逆转录－套式－聚合酶链反应检测HCV RNA正链和负链及与肝细胞癌的关系

为了解ＨＣＶ与肝癌的关系，采用ＨＣＶ５－ＮＣＲ正相引物和反相引物逆转录－套式－聚合酶链反应（ＲＴ－Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）检测了２２例肝癌手术患者血清、癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链和负链；用ＨＢＶＣ保守区引物ＰＣＲ法检测了ＨＢＶＤＮＡ。结果发现：５例抗－ＨＣＶ阳性的肝癌患者中，３例血清、癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链扩增试验均阳性；１例三者均阴性；１例血清和癌旁组织阳性。３例正链扩增试验阳性的癌组织和癌旁组织均检出了ＨＣＶＲＮＡ负链，但血清中未检出负链。在２２例ＨＣＣ中１３例血清、８例癌组织和１５例癌旁组织中检出ＨＢＶＤＮＡ。５例有ＨＣＶＲＮＡ和／或抗－ＨＣＶ阳性的肝癌患者血清、和／或癌组织、和／或癌旁组织中均伴随ＨＢＶＤＮＡ和／或ＨＢ－ＶＭ阳性。提示ＨＣＶ可在癌旁肝细胞或肝癌细胞中感染并复制；ＨＢＶ感染与肝癌发生的关系比ＨＣＶ感染更密切。     

逆转录—套式—聚合酶链反应检测HCV RNA正链和负链及与肝细胞…

为了解ＨＣＶ与肝癌的关系，采用ＨＣＶ５′－ＮＣＲ正相引物和反相引物逆转录－套式－聚合酶链反应（ＲＴ－Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）检测了２２例肝癌手术患者血清，癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链和负链，用ＨＢＶＣ保守区引物ＰＣＲ法检测了ＨＢＶＤＮＡ，结果发现，５例抗－ＨＣＶ阳性的肝癌患者中，３例血清，癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链扩增试验均阳性，１例三者均阴性，１例血清和癌旁组织阳性。３例正链扩增试验阳性     

肝癌组织中丙型和乙型肝炎病毒基因状况研究

采用逆转录巢式ＰＣＲ技术检测了５１例ＨＣＣ患者的肝癌及癌周肝组织中ＨＣＶＲＮＡ正负链，同时以巢式ＰＣＲ技术检测了这些组织中的ＨＢＶＤＮＡ。结果，１１．８％（６／５１）检出组织中ＨＣＶＲＮＡ正链：其中５例在癌周肝组织，２例在癌组织中检测出ＨＣＶＲＮＡ负链，由于负链ＲＮＡ为ＨＣＶ的复制中间体，不释放到细胞外，其检出ＨＣＶ感染与ＨＣＣ关系的研究提供了进一步的病因证据，组织中ＨＢＶＤＮＡ检出率高达９２．２     

周围血白细胞的复制型丙型肝炎病毒RNA的检测及临床意义

用简并引物作套式反转录。聚合酶链反应检测正、负链丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ。显示３０例急、慢性丙型肝炎患者的血清及血浆中，７例无症状抗－ＨＣＶ阳性者的血清、血浆及周围血白细胞（ＰＢＬ／Ｃ）中，均未检出负链ＨＣＶＲＮＡ。慢性丙型肝炎者ＰＢＩ（中正、负链ＨＣＶＲＮＡ的检出率高于急性丙型肝炎及无症状抗－ＨＣＶ阳性者（Ｐ＜０．０５～０．００１）。１７例经肝组织学检查的患者中，急性肝炎（ＡＨ）者ＰＢＬ／Ｃ的正、负链ＨＣＶＲＮＡ检出率低于慢性活动性肝炎（ＣＡＨ）者（Ｐ＜０．０５）。１例ＡＨ及６例ＣＡＨ患者肝组织内正、负链ＨＣＶＲＮＡ全部阳性。证实丙型肝炎患者的ＰＢＬ／Ｃ确可被ＨＣＶ感染，病程越长，被ＨＣＶ感染的可能性越大；病情活动者，ＰＢＬ／Ｃ中负链ＨＣＶＲＮＡ的检出率越高。提示ＨＣＶ不仅可以感染ＰＢＬＣ，而且可在其中复制；负链ＨＣＶＲＮＡ的出现与病情活动有关。     

