糖肾安对糖尿病肾病大鼠肾脏TGF-β_1及VEGF表达的影响

目的 探讨糖肾安对糖尿病肾病模型大鼠肾脏转化生长因子-β1（TGF-β1）及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达的影响,并探讨其作用机制。方法 采用单侧肾脏切除、高糖高脂饲料喂养、小剂量链脲佐菌素腹腔注射法成功制作糖尿病肾病（DKD）大鼠模型18只并随机分为糖肾安组和模型组各9只;10只健康大鼠为对照组。连续灌药6周,测定各组肾重、血糖、24 h尿蛋白定量、血浆Ⅳ型胶原蛋白（COLⅣ）水平及肾脏TGF-β1、VEGF mRNA水平。结果 与对照组相比,模型组血浆COLⅣ水平及肾脏TGF-β1、VEGF mRNA水平明显升高（P均〈0.01）,且TGF-β1、VEGF mRNA水平与24 h尿蛋白排泄量及血浆COLⅣ水平呈正相关（P〈0.05）。与模型组相比,糖肾安组血糖降低、24 h尿蛋白定量减少、血浆COLⅣ水平及肾脏TGF-β1、VEGF mRNA水平降低（P均〈0.01）。结论 糖肾安联合糖适平对DKD大鼠肾脏有保护作用,其机制可能是通过降低TGF-β1、VEGF的表达水平而实现的。     

甘油三酯肾毒性及其加重大鼠阿霉素肾病的初步研究

目的 探讨甘油三酯(TG)是否具有肾毒性以及外源性TG对阿霉素肾病大鼠的影响。方法 雄性SD大鼠40只，分为5组，即C组：正常对照组，F组：果糖饲喂组，A组：ADR肾病组，FA组：ADR肾病 果糖饲喂组，FAB组：ADR肾病 果糖饲喂组 非诺贝特治疗组(n=10)。实验周期为16周。在实验前、实验后第2、8和16周分别抽空腹血查肾功能、白蛋白、血脂。抽血次日留24h尿测尿蛋白定量。实验结束时采血留尿后宰杀动物，留取肾组织行光镜下观察HE、油红O染色病理学改变，测定肾脏内纤维连接蛋白(FN)和转化生长因子β(TGF-β)的含量。结果 饲喂果糖可造成大鼠食饵性高TG血症，但肾脏基本无病变，肾脏内少见脂质沉积；而饲喂果糖可显著升高阿霉素肾病大鼠的血TG水平，尿蛋白排泄量显著增多，肾脏病理改变加重，肾小球和肾小管内脂质沉积增加，肾皮质FN和TGF-β的含量均较食饵性高甘油三酯血症大鼠显著增加或增强；而以吉非罗齐降低大鼠血浆甘油三酯水平后大鼠尿蛋白排泄量减少以及肾脏病理减轻，肾脏内脂质沉积明显减少，肾皮质内FN和TGF-β的含量下降。结论 高TG血症对SD大鼠肾脏具毒性作用，并可加重阿霉素肾病大鼠病情和肾脏病理，提示临床重视和治疗高TG血症的必要性和紧迫性。     

罗格列酮对实验性2型糖尿病大鼠肾脏保护作用

通过高糖高脂饮食结合小剂量链脲佐菌素的方法建立模拟2型糖尿病大鼠合并肾脏损害的动物模型,糖尿病大鼠随机分成糖尿病组、罗格列酮治疗组（3mg/kg·d）和正常对照组。4周、8周末测量大鼠血糖和胰岛素水平,18周末测量大鼠血糖、血肌酐和胰岛素水平,留24小时尿检测尿肌酐、尿蛋白定量。用免疫组化、反转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测TGF-β1在肾脏的表达情况。结果TGF-β1在糖尿病组大鼠肾脏的表达明显增加,罗格列酮可以显著降低糖尿病大鼠血糖、血脂水平,降低尿白蛋白和肾脏的TGF-β1表达水平。结论罗格列酮对实验性2型糖尿病大鼠合并肾脏损害具有一定的治疗作用。     

罗格列酮对实验性2型糖尿病大鼠肾脏保护作用

通过高糖高脂饮食结合小剂量链脲佐菌素的方法建立模拟2型糖尿病大鼠合并肾脏损害的动物模型,糖尿病大鼠随机分成糖尿病组、罗格列酮治疗组（3mg/kg·d）和正常对照组。4周、8周末测量大鼠血糖和胰岛素水平,18周末测量大鼠血糖、血肌酐和胰岛素水平,留24小时尿检测尿肌酐、尿蛋白定量。用免疫组化、反转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测TGF-β1在肾脏的表达情况。结果TGF-β1在糖尿病组大鼠肾脏的表达明显增加,罗格列酮可以显著降低糖尿病大鼠血糖、血脂水平,降低尿白蛋白和肾脏的TGF-β1表达水平。结论罗格列酮对实验性2型糖尿病大鼠合并肾脏损害具有一定的治疗作用。     

