辛伐他汀对大鼠骨髓基质细胞成骨分化的影响

目的:研究辛伐他汀体内给药后对大鼠骨髓基质细胞在体外培养过程中成骨分化和增殖的影响,探讨其刺激成骨的作用机制. 方法:30只SD雌性大鼠,随机分为3组,每组10只. G1组(C)为对照组;G2组(SIM-10)给予辛伐他汀10 mg/(kg·d);G3组(SIM-20)给予辛伐他汀20 mg/(kg·d). 连续给药28 d后,取大鼠的骨髓细胞体外培养,诱导14 d后用RT-PCR和Western blot分别检测cbfa1 mRNA和蛋白表达的变化;收集上清液,检测细胞碱性磷酸酶;应用cell counting kit(CCK-8) 测定细胞增殖情况. 结果:辛伐他汀体内干扰28 d后,再经过骨髓细胞体外培养诱导14 d后,cbfa1因子的mRNA及蛋白表达水平均增高,呈剂量依赖关系. 上清液碱性磷酸酶表达增高,呈剂量依赖关系. 实验组与对照组比较,G2组(10 mg)组促进细胞增殖,而G3组(20 mg组)未见显著性差异. 结论: 辛伐他汀可促进骨髓基质细胞中cbfa1 mRNA和蛋白的表达,碱性磷酸酶活性增高,辛伐他汀刺激成骨的作用机制可能与此有关.     

巴戟天对骨髓基质细胞向成骨细胞分化影响的实验研究

为探讨巴戟天对骨髓基质细胞向成骨细胞分化的影响,采用含药血清的方法体外培养骨髓基质细胞,分A组(巴戟天水提物组)、B组(巴戟天醇提物组)、C组(对照组)、D组(经典成骨诱导组)、E组(巴戟天水提物+经典成骨诱导组)、F组(巴戟天醇提物+经典成骨诱导组),观察各组碱性磷酸酶染色、茜素红染色、碱性磷酸酶比活性及骨钙素含量,结果显示碱性磷酸酶染色和茜素红染色反应强弱的顺序为F组＞E组＞D组＞B组＞A组,C组为阴性;碱性磷酸酶比活性和骨钙素(BGP)含量测定结果为:A、B、D、E、F组在同一时间点均高于C组(P<0.05),E组、F组在同一时间点均高于D组(P<0.05).说明巴戟天水提物及醇提物均能促进骨髓基质细胞向成骨细胞分化,且巴戟天醇提物的作用强于水提物.     

辛伐他汀促进骨髓基质细胞的成骨分化

目的：观察辛伐他汀对骨髓基质细胞成骨分化的影响，探讨其刺激成骨的作用机制。方法：体外培养成年小鼠骨髓基质细胞，不同浓度的辛伐他汀作用72h后，RT-PCR检测骨钙素(osteocalcin，OCN)mRNA水平的变化，Western blot检测OCN和骨桥蛋白(osteopontin，OPN)表达水平的变化，细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)细胞化学染色及酶比活性测定。结果：辛伐他汀作用72h后，OCN的mRNA表达水平增高，OCN、OPN蛋白表达水平增高，呈剂量依赖关系，细胞ALP染色增强，ALP比活性显著增高。结论：辛伐他汀促进骨髓基质细胞的成骨分化，辛伐他汀刺激成骨的作用机制可能与此有关。     

辛伐他汀对人骨髓基质干细胞向成骨细胞分化过程的影响

目的：观察辛伐他汀（SIM）对体外人骨髓基质干细胞（hBMSCs）向成骨分化的影响,探讨其刺激成骨的作用机制.方法：取健康成人骨髓进行体外成骨诱导培养,实验分为对照组（G1）：不给予药物干预;实验组（G2）：传代后加入SIM1×10-7mol/L.于传代后7,14,21d采用RealtimeRT-PCR检测mRNA水平和BMP-2,Smad1,β-catenin,Frizzled2的表达,并用免疫组织化学检测蛋白水平β-catenin的表达.传代后7d行细胞碱性磷酸酶（ALP）染色和比活性检测;传代后21d行vonKossa染色,检测细胞外基质矿化.结果：SIM作用后7,14,21d3个不同时间点,BMP-2表达均显著高于对照组;Smad1在成骨诱导14,21d时表达高于G1,其余组间差异均不显著;β-catenin免疫组织化学染色2组差异不显著;G2组ALP表达和矿化能力均显著高于G1组.结论：SIM1×10^-7mol/L可促进体外成骨诱导培养的hBMSCs向成骨细胞分化,上调TGF-β/BMPs信号通路部分信号分子表达,但未能显著改变Wnt/β-catenin信号通路部分相关因子的表达.     

