四株人体和大鼠食管癌裸鼠移植瘤株的建立及其生物学特性研究

我们将12例人食管癌手术切除组织接种于NC和BALB/C裸鼠皮下,其中2例获移植成功,裸鼠间传代达32代,历时2年余,建立了二株人食管癌裸鼠移植瘤,分别为人食管鳞状细胞癌裸鼠移植瘤(HEC_2)和人食管腺鳞癌裸鼠移植瘤(HEC_6)。两移植瘤具有潜伏期短、移植成功率高(100％)、荷瘤存活时间长及生物学特性稳定等特点。并在建立大鼠食管癌细胞系(RE25—3.)的基础上,建立了二株大鼠食管癌裸鼠移植瘤(RE25/N和RE66/N)。此四株人体和大鼠食管癌裸鼠移植瘤株为食管癌病因、发病机理及治疗的研究,提供了极好的模型。     

人乳腺癌裸鼠移植瘤组织Duffy抗原趋化因子受体与Her-2蛋白表达相关性的探讨

目的:探讨人乳腺癌裸鼠移植瘤组织Duffy抗原趋化因子受体(DARC)与Her-2蛋白表达的相关性.方法:建立人乳腺癌裸鼠原位移植瘤模型,按细胞类型分为DARC低表达的MDA-MB-231裸鼠移植瘤、转染空质粒的MDA-MB-231(MDA-MB-231-vect)裸鼠移植瘤及转染DARC cDNA的MDA-MB-231(MDA-MB-231-DARC)裸鼠移植瘤.隔天观察裸小鼠的健康状况和肿瘤细胞的成瘤性,成瘤后每周测量1次各移植瘤的体积,至第2周及第4周时,分别处死各组实验动物8只,获取移植瘤,免疫组化检测原位移植瘤组织中DARC及Her-2蛋白表达;选取中国福利会国际和平妇幼保健院乳腺癌临床组织标本80例,通过免疫组化技术检测DARC和Her-2蛋白表达,并对其相关性进行分析.结果:虽然各组动物的成瘤率均为100%,但DARC转染后的 MDA-MB-231移植瘤(MDA-MB-231-DARC移植瘤)生长明显减慢(P=0.007),且裸鼠移植瘤组织中Her-2蛋白呈低表达,转染与未转染DARC的裸鼠移植瘤组织中Her-2蛋白表达差异有统计学意义,χ2=69.83,P=0.045;对人乳腺癌临床组织标本免疫组化检测结果显示,Her-2蛋白表达与DARC蛋白呈负相关,r=-0.464,P=0.026.结论:人乳腺癌裸鼠移植瘤组织中DARC的过表达抑制Her-2蛋白表达.     

Lewis y抗原对人卵巢癌细胞RMG-Ⅰ裸鼠移植瘤p-Akt蛋白表达的影响

目的:探讨α1,2-岩藻糖转移酶基因转染对人卵巢癌细胞株RMG-I裸鼠移植瘤中磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达的影响。方法:利用已经建立的Lewis y抗原稳定高表达的卵巢癌细胞株RMG-I-H建立裸鼠移植瘤模型,利用免疫组织化学染色法检测基因转染前后裸鼠移植瘤组织中Lewis y抗原及p-Akt蛋白的表达。结果:基因转染后的裸鼠移植瘤组织细胞表面Lewis y抗原及p-Akt蛋白的表达均明显增加,转染组与非转染组之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Lewis y抗原明显促进卵巢癌细胞株RMG-I裸鼠移植瘤p-Akt蛋白的表达。     

双歧杆菌对实验性大肠癌化bcl-2及bax基因表达的影响

目的 通过观察大肠癌裸鼠移植瘤bcl-2及bax基因的蛋白表达水平,探讨双歧杆菌的抑瘤途径及机制.方法 采用免疫组化SP法检测了40只裸鼠大肠癌移植瘤bcl-2及bax基因的蛋白表达率及表达强度.结果 双歧杆菌注射组大肠癌移植瘤bcl-2蛋白表达率及阳性细胞密度均低于肿瘤对照组,bax基因的表达情况则相反.结论 双歧杆菌可使大肠癌裸鼠移植瘤的bcl-2基因表达下调,bax基因表达增强,最终诱导肿瘤细胞凋亡,实现其抗瘤目的.     

