硼替佐米对多药耐药HL-60细胞增殖的影响及耐药逆转作用

目的 观察硼替佐米对多药耐药白血病细胞增殖的影响及耐药逆转作用,初步探讨硼替佐米抑制多药耐药白血细胞增殖的分子机制.方法 以多药耐药白血病细胞系HL-60/DNR和HL-60/VCR细胞为模型,以HL-60细胞为对照,用四甲基偶氮唑盐反应比色法(MTT法)测定硼替佐米对HL-60、HL-60/DNR和HL-60/VCR细胞增殖的抑制作用,计算微毒剂量作为逆转耐药剂量.分4个实验组:HL-60/DNR+柔红霉素(DNR)、HL60/DNR+DNR+硼替佐米、HL-60/VCR+长春新碱(VCR)、HL-60/VCR +VCR+硼替佐米,计算硼替佐米逆转耐药倍数.硼替佐米按浓度递增(10、40、80nmol/L)作用于HL-60/DNR和HL-60/VCR细胞48 h,实时定量RT-PCR和Western blot方法检测XIAP、cIAP-1、cIAP-2 mRNA和蛋白表达水平及NF-κB活性.结果 硼替佐米呈浓度依赖性抑制HL-60、HL-60/DNR和HL-60/VCR细胞增殖,IC50值分别为(28.90 ±3.99)、(81.19 ±9.34)和(73.48±8.94) nmol/L.10 nmol/L硼替佐米预处理48 h后,DNR对HL-60/DNR细胞的IC50值由(12.90±1.75) μmol/L降低至(3.54±0.57) μmol/L(P ＜0.01),VCR对HL-60/VCR的IC50值由(33.25 ±7.28)μmol/L降低至(9.97±1.15) μmol/L(P ＜0.01),逆转耐药倍数分别为(3.32±0.53)和(2.64±0.28)倍.硼替佐米呈浓度依赖性下调XIAP、cIAP-1、cIAP-2 mRNA和蛋白的表达水平及抑制NF-κB活化.结论 硼替佐米可抑制多药耐药HL-60细胞增殖,并对多药耐药具有一定的逆转作用;其机制可能与下调凋亡抑制蛋白表达相关.     

硼替佐米单独或联合三尖杉酯碱、三氧化二砷对耐药白血病细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨硼替佐米单独或联合三尖杉酯碱(HT)、三氧化二砷(As2O3)对HL-60/ADM多药耐药细胞株和难治、复发急性白血病原代细胞增殖、凋亡的影响.方法 以HL-60/ADM白血病细胞株及难治、复发急性白血病患者原代细胞为研究对象,采用硼替佐米单独或联合HT、As2O3,处理细胞,MTT法观察细胞增殖活力,Hoechst33342染色、流式细胞术检测细胞凋亡率及检测胞内阿霉素荧光阳性率,进一步分析硼替佐米逆转耐药能力.结果 10～50 nmol/L硼替佐米能够抑制HL-60/ADM细胞增殖并引起凋亡,其中40 nmol/L处理48 h达最大抑制效果;应用15 μmol/L As2O3和752nmoL/L HT分别与不同浓度硼替佐米联合处理HL-60/ADM细胞,其对HL-60/ADM细胞的增殖抑制率和凋亡率均高于硼替佐米单药处理组(P值均<0.05).10 nmol/L硼替佐米能使HL-60/ADM细胞对阿霉素的蓄积作用大大提高.硼替佐米对难治、复发急性白血病患者原代细胞的增殖抑制作用与HL-60/ADM细胞一致.结论 硼替佐米能够抑制HL-60/ADM细胞及难治、复发急性白血病原代细胞增殖并诱导其凋亡,与HT或As2O3联合具有相加作用.     

