多药耐药性研究进展

多药耐药性（ＭＤＲ）是肿瘤细胞抵抗化疗药物导致肿瘤化疗失败的主要原因。本文探讨ＭＤＲ基因与癌基因的关系，某些药物对ＭＤＲ的逆转及转基因小鼠在ＭＤＲ研究中的新进展．     

抗人肝癌细胞单克隆抗体的研究

以新建立的人肝细胞癌细胞株PUMC-H1及PUMC-H3免疫BALB/c小鼠,利用小鼠B细胞杂交瘤技术,进行融合、克隆及亚克隆,采用酶标、免疫荧光及放免法(以酶标为主,包括新建立的一种检测抗细胞抗原单克隆抗体的ELISA法),筛选出一批抗人肝癌细胞单     

神经酰胺糖基化与肿瘤的多药耐药性

神经酰胺为细胞神经鞘脂类代谢的主要分子,是介导细胞凋亡的第二信使.细胞神经酰胺糖基化能力的提高作为一种新的多药耐药机制受到人们的关注.神经酰胺与葡萄糖神经酰胺在细胞内的相互转化影响肿瘤细胞对化疗药的敏感性,抑制神经酰胺糖基化,提高细胞内神经酰胺的蓄积,可以诱导多药耐药细胞凋亡.神经酰胺与葡萄糖神经酰胺在细胞内的相互转化影响肿瘤细胞对化疗药的敏感性,抑制神经酰胺糖基化为逆转肿瘤细胞耐药性的新思路.     

甲基莲心碱对耐长春新碱人胃癌细胞多药耐药性的逆转

目的:研究甲基莲心碱(Nef)逆转耐长春新碱人胃癌细胞多药耐药性(MDR)的作用及机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测长春新碱(VCR)的细胞毒性;PI染色流式细胞计数测定VCR诱导细胞凋亡;间接免疫荧光流式细胞术检测细胞P-gp和MRP的表达。结果:Nef(5、10μmol·L^-1)对人胃癌细胞(SGC7901)和耐长春新碱人胃癌细胞(SGC7901/VCR)无显著毒性作用,VCR对敏感株SGC7901的IC₅₀为0.06mg·L^-1,而对MDR细胞株SGC7901/VCR的IC₅₀为2.32mg·L^-1,SGC7901/VCR较SGC7901对VCR耐药39倍,Nef(2.5、5、10μmol·L^-1)能使VCR对SGC7901/VCR细胞的IC₅₀从2.32mg·L^-1依次下降至0.34、0.12、0.05mg·L^-1,逆转倍数分别为6.8、18.1、43.8。Nef(2.5、5、10μmol·L^-1)能降低SGC7901/VCR细胞对VCR的凋亡抗性,其作用强于维拉帕米(VRP)。SGC7901/VCR细胞较SGC7901细胞高表达P-gp、MRP,Nef(10μmol·L^-1)处理24h后,SGC7901/VCR细胞P-gp、MRP的表达明显低下。结论:Nef具有逆转耐长春新碱人胃癌细胞的MDR作用,其作用机理与下调P-pg和MRP表达有关。     

非小细胞肺癌COX-2的表达与多药耐药性关系的研究

目的：探讨环氧合酶-2（COX-2）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达，并探讨COX-2对多药耐药相关蛋白（MRP）表达的影响。方法:应用免疫组化技术检测62例非小细胞肺癌及10 例正常肺组织中COX-2 及MRP的表达。结果:正常肺组织未见COX-2及MRP的表达。NSCLC组织中COX-2的阳性表达率为61.3%（37/62），其阳性表达与NSCLC的组织学类型、肺癌组织不同临床分期、有无淋巴结转移、组织分化程度有关，与肺癌患者的性别无关。COX-2阳性组织中MRP的表达阳性率为89.2%（33/37），而COX-2阴性组织中MRP同时阴性率为68.0%（17/25），相关关系分析显示肺癌COX-2表达与多药耐药相关蛋白MRP表达呈显著正相关。结论:COX-2 的表达参与NSCLC的发生及恶化进展，并可能调控MRP的表达。     