通过活体动物光学成像系统建立乳腺癌动物模型

目的: 通过活体动物光学成像系统建立稳定表达荧光素酶的乳腺癌裸鼠移植瘤模型.方法: 用脂质体包裹带有neo抗性基因及荧光素酶报告基因的真核表达质粒pGL4.17[luc2/neo],体外转染人乳腺癌细胞株MCF-7,将获得稳定表达荧光素酶的乳腺癌细胞株(MCF-7-luc)进行皮下接种BALB/c裸鼠及尾静脉接种SCID小鼠,建立BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型和SCID小鼠尾静脉移植瘤模型,通过活体成像系统监测体内肿瘤的生长及转移情况.结果: 经过筛选得到1个能够用于建立裸鼠皮下移植瘤模型及SCID小鼠尾静脉移植瘤模型的稳定表达荧光素酶的乳腺癌细胞株,并成功建立了乳腺癌裸鼠皮下移植瘤模型及SCID小鼠尾静脉移植瘤模型.结论: 通过活体动物光学成像系统成功获得的稳定表达荧光素酶的乳腺癌皮下移植瘤和尾静脉移植瘤模型,为人乳腺癌的相关研究提供了一个直观、方便、灵敏和可靠的平台.     

ELAM-1在鼻咽癌裸鼠移植瘤中的表达及其与转移的关系

目的 建立裸鼠鼻咽癌转移模型并探讨 E-选择素（ELAM-1）与鼻咽癌转移的相关性。方法 将鼻咽癌5-8F细胞悬液注射于裸鼠左后肢爪垫，观察裸鼠状态、成瘤情况并测量裸鼠体重及移植瘤长短径；采用连续病理切片苏木精-伊红染色观察移植瘤及转移情况，将16只人鼻咽癌荷瘤裸鼠分为转移组和非转移组；采用免疫组织化学法检测两组移植瘤组织中ELAM-1的表达。 结果 16只裸鼠均成瘤，成瘤率为100.0%，其中10只裸鼠出现转移瘤，转移率为62.5%。建模前，两组裸鼠体重差异无统计学意义［（13.83±0.56）g vs （14.62±0.30） g，t=1.026，P=0.071］。建模后4~7周，裸鼠瘤体体积呈指数增长，且转移组移植瘤增长速度较非转移组快，非转移组裸鼠瘤体体积小于转移组［（198.91 ± 163.29） mm³ vs （268.76 ±174.31） mm³，t=4.376，P=0.005］。ELAM-1在鼻咽癌裸鼠移植瘤、淋巴结转移灶及远处转移灶中的表达均为阳性，主要表达于细胞膜。转移组移植瘤光密度值高于非转移组（0.4497±0.0705 vs 0.0435±0.0082，t=4.388，P＝0.001）。结论 本研究成功构建稳定性好、转移率高的鼻咽癌裸鼠移植瘤转移模型，且ELAM-1在裸鼠移植瘤中高表达，可促进鼻咽癌裸鼠移植瘤生长和转移。     

组织蛋白酶D与人低分化鼻咽癌单克隆株转移的关系

作者采用免疫组化技术检测了鼻咽癌裸鼠移植瘤和回复培养的肿瘤细胞中组织蛋白酶Ｄ的表达，并探讨其与转移的关系。结果表明：不同代之间裸鼠移植瘤和回复培养的肿瘤细胞中组织蛋白酶Ｄ的表达有差异。其中第四代裸鼠移植瘤和回复培养的肿瘤细胞组织蛋白酶Ｄ的表达明显高于原代移植瘤及原代细胞（Ｐ＜０．０５）。裸鼠移植瘤中组织蛋白酶Ｄ的表达与肿瘤转移率成正比。提示组织蛋白酶Ｄ的表达与肿瘤转移关系密切。     

