N—(取代桂皮酰)氨基酸衍生物的合成及其对HeLa—S3细胞的放射增敏作用

为了寻找有效低毒的乏氧细胞放射增敏剂,我们设计和研究了一系列N-(取代桂皮酰)氨基酸衍生物。这些化合物由对应的取代桂皮酰氯和氨基酸的碱性溶液反应获得。用它们的钠盐试验对离体HeLa-S3系列的放射增敏作用。照射前药物和处于指数生长期的HeLa-S3系列作用2小时,照射前半小时乏氧,以不同剂量X线照射后,弃去药物,接种子培养皿中,置CO_2孵箱内培养,13天后,计集落数,并计算存活率。用多     

6—硝基化合物对小鼠小肠隐窝上皮细胞增敏作用的研究

乏氧细胞增敏剂的研究是国内外许多学者关注的重要研究课题之一。6-硝基化合物(简称Ⅱ号药)是中国医科院放射所研制的系列增敏剂中我室经体内,体外肿瘤细胞两步筛选出的较为理想的辐射增敏剂.为了解Ⅱ号药对正常组织的作用情况,本文观察了Ⅱ号药对小鼠小肠隐窝上皮细胞的增敏作用.     

AG825对乳腺癌细胞的辐射增敏作用

目的：通过体外实验观察酪氨酸蛋白激酶抑制剂AG825对人类表皮生长因子受体2（ERBB-2）高表达乳腺癌细胞的生长抑制作用和辐射增敏作用，并从DNA双链断裂（Double strand break，DSB）损伤修复的角度初步探讨AG825辐射增敏机制。方法：首先通过MTT比色法观察了不同浓度AG825对ERBB-2高表达乳腺癌细胞系MDA—MB-453生长抑制作用。然后将细胞设为空白对照组，单纯放射组，AG825预处理组。通过克隆形成实验观察AG825预处理组和单纯辐射组乳腺癌细胞辐射后生存分数（Survivial fraction，SF）的差异。并且通过单细胞中性凝胶电泳分析了AG825预处理对辐射诱导的DSB的影响。同时用免疫印记法分析AG825预处理后MDA—MB-453细胞在辐射后不同时间DSB修复的关键激酶DNA依赖蛋白激酶催化亚单位（DNA dependent protein kinase catalytic subunit，DNA—PKcs）蛋白的表达情况。结果：MTT比色法显示AG825对MDA—MB-453生长抑制作用随AG825浓度增高而增加。辐射后单纯放射组MDA—MB-453细胞生存分数较空白对照组明显下降。AG825预处理组辐射后生存分数较单纯放射组进一步下降，同时DSB较单纯放射组增加。免疫印记显示单纯放射组DNA—PKcs蛋白表迭在辐射后较空白对照组增加，而AG825预处理组DNA—PKcs表达较单纯放射组下降。结论：AG825对ERBB2高表达乳腺癌细胞具有生长抑制作用一、并且其对ERBB2高表达乳腺癌细胞具有辐射增敏作用，其辐射增敏机制可能与AG825抑制DNA—PKes蛋白表达而减少辐射后DSB修复有关。但还需进一步的体内实验来评价AG825辐射增敏作用。     

AG825对乳腺癌细胞的辐射增敏作用

Objective:To observe the radiosensitivity effect of AG825 on breast cancer cell line with high expression of ERBB2 in vitro.Methods:MTT and clone formation assay were used to observe the effect of AG825 on proliferation and radiosensitivity of breast cancer line MDA-MB-453.After MDA-MB-453 was exposed to AG825 and radiation,comet assay and Western blotting were applied to detect double strand break and expressions DNA-PKcs protein,respectively.Results:AG825 inhibited proliferation rate and decrease survival fraction of MDA-MB-453.After radiation,compared with control group,expression of DNA-PKcs was lower in group with AG825 presence but double strand break was higher.Conclusion:AG825 could increase radiosensitivity of breast cancer cell line MDA-MB-453,and it may associate with its inhibition of radiation induced expression of DNA-PKcs and double strand break repair.     