地高辛标记原位杂交技术检测骨髓单个细胞中HCV RNA

为探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）肝外感染、复制场所与肝损害的关系，应用地高辛标记ＨＣＶ ＲＮＡ探针原位杂交技术，对２０例慢性丙型肝炎患者骨髓单个核细胞中的ＨＣＶ ＲＮＡ（包括正边ＲＮＡ和负链ＲＮＡ）进行了检测。结果有１８例骨髓单个核细胞用正链ＨＣＶ ＲＮＡ探针杂交在较多细胞中出现杂交信号（９０％），而所有患者骨髓竟单个核细胞用负链ＨＣＶ ＲＮＡ探针杂交无杂交信号出现。结果提示：慢性丙肝患者骨髓中存在的     

原发性肝癌患者血清和肝组织中庚型肝炎病毒基因的PCR检测

用逆转录－聚合酶链反应法（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了原发性肝癌（ＰＬＣ）患者血清及肝癌和癌旁肝组织中的庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）ＲＮＡ，以ＰＣＲ－双脱氧末端终止法测定了ＰＣＲ产物的核苷酸序列。结果显示，血清和肝组织中ＨＧＶＲＮＡ的检出率分别为１９．４％（１３／６７）和２５．７％（９／３５），且ＨＧＶＲＮＡ在肝癌组织呼吕旁肝组织中同时存在，血清和肝组织中ＨＧＶ ＲＮＡ检测结果的符合率为８５％；５′非编码区（５     

乙型用丙型肝炎病毒感染与肝细胞癌

为探讨乙型和丙型肝炎病毒（ＨＧＢＶ和ＨＣＶ）感染与肝细胞癌（肝癌）发生的关系采用ＥＬＩＳＡ和聚合酶链反应（ＰＣＲ）对沈阳地区１１７例肝癌、１０７便肝硬化和４５ 析患者血清进行了ＨＢＶ和ＨＣＶ血清标志及ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶ ＲＮＡ检测，并采用性片段长度多态性对其中７３便ＨＣＶ ＲＮＡ阳性血清进行了ＨＣＶ基因分型。结果，肝癌组ＨＢＶ感染率（６０．７％）显著高于ＨＣＶ感染率（３３．５％，Ｐ〈０．０１），     

一步反转录一原位聚合酶链扩增法检测原发性肝癌细胞中HCV－RNA

一步反转录一原位聚合酶链扩增法检测原发性肝癌细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ曾维政，蒋明德，褚桂珍，邓桂英，张建华，楚人俊，陈泰庆，张家碧探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）和肝细胞肝癌（ＨＣＣ）发生之间的关系，需在细胞和分子水平上证实肝癌细胞内有无ＨＣＶ存在及其分布状态...     

肝细胞癌组织中HCV复制中间体的研究

本文报道在逆转录反应时仅加入与负链（复制中间体）ＨＣＶＲＮＡ互补的有义外引物，待将逆转录酶变性灭活后，再加入反义外引物，然后进行两轮聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增。用这种逆转录反应和套式ＰＣＲ方法，检测了ＨＣＣ组织和对照血清中负链ＨＣＶＲＮＡ的存在状况。结果负链ＨＣＶＲＮＡ在１０例（其中３例为已测血清总ＨＣＶＲＮＡ阳性，余７例为随机选择）ＨＣＣ组织中检出５例，而在５例（其中３例与组织配对）总ＨＣＶＲＮＡ的ＨＣＣ阳性病人血清则均阴性。表明ＨＣＣ组织中确有ＨＣＶ复制，从而进一步提示ＨＣＶ感染与我国ＨＣＣ的发生密切相关。     

干扰素联合病毒唑对肝炎患者正,负链丙型肝炎病毒RNA的影响

为评价干扰素联合病毒唑的抗病毒效果，用套式反转录－聚合酶链反应技术观察其对慢性丙型肝炎患者正、负链丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶＲＮＡ）的作用。结果显示，在对联合抗病毒治疗有反应的患者中，多数患者ＡＬＴ降至正常，血清正链阳性率由９２．３１％降至３８．４６％（Ｐ＜０．００５），周围血单核细胞（ＰＢＭＣ）中负链阳性率由７６．９２％降至３８．４６％（Ｐ＜０．０５），但对ＰＢＭＣ中正链ＨＣＶＲＮＡ影响不大。治疗停止后，半数以上患者病情复发，病情复发者均为ＰＢＭＣ中正链及负链ＨＣＶＲＮＡ持续阳性者。提示单纯检测血清正链ＨＣＶＲＮＡ作为疗效考核及病情转归的判断指标有一定的局限性。同时检测血清及ＰＢＭＣ中正、负链ＨＣＶＲＮＡ，具有重要的临床意义。本研究干扰素联合病毒唑的抗病毒效果与单用干扰素接近，似说明病毒唑并未增加干扰素的疗效     