硼替佐米对K562细胞增殖、凋亡及SHIP基因表达的影响

本研究旨在探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米(bortezomib)对K562细胞的增殖、凋亡及SHIP基因表达的影响。将不同浓度的硼替佐米作用于K562细胞,采用MTT法测定细胞增殖活性,用流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR方法检测SHIP mRNA表达。结果表明,硼替佐米10、20、50和100 nmol/L作用于K562细胞24 h,细胞增殖抑制率分别为(5.76±1.47)%、(10.55±1.59)%、(17.14±2.05)%和(27.69±3.57)%,空白对照组为(1.30±0.10)%;20nmol/L硼替佐米作用于K562细胞24、48、72 h,细胞增殖抑制率分别为(10.55±1.59)%、(16.33±2.53)%、(19.78±1.56)%,24 h组与48 h组比较,差异具有统计学意义(P<0.05),10、20、50、100 nmol/L硼替佐米作用于K562细胞24h,Annexin V-FITC/PI双标法显示其凋亡率分别为(12.7±0.6)%、(26.9±0.9)%、(32.6±1.2)%、(72.5±1.5)%,均高于对照组(1.0±0.5)%(P<0.05)。RT-PCR法检测结果显示应用硼替佐米作用后SHIP mRNA表达上调明显,与空白对照组比较差异有统计学意义。结论:硼替佐米呈时间、浓度依赖性抑制K562细胞增殖,并能通过上调SHIP基因的表达诱导细胞凋亡。     

硼替佐米体外诱导K562细胞凋亡的作用不受骨髓间充质干细胞的影响

本研究探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米在有或无骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells)条件下对白血病细胞株K562促凋亡作用,以及对MSC和K562细胞的黏附分子VCAM-1表达的影响.建立MSC和K562细胞的共培养体系,以终浓度为50 mnol/L的绷替佐米处理K562细胞4-24小时,应用Annexin-V/PI双染法检测K562细胞凋亡,半定量RT-PCR检测VCAM-1 mRNA的表达.结果显示,硼替佐米可诱导K562细胞凋亡,并呈现时间依赖性;共培养组调亡细胞比例与单独培养组相比无显著差异;K562细胞与MSC共培养可诱导K562细胞表达VCAM-1,MSC在共培养前后表达VCAM-1无明显变化.硼替佐米作用24小时后,K562细胞表达VCAM-1消失,MSS表达VCAM-1明显下降.结论:硼替佐米在MSC存在的情况下依然可诱导白血病细胞凋亡,提示硼替佐米可拮抗MSC对白血病细胞的保护作用.     

硼替佐米对内皮细胞迁移及血管新生的影响

目的 通过观察硼替佐米对内皮细胞迁移和血管新生相关因子表达的影响,探讨硼替佐米抗肿瘤细胞增殖作用的机制.方法 细胞计数法检测不同浓度硼替佐米分别处理12和24 h后内皮细胞系HMEC-1细胞的相对增殖活力;采用Transwell模型观察细胞迁移率;实时定量PCR方法检测Annexin A2、血管内皮生长因子(VEGF)基因表达水平,Western blot法检测Annexin A2在蛋白水平的变化.结果 2.5、5.0、10 nmol/L硼替佐米作用12 h,对HMEC-1细胞增殖抑制作用较弱[细胞增殖相对活力分别为(100.4±2.2)%、(79.3±2.1)%、(87.4±6.2)%],仅10 nmol/L组与对照组(100.O%)相比差异有统计学意义(P<0.05);但明显降低了细胞的迁移率,2.5、5.0、10.0 nmol/L硼替佐米组HMEC-1细胞迁移率分别为(69.7±6.0)%、(59.7±9.0)%、(54.7±12.7)%,与对照组(100.0%)相比,差异均具有统计学意义(P<0.05):硼替佐米抑制了Annexin A2和VEGF基因的表达,5.0 nmol/L硼替佐米处理12 h,HMEC-1细胞Annexin A2和VEGF相对表达水平分别为0.540±0.001和0.673±0.153,与对照组(均设定为1.000)相比,差异均有统计学意义(P<0.05),Western blot同样显示Annexin A2在蛋白水平表达下调.结论 硼替佐米可通过下调 Annexin A2和VEGF的表达,从而抑制内皮细胞系HMEC-1细胞的迁移.     