Survivin基因RNAi对子宫颈癌裸鼠移植瘤生长与凋亡的影响

目的：观察survivin基因RNAi对宫颈癌裸鼠移植瘤生长与凋亡的影响。方法：随机将BALB/c裸鼠分4组,分别注射转染携survivin RNAi重组质粒的HeLas2细胞、转染阴性对照质粒细胞HeLaNC、转染空质粒细胞HeLaU6 neo及宫颈癌HeLa细胞,建立人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型。观察survivin RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响;免疫组化法检测移植瘤组织中survivin蛋白的表达和微血管密度（MVD）,HE染色及TUNEL染色观察survivin RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤凋亡的影响。结果：成功建立人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型, HeLas2组裸鼠瘤重明显小于其他3组（P<0.05）;肿瘤生长抑制率为67.9%。免疫组化结果显示,HeLas2组裸鼠移植瘤组织中survivin蛋白表达显著下降; MVD值也显著降低（P<0.05）;HE染色、TUNEL染色结果显示,HeLas2组裸鼠移植瘤组织细胞凋亡明显增多（P<0.05）,AI值达(22.73±137)%。结论：Survivin基因RNAi可通过下调移植瘤组织survivin蛋白表达和降低其MVD抑制移植瘤生长并促进其凋亡。     

5-脂氧合酶活化蛋白抑制剂MK886治疗裸鼠人结肠癌移植瘤的实验

 目的观察5-脂氧合酶活化蛋白(FLAP)抑制剂MK886对裸鼠人结肠癌移植瘤的治疗作用,并探讨其抗肿瘤的可能机制。方法以HT-29人结肠癌细胞制备裸鼠人结肠癌移植瘤模型,15只荷瘤裸鼠随机分为三组,治疗组以MK886溶解在二甲基亚砜中投药,两对照组分别给以二甲基亚砜及不作任何治疗。治疗期间观察肿瘤生长情况,治疗结束后处死裸鼠并取瘤,测量肿瘤体积重量,用免疫组化方法检测肿瘤微血管密度,用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况。结果15只裸鼠全部成瘤,且实验过程中无一裸鼠死亡;通过测量瘤体积、瘤重结果显示,MK886可抑制人结肠癌裸鼠皮下移植瘤的生长;实验还证实MK886对人结肠癌裸鼠皮下移植瘤具有诱导肿瘤细胞凋亡及抗血管生成作用。结论MK886对于裸鼠人结肠癌移植瘤具有明显的治疗效果,MK886可能通过诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤微血管形成等机制控制人结肠癌的生长。     

长期观察的人肠粘液腺癌裸鼠移植瘤

人体肿瘤的裸鼠移植瘤在深入研究人类肿瘤生物学特性方面发挥了重要作用。人体肿瘤裸鼠移植瘤性状的稳定性是人们所关心的重要问题。我们曾报道了人肠粘液腺癌裸鼠移植瘤瘤株的建立及其生物学特性移植。该瘤株目前已传57代,历时5年多移植成活率为99.34％,是迄今国内连续传代最长的裸鼠移植瘤。我们以这一模型研究了人肠粘液腺癌移植瘤某些生物学特性的稳定性。     

敲减基质金属蛋白酶-10抑制人膀胱癌T24细胞系裸鼠皮下移植瘤生长

目的:探讨敲减MMP-10对人膀胱癌T24细胞系裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法:设计并合成针对人MMP-10的siRNA及阴性对照siRNA,分别注射至裸鼠皮下膀胱癌T24细胞系移植瘤,每周两次监测并比较各组裸鼠体重、瘤体大小,于接种后第5周处死裸鼠,取出皮下移植瘤,并比较各组瘤体重量的差异,并通过免疫组织化学染色检测MMP-10表达水平。结果:皮下注射膀胱癌T24细胞建立裸鼠皮下移植瘤模型,成瘤率达100%。瘤体内注射MMP-10 siRNA可以显著抑制膀胱癌T24细胞裸鼠皮下移植瘤的生长(P<0.05);观察结束时MMP-10 siRNA组所剥离的瘤体重量明显低于对照组(P<0.05)。各组裸鼠的平均体重并没有明显改变(P>0.05),提示瘤体内注射MMP-10 siRNA对裸鼠的一般情况影响不大,并没有明显的毒性或副作用。免疫组织化学染色结果示MMP-10 siRNA组MMP-10的染色强度及阳性细胞数均明显低于普通成瘤组和阴性对照组,提示瘤体内注射siRNA可以在体内有效敲低MMP-10的表达。结论:MMP-10在人膀胱癌T24细胞裸鼠皮下移植瘤的生长过程中发挥重要作用;瘤体内注射MMP-10 siRNA可以有效且安全地抑制膀胱癌T24细胞裸鼠皮下移植瘤的生长。     

