金钠多 艾司洛尔减轻缺氧刺激内皮细胞分泌内皮素的作用比较

目的观察缺氧对血管内皮细胞(VEC)分泌内皮素(ET)的影响及金钠多和艾司洛尔的保护作用。方法将培养的血管内皮细胞分为4组:空白对照组、单纯缺氧组、缺氧+金钠多组、缺氧+艾司洛尔组。除空白对照组外,其他各组置于低压舱内进行缺氧暴露。用放射免疫法测定各组缺氧前和缺氧后0.5、6和24hET含量。结果①缺氧可促进VEC分泌ET增加(P<0.01)。②同单纯缺氧组比较,在缺氧后0.5、6、24h时,金钠多组的ET含量明显降低(P<0.01)。③同单纯缺氧组比较,在缺氧后0.5h艾司洛尔组的ET含量明显降低(P<0.01),但在缺氧后6h和24h时,两组ET含量差异无统计学意义(P>0.05)。④金钠多组与艾司洛尔组比较,ET浓度降低在0.5h差异无统计学意义(P>0.05),但在6h和24h金钠多组ET含量较艾司洛尔组明显降低(P<0.01)。结论缺氧可使VEC释放ET显著增加;金钠多和艾司洛尔能抑制缺氧促VEC分泌ET的作用;金钠多的保护作用更强于艾司洛尔。     

茶多酚对血管紧张素Ⅱ诱导的血管内皮细胞游离钙离子浓度的调节作用

目的研究茶多酚(TPs)对血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)诱导的血管内皮细胞(VEC)游离钙离子浓度([Ca2+]i)的调节作用。方法将VEC分为四组:Ang-Ⅱ10-7mol/L组(A组)、Ang-Ⅱ10-7mol/L+TPs 5 mg/L组(B1组)、Ang-Ⅱ10-7mol/L+TPs 25 mg/L组(B2组)及空白对照组(C组)。用激光共聚焦显微镜测量各组细胞的[Ca2+]i。结果与C组相比,A组[Ca2+]i增高(P<0.01);而B1、B2组[Ca2+]i明显低于A组(P<0.01),且B2组[Ca2+]i低于B1组(P<0.01)。结论 TPs对Ang-Ⅱ诱导的[Ca2+]i增加具有剂量依赖性的保护作用。     

缺氧条件下人卵巢癌细胞对顺铂耐药与TLR9的关系研究

目的:研究缺氧条件下人卵巢癌细胞(SKOV3)对顺铂耐药与Toll样受体9(TLR9)的关系。方法:采用免疫荧光法检测破膜和未破膜SKOV3中TLR9的表达。取SKOV3,加入TLR9特异性激动剂Cp G-ODN 2006(A组)及其同型对照Cp G-ODN 2006control(B组)作用6、12、24 h后,加入顺铂,以CCK-8法检测细胞抑制率。取SKOV3或经0(未加)、1、10、102、103μmol/L TLR9特异性拮抗剂氯喹预处理3 h后的SKOV3,加入SKOV3常氧(21%O2)、缺氧(1%O2)孵育6、12、24 h的细胞上清作用24 h后,加入顺铂,检测细胞增殖抑制率,计算预处理细胞缺氧时药物抑制率的降低倍数(HICR);并采用Western blot法检测常氧24 h细胞上清(C组)、缺氧24 h细胞上清(D组)、缺氧24 h细胞上清+10μmol/L氯喹(E组)条件下SKOV3中多药耐药相关蛋白(MRP)的表达。结果:TLR9在SKOV3的细胞膜和细胞质中均有表达。与A组比较,B组细胞增殖抑制率降低(P<0.01)。与常氧细胞上清比较,缺氧细胞上清作用后细胞增殖抑制率降低(P<0.05)。与未加氯喹比较,加入10、102μmol/L氯喹能明显降低HICR(P<0.01),其中缺氧24 h细胞上清+10μmol/L氯喹降低最明显。与C组比较,D组细胞中MRP表达增强(P<0.01);与D组比较,E组细胞中MRP表达减弱(P<0.01)。结论:TLR9受体在缺氧下可被激活,并可导致SKOV3对顺铂耐药,该作用可能与上调MRP表达有关。     