三氧化二砷增强硼替佐米、地塞米松对多发性骨髓瘤细胞的作用

目的 通过观察硼替佐米单用及与三氧化二砷(As_2O_3)、地塞米松(DXM)联合应用对多发性骨髓瘤(MM)细胞株KM3细胞增殖及凋亡的影响,探讨As_2O_3能否增强硼替佐米、DXM的抗MM作用.方法 采用MTT法检测硼替佐米单用及与As_2O_3、DXM联合应用对KM3细胞增殖的抑制作用,计算其IC_(50)值.采用细胞形态学、琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段观察硼替佐米对KM3细胞凋亡的影响,Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测硼替佐米联合As_2O_3、DXM后KM3细胞凋亡率的变化.结果 硼替佐米、As_2O_3及DXM对KM3细胞增殖抑制呈时间和浓度依赖性IC_(50)值分别为0.27、3.10、8.01 μmol/L;硼替佐米联合As_2O_3及DXM对KM3细胞的增殖抑制作用强于硼替佐米联合As_2_O3或DXM[(34.51±0.51)%对(25.39±0.90)%;(34.51±0.51)%对(23.80±0.78)%].0.25μmol/L硼替佐米与KM3细胞共孵育48 h后,KM3细胞出现典型的凋亡形态学改变,DNA电泳呈现梯形条带,Annexin V阳性细胞比例增高;硼替佐米联合As_2O_3、DXM组的KM3细胞凋亡率明显高于硼替佐米联合DXM组.结论 在体外,硼替佐米能够抑制KM3细胞增殖,诱导其凋亡.硼替佐米联合As_2O_3及DXM对KM3细胞增殖抑制作用显著增强;As_2O_3可增强硼替佐米、DXM对KM3细胞的诱导凋亡作用.     

间充质干细胞对多发性骨髓瘤细胞生长及硼替佐米诱导其凋亡的影响研究

目的 探讨间充质干细胞在多发性骨髓瘤细胞生长以及硼替佐米诱导骨髓瘤细胞凋亡中的作用.方法 取15例临床确诊的多发性骨髓瘤(MM)患者以及3名正常供者的骨髓标本,分离其间充质干细胞(MM-BMSC和ND-BMSC);测定细胞生长曲线、免疫表型和细胞因子分泌水平.将骨髓瘤细胞(NCI-H929)与BMSC细胞共培养,并加入蛋白酶体抑制剂硼替佐米,观察BMSC对NCI-H929细胞生长增殖的影响;进一步通过Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术(FCM)检测BMSC对硼替佐米诱导NCI-H929细胞凋亡的影响.结果 成功分离得到MM患者以及正常供者骨髓间充质干细胞,FCM检测显示两者均高表达CD73和CD105(＞95%),表达CD44和CD29,不表达CD31、CD34、CD45和HLA-DR(＜1%)等表面分子.生长曲线测定显示MM-BMSC增殖较为缓慢,倍增时间(82 h)较ND-BMSC(62 h)略有延长(P＜0.05).与ND-BMSC比较,MM-BMSC分泌高水平的细胞因子IL-6和VEGF,分别为(188.8±9.4)pg/ml对(115.0±15.1)pg/ml和(1497.2±39.7)pg/ml对(1329.0±21.1)pg/ml.将BMSC与骨髓瘤细胞NCI-H929共培养,MM-BMSC可促进骨髓瘤细胞的生存,降低NCI-H929细胞对硼替佐米的敏感性,明显抑制硼替佐米诱导的瘤细胞凋亡.结论 MM-BMSC可促进骨髓瘤细胞的生长,明显减少蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导的细胞凋亡.     

硼替佐米增加HL-60细胞对TRAIL的敏感性

本研究旨在探讨硼替佐米（bortezomib）是否可以增加HL-60细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNF—related apoptosis—inducing ligand,TRAIL）的敏感性及其可能的作用机制。选择亚细胞毒浓度的硼替佐米与不同浓度的TRAIL联合处理HL-60细胞,用MTT法检测并绘制增殖抑制曲线．用Annexinv／PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测caspase-8的表达。结果表明,亚细胞毒浓度的硼替佐米与10ng／ml的TRAIL联合作用于HL-60细胞时细胞凋亡率较单独应用TRAIL时增加,相应的caspase-8的表达也随之增加。结论：亚细胞毒浓度的硼替佐米可以增加HL-60细胞对TRAIL的敏感性,其机制可能与促进caspase-8表达有关。     