敲减基质金属蛋白酶-10抑制人膀胱癌T24细胞系裸鼠皮下移植瘤生长

目的：探讨敲减MMP-10对人膀胱癌T24细胞系裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法：设计并合成针对人MMP-10的siRNA及阴性对照siRNA,分别注射至裸鼠皮下膀胱癌T24细胞系移植瘤,每周两次监测并比较各组裸鼠体重、瘤体大小,于接种后第5周处死裸鼠,取出皮下移植瘤,并比较各组瘤体重量的差异,并通过免疫组织化学染色检测MMP-10表达水平。结果：皮下注射膀胱癌T24细胞建立裸鼠皮下移植瘤模型,成瘤率达100%。瘤体内注射MMP-10 siRNA可以显著抑制膀胱癌T24细胞裸鼠皮下移植瘤的生长（P〈0.05）;观察结束时MMP-10 siRNA组所剥离的瘤体重量明显低于对照组（P〈0.05）。各组裸鼠的平均体重并没有明显改变（P〉0.05）,提示瘤体内注射MMP-10 siRNA对裸鼠的一般情况影响不大,并没有明显的毒性或副作用。免疫组织化学染色结果示MMP-10 siRNA组MMP-10的染色强度及阳性细胞数均明显低于普通成瘤组和阴性对照组,提示瘤体内注射siRNA可以在体内有效敲低MMP-10的表达。结论：MMP-10在人膀胱癌T24细胞裸鼠皮下移植瘤的生长过程中发挥重要作用;瘤体内注射MMP-10 siRNA可以有效且安全地抑制膀胱癌T24细胞裸鼠皮下移植瘤的生长。     

纽卡斯尔病毒疫苗和白细胞介素-12对荷人卵巢癌裸鼠模型作用的实验研究

目的:探讨纽卡斯尔病毒疫苗(ATV-NDV)和白细胞介素-12(IL-12]对3AO裸鼠皮下移植瘤的影响及其作用机制.方法:建立3AO裸鼠移植瘤模型,随机分为4组,每组10只.Ⅰ组注射ATV-NDV(0.2 mL);Ⅱ组注射IL-12(100 ng/kg);Ⅲ组注射IL-12(100 ng/kg)加ATV-NDV(0.2 mL);Ⅳ组为对照组,腹腔注射生理盐水0.2 mL;观察各组裸鼠成瘤率、生存期和生存延长率及肿瘤生长曲线.流式细胞术(FCM)观察裸鼠移植瘤细胞凋亡率及细胞周期,双标记计数NK细胞比例;称取裸鼠脾脏质量;移植瘤瘤体及各组裸鼠肝、脾、肾行组织病理学变化检查.结果:治疗组在荷瘤裸鼠生长延长率,裸鼠移植瘤细胞凋亡率,NK细胞群计数,裸鼠脾脏重量方面明显高于对照组,Ⅲ组高于Ⅰ组和Ⅱ组.组织病理学检查各治疗组中均可见有肿瘤坏死,肿瘤内及周围有明显的淋巴细胞浸润.结论:ATV-NDV和IL-12对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤具有明显的抑制作用.IL-12可增强ATV-NDV对卵巢癌的抑制作用.     

