点,在临床实验的基础上,结合生物医学工程技术和现代中医药理论,研制出微电脑前列腺脉冲式水囊按摩药渗仪.试用于治疗慢性细菌性前列腺炎病人600例.结果临床治愈459例(76.5%),显效101例(16.8%),好转40例(6.7%).无任何副作用.结论微电脑前列腺脉冲式水囊按摩药渗仪对慢性细菌性前列腺炎是一种良效、安全、舒适而科学的治疗新途径.     

新生儿心肺功能监护仪的设计与新生儿生理参数的确定

本文介绍了新生儿心肺功能监护仪的软硬件设计,该仪器具有体积小,功能全面,适用性广,操作简单等特点,能可靠地实现对新生儿的监护,用该仪器对新生儿的血氧饱各度和心率这两个最重要的生理参数的测定获取了中国新生儿呼吸系统的数据,对数据的统计分析表明,血氧饱和度和心率这两个最重要热处理到达数的测定获取了中国新生儿呼吸系统的数据,对数据的统计分析表明,血氧饱和度和心率都属于正态分布,并依此给出了中国新生婴儿的这两个参数的分布范围。     

家蝇实验种群生殖,存活及生命表的研究

在最适宜的综合实验条件下，采用定量研究的方法，对家蝇实验种群的生殖、存活和生命表进行了研究，求出家蝇各生长阶段的发育历期（卵为０．５±０．０８００ｄ；幼虫为４．５±０．５０００ｄ；蛹为５．５±０．５０００ｄ；一世代为１５．５±１．５５６６ｄ），成活率（卵为９４．８２５１％；幼虫为８９．３２３８％；蛹为９５．２３７７％；一世代为８１．０２８９％），生殖特性（最大产卵量为１８４个／次／雌，平均产卵次数为８±７．８３７７次；终生产卵数为６８７±４１６．５８５８个）和存活特性（雌性最大寿命为７７ｄ；雄性最大寿命为６３ｄ；雌性平均寿命为３７．４９６３ｄ；雄性平均寿命为２６．８３９８ｄ）。我们也求出了家蝇整个生命中各天的死亡数和产卵数，绘制了家蝇实验种群生命表。我们研究获得的各项结果为家蝇的消灭和开发提供了科学的理论依据。     

恶性疟原虫疫苗研究VIPfCMR基因与人白细胞介素-2基因的连接与克隆

用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ和ＳａｌＩ将恶性疟原虫复合抗原基因ＰｆＣＭＲ从质粒ｐＷＲ４５０－１／ＰｆＣＭＲ中切下，插入质粒ｐＢＶ２２０／ＩＬ－２中人白细胞介素－２（ＩＬ－２）基因的ＥｃｏＲＩ位点。重组质粒转化大肠杆菌ＤＨ５ａ，通过ＰＣＲ扩增和酶切鉴定，筛选出正向插入的重组载体ｐＢＶ２２０／ＰｆＣＭＲ－ＩＬ－２。为表达ＰｆＣＭＲ－ＩＬ－２融合蛋白打下基础。     

丙型肝炎病毒基因型与血清HCV RNA含量关系及与干扰素应答的研究

目的探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因型与血清ＨＣＶＲＮＡ含量的关系及其对干扰素应答的影响。方法应用定量荧光ＰＣＲ（Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ）技术检测了１３５例不同基因型ＨＣＶ感染的慢性丙型肝炎患者血清ＨＣＶＲＮＡ含量，另对其中７７例进行干扰素治疗并随访１２个月以上。结果ＨＣＶ－Ⅱ型感染血清ＨＣＶＲＮＡ水平（１０７．８±３．４拷贝／ｍｌ）显著高于ＨＣＶ－Ⅲ型感染（１０６．３±２．５拷贝／ｍｌ）（Ｐ＜０．０１），Ⅲ型感染的应答率（７／１３，５３．８％）显著高于Ⅱ型感染（２０／６４，３１．３％）（Ｐ＜０．０５）。应答组治疗前血清ＨＣＶＲＮＡ含量（１０６．８±２．７拷贝／ｍｌ）显著低于无应答组（１０８．３±３．２拷贝／ｍｌ）（Ｐ＜０．０１）。ＨＣＶＲＮＡ含量低于１０６．５拷贝／ｍｌ者，无论何种型别ＨＣＶ感染均应答较好，而ＨＣＶＲＮＡ高于１０８．０拷贝／ｍｌ者则应答极差。结论ＨＣＶ基因型及病毒血症水平是预测干扰素疗效的重要因素，且后者比前者意义更大。Ⅱ型感染病毒血症水平较高可能是影响其疗效的原因之一。     

医学图像非刚性配准研究进展

医学图像非刚性的配准在医学诊断和治疗计划中起着重要的作用,学者们为此提出了各种非刚性配准算法.本文首先分析了非刚性配准的必要性;接着介绍了近年来提出的典型非刚性配准算法,给出了这些方法的基本原理及研究进展,最后对非刚性配准的发展方向进行了展望.     

中国株庚型肝炎病毒(HGV)感染猕猴的实验研究

应用０．５ｍｌ含中国株庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）的血清接种５只猕猴，５只猕猴于接种后１周血清ＨＧＶＲＮＡ均阳转；ＨＧＶＲＮＡ滴度在猴体内可高达１∶１０５，较接种血清中ＨＧＶＲＮＡ滴度（１∶１０２）高出许多，提示ＨＧＶ在猕猴体内复制。其中４只猕猴血清抗－ＨＧＶ阳转；４只出现ＡＬＴ异常。后用其中１只猕猴感染后４５天的血清给另２只猕猴接种，该２只猴也出现血清ＨＧＶＲＮＡ和抗－ＨＧＶ阳转及ＡＬＴ异常。本研究表明，中国猕猴有可能作为ＨＧＶ感染的动物模型。     

营养和激素对家蝇卵黄发生的影响

本实验通过对家蝇取食量的测定，对家蝇进行不同饲料饲喂后，对其不同发育期的血淋巴、脂肪体及和卵巢的发育及卵黄蛋白含量进行观察测定，结果表明，取食蛋白组家蝇血淋巴、脂肪体和卵巢卵黄蛋白含量均高于奶粉组和对照组；羽化４８ｈ后的血淋巴和脂肪体中卵黄蛋白含量为７．３μｇ／μｌ、３１．９μｇ／头；卵巢卵黄蛋白含量为５５．０μｇ／头；在羽化后７２ｈ血淋巴和脂肪体中卵黄蛋白含量分别为２．９μｇ／μｌ、３２．０μｇ／头；卵巢卵黄蛋白含量为８０．０μｇ／头；脉冲式饲喂家蝇后，体内卵黄蛋白含量明显高于对照组，说明蛋白质饲料在家蝇卵黄发生中起重要作用。激素处理结果证明，ＪＨＡ单独处理及ＪＨＡ和蜕皮素协同处理均能促进卵黄蛋白的合成和摄取，而蜕皮素单独处理没有促进作用。最后对营养和激素对生殖的调控作用进行了讨论。