2-甲氧基雌二醇联合硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞凋亡的影响

目的 探讨2-甲氧基雌二醇(2-ME2)联合硼替佐米的抗多发性骨髓瘤(MM)效应及与聚集小体(aggresome)形成之间的相关性.方法 以MM细胞系RPMI 8226、NCI-H929、U266、SKO-007细胞作为研究对象,采用硼替佐米单药或联合2-ME2处理,通过等效应线图法分析两者是否具有抗MM协同效应;通过免疫荧光技术在同一组细胞群中研究聚集小体阳性和阴性细胞的凋亡情况.结果 ①硼替佐米呈浓度和时间依赖性地显著提高聚集小体阳性细胞比例,且聚集小体几乎全部出现于非凋亡细胞中.②等效应线图法分析显示一定浓度范围的硼替佐米与2-ME2联合具有显著的协同作用.③硼替佐米与2-ME2联合应用后聚集小体阴性的凋亡细胞显著增多而聚集小体阳性的非凋亡细胞明显减少.在RPMI 8226及U266细胞中,硼替佐米单药与联合用药组相比,聚集小体阴性的凋亡细胞分别由(14.5±2.6)%及(20.1±2.9)%增加至(80.7±6.9)%及(71.6±6.2)%;聚集小体阳性的非凋亡细胞分别由(75.3±5.7)%及(69.1±8.6)%减少到(13.8±3.8)%及(19.5±4.2)%.结论 硼替佐米诱导生成的聚集小体对MM细胞具有保护作用;2-ME2通过抑制聚集小体途径可以显著增强硼替佐米的抗MM效应.     

骨髓瘤细胞系对硼替佐米敏感性与β-连环素表达水平关系的研究

目的 探讨β-连环素(β-catenin)与骨髓瘤细胞系对硼替佐米(Bortezomib)敏感性的关系.方法 以骨髓瘤细胞系RPMI8226、CZ-1、NCI-H929细胞为研究对象,采用锥虫蓝拒染法及改良四呷基偶氮唑盐比色(MTT)法检测药物对细胞的增殖抑制,Annexin V及PI染色流式细胞术检测药物对细胞凋亡的影响,RT-PCR及Western blot法比较硼替佐米、2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol,2ME2)单药或联合处理后,不同细胞系胞质内β-连环素的表达及变化,分析β-连环素表达水平与骨髓瘤细胞系对硼替佐米敏感性的关系.结果 β-连环素蛋白在不同骨髓瘤细胞系的基础表达水平由高到低依次为RPMI8226、CZ-1、NCI-H929细胞,对应的硼替佐米半数抑制浓度(IC50)分别为(49.8±0.6)、(24.7±0.4)、(8.4±0.2)nmol/L;硼替佐米(0、1、5、10 nmol/L)单药处理后,各细胞系β-连环素蛋白水平呈时间、剂量依赖性升高,而相应mRNA水平无明显变化;与硼替佐米(5 nmol/L)单药处理组相比,硼替佐米(5 nmol/L)联合2ME2(1 μmol/L)处理后,RPMI8226、CZ-1及NCI-H929细胞胞质β-连环素蛋白水平分别降低64.03%、52.56%和51.48%,凋亡细胞比例分别增加8.00、1.86、1.19倍.结论 β-连环素表达水平较高的骨髓瘤细胞系对硼替佐米敏感性较低;小剂量2ME2联合硼替佐米可降低β-连环素水平,增强骨髓瘤细胞系对硼替佐米的敏感性.     