缺氧时AngⅡ对血管内皮细胞钙离子浓度的影响及金钠多的保护作用

目的 观察缺氧时血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管内皮细胞(VEC)内钙离子浓度的影响,探讨金钠多(银杏叶提取物)对VEC的保护作用.方法 建立VEC缺氧损伤模型;实验分为空白对照组、单纯缺氧组、缺氧加金钠多保护组、单纯AngⅡ作用组、AngⅡ加金钠多保护组,缺氧加AngⅡ作用组、缺氧加Ang Ⅱ加金钠多保护组等7组.各组细胞经过Fluo-3/AM负载后,用激光共聚焦显微镜测定VEC内Fluo-3的荧光强度代表钙离子浓度.结果 VEC分别经过缺氧及AngⅡ损伤后,细胞内钙离子浓度明显升高(P＜0.01);缺氧条件下Ang Ⅱ可引起VEC钙离子浓度进一步升高(P＜0.01);金钠多可抑制细胞内钙离子浓度的升高,但各金钠多保护组的钙离子浓度仍明显高于空白对照组(P＜0.05或P＜0.01).结论 缺氧及AngⅡ等损伤因素都可引起VEC内钙离子浓度明显升高;金钠多明显减轻上述损伤,减轻细胞内钙离子超载,从而发挥对细胞的保护作用.     

丁苯酞对缺氧人脐静脉血管内皮细胞Ang-2蛋白表达的影响

目的:探讨药物丁苯酞(NBP)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)缺氧损伤的保护作用及其对血管生成素2(Ang-2)表达的影响。方法:体外培养HUVEC,建立稳定的内皮细胞缺氧损伤模型。试验分为正常对照组、缺氧损伤模型组、NBP组,按要求分别给予药物处理后,用CCK-8法检测细胞活力,采用免疫细胞化学方法和图像定量分析技术检测平均吸光度,比较各组Ang-2蛋白表达的变化;Western Blot法检测各组Ang-2蛋白的表达情况。结果:NBP可提高HUVEC的存活率;与正常组比较,缺氧组Ang-2蛋白表达量明显升高(P<0.05);与缺氧组比较,NBP组Ang-2蛋白表达进一步增高(P<0.05)。结论:NBP可以上调Ang-2蛋白的表达,对HUVEC缺氧损伤有一定的保护作用。     

血管紧张素-Ⅱ对血管内皮细胞内皮素-1 mRNA表达水平的影响及阿托伐他汀的保护作用

目的观察血管紧张素(Ang)-Ⅱ对血管内皮细胞内皮素(ET)-1 mRNA表达水平的影响及阿托伐他汀的保护作用。方法将培养的血管内皮细胞随机分为4组:空白对照组(仅给予细胞培养液)、单纯Ang-Ⅱ组(细胞培养液中加入Ang-Ⅱ,使其终浓度为10-7mol/L)、Ang-Ⅱ+小剂量阿托伐他汀组(在单纯Ang-Ⅱ组的基础上加入阿托伐他汀,使阿托伐他汀的终浓度为0.1μmol/L)、Ang-Ⅱ+大剂量阿托伐他汀组(在单纯Ang-Ⅱ组的基础上加入阿托伐他汀,使阿托伐他汀的终浓度为1μmol/L)。以反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测血管内皮细胞的ET-1mRNA表达水平。结果①与空白对照组相比,单纯Ang-Ⅱ组血管内皮细胞的ET-1 mRNA表达水平显著增高(P<0.01);②与单纯Ang-Ⅱ组相比,两个Ang-Ⅱ+阿托伐他汀组大鼠的心肌ET-1 mRNA表达水平显著降低(P<0.01);③Ang-Ⅱ+高浓度阿托伐他汀组的ET-1 mRNA表达水平显著低于Ang-Ⅱ+低浓度阿托伐他汀组(P<0.05)。结论Ang-Ⅱ可使血管内皮细胞ET-1 mRNA表达水平显著增高,阿托伐他汀可逆转这一作用,且其作用呈剂量依赖性。     