骨髓基质细胞及诱导成骨的研究进展

骨髓基质细胞（BMSCs）具有多分化潜能，近年来，组织工程中选择种子细胞的研究方兴未艾，由于BMSCs取材方便容易，扩增方法可靠，应用范围广泛及成骨确定且避免了免疫排斥问题，已成为最有前途的骨组织工程种子细胞。     

辛伐他汀对酒精诱导大鼠骨髓基质细胞成脂及成骨基因表达的影响

目的观察辛伐他汀对酒精诱导大鼠骨髓基质细胞成脂及成骨基因改变的影响,探讨辛伐他汀治疗酒精性骨坏死的可能性。方法分离培养SD大白鼠骨髓基质细胞（MSCs）,随机分为三组：模型组：第1周以含终浓度0．09mol／L酒精的培养液培养,第2周停用酒精,实验组：第1周以含终浓度0．09mol／L酒精的培养液培养,第2周停用酒精,改以含终浓度1×10^-7mol／L辛伐他汀的培养液培养;对照组：全程以不加酒精和辛伐他汀的培养液培养。于实验第14天时收集细胞,以RT—PCR检测细胞中过氧化物酶体增殖子激活受体-γ（PPARγ）mRNA和骨钙素（OC）mRNA的表达。实验数据以均数±标准差（x^-±S）表示,采用SPSS10．0软件进行统计学分析,多组间比较采用单因素方差分析,样本均数间的两两比较采用LSD—t检验,检验水准仪=0．05。结果与对照组比较,模型组细胞PPARγmRNA表达水平明显升高（P〈0．05）,实验组细胞PPARγmRNA表达水平稍高（P〉0．05）;与对照组比较,模型组OCmRNA表达水平明显降低（P〈0．05）,实验组OCmRNA表达水平稍低（P〉0．05）。结论辛伐他汀能抑制酒精诱导MSCs成脂基因表达,对抗或解除酒精对MSCs的成骨分化的抑制而增加成骨基因表达,可能有治疗酒精性骨坏死的作用。     

聚乳酸对体外培养的骨髓基质细胞生物学行为的影响

目的 检测聚乳酸（ＰＬＡ）对骨髓基质细胞（ＢＭＳＣ）体外成骨的过程及其生物学行为的影响。方法 将ＢＭＳＣ传代细胞分别与ＰＬＡ进行复合培养，观察细胞生长基与生物材料附着情况，检测ＭＢＳＣ的增殖能力，蛋白含量及碱性磷酸酶（ＡＬＰ）含量。结果 ＢＭＳＣ可以在ＰＬＡ表面贴附，ＰＬＡ对ＢＭＳｃ的增殖及功能表现无明显差异。结论 ＰＬＡ的生物相容性良好，有望作为ＢＭＳｃ的载体用于骨组织工程研究。     

辛伐他汀抑制乙醇诱导骨髓基质细胞成脂分化的实验研究初步报告

目的观察辛伐他汀抑制乙醇诱导骨髓基质细胞成脂分化的作用，探讨辛伐他汀治疗酒精性骨坏死的可能性。方法分离培养SD大白鼠骨髓基质细胞，随机分为三组：模型组：实验周期的前半程以含终浓度0．09mol／L乙醇的培养液培养，后半程停用乙醇；实验组：实验周期的前半程以含终浓度0．09mol／L乙醇的培养液培养，后半程停用乙醇，改以含终浓度1×10^-7mol／L辛伐他汀的培养液培养；对照组：全程以不加乙醇和辛伐他汀的培养液培养。镜下观察细胞变化，测定细胞培养液中骨钙素含量、细胞内ALP活性及甘油三酯含量。结果按上述处理细胞并培养14d后，实验组中细胞内碱性磷酸酶活性、培养液中骨钙素含量均高于模型组（P〈0．05），与对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。上述处理细胞并培养21d后，实验组中脂肪细胞数量、细胞内甘油三酯含量均低于模型组（P〈0．05），与对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论可以认为辛伐他汀能抑制乙醇诱导骨髓基质细胞分化为脂肪细胞，促进成骨分化，可能有治疗酒精性骨坏死的作用。     