丙型肝炎病毒在肝外组织复制状态和抗原表达

目的 探讨丙型肝炎肝外组织丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ,ＨＣＶ）感染和复制状态及其意义。方法 分别采用免疫组织化学和逆转录多聚酶链反应（ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ,ＲＴＰＣＲ）方法检测９例丙型肝炎肾,心,胰腺和肠等肝外组织ＨＣＶ多种抗原和正链,负链ＨＣＶ ＲＮＡ。结果 ９例中６例（６６．７％）在肝外组织检出ＨＣ     

肝细胞肝癌癌组织及癌旁肝组织中HCVNS5蛋白的检测

为了解肝细胞肝癌（ＨＣＣ）患者丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染状况，应用免疫组织化学方法以单克隆鼠抗－ＨＣＶＮＳ５检测了一组ＨＣＣ患者癌组织和癌旁肝组织中ＨＣＶ表达情况。结果：６４例ＨＣＣ患者癌旁肝组织中，共检出ＨＣＶＮＳ５阳性３０例（４６．９），阳性信号位于癌细胞和癌直细胞胞浆中，阳性细胞多呈弥漫或簇状分布；３０例ＨＣＶＮＳ５呈阳性的标本中，７例只于癌直细胞中检出，１２例只存在于癌组织中，另１１例癌旁     

原位聚合酶链技术检测肝细胞癌组织内丙型肝炎病毒核酸及其意义

应用一步反转录。聚合酶链原位扩增法（ＯＲＴ－ＰＣＲＩＳ）检测肝细胞癌（ＨＣＣ）及癌周组织内丙型肝炎病毒核糖核酸（ＨＣＶＲＮＡ），同时以一步反转录－ＰＣＲ（ＯＲＴ－ＰＣＲ）法检测血清及肝组织匀浆内ＨＣＶＲＮＡ。发现癌和癌周组织经原位扩增后ＨＣＶＲＮＡ检出率为７７．８％（２／２７）及８１．５％（２２／２７），而血清及组织匀浆内仅为２９．６％及３７．Ｏ％，两者与癌及癌周组织相比差异均有显著性（Ｐ＜０．０１）。ＯＲＴ－ＰＣＲＩＳ示在癌组织中ＨＣＶＲＮＡ以核型为主（１２／２１），阳性细胞点样分布，细胞内信号强度多为＋（５７．１％）；而癌周组织以核浆型为主（１４／２２），阳性细胞弥漫分布，信号强度多为＋＋＋（５０．０％）。无论在癌还是在癌周组织均未发现ＨＣＶｃＤＮＡ存在。结果提示ＯＲＴ－ＰＣＲＩＳ优于ＲＴ－ＰＣＲ，ＨＣＶ对本地区ＨＣＣ发生、发展起着极为重要的作用。癌周ＨＣＶ复制较癌组织内活跃，癌和癌周细胞核阳性表明ＨＣＶＲＮＡ在核内整合或复制，这种整合或复制对肝细胞基因组ＤＮＡ产生的影响可能与乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）相类似。     

原位反转录PCR检测慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞中HCV

目的研究慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌ，ＰＢＭＣ）中丙型肝炎病毒的定位分布及复制。方法直接原位反转录－ＰＣＲ（标记引物）对２０例慢性丙型肝炎患者的ＰＢＭＣ内丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的分布、定位及存在形式进行研究。结果１６例患者外周血单个核细胞的胞浆内发现ＨＣＶＲＮＡ阳性信号，并有一例患者的胞浆内发现ＨＣＶＲＮＡ负链信号。结论ＨＣＶ可感染ＰＢＭＣ并在其中复制。原位ＲＴ－ＰＣＲ为进一步研究ＨＣＶ进入人体内的分布、潜伏、复制状况以及丙型肝炎治疗、药物研究奠定了基础。     

HCV感染孕妇的引产胎肝内HCV RNA的定位研究

为了探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）母婴传播是否发生产前，用逆转录－套式－聚合酶链反应检测孕妇外周血及其引产胎肝匀浆中ＨＣＶＲＮＡ，同时用原位杂交技术检测引产胎肝细胞中ＨＣＶＲＮＡ。结果从６例外周血ＨＣＶＲＮＡ阳性的中期妊娠孕妇的引产胎肝组织匀浆中，４例胎肝检出ＨＣＶＲＮＡ其中２例胎肝组织切片开发现ＨＣＶＲＮＡ原位杂交阳性胎肝细胞，阳性着色局限于胎肝细胞的胞浆内，提示ＨＣＶ母婴传播可发生于产前妊娠期，Ｈ     

血清抗－HCV与HCVRNA检测临床意义的探讨

血清抗－ＨＣＶ与ＨＣＶＲＮＡ检测临床意义的探讨冯国和，李颖，刘沛，王兆荃，孙国君血清丙型肝炎病毒抗体（抗－ＨＣＶ）与丙型肝炎病毒核糖核酸（ＨＣＶＲＮＡ）检测已作为丙型肝炎病原学诊断主要指标。二者检测意义的不同致使结果不完全一致。我们通过对９６例临床血...     