血管生成素1与血管内皮生长因子165对人胃癌细胞增殖与凋亡的影响

目的研究人血管生成素1(Ang-1)、血管内皮生长因子165(VEGF165)以及两种因子相互作用对人胃癌细胞株MGC-803增殖与凋亡的影响。方法应用MTT法测定腺病毒绿色荧光蛋白(Ad-GFP)(B组)、Ad-Ang-1(C组)、Ad-VEGF165(D组)以及Ad-Ang-1+Ad-VEGF165/2(E组)对MGC-803细胞增殖的影响;另设对照组(A组)。采用流式细胞术分析血清饥饿时其对凋亡的影响;运用Western blot方法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果 24、48、72 h时,C、D、E组吸光度均明显高于B、A组(P<0.05);E组吸光度明显高于C、D组(P<0.05)。与A组或B组相比,C、D、E组均能够抑制细胞凋亡(P<0.01),其中E组抑制凋亡作用最强。C、D、E组Bcl-2蛋白表达均比B、A组明显增高(P<0.05),Bax蛋白的表达则明显降低(P<0.05)。结论 Ang-1、VEGF165和Ang-1+VEGF165/2能够明显促进MGC-803细胞体外增殖,抑制血清饥饿时的凋亡;Ang-1与VEGF165联合作用要显著强于单用Ang-1或VEGF165。     

脉络宁注射液对人血管内皮细胞缺氧损伤的保护作用

目的:研究脉络宁注射液对人脐静脉血管内皮细胞缺氧损伤的保护作用及其机制。方法:常规进行人血管内皮细胞(HUVECs)培养,将细胞随机分为正常对照组、缺氧组和脉络宁20 mg.L-1组。采用CCK-8法检测细胞存活率;Hochest33258荧光染料检测细胞凋亡率;RT-PCR法检测各组细胞中血管内皮生长因子(VEGF),血管生成素-2(Ang-2)mRNA表达水平。结果:脉络宁注射液可显著提高缺氧损伤细胞的存活率(P<0.05);与正常对照组比较,缺氧组细胞内VEGF和Ang-2 mRNA表达水平明显增高。与缺氧组比较,脉络宁组VEGF和Ang-2的表达进一步增强,各组间比较均有差异(P<0.05)。结论:脉络宁注射液可减轻血管内皮细胞缺氧损伤,上调缺氧血管内皮细胞中VEGF和Ang-2的表达,对血管内皮细胞缺氧损伤有一定的保护作用。     

血管调节因子在脑缺血中的作用及其相互关系

目的：探讨在缺血性脑血管病的发生发展中，相关的血管调节因子的作用及相互关系。方法：采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血模型后，分别给予一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L—NAME(B组)及内皮素(ET)受体拮抗剂PD142893(C组)，在术后3，6，24h进行神经病学评分，术后24h测定血浆ET及NO含量，计数梗死边缘区及海马CA1亚区存活神经元数目。结果：与单纯缺血组(A组)相比较，C组神经功能损害减轻，梗死边缘区及海马CA1亚区存活神经元数增多，而B组的改变则相反。同时，B组血浆ET含量升高，而C组血浆NO含量降低。结论：ET受体拮抗剂对缺血脑组织有保护作用。NO在脑缺血急性期有神经保护作用。脑缺血后NO抑制了ET的产生和释放，而ET则促进了NO的产生。     

黄芪注射液对冠心病患者血浆LPO,红细胞SOD及血管内皮细胞数影响的研究

将42例冠心病稳定心绞痛患者随机分成两组,A组应用黄芪注射液16ml(相当于生药32克),加入5％葡萄糖250ml中,B组单用5％葡萄糖250ml,均静脉滴注2周,观察用药前后血浆LPO、红细胞SOD及血管内皮细胞数。另设健康人对照组,结果冠心病患者血浆LPO及血管内皮细胞数显著高于健康人组(P<0.01及0.001),且两者呈显著正相关(r=0.74,P<0.001),红细胞SOD显著低于健康人组(P<0.01)。冠心病患者应用黄芪注射液静滴2周后,血浆LPO及血管内皮细胞数较治疗前均显著降低(P<0.01),红细胞SOD较治疗前显著升高(P<0.01),而单用5％葡萄糖静滴的对照组上述指标却无显著改变(P>0.05)。本研究结果提示:黄芪注射液有抗细胞膜脂质过氧化、保护血管内皮细胞的作用。     