相互间非接触性共培养对神经干细胞和骨髓基质细胞的影响

目的 观察在神经干细胞培养液下非接触性共培养对骨髓基质细胞和神经干细胞的影响.方法 采用Transwell构建共培养体系非接触性共培养方式培养细胞,进行形态学和免疫化学染色方法观察.结果 共培养组:神经干细胞贴壁、伸出长突起,随培养时间延长,彼此交织成网;免疫组化显示细胞分化为神经元、胶质细胞、少突胶质细胞.骨髓基质细胞则大部分悬浮生长形成大的球状,此球状细胞分化的细胞表达神经元、胶质细胞、少突胶质细胞标志性蛋白.对照组:神经干细胞组细胞仍呈悬浮球状生长;骨髓基质细胞组细胞则部分悬浮生长形成小的球状,部分贴壁生长.结论 在神经干细胞培养液下非接触性共培养,骨髓基质细胞和神经干细胞能相互促进向神经细胞的分化,表明骨髓基质细胞和神经干细胞均可能分泌一些营养因子,为彼此提供一种生存分化的微环境.     

辛伐他汀对骨髓基质干细胞成骨分化晚期骨钙素表达的影响

目的通过辛伐他汀体外干预成骨分化晚期的骨髓基质干细胞,观察骨钙素（osteocalcin,OCN）在mRNA和蛋白水平的表达,探讨辛伐他汀促进成骨分化作用及机制。方法取4周龄大鼠股骨和胫骨骨髓腔内的干细胞体外培养,传一代后并向成骨细胞诱导分化,取第五代细胞分别加入lOl7M浓度的辛伐他汀或等量溶剂干预,于加药后48h提取细胞RNA及蛋白,采用Realtime PCR和Westernblot法检测0CN的表达,同时收集细胞培养液上清,ELISA法检测0CN浓度;1周后采用yonKossa染色观察细胞外基质矿化能力。结果①RealtimePCR：实验组0CN的mRNA表达水平显著高于对照组（P〈0．05）;②Westernblot：实验组OcN的蛋白表达水平显著高于对照组（P〈0．05）;③ELISA：实验组细胞培养上清中0CN浓度显著高于对照组（P〈0．05）;④VonKossa染色：实验组细胞外基质矿化能力强于对照组。结论辛伐他汀可以刺激大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞分化晚期0CN在rnRNA和蛋白水平的表达。     

大鼠骨髓基质干细胞向神经元样细胞的分化

目的:体外定向诱导大鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）向神经元样细胞的分化。方法： 用DMEM培养液冲洗骨髓,收集骨髓细胞接种在培养瓶中体外扩增、纯化。用诱导剂诱导BMSCs分化为神经元样细胞。用免疫组化ABC法鉴定神经丝蛋白（NF-200）、微管相关蛋白（MAP-2）、神经元特异核蛋白（NeuN）、巢蛋白(Nestin) 、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、GAD和ChAT的表达。结果： BMSCs经诱导后,胞体增大,并伸出细长突起,与神经元形态相似。免疫组化显示大部分细胞NF-200,MAP-2,NeuN和Nestin表达阳性,(3±0.8)%的细胞GAD表达阳性,(5±0.3)%的细胞ChAT表达阳性,而GFAP 表达阴性。结论： BMSCs可被诱导分化为神经元样细胞,部分细胞可表达GAD与ChAT。     

骨形态发生蛋白对人骨髓基质细胞的体外成骨分化影响

目的 提取牛骨形态发生蛋白，并观察其对人骨髓基质细胞的体外成骨分化作用，为将骨形态发生蛋白与骨髓基质细胞用于进一步的缺损修复研究提供实验依据。方法 从小牛骨中的提取骨形态发生蛋白，配制条件培养液，并作用于培养状态的人骨髓基质细胞，染色检测细胞碱性磷酸酶，I型胶原表达情况，放免法测定培养液中骨钙素含量。结果 人骨髓基质细胞经衣导培养后，碱性磷酸酶，I型胶原，骨钙素表达明显增加。结论 体外培养时，天然骨形态发生蛋白可促进人骨髓基质细胞的成骨分化。     

Effects of endothelin-1 on differentiation of cardiac myocyte induced from rabbit bone marrow stromal cells

Background Cardiomyocyte transplantation for the therapy of myocardial ischaemia is being paid close attention. However, how the microenvironment controls the differentiation of transplanted bone marrow stromal cells （BMSCs） is unknown. Endothelin-1 （ET-1）, a cytokine, increases during myocardial infarction, but it is not known whether ET-1 is responsible for the fate of transplanted BMSCs. In the present study, we investigated the effects of ET-1 on differentiation and maturation of induced rabbit BMSCs, in vitro, to elucidate the cellular biological mechanisms.     