蟾蜍灵在诱导HL-60细胞凋亡过程中对Bcl-2和PKC的影响

为了研究蟾蜍灵在诱导HL-60细胞凋亡过程中对Bcl-2表达与裂解和磷酸化的作用,及对蛋白激酶C(PKC)活性与PKCs亚细胞定位的影响,分别采用台盼蓝拒染法检测细胞生存率,细胞染色法观察凋亡形态,流式细胞术分析细胞周期,琼脂糖凝胶电泳检测凋亡DNA片段化,[γ-32P]同位素掺入法测定PKC活性,Westernblot分析Bcl-2及PKC蛋白表达。结果表明:①蟾蜍灵抑制HL-60细胞增殖,24、48及72小时的IC50分别为(25.8±2·1)、(8.0±1.2)及(2.3±0.3)nmol/L;②50nmol/L蟾蜍灵作用24小时可诱导HL-60细胞凋亡;③50nmol/L蟾蜍灵处理HL-60细胞6-24小时,Bcl-2蛋白表达水平明显下调,并出现23kD的裂解片段,磷酸化水平逐渐降低;④1-100nmol/L蟾蜍灵分别作用30分钟,对PKC总活性无影响,但可促使PKCβⅡ膜转位。结论:蟾蜍灵诱导HL-60细胞凋亡可能与Bcl-2表达降低、裂解及脱磷酸化有关。     

蟾蜍灵诱导HL-60细胞凋亡过程中对Bcl-2、Survivin、Smac/DIABLO表达的影响

目的 研究蟾蜍灵在诱导HL-60细胞凋亡过程中，对线粒体凋亡途径相关基因Bcl-2、Bax、Survivin及Smac／DIABLO表达的影响。方法 采用锥虫蓝拒染法检测细胞存活情况，细胞形态学观察及流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot分析Bcl-2、Bax、Smac／DIABLO、Survivin及caspase-3蛋白表达，RT-PCR检测SurvivinmRNA表达。结果 蟾蜍灵抑制HL-60细胞增殖，24，48及72h的，IC50值分别为25．8，8．0及2．1nmol/L。蟾蜍灵大于50．0nmol/L时可明显诱导HL-60细胞凋亡。50．0nmol／L蟾蜍灵作用6，12，24及48h，Bcl-2蛋白表达分别下调至作用前的88．6％，53．3％，19．2％及9．5％，而Bax蛋白表达无明显变化，Bcl-2／Bax比值由2．0分别降至1．7，1．1，0．4及0．2。Survivin蛋白表达分别下调至作用前的75．2％，54．8％，37．5％及20．3％；Survivin mRNA表达在作用6，12和24h后分别下调至作用前的85．7％，39．4％和12．5％，在作用48h后几乎检测不到。50．0nmol／L蟾蜍灵作用12，24及48h，线粒体部分的Smac／DIABLO蛋白表达分别下调至作用前的77．5％，21．2％及15．3％，而胞浆部分的Smac／DIABLO蛋白表达分别上调至作用前的1．4，2．0．及3．5倍。蟾蜍灵作用8～48h可检测到caspase-3的活化亚基。结论 蟾蜍灵诱导的HL-60细胞凋亡与Bcl-2及Survivin表达下调、线粒体释放Smac／DIABLO及caspase-3活化有关。     

JWA基因在HL-60细胞定向分化中的表达及意义

为了研究JWA基因在HL-60细胞定向分化中的表达规律,探讨其在白血病细胞分化和凋亡中的意义及可能的作用机制,应用FCM检测HL-60细胞经ATRA（10^-6 mol/L）、Ara-C（10 ng/ml）、TPA（10^-8 mol/L）作用后2、4、6、8天CD13、CD14、CD15、CD11b改变及细胞周期变化;应用半定量RT-PCR及蛋白印迹技术检测JWA基因在HL-60细胞定向分化中的表达趋势以及相关凋亡因子Bcl-2、HSP27和HSP70的表达.结果表明：经上述药物分别处理HL-60细胞后,不同时段FCM相关指标检测结果证明其分别向粒、单核、巨噬细胞样分化.JWA基因表达呈时间依赖性升高;Bcl-2则呈时间依赖性下降;HSP70在ATRA及TPA组与JWA表达呈正相关,与Bcl-2呈负相关,而各组HSP27并无表达.ATRA处理HL-60细胞后JWA基因表达趋势与原代细胞相反,且不需要ATRA诱导分化作为前提.分别以Ara-C 10 ng/ml和Ara-C 20 ng/ml处理HL-60细胞后,JWA基因的表达呈反向变化,即前者呈时间依赖性增加,而后者则下降.结论：JWA基因在实现ATRA及TPA诱导白血病细胞分化和凋亡中可能具有双重调节作用;JWA基因表达的高低与Ara-C诱导分化作用及细胞毒作用有关;HL-60细胞与原代白血病细胞在诱导分化机制方面可能不尽相同.     