原位杂交法检测外周血单个核细胞中HCV RNA

目的比较慢性丙型肝炎患者用干扰素治疗前以及治疗后３个月ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ。方法应用地高辛素标记ＨＣＶＲＮＡ正链及负链探针，建立原位杂交方法检测外周血单个核细胞（ＰＭＢＣ）中的ＨＣＶＲＮＡ。结果治疗前１９例患者正链ＨＣＶＲＮＡ阳性，８例负链ＨＣＶＲＮＡ阳性，用正链探针杂交在较多的细胞中出现杂交信号，负链探针杂交仅在少数细胞中出现杂交信号，ＨＣＶＲＮＡ在ＰＢＭＣ胞浆中呈均质性分布。用干扰素治疗结束后３个月２０例患者中９例ＨＣＶＲＮＡ转阴性，近期治愈率４５％。结论原位杂交技术的敏感性及特异性较高，且重复性较好，是研究ＨＣＶＲＮＡ在组织中定位分布和病毒复制场所一种切实可行的方法     

HCV核心抗原在肝细胞癌及癌旁肝组织中的免疫组化研究

ＨＣＶ核心抗原在肝细胞癌及癌旁肝组织中的免疫组化研究汪荣泉周子成杨建明房殿春目前有关丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）相关抗原在肝细胞癌（ＨＣＣ）中表达定位研究作者所见报道不多。因此采用ＳＰ法和ＨＣＶ核心抗原的单克隆抗体、ＨＢｓＡｇ的多克隆抗体对ＨＣＣ及癌旁组织...     

慢性肝病患者肝组织中HGV抗原的表达及意义

目的探讨慢性肝病患者组织中庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）表达与意义。方法应用免疫组织化学方法以鼠抗ＨＧＶＮＳ５甲克隆抗体检测１４２例慢性肝病患者肝组织中ＨＧＶ抗原，部分患者采用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测其血清中ＨＣＶＲＮＡ。结果１４２例肝病患者中，２９例（２０．４％）组织中检出ＨＧＶ抗原，肝硬化组（４２．９％，１２／２８）较慢性肝炎（１５．９％８／１１）和肝癌（１４．３％，９／６３）组检出率高。阳性信号位于胞浆中，阳性细胞可成散在、簇状或弥漫性分布。阳性细胞周围可有炎性坏死；肝癌患者抗原阳性细胞主要位于癌旁肝组织，癌巢中仅偶见少数散在分布的阳必细胞；绝大多数组织抗原阳性者其血清ＨＧＶＲＮＡ为阳性。有４例患者组织中ＨＧＶ抗原阳性但其血清ＨＧＶＲＮＡ阴性。结论ＨＧＶ可在慢性肝病包括肝细胞肝癌患者肝组织中表达，ＨＧＶ感染在慢性肝炎病期进展及肝癌发生中具有一定意义。     

丙型肝炎病毒抗体检测的诊断价值

用国产第二代丙型肝炎病毒抗体（抗－ＨＣＶ）检测试剂盒检测了２９６例临床血清标本以及２８例供血者血清标本。并用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测了这些标本的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ，以了解抗－ＨＣＶ检测对ＨＣＶ感染的诊断价值。同时探讨其在供血员筛选中的应用价值。结果在临床标本中，抗－ＨＣＶ阳性者有８１．１％ＨＣＶＲＮＡ阳性。抗－ＨＣＶ阴性者有２１．７％ＨＣＶＲＮＡ阳性。但是２８例抗－ＨＣＶ阴性的供血者ＨＣＶＲＮＡ全部阴性。提示：抗－ＨＣＶ阳性对于ＨＣＶ感染的诊断价值很高。临床怀疑为ＨＣＶ感染而进行检测的血清标本即使抗－ＨＣＶ阴性，也不能除外ＨＣＶ感染。用抗－ＨＣＶ筛选供血者可能使供血中ＨＣＶＲＮＡ阳性率大大降低。