树突状细胞体外诱导抗肝癌免疫抑制裸鼠人肝癌细胞系HepG2移植瘤发生与生长

为研究树突状细胞(DC)体外诱导抗肿瘤免疫能否预防裸鼠移植瘤发生及抑制裸鼠移植瘤生长,联合应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及白介素4(IL-4)直接从肝癌患者外周血中培养出DC;以源于人肝癌细胞系HepG2的肿瘤抗原粗提物刺激DC,DC激活同源的T淋巴细胞;以被激活的T淋巴细胞预防性接种于裸鼠皮下,观察进一步接种的人肝癌细胞系HepG2移植瘤发生;观察被激活的T淋巴细胞抑制已接种于裸鼠的人肝癌细胞系HepG2移植瘤生长.发现,DC诱导的抗肿瘤免疫不仅能预防裸鼠人肝癌细胞系HepG2移植瘤发生,而且能抑制该移植瘤生长.提示经肿瘤抗原激活的DC作为一新概念上的抗肿瘤疫苗有可能在肝癌的预防及治疗中发挥重要作用.     

携带内皮抑素基因的腺病毒对HO-8910细胞裸鼠移植瘤的影响

[目的]探讨携带内皮抑素基因的腺病毒(pLP-Ad-ES)对荷人卵巢癌裸鼠移植瘤的抑制作用及其作用机制。[方法]采用细胞培养、移植瘤模型建立、RT-PCR、免疫组化等方法观察pLP-Ad-ES、pLP-Ad-ES+顺铂(DDP)对裸鼠移植瘤的影响及VEGF、MMP-2、Endostatin的表达。[结果]pLP-Ad-ES、pLP-Ad-ES+DDP能够抑制裸鼠移植瘤的生长,有明显的抑瘤作用(P<0.05);经腺病毒作用后,裸鼠移植瘤中MMP-2、VEGF呈现低表达、Endostatin呈现高表达。[结论]pLP-Ad-ES能够抑制卵巢癌裸鼠移植瘤的生长;同时能够抑制VEGF、MMP-2的表达,增强Endostatin的表达,提示内皮抑素的作用机制可能与抑制血管生成和调节基质金属蛋白酶有关。     

三氧化二砷联合TNP-470对裸鼠人肝癌移植瘤的影响

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)联合烟曲霉的提取物烟曲霉醇(TNP-470)对裸鼠人肝癌移植瘤生长的影响及其作用机制。方法:人肝癌转移模型(HCC)-LCI-D20原位移植瘤裸鼠32只,随机分4组(每组8只)给药:As2O3联合TNP-470组、As2O3组、TNP-470组、生理盐水(NS)对照组,给药21天后,对裸鼠移植瘤大小、肿瘤微血管密度(MVD)、免疫组化、透射电镜结果进行观察。结果:As2O3组、TNP-470组及联合组的平均瘤重及平均瘤体积均低于对照组(P<0.05);计算两药相互作用系数(CDI)值:瘤重CDI(0.95)<1,体积CDI(0.89)<1,两药有协同抑制移植瘤生长的作用。As2O3组抑制移植瘤VEGF、EGFR的表达;TNP-470组抑制移植瘤EGFR的表达,对移植瘤VEGF的表达无影响;联合组明显抑制移植瘤EGFR的表达,抑制移植瘤VEGF的表达作用等同As2O3组。裸鼠原位移植瘤的光镜、电镜下观察结果有意义;各用药组裸鼠原位移植瘤的MVD值均低于对照组(P<0.05)。结论:As2O3联合TNP-470协同抑制裸鼠人肝癌移植瘤的血管新生,能有效抑制移植瘤生长。     