蟾蜍灵对HL—60细胞的生长抑制及凋亡诱导作用

目的 研究中药蟾酥有效成分蟾蜍灵（ｂｕｆａｌｉｎ）对人白血病细胞的作用及其机制。方法 应用ＭＴＴ比色法观察蟾蜍灵对细胞的抑制作用。荧光显微境和透射电镜观察细胞结果色的改变,ＤＮＡ交电泳１、原位缺口标记法和流式细胞术等分析细胞凋亡。结果 ①蟾蜍灵明显抑制ＨＬ－６０细胞的生长,半数抑制浓度（ＩＣ５０）约为０．０２５μｍｏｌ／Ｌ;②典型的细胞形态学改变、ＤＮＡ片段化和亚Ｇ１峰的检出等证实蟾蜍灵能诱导白血     

蟾蜍灵在诱导HL-60细胞凋亡时对SYK和CBL家族蛋白的影响

为了探讨酪氨酸蛋白激酶SYK和CBL家族泛素连接酶在蟾蜍灵诱导HL-60细胞凋亡过程中的作用机制,采用台盼蓝染色检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞凋亡,采用Western blot和免疫沉降技术检测CBL、CBL—b表达和SYK的磷酸化。结果显示,蟾蜍灵以时间和剂量依赖方式抑制HL-60细胞增殖,24、48和72小时抑制细胞活力的IC50浓度分别约为26．3,7．8和2．0 nmol／L。高剂量蟾蜍灵从8小时即开始诱导HL-60细胞凋亡;与此同时蟾蜍灵快速活化SYK,并以时间依赖的方式下调CBL和CBL—b表达。结论：SYK活化及CBL家族蛋白表达下调可能参与蟾蜍灵对HL-60细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用。     

Mcl-1基因在HL-60细胞对全反式维甲酸耐药机制中的作用

目的探讨髓系白血病-1(Mcl-1)基因在HL60细胞对全反式维甲酸(ATRA)耐药中的作用。方法采用少量、递增、反复ATRA诱导HL-60细胞,建立ATRA耐药细胞系HL60/ATRA;利用鸡尾酒法制备Mcl-1基因的小片段干扰RNA(SmallinterferenceRNA,siRNA),并通过脂质体介导将其导入HL60/ATRA细胞;Westernblot检测Mcl-1蛋白在细胞中的表达;MTT实验、NBT还原反应实验、TUNEL免疫组化染色法分别检测细胞的增殖、分化和凋亡情况。结果HL60/ATRA细胞Mcl1蛋白相对灰度值为0.624±0.127,较野生型HL60细胞(相对灰度值为0.162±0.127)明显高表达,并可耐受100nmol/L的ATRA,而不发生分化、凋亡[凋亡率为(1.0±0.5)%];Mcl1siRNA导入HL60/ATRA细胞后,Mcl1蛋白表达下调(相对灰度值为0.267±0.086),恢复对ATRA的敏感性[凋亡率为(18.5±4.5)%]。结论Mcl1基因可能参与了HL60细胞ATRA耐药的形成;抑制Mcl-1基因可能成为一种新的逆转ATRA耐药的策略。     

二烯丙基二硫诱导HL-60细胞G2/M期生长阻滞的分子机制研究

目的　探讨二烯丙基二硫 (DADS)诱导HL 6 0细胞G2 /M期细胞生长阻滞的分子机制。方法　用不同浓度的DADS处理HL 6 0细胞 ,分别作用 0 ,6 ,1 2 ,2 4 ,4 8h后用MTT法测定细胞增殖活性 ;用流式细胞术和有丝分裂指数测定细胞增殖周期 ;用Westernblot检测 p38丝裂原活化蛋白 (p38MAPK)及Cdc2 5B和Cdc2激酶的表达和磷酸化水平 ;用RT PCR检测p38MAPKmRNA的表达。结果　DADS抑制HL 6 0细胞增殖呈浓度依赖性 ,且DADS(2 0 μmol/L)与ATRA(1 0nmol/L)对HL 6 0细胞增殖活性影响相近 (P >0 .0 5 ) ;DADS 2 0 μmol/L作用HL 6 0细胞 1 2h后能引起G2 /M期细胞百分数增高并达到最大值 ,而此时有丝分裂指数明显下降 (P <0 .0 5 ) ;同时 ,磷酸化p38MAPK蛋白及p38MAPKmRNA的表达达到高峰 (P <0 .0 5 ) ,并引起Cdc2 5B和Cdc2磷酸化水平的相应变化。而p38特异性抑制剂SB2 0 2 1 90 (1 0 μmol/L)能阻断DADS对HL 6 0细胞增殖的抑制作用 (P <0 .0 5 )。结论　DADS能启动HL 6 0细胞G2 /M控制点 ,它的激活可能与磷酸化 p38MAPK的活化有关     