尿激酶对大鼠胸膜成纤维细胞分泌TGF-β1、VEGF、PAI-1的影响

目的探讨尿激酶(urokinase,UK) 对大鼠胸膜的成纤维细胞（fibroblasts，FB）分泌转化生长因子-β₁ （transforming growth factor beta-1，TGF-β₁）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、纤溶酶原激活物抑制剂（plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1）的影响。方法取健康雄性SD大鼠胸膜，培养、纯化并鉴定FB。设对照组和实验组。对照组分2组：对照0组由不含胸膜FB的40个样本组成，加入无血清RPMI 1640培养液；对照1组由40个胸膜FB样本组成，加入无血清RPMI 1640培养液，培养24h后，用酶联免疫吸附法测定上清液中TGF-β₁、PAI-1、VEGF的含量；实验组分为4组，共40个样本，分别加入5000、10000、20000和30000IU/ml的UK，培养24h后取上清液，测定其中TGF-β₁、VEGF、PAI-1量。结果对照0组未检测出TGF-β₁、PAI-1、VEGF；对照组1胸膜FB分泌TGF-β₁、VEGF、PAI-1的量为（3135.205±390.975）pg/mL；（22.09±7.48）ng/ml；（1.8775±0.39）ng/ml；加入5000～30000IU/ml尿激酶的试验组， TGF-β1、VEGF、PAI-1的浓度与对照1组相比，有明显下降（P<0.05）。结论胸膜成纤维细胞能分泌TGF-β₁、PAI-1、VEGF；而尿激酶能抑制其分泌。     

过氧化物酶增殖物激活受体α激动剂对心脏成纤维细胞增殖的抑制作用

目的: 探讨过氧化物酶增殖物激活受体α（PPARα）激动剂非诺贝特(fenofibrate)对糜酶介导的大鼠心脏成纤维细胞（CFs）增殖的影响及作用机制。方法: 用胰酶消化法分离、培养新生SD大鼠的CFs。采用3H-脱氧胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入法测定CFs的DNA合成,用流式细胞术分析细胞周期,用RT-PCR检测PPARα 及转化生长因子β1（TGF-β1）mRNA的表达。结果: ①以不同浓度的非诺贝特预处理后,CFs的3H-TdR掺入量呈浓度依赖性减少,其中50和100 μmol/L组均较糜酶组明显减少（分别为P<0.05和P<0.01）。②随着非诺贝特浓度的增加,CFs在G0/G1期的百分率逐渐增加,S期的百分率和增殖指数逐渐减少,其中50和100 μmol/L组与糜酶组比较,上述各项指标均有显著性差异（分别为P<0.05和P<0.01）。③以25、50和100 μmol/L非诺贝特预处理后,PPARα mRNA表达的水平呈浓度依赖性增加,其中50和100 μmol/L组均较糜酶组显著增加（分别为P<0.05和P<0.01）。④随着非诺贝特浓度的增加,TGF-β1 mRNA表达水平呈递减趋势,其中50和100 μmol/L组均较糜酶组明显减少（P<0.01）。结论: PPARα 激动剂非诺贝特以浓度依赖的方式抑制糜酶诱导的大鼠CFs增殖的作用,其机制与PPARα基因表达的上调和TGF-β1基因表达的下调有关,提示PPARα 和TGF-β1这两条信号通路可能存在信息交流。     

拮抗血管紧张素Ⅱ对5/6肾切除大鼠肾小管间质血小板反应蛋白1表达的影响

目的：观察血小板反应蛋白1（TSP1）在大鼠纤维化肾组织中的表达，以及血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对肾小管上皮细胞表达TSP1的影响。方法：建立5／6肾切除SD大鼠模型，设假手术组，手术组，氨氯地平组。缬沙坦组，雷米普利组。术后定时检测血压，分别于成模后0、4、12周取材，检测血肌酐、尿素氮、24h尿蛋白定量并计算Ccr。采用Masson染色观察肾小管间质纤维化（TIF）的程度；通过免疫组化观察TSP1、转化生长因子1（TGF-β1）、纤维连接蛋白（fibronectin，FN）在各组大鼠肾组织中表达及分布；采用免疫荧光共染技术观察TSP1／TGF-β1两者共区域表达随病变进展的变化；抽提肾皮质组织总RNA，RT—PCR法检测TSP1、TGF-β1和FN mRNA转录水平的表达。体外实验，以1 μM AngⅡ刺激人肾小管上皮细胞（HK-2）24h，10μM氯沙坦（Losartan）进行干预，分别采用RT-PCR、免疫荧光和Western blot检测TSP1、TGF-β1、FN mRNA转录水平和蛋白表达的改变，ELISA法检测培养基中活性和总TGF-β1的含量。结果：①正常大鼠肾小管间质基本无TSP1分布；而在5／6肾次全切大鼠的肾小管间质区内，小管上皮细胞、肌成纤维细胞和浸润的单核／巨噬细胞均能表达TSP1，12周手术组TSP1蛋白表达水平较假手术组上调近5倍：且较之0周和4周手术组亦明显增加（均P〈0．01），12周手术组TSP1mRNA和蛋白表达水平较假手术组分别上调1．94倍和5倍（均P〈0．05）；②TSP1表达增加与Ccr减退呈负相关（r=-0．472，P〈0．01）；12周手术组大鼠肾组织TIF程度以及TGF-β1、FN的表达较假手术组均明显上调（均P〈0．05），并与TSP1表达增加呈正相关；③缬沙坦／雷米普利处理组TSP1表达也上调，但程度明显低于手术组和氨氯地平组（均P〈0．05），而二组之间无差别；④AngⅡ能明显上调HK-2细胞TSP1、TGF—β1和FN mRNA转录水平和蛋白表达，而氯沙坦能抑制TSP1和TGF—β1的mRNA转录和蛋白合成，下调培养上清液中活性和总TGF-β1的含量。结论：肾小管间质病变的进展过程中，AngⅡ能使TSP1表达上调，其改变程度与肾功能损害密切相关；血管紧张素转换酶抑制剂／血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂能减少TSPl和TGF—β1在纤维化肾组织中的表达，从而进一步对细胞外基质的沉积进行调节。     