CK、Tubulin-β和PCNA在鼻咽癌放疗后复发组织中的表达及意义

 目的 研究鼻咽癌中CK、Tubulin-β及PCNA的表达,探讨其与鼻咽癌放疗后复发和转移的可能机制。方法裸鼠体内移植瘤实验观察鼻咽癌细胞F1、S1放射治疗前后的细胞形态、体内增殖和转移能力,采用免疫组织化学SP法检测裸鼠移植瘤组织、鼻咽癌及放疗后复发组织中CK、Tubulin-β及PCNA的表达。结果放射后F1、S1裸鼠移植瘤瘤体质量分别较未放射组的F1、S1裸鼠移植瘤瘤体质量低（P<005）。各组均无肺转移,放射治疗后S1裸鼠移植瘤淋巴结转移率高于F1组,但差异无统计学意义（P>005）。未放射组F1裸鼠移植瘤组织中PCNA表达高于未放射S1裸鼠移植瘤（P<0.05）;放射治疗后S1裸鼠移植瘤中CK和PCNA表达均高于放射后的F1裸鼠移植瘤（P<0.05/0.01）。鼻咽癌放疗后复发组织中PCNA表达高于鼻咽癌组（P<0.05）。Spearman相关分析显示,鼻咽癌组织中CK与Tubulin-β、Tubulin-β与PCNA表达呈正相关关系,放疗后复发组织中CK与Tubulin-β和PCNA表达呈正相关（P<0.05）。鼻咽癌及放疗后复发组织中CK、Tubulin-β及PCNA的表达与患者年龄、性别、颈部淋巴结转移和临床分期无关。结论CK和Tubulin-β参与鼻咽癌放疗后复发的过程,并与细胞增殖关系密切,但不能独立作为鼻咽癌放疗后复发的预测指标。     

三氧化二砷联合TNP-470对裸鼠人肝癌移植瘤的影响

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）联合烟曲霉的提取物烟曲霉醇（TNP-470）对裸鼠人肝癌移植瘤生长的影响及其作用机制。方法：人肝癌转移模型（HCC）-LCI—D20原位移植瘤裸鼠32只，随机分4组（每组8只）给药：As2O3联合TNP-470组、As2O3组、TNP-470组、生理盐水（Ns）对照组，给药21天后，对裸鼠移植瘤大小、肿瘤微血管密度（MVD）、免疫组化、透射电镜结果进行观察。结果：As2O3组、TNP-470组及联合组的平均瘤重及平均瘤体积均低于对照组（P〈0．05）；计算两药相互作用系数（CDI）值：瘤重CDI（0．95）〈1，体积CDI（0．89）〈1，两药有协同抑制移植瘤生长的作用。As2O3组抑制移植瘤VEGF、EGFR的表达；TNP-470组抑制移植瘤EGFR的表达，对移植瘤VEGF的表达无影响；联合组明显抑制移植瘤EGFR的表达，抑制移植瘤VEGF的表达作用等同As2O3组。裸鼠原位移植瘤的光镜、电镜下观察结果有意义；各用药组裸鼠原位移植瘤的MVD值均低于对照组（P〈0．05）。结论：As2O3联合TNP-470协同抑制裸鼠人肝癌移植瘤的血管新生，能有效抑制移植瘤生长。     

Lewisy抗原对人卵巢癌细胞RMG—I裸鼠移植瘤P—Akt蛋白表达的影响

目的：探讨α1,2-岩藻糖转移酶基因转染对人卵巢癌细胞株RMG—I裸鼠移植瘤中磷酸化Akt（P—Akt）蛋白表达的影响。方法：利用已经建立的Lewis y抗原稳定高表达的卵巢癌细胞株RMG—I—H建立裸鼠移植瘤模型,利用免疫组织化学染色法检测基因转染前后裸鼠移植瘤组织中LewisY抗原及P—Akt蛋白的表达。结果：基因转染后的裸鼠移植瘤组织细胞表面LewisY抗原及P—Akt蛋白的表达均明显增加,转染组与非转染组之间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：Lewis y抗原明显促进卵巢癌细胞株RMG—I裸鼠移植瘤P—Akt蛋白的表达。     

双歧杆菌对实验性大肠癌bcl—2及bax基因表达的影响

目的 通过观察大肠癌裸鼠移植瘤ｂｃｌ－２及ｂａｘ基因的蛋白表达水平，探讨双歧杆菌的抑瘤主机制。方法 采用免疫组化ＳＰ法检测了４０只裸鼠大肠癌移植瘤ｂｃｌ－２及ｂａｘ基因的蛋白表达率及表达强度。结果 双歧杆菌注射组大肠癌移植瘤ｂｃｌ－２蛋白表达率及阳性细胞密度均低于肿瘤对照组，ｂａｘ基因的表达情况则相反。结论 双歧杆菌可使大肠癌裸鼠移植瘤的ｂｃｌ－２基因表达下调，ｂａｘ基因表达增强，最终诱导肿瘤细胞