Tie-2介导Ang-1、Ang-2调节大鼠失血性休克血管反应性双相变化的作用研究

目的 观察Tie-2在血管生成素-1(angiopoietin-1, Ang-1)、血管生成素-2(angiopoietin-2, Ang-2)调节失血性休克血管反应性双相变化中的作用。方法 采用离体微血管环张力测定技术和western blot技术,观察失血性休克后不同时间点肠系膜上动脉(superior mesenteric artery,SMA)中Tie-2蛋白表达和磷酸化变化、抑制Tie-2对Ang-1和Ang-2调节缺氧早期和晚期血管反应性作用的影响,以及给予Ang-1和Ang-2后缺氧的血管内皮细胞(vascular endothelial cell, VEC)和血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell, VSMC)混合细胞中Tie-2蛋白表达和磷酸化变化,并观察抑制Tie-2对缺氧早期和晚期的混合细胞NO含量的影响。结果 (1) 肠系膜上动脉Tie-2蛋白表达和酪氨酸磷酸化在正常时很低,失血性休克后逐渐增高,在休克早期(休克10min),Tie-2蛋白表达变化不大,但酪氨酸磷酸化已明显增高(P<0.01);随着休克时间延长,Tie-2蛋白表达和酪氨酸磷酸化均进一步显著增高(P<0.01)。(2)Tie-2抑制剂可降低缺氧10min的血管高反应性(NE的Emax由13.479mN降低至10.122mN,P<0.05),并显著抑制Ang-1对缺氧10min血管反应性的维持作用(Emax由15.283mN降低至10.253mN,P<0.01);Tie-2抑制剂可改善缺氧4h的血管低反应性(NE的Emax由5.875mN增高至8.003mN,P<0.05),并显著拮抗Ang-2进一步降低缺氧4h血管反应性的作用(Emax由3.444mN增高至7.643mN,P<0.01)。(3)缺氧10min时,降低血管高反应性的Ang-2可降低Tie-2磷酸化,使其由0.0403降低至0.0123(P<0.01);缺氧4h时,恢复血管低反应性的Ang-1可降低Tie-2蛋白表达,使其由0.2276降低至0.0851 (P<0.01),也可以降低Tie-2磷酸化,使其由0.1437降低至0.0359 (P<0.01)。(4) NO含量在缺氧早期显著增高,Ang-2和Tie-2抑制剂显著抑制其增高(P<0.01);缺氧晚期NO含量较正常对照组增高得更为显著,Ang-1和Tie-2抑制剂可抑制其增高(P<0.01)。结论 Ang-1、Ang-2通过Tie-2受体调节大鼠失血性休克血管反应性双相变化。     

艾司洛尔对缺氧复氧诱导的心肌细胞AMPK/GSK-3β通路及凋亡的影响

目的 探讨艾司洛尔对缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响,并初步研究其作用机制.方法 体外培养大鼠心肌细胞(H9c2),并建立缺氧/复氧(I/R)损伤模型,随机分为对照组、H/R组和艾司洛尔低、中、高剂量(0.2、5.0、25.0μmol/L)组;噻唑蓝(MTT)法检测各组H9c2细胞存活率变化情况;膜联蛋白V-异硫氰酸荧...     

急性缺氧和血管紧张素Ⅱ对血管内皮细胞分泌内皮素功能的影响

目的观察急性缺氧和血管紧张素Ⅱ对培养的血管内皮细胞分泌内皮素的影响。方法将培养的血管内皮细胞分为空白对照组、单纯缺氧组、血管紧张素Ⅱ组和血管紧张素Ⅱ联合缺氧组(其中AgⅡ组和AgⅡ同缺氧联合组又根据AgⅡ在培养液中的终浓度分别设高、中、低浓度组)。采用低压舱对培养的血管内皮细胞进行缺氧,采用放免法测定各组样本细胞培养液中的内皮素浓度。结果①急性缺氧可引起血管内皮细胞分泌血管内皮素含量明显增高。②血管紧张素Ⅱ亦显著促进血管内皮细胞分泌血管内皮素,尤以中等浓度血管紧张素Ⅱ作用明显。③急性缺氧加血管紧张素Ⅱ对血管内皮细胞分泌血管内皮素的影响明显强于其单一因素的影响。④无论是单纯缺氧、单纯血管紧张素Ⅱ作用,还是缺氧与血管紧张素Ⅱ联合作用于血管内皮细胞于作用后0.5h分泌内皮素即增加,作用后6h达高峰,作用后24h有所降低。结论急性缺氧和血管紧张素Ⅱ均具有促进血管内皮细胞分泌内皮素的作用,且两者具有协同作用。其生理效应与其剂量和时间相关联。     