青蒿琥酯对人宫颈癌HeLa细胞的乏氧杀伤和辐射增敏作用初探

目的：观察青蒿琥酯对人宫颈癌HeLa细胞的乏氧杀伤及辐射增敏作用的影响。方法：采用Mosman′sMTT细胞增殖检测法。结果：青蒿琥酯（Artemisinin,Art）能够抑制人宫颈癌HeLa细胞的生长,其半数抑制浓度（IC50）为37μg/ml,在乏氧条件下,青蒿琥酯对HeLa细胞的IC50O 30μg/ml,在本实验条件下,咪嗦哒唑（MISO）的辐射增敏比（SER）为1．39,而青蒿琥酯在10μg/ml的SER为1．32,在30μg/ml的SER为2．00。结论：青蒿琥酯具有一定的辐射增敏作用,其辐射增敏作用是否与其结构有尚待深入研究。     

S—系列化合物的放射增敏作用

业已证明6-硝基-1-二乙氨乙基吲唑盐酸盐和6-硝基-2-二乙氨乙基吲唑盐酸盐是2个有效乏氧细胞增敏剂,S-8711及S-8712对离体乏氧细胞也都显示有一定的放射增敏效果,但前两者离体细胞毒性及后两者的放射增敏效果并不尽人意。为进一步降低毒性提高增敏作用.放射医学研究所新合成了7种新的化合物,分别为S-8816,S-8820,S-8824,S-8827,S-8928,S-8929及S-8930。经离体细胞存活曲线     

抑制PI3K/Akt提高药物对HeLa细胞放射增敏作用的研究

目的通过研究抑制PI3K／Akt提高多烯紫杉醇和顺铂对HeLa细胞放射增敏作用，探讨PI3K／Akt在多烯紫杉醇和顺铂放射增敏中的机制。方法体外培养HeLa细胞，应用MTT测定多烯紫杉醇和顺铂对HeLa细胞半数抑制率（IC50）。应用药物（IC20）单独及联合LY294002作用24h后X线2、3、4、6、8Gy照射。计算细胞克隆存活分数，多靶单击模型拟合曲线并计算Dq、D0、SF2值和放射增敏比（SER）。应用western blot方法检测Akt和磷酸化Akt蛋白的表达。应用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果多烯紫杉醇和顺铂能够明显提高放射引起的Akt磷酸化。多烯紫杉醇＋LY294002＋放射组、顺铂＋LY294002＋放射组SER（1．92、1．71）明显高于多烯紫杉醇＋放射组、顺铂＋放射组（1．41、1．37）。多烯紫杉醇＋LY294002＋放射组、顺铂＋LY294002＋放射组细胞凋亡率（12．5％、10．2％）明显高于多烯紫杉醇＋放射组、顺铂＋放射组（6．1％、5．1％）。结论P13K／Akt信号转导途径的活化是多烯紫杉醇和顺铂对HeLa细胞放射增敏作用降低的重要原因，抑制P13K／Akt能够提高多烯紫杉醇和顺铂对HeLa细胞的放射增敏作用。     

曲古霉素A对宫颈癌HeLa细胞的毒性及放射增敏作用

目的探讨曲古霉素A（TSA）对宫颈癌HeLa细胞的毒性及放射增敏作用。方法MTT法检测TSA处理宫颈癌HeLa细胞12、24、48、72 h的细胞毒性及TSA作用24 h的10%细胞抑制浓度（10％ inhibition concentration,IC10）和半数抑制率IC50对HeLa细胞不同分割放疗方式的增敏效果;克隆形成法分析IC10 的TSA对HeLa细胞放射增敏作用的影响,单击多靶模型拟合细胞存活曲线,计算放射增敏比（sensitive enhencement ratio,SER）。结果0.05~0.8 μmol/L TSA对HeLa细胞具有增殖抑制作用,且呈一定的时间－剂量依赖性,TSA作用24 h的IC10和IC50分别为0.0312和0.5865。0.6 μmol/L以上浓度及药物作用时间超过48 h的TSA对HeLa细胞的增殖抑制作用并无明显增加。IC10曲古霉素A的SER为1.6858,IC10的TSA对每次2.0 Gy、1.0 Gy（×2）、0.5 Gy（×4）分割放射组的SER分别为1.4496、1.6410、1.9554。结论TSA对宫颈癌HeLa细胞具有良好的细胞毒性及放射增敏作用,且对低剂量多次分割放疗的增敏作用更强。     

6—硝基化合物与MISO在离体细胞中放射增敏作用的比较

为了提高肿瘤组织中乏氧细胞的放射敏感性,国际上已有不少放射增敏剂应运而生,其中MISO是公认的代表,并已被作出临床评价。由于MISO有明显的神经毒作用,有效剂量与极量相近,因而在应用中受到限制。继MISO之后,不少结构经过改造,毒性又小的放射增敏剂相继出现。     

含硝基的双杂环化合物的离体放射增敏作用

在目前已研究的放射增敏剂中,绝大部分化合物的母核为单杂环族,例如早期的甲硝唑,用于临床的MISO和近几年研究的几种有效的放射增敏剂RSU—1069、SR2508、R_003—8799等。这些增敏剂在离体与整体试验中均具有较明显的增敏效应,但在临床试验时却都观察到不同程度的毒副作用,特别     