大鼠骨髓基质细胞体外诱导分化的研究

目的:探索骨髓基质细胞体外定向诱导分化为神经细胞的可能性。方法:取大鼠的骨髓基质细胞在体外培养,用免疫组化方法检测正常脊髓提取液和脑源性神经生长因子诱导分化,观察诱导后细胞的形态。结果:骨髓基质细胞在体外培养呈梭形。诱导后细胞呈神经元样细胞改变。神经元烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白染色阳性。结论:骨髓基质细胞可在体外诱导分化。     

小鼠骨髓基质细胞诱导分化为神经细胞的实验研究

目的探讨小鼠骨髓基质细胞体外诱导及向神经细胞方向分化.方法从小鼠骨髓中分离培养骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells, BMSC),应用碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF),维甲酸(retinoic acid, RA),二甲亚砜和神经生长因子(nerve growth factor, NGF)对细胞诱导分化,72 h后对细胞表达神经微丝蛋白(NF-200),胶质原性纤维酸性蛋白(GFAP),纤维结合素(fibronectin)的结果进行荧光和组化检测.结果诱导72 h后细胞形态类似神经细胞改变,免疫组化显示约60%细胞分化为NF-200阳性细胞,约50%细胞分化为GFAP阳性细胞,同时细胞fibronectin表达明显降低,与对照组比较相差显著.结论维甲酸,神经生长因子,二甲亚砜,碱性成纤维细胞生长因子的联合作用可体外诱导骨髓基质细胞向神经细胞分化.     

hBMP-4瞬时转染对兔骨髓基质干细胞生物学行为的影响

目的应用兔骨髓基质干细胞(bonemarrowstromalcells,MSCs)作为基因治疗的靶细胞,体外转染人骨形成蛋白4(humanbonemorphogeneticprotein-4,hBMP-4)基因,观察瞬时转染对兔MSCs生物学行为的影响。方法贴壁法培养兔MSCs,分别在体外转染pEGFP-hBMP-4和pEGFP基因并留置空白对照。检测转染效率及目的基因的转录和表达,观察细胞形态及生长情况,检测碱性磷酸酶、钙结节及骨钙素等成骨细胞表型。结果基因转染效率达到20%～30%,RT-PCR显示MSCs本身有目的基因的少量转录,转染pEGFP-hBMP-4后转录增强。目的基因转染后细胞形态略有变化,生长曲线与对照组相似,碱性磷酸酶阳性染色面积增加(P=0.0016),钙结节增多(P=0.0001),骨钙素表达增强(P=0.03)。结论优化的条件下取得了较高的转染效率,hBMP-4基因转染可以增强目的基因的转录,加速MSCs向成骨细胞表型转化。hBMP-4转染的MSCs可望成为组织工程化骨理想的种子细胞。     

体外免活性骨组织对同种骨髓基质细胞粘附特性影响的实验研究

目的 研究兔活性骨组织在共培养条件下对同种骨髓基质细胞粘附特性的影响。方法 分别应用生理盐水和三蒸水浸泡新鲜兔骨碎粒5h后与同种骨髓基质细胞共培养作为实验组；末进行共培养的骨髓基质细胞作为对照组。应用体视学计数法观察接种后0．5、1、2、4、8h各时间点骨髓基质细胞贴壁情况，计量贴壁细胞数，计算出细胞贴壁率。结果实验组的骨髓基质细胞贴壁率均显著高于对照组(P＜0．011，但三蒸水浸泡的兔活性骨组织共培养的同种骨髓基质细胞的贴壁率最高。结论 活性骨组织在体外具有调节和促进同种骨髓基质细胞粘附特性的作用，用三蒸水浸泡的活性骨组织的作用最强。