利多卡因和艾司洛尔预防七氟醚诱导插管反应的研究

目的 比较在单纯吸入七氟醚诱导插管期间,利多卡因和艾司洛尔对患者心血管反应的影响.方法 选择全麻下行择期非心脏手术患者60例,ASA分级Ⅰ～Ⅲ,年龄20～65岁,随机分为3组(n=20); Ⅰ组(对照组),Ⅱ组(艾司洛尔组),Ⅲ组(利多卡因组).麻醉诱导前2 min,Ⅰ组静脉注射生理盐水1 ml,Ⅱ组静脉注射艾司洛尔2 mg/kg,Ⅲ组静脉注射利多卡因1.5 mg/kg.然后进行麻醉诱导插管,在插管过程中连续监测患者血压(SBP,DBP)和心率(HR).记录麻醉诱导前(T0基础值),气管插管即刻(T1),气管插管后即刻(T2),1 min(T3),3 min(T4),5 min(T5)时上述指标.结果 Ⅲ组患者的SBP,DBP较Ⅰ组低,但心率增加与Ⅰ组无差异,Ⅱ组患者的SBP,DBP andHR与Ⅰ组相比均明显降低.结论 利多卡因能够抑制七氟醚麻醉诱导插管期间血压升高,但不能有效抑制心率增快.艾司洛尔对血压、心率的升高均有明显抑制作用.     

丹酚酸B镁盐抑制低氧诱导内皮细胞钙内流和一氧化氮释放

AIM: To investigate the inhibitory effect of magnesium lithospermate B (MLB) on hypoxia-induced elevation of intracellular calcium concentration ([Ca2+]i) and nitric oxide (NO) release in endothelial cells. METHODS: The cultured human umbilical vein endothelial cells (ECV304) were cultured for 30 min under 95 % N(2) and 5 % CO2. Cell injury was evaluated by dye exclusion test and lactate dehydrogenase (LDH) assay. [Ca2+]i was determined by Fura 2-AM. NO content was examined by the NO assay kit. Endothelial nitric oxide synthase (eNOS) and inducible nitric oxide synthase (iNOS) mRNA expressions were measured by semi-quantitative RT-PCR. RESULTS: Cell viability was decreased from (93.0 +/- 2.6) % in normoxia to (85.5 +/- 2.1) % in hypoxia (P < 0.01), and LDH release was increased from (41 +/- 28) U/L in normoxia to (141+/-68) U/L in hypoxia (P < 0.01) in ECV304 cultured under calcium conditions. MLB 5 and 10 mg/L improved cell viability and inhibited LDH leakage in ECV304. In addition, hypoxia increased [Ca2+]i, NO release, and eNOS and iNOS mRNA expressions in ECV304 (P < 0.01). These increases could be inhibited by MLB 5 and 10 mg/L (P < 0.01), but they were unaffected by hypoxia under calcium-free conditions. CONCLUSION: MLB attenuates hypoxia-induced cell injury and inhibits hypoxia-induced increases of [Ca2+]i, NO release, and eNOS and iNOS mRNA expressions in ECV304 in Krebs'solution containing calcium. The decreases of NO production and eNOS mRNA expression are possibly associated with inhibition of extracellular calcium influx in MLB-treated ECV304     

Angiopoietin-1 protects myocardial endothelial cell function blunted by angiopoietin-2 and high glucose condition

Aim:

To evaluate the effects of angiopoietin-1 (Ang-1) on myocardial endothelial cell function under high glucose (HG) condition.

Methods:

Mouse heart myocardial endothelial cells (MHMECs) were cultured and incubated under HG (25 mmol/L) or normal glucose (NG, 5 mmol/L) conditions for 72 h. MTT was used to determine cellular viability, and TUNEL assay and caspase-3 enzyme linked immunosorbent assays were used to assay endothelial apoptosis induced by serum starvation. Immunoprecipitation and Western blot analysis were used to analyze protein phosphorylation and expression. Endothelial tube formation was used as an in vitro assay for angiogenesis.

Results:

Exposure of MHMECs to HG resulted in dramatic decreases in phosphorylation of the Tie-2 receptor and its downstream signaling partners, Akt/eNOS, compared to that under NG conditions. Ang-1 (250 ng/mL) increased Tie-2 activation, inhibited cell apoptosis, and promoted angiogenesis. Ang-1-mediated protection of endothelial function was blunted by Ang-2 (25 ng/mL).

Conclusion:

Ang-1 activates the Tie-2 pathway and restores hyperglycemia-induced myocardial microvascular endothelial dysfunction. This suggests a protective role of Ang-1 in the ischemic myocardium, particularly in hearts affected by hyperglycemia or diabetes.