6-硝基化合物对小鼠小肠隐窝上皮细胞增敏作用的研究

6-硝基化合物是中国医学科学院放射研究所研制的系列增敏剂中的一种。我室经体内外两步实验筛选,认为6-硝基化合物是较为理想的肿瘤细胞增敏剂。我们观察了Ⅱ号药对小鼠小肠隐窝上皮细胞的增敏作用。结果显示:SER=1.04,增敏比明显低于Ⅱ号药对肿瘤细胞的增敏比。表明Ⅱ号药对小鼠小肠隐窝上皮细胞无明显增敏作用,是一种有希望的值得继续探索完善的含氧细胞增敏剂。     

槲皮素对宫颈癌HeLa细胞放射增敏的体外实验研究

目的探讨槲皮素对人宫颈癌He La细胞株的放射增敏作用及槲皮素放射增敏作用机理。方法克隆形成法研究不同浓度槲皮素(20%IC_(50)和IC_(50))及不同给药时序(先放后药和先药后放)对宫颈癌He La细胞的放射增敏作用,根据实验设计分为单放组、20%IC_(50)槲皮素先药后放组、20%IC_(50)槲皮素先放后药组、IC_(50)槲皮素先药后放组、IC_(50)槲皮素先放后药组,检测各组经不同量X线照射(12、8、6、4、2、0 Gy)后的细胞存活率(SF)。选择上述实验结果最佳给药时序,将实验设计为未加药对照组、单放组、单药1组(20%IC_(50))、单药2组(IC_(50))、药放1组(20%IC_(50))及药放2组(IC_(50)),放疗剂量为4Gy,分别采用流式细胞法、DAPI染色、Western blotting(仅采用20%IC_(50))检测各组处理24 h后的细胞周期分布、细胞凋亡变化及Bcl-2、Bax蛋白水平。结果不同浓度槲皮素及不同剂量射线按不同时序处理后的各组细胞与单放组比较SF均下降(P<0.05)。SF与槲皮素浓度呈反比,药物浓度越高,槲皮素的放射增敏作用越强。相同浓度药物和相同剂量射线不同处理时序相比较,先放后药组的SF均比先药后放组低。DAPI染色后荧光显微镜显示,放射线及槲皮素均可引起He La细胞核不同程度的皱缩,两者联合作用后胞核皱缩、碎裂更为明显。流式细胞仪检测显示,与其他各组比较,药放联合组G2/M期阻滞更显著(P<0.05)。Western blotting检测显示,药放联合组Bcl-2蛋白表达下调较其他各组更加显著(P<0.05),但Bax蛋白表达上调与槲皮素单药组比较差异无统计学意义。结论槲皮素对He La细胞具有放射增敏作用,其增敏作用具有浓度及时序效应;放疗增敏作用的机制可能与诱导细胞凋亡、阻滞细胞于G2/M期及下调Bcl-2/Bax比例有关。     

ANTP-SmacN7融合肽对H460细胞的辐射增敏作用

背景与目的肿瘤的辐射耐受制约了放疗疗效,第二个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激活剂（Second mitochondria-derived activator of caspase, Smac）蛋白类似物可明显提高辐射诱导的肿瘤细胞凋亡,有望成为新型肿瘤辐射增敏药物。本研究旨在探讨新型Smac蛋白类似物ANTP-SmacN7融合肽对肺癌细胞系H460的辐射增敏作用。方法合成ANTP-SmacN7融合肽,连接荧光素FITC以观察融合肽能否进入细胞。对数生长期H460细胞分为空白对照组、单纯照射组、ANTP-SmacN7组和照射联合ANTP-SmacN7组,单纯照射组给予0 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy照射,照射联合ANTP-SmacN7组中ANTP-SmacN7的浓度为20μmol/L,WST-1测定H460细胞的增殖。流式细胞仪测定细胞处理后24 h和48 h的细胞凋亡率。Western blot实验检测caspase3和cleaved caspase3的表达水平。结果 ANTP-SmacN7融合能够顺利进入细胞,且能够增强H460细胞的辐射敏感性（F=25.1,P<0.01,增敏比为1.86）,照射联合ANTP-SmacN7可明显降低H460细胞的克隆形成率（χ2=45.2,P<0.01;χ2=40.3,P<0.01）,提高cleaved caspase3的表达量,促进caspase3的活化,增加辐射诱导的细胞凋亡率。结论 ANTP-SmacN7融合肽可明显提高H460细胞的辐射敏感性,作为一种新的Smac蛋白类似物有望用于肿瘤的辐射增敏治疗。     