非诺贝特对胰岛素抵抗大鼠肝脏脂肪酸氧化的影响

目的观察自发胰岛素抵抗的OLETF大鼠肝脏脂肪酸氧化代谢的异常以及非诺贝特对其的影响。方法以8周龄LETO大鼠为正常对照,将同周龄OLETF大鼠随机分为未治疗组和治疗组[非诺贝特20ms／（kg·d）],于17周龄及30周龄分批处死动物,使用实时定量RT－PCR法测定肝脏组织脂肪酸氧化相关基因过氧化物酶体增生物激活受体－α（PPAR－α）、丙二酰辅酶A脱羧酶（MCD）、脂酰辅酶A氧化酶（AOX）mRNA的表达。结果与唧0大鼠相比,未治疗组8周龄大鼠首先出现糖负荷后2h游离脂肪酸（FFA）水平升高（P〈0．05）,17周龄出现空腹FFA以及血糖、胰岛素水平的升高;30周龄时肝脏组织PPAR-α、MCD、AOXmRNA表达均下调,甘油三酯含量升高（P均〈0．01）。治疗组空腹FFA水平明显降低,肝组织PPAR-α、MCD、AOXmRNA表达上调,肝组织甘油三酯含量下降（P均〈0．05）。结论非诺贝特可使OLETF大鼠肝脏脂肪含量下降,这可能与其降低血清FFA水平及上调肝脏组织与脂肪酸氧化相关酶的基因表达有关。     

氟伐他汀对糖尿病大鼠心肌结缔组织生长因子表达的影响

目的探讨氟伐他汀对糖尿病大鼠心肌结缔组织生长因子（CTGF）表达的效应及意义。方法32只大鼠分为对照组、糖尿病未治疗组、氟伐他汀小剂量治疗组及氟伐他汀大剂量治疗组，12周后称重并计算心体比（H／B）和左室重量指数（LVMI），RT-PCR检测各组心肌CTGF、纤维连接蛋白（FN）、Ⅲ型胶原（ColⅢ）、TGF-β1的表达。结果糖尿病未治疗组H／B、LVMI增高;CTGF、TGF-β1、FN和ColⅢ的mRNA表达显著上调。氟伐他汀治疗能降低H／B、LVMI（P〈0．05～0．01）；减少糖尿病心肌CTGF、TGF-β1、FN和ColⅢ的mRNA表达（均P〈0．01），下调CTGF比TGF-β1显著。以上效应具有剂量依赖性。结论氟伐他汀可抑制糖尿病大鼠心肌细胞外基质积聚，CTGF表达下调可能是其心脏保护的作用机制之一。     

漏芦对慢性肾功能不全大鼠保护机制的研究

目的 观察漏芦对慢性肾功能不全大鼠肾功能及肾组织TGF-β1和CTGF表达的影响.方法 采用改良肾脏5/6切除术建立大鼠慢性肾功能不全模型,随机分为正常对照组(C组),非治疗组(NT组)和漏芦治疗组(RR组).RR组每天予以漏芦(15 g/kg)灌胃.治疗4 w后,检测各组大鼠的24 h尿蛋白定量、血尿素氮、血肌酐及肾硬化指数,通过免疫组化及蛋白印迹观察肾组织TGF-β1和CTGF的表达.结果 NT组大鼠的24 h尿蛋白定量、血尿素氮、血肌酐及肾脏硬化指数较C组明显增加(P＜0.01),而RR组大鼠24 h尿蛋白定量、血尿素氮、血肌酐及肾脏硬化指数较NT组减少(P＜0.05).NT组大鼠肾组织TGF-β1、CTGF表达较C组明显增加(P＜0.01),RR组肾组织TGF-β1、CTGF表达较NT组减弱(P＜0.05).结论 漏芦可降低慢性肾功能不全大鼠24 h尿蛋白、血尿素氮、肌酐水平,减轻肾组织硬化,抑制肾组织TGF-β1和CTGF表达.漏芦对慢性肾功能不全的保护机制可能与降低肾脏TGF-β1和CTGF表达有关.