调控抗凋亡基因survivin表达的因素研究

为了探讨调控存活蛋白（survivin）基因表达的影响因素,以NB4和HL-60细胞株作为实验对象,对细胞进行体外细胞培养、形态学观察,并用半定量RT-PCR检测survivin mRNA的表达.结果显示：NB4细胞株细胞survivin基因表达阳性,经1 μmol/L ATRA处理后,随着作用时间延长,其细胞分化抗原CD11b表达量逐渐增高（-↑x=47.002,P=0.000）,而CD33表达量逐渐减低（-↑x=1.614,P=0.806）,并见survivin基因表达下调,细胞周期阻滞于G0-G1期（-↑x=58.566,P=0.000）;ATRA对HL-60细胞株细胞survivin mRNA表达有下调作用;G-CSF、GM-CSF和植物血凝素（PHA）均能使NB4和HL-60细胞株细胞survivinmRNA表达上调,并呈时效关系;100-1 000 nmol/L survivin反义寡聚核苷酸（AS-0DN）抑制NB4细胞株细胞survivin mRNA表达,随着浓度增加其抑制率增加,600nmol/L时其抑制率最低为38%,增加浓度未见抑制率继续下降,而对照组、脂质体组和正义链组中NB4细胞株细胞sur-vivin mRNA表达几乎未受到抑制;在细胞形态学上,NB4细胞株细胞经survivin AS-ODN处理后出现典型的凋亡形态学变化.结论：PHA、GM-CSF和G-CSF对HL-60和NB4细胞株细胞survivin基因表达起正向调节作用,而sur-vivin AS-ODN和ATRA起负向调节作用;ATRA下调survivin基因表达,且细胞周期阻滞于G0-G1期,这说明survivin基因表达与细胞周期之间关系密切,抑制NB4细胞株细胞survivin基因的表达可促使细胞发生凋亡.     

人脐带间充质干细胞增强全反式维甲酸对HL-60细胞的诱导分化作用

本研究探讨人脐带间充质干细胞(hucMSC)对全反式维甲酸(ATRA)诱导HL-60细胞分化以及对HL-60增殖的影响。HL-60细胞分为4组:未经ATRA处理的对照组、与hucMSC细胞共培养的hucMSC组,经ATRA处理的ATRA组以及经ATRA处理并与hucMSC细胞共培养的ATRA+hucMSC组。在规定时间采用Cell Counting Kit-8(CCK8)检测对照组和hucMSC组HL-60细胞增殖情况;在光学显微镜下观察各组细胞形态、NBT阳性细胞;应用real-timePCR方法检测c-myc基因表达水平以及流式细胞术检测CD11b表面标志以比较各组中HL-60细胞的分化情况。结果表明:共培养体系中hucMSC细胞能抑制HL-60的增殖,hucMSC∶HL-60为1∶1时,48小时时p0.05,72小时时p0.01;hucMSC∶HL-60为1∶5时,72小时时p0.05。在2μmol/LATRA的刺激下,ATRA+huc-MSC组与ATRA组相比,出现更多具有中性粒细胞形态的HL-60细胞和更高的NBT阳性率(p0.05);ATRA+hucMSC组中HL-60细胞c-myc基因表达更低(p0.05);ATRA+hucMSC组中HL-60细胞CD11b的表达更高(48小时p0.05,72小时p0.01)。结论:脐带间充质干细胞能抑制HL-60增殖并且增强ATRA对HL-60细胞的诱导分化作用。