两种新6-硝基吲唑化合物的放射增敏作用

1-乙氨二乙基6硝基吲唑盐酸盐显示了较高的乏氧细胞放射增敏效果,S-8711是上述两个化合物的改造物,我们对侧链再次进行改造,重新设计合成了二个6-硝基吲唑化合物,试图降低毒性,提高增敏效果。 我们报道S-8816,S-8824对离体Hela-S_3细胞毒性以及乏氧细胞增敏作用的实验结果。实验选用单层贴     

MLN2238对宫颈癌HeLa细胞生长抑制和放射增敏及其机制探讨

目的：探讨蛋白酶体抑制剂MLN2238对宫颈癌HeLa细胞生长抑制和放射增敏作用及其机制。方法：采用CCK-8法检测MLN2238对HeLa细胞生长的抑制效应,克隆形成实验检测MLN2238辐射敏感性的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,线粒体荧光探针显像检测线粒体活性变化,蛋白质印迹法测定细胞中蛋白表达情况。结果：MLN2238对HeLa细胞有明显的抑制作用,0．05μmol／L抑制率为3．95％,0．1μmol／L为14．89％,0．5μmol／L为29．37％,1μmol／L为38．95％,5μmol／L为54．44％,10μmol／L为70．52％,30／μmol／L为81．76％,其效应呈剂量依赖性,F=1172．02,P〈0．001。0．1μmol／L的MLN2238对HeLa细胞有放射增敏作用,其放射增敏比（sensitizingen—hancementratio,SER）为1．40。MLN2238联合X射线对HeLa细胞存在交互作用,对照组细胞凋亡分数为（2．64±0．07）％,单药组为（2．76±0．38）％,单照4Gy组为（9．50±0．14）％,单照8Gy组为（21．04±0．04）％,联合4Gy组为（11．12土0．19）％,联合8Gy组为（26．18±0．35）％,细胞凋亡率逐渐增加,差异有统计学意义,F兰20．23,P=0．0022。0．1μmol／L的MLN2238可影响细胞线粒体活性,导致线粒体膜损伤加重,增加细胞凋亡。MLN2238与X射线联合作用能增加凋亡相关蛋白Bax／Bcl-2的表达。结论：MLN2238对宫颈癌HeLa细胞有生长抑制和放射增敏作用,MLN2238对宫颈癌HeLa细胞可能通过线粒体途径介导的凋亡而增强其辐射敏感性。     

胆固醇酯转运蛋白对人宫颈癌HeLa细胞辐射增敏性的影响

目的:研究胆固醇酯转运蛋白(cholesteryl ester transfer protein,CETP)高表达对宫颈癌HeLa细胞放射敏感性的影响。方法:采用脂质体介导法将构建插入全长CETP基因的pcDNA3载体转染人宫颈癌HeLa细胞,获得稳定高表达CETP的HeLa细胞,同时转染pcDNA3空质粒为对照;克隆形成实验检测细胞的存活率;FCM法检测细胞的凋亡率;蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)的表达。结果:X-射线照射后,CETP高表达的HeLa-CETP细胞的放射增敏比SERD0和SERDq分别为1.42和2.09,而未转染细胞与转染空质粒的细胞照射后,细胞存活率差异无统计学意义。FCM结果显示,在X-射线照射后,HeLa-CETP细胞的凋亡率明显高于未转染细胞与转染空质粒的细胞(P<0.05)。蛋白质印迹法检测结果显示,提高CETP的表达可以降低抗细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和NF-кB的表达,而增加促细胞凋亡Bax蛋白的表达。结论:导入外源性CETP基因,提高HeLa细胞中CETP表达水平可明显增加HeLa细胞的放射敏感性,其作用机制可能与增加辐射诱导细胞凋亡和改变凋亡相关蛋白的表达有关。     

紫杉醇对骨肉瘤细胞放射增敏作用的研究

目的观察体外环境下紫杉醇对骨肉瘤（osteosarcoma,OS）细胞的放射增敏效果及其与药物作用时间的关系。方法以MG-63细胞为实验对象,采用MTT法检测不同浓度紫杉醇（6、0.6、0.06、0.006和0.000 6μg/mL）对MG-63细胞的抑制作用,确定IC10作为后续实验的药物浓度;采用克隆形成分析法分别测定MG-63细胞在紫杉醇作用24h后照射以及单纯照射的存活分数（SF）,拟合细胞生存曲线并计算放射增敏比,分析紫杉醇对MG-63细胞的放射增敏作用;采用克隆形成分析法测定紫杉醇作用于MG-63细胞12、24和36h后细胞生存率的变化,确定最佳照射时间。组间比较采用单因素方差分析。结果 MTT实验结果显示,当紫杉醇浓度分别为0.000 6、0.006、0.06、0.6和6μg/mL时,其细胞抑制率分别为（3.25±2.58）%、（9.98±3.83）%、（20.35±3.91）%、（21.55±3.70）%和（55.36±4.67）%。提示,紫杉醇对MG-63细胞的生长抑制作用呈浓度依赖性,F=83.70,P〈0.01,IC10为0.01μg/mL;IC10浓度紫杉醇増敏比分别为1.14（D0比）、1.20（Dq比）和1.08（SF2比）;MG-63细胞α/β值为2.23,IC10浓度紫杉醇作用后α/β值为2.32。紫杉醇作用于MG-63细胞12、24和36h后再进行照射,细胞存活分数分别为（9.21±0.81）%、（5.39±0.75）%和（0.38±0.13）%,显著低于对照组的（12.86±1.07）%,差异有统计学意义,F=144.11,P〈0.01。结论紫杉醇对MG-63细胞有放射增敏作用,增敏作用呈时间依赖性,有一定的临床应用前景。     

青蒿素对人宫颈癌细胞放射增敏作用及其机制的研究

目的:研究青蒿素(artemisinin)对人宫颈癌HeLa细胞放射敏感性增强的作用机制.方法:MTT法检测青蒿素对正常人皮肤成纤维细胞GM0639、宫颈鳞癌SiHa细胞和宫颈腺癌HeLa细胞的生长抑制作用.克隆形成实验检测青蒿素对GM0639、SiHa和HeLa细胞的放射增敏作用.Western 印迹法检测CyclinB1和Wee1蛋白在HeLa细胞中表达的变化.结果:MTT法检测结果显示,不同浓度的青嵩素(27.67～442.75 nmol/L)对GM0639、SiHa和HeLa细胞作用24和48 h时均有细胞生长抑制作用;而青蒿素(110.69 nmol/mL)分别作用GM0639、SiHa和HeLa细胞6 h后,对3株细胞的生长抑制率分别为0.93±0.25、0.84±0.10和0.77±0.03,对照组(未加药组)3株细胞的生长抑制率分别为0.92±0.13、0.83±0.09和0.75±0.21,加药组和对照组之间差异无统计学意义(P>0.05).青蒿素对GM0639和SiHa细胞无放射增敏作用,对HeLa细胞有放射增敏作用,SER=1.12;青嵩素和照射联合作用HeLa细胞后,细胞中CyclinB1蛋白表达比照射组增加,Wee1蛋白表达比照射组减少.结论:青蒿素能增加HeLa细胞的放射敏感性,其作用机制可能与上调CylinB1及下调Wee1的蛋白表达有关.     

寡核苷酸Dbait乏氧辐射双诱导重组质粒的构建及其对人宫颈癌HeLa细胞的乏氧放射增敏效应

目的构建携带新型放射增敏剂Dbait的乏氧辐射双诱导的重组质粒pcDNA 3.1（+）-HREEgr-1-Dbait,探讨乏氧条件下其对宫颈癌HeLa细胞的放射增敏作用,为Dbait的基因靶向放射增敏治疗提供实验依据。方法从C57BL/6裸鼠肝组织扩增Egr-1启动子,人工合成HRE增强子序列和新型寡核苷酸药物Dbait,通过基因重组分别将Egr-1、HRE和Dbait克隆入pcDNA 3.1（+）中,获得重组质粒pcDNA 3.1（+）-HRE-Egr-1-Dbait。转染宫颈癌HeLa细胞,采用集落形成试验观察在常氧和乏氧状态下宫颈癌HeLa细胞的放射敏感度。结果真核表达重组质粒pcDNA 3.1（+）-HRE-Egr-1-Dbait构建成功并通过PCR和测序鉴定。在常氧情况下宫颈癌HeLa细胞的D₀、D_q、SF2、α/β值分别为1.98、0.93、0.52、11.12。在乏氧情况下宫颈癌HeLa细胞的D₀、D_q、SF2、α/β值分别为1.74、1.46、0.43、15.82,氧增敏比OER为0.88。结论成功构建了携带新型放射增敏剂Dbait的乏氧辐射双诱导的真核表达质粒pcDNA 3.1（+）-HRE-Egr-1-Dbait,并验证了其在宫颈癌HeLa细胞中的乏氧辐射增敏效应。