Raf-1基因可能与口腔上皮癌细胞多药耐药性发生机制有关

目的 通过检测Raf-1基因在口腔上皮癌多药耐药细胞株(KBV)及敏感细胞株(KB)中表达的差异,探讨Raf-1基因在口腔上皮癌细胞多药耐药性发生中的作用. 方法 体外培养口腔上皮癌多药耐药株及敏感株,通过RT-PCR技术及免疫荧光技术、免疫印迹技术检测Raf-1基因在KB及KBV细胞中转录及翻译水平的差异,通过MTT法及流式细胞检测技术(FCM)检测KB及KBV细胞对长春新碱(VCR)敏感度的差异.结果 KB组细胞株在Raf-1基因转录和翻译水平均非常显著地低于KBV组(P<0.01);MTT法检测结果显示,KBV组细胞对长春新碱的耐药性是KB组的16.5倍;流式细胞术检测结果显示,KB组细胞凋亡率显著高于KBV组(P<0.01).结论Raf-1基因可能参与口腔上皮癌耐药性的发生过程,成为引起肿瘤细胞耐药的重要原因之一.     

多药耐药性相关蛋白MRP在胃癌耐药细胞SGC7901中的表达

肿瘤多药耐药性的产生是导致临床上化疗失败的主要原因。本研究观测了胃癌阿霉素耐药细胞ＳＧＣ７９０１／Ａｄｒ中，多药耐药相关蛋白（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ，ＭＲＰ）的表达，以了解其在胃癌细胞耐药中的作用。１材料和方法１．１药物与试剂阿霉素（ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ，ＡＤＲ）（ＦａｒｍｉｔａｌｉａｃａｒｌｏＥｒｂａ），ＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ），ＱＣＲＬ１杂交瘤上清（加拿大Ｃｏｌｅ教授惠赠［１］）。１．２细胞培养人胃低分化腺癌细胞系ＳＧＣ７９０１（军事医…     

华蟾素对肝癌Bel-7402细胞放疗敏感性的影响及其作用机制的研究

目的 探讨华蟾素对肝癌Bel-7402细胞放疗敏感性的影响及其作用机制。方法 分别使用浓度为0.125、 0.250、 0.500、1.000 μg/mL华蟾素处理肝癌Bel-7402细胞24 h、48 h、72 h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖的影响,根据半数抑制浓度(IC₅₀)选择华蟾素浓度及作用时间。用0 μg/mL(对照组)和0.4 μg/mL华蟾素处理肝癌Bel-7402细胞,同时用剂量为0、2、4、6、8 Gy的6 MV X线进行照射,克隆形成实验检测细胞放疗敏感性。用IC₅₀为0.4 μg/mL华蟾素、6 Gy的X线分别单独或联合处理肝癌Bel-7402细胞,48 h后流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率;Western blot检测细胞中p50、p65、Bcl-2、cyclin D1蛋白表达情况。结果 华蟾素能够显著抑制肝癌Bel-7402细胞增殖,随着作用浓度的增加及作用时间的延长,细胞抑制率逐渐升高。华蟾素能够抑制经照射后的肝癌Bel-7402细胞克隆形成能力,细胞存活率显著低于对照组(P<0.05)。与对照组相比,华蟾素组、放疗组及联合组肝癌Bel-7402细胞G0/G1期细胞比例增多,S期细胞减少,细胞凋亡率升高,p50、p65、Bcl-2和cyclin D1蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P值均＜0.05);联合组与华蟾素组和放疗组相比,细胞周期、细胞凋亡率及蛋白表达差异均有统计学意义(P值均<0.01)。结论 华蟾素能够增强肝癌Bel-7402细胞的放疗敏感性;其作用机制可能与华蟾素能够通过抑制核因子-κB信号通路及下调Bcl-2和cyclin D1蛋白表达,进而抑制细胞增殖、诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡相关。     

抗耐药性金黄色葡萄球菌嵌合药靶的设计与构建

目的设计耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药相关TG-TPase嵌合基因,进行分子建模及三维结构观察,并构建了原核表达质粒,进行嵌合基因的表达、纯化,为进一步利用其酶学活性建立抑制分子筛选系统奠定基础。方法运用Bioedit和DNAStar软件对MRSA耐药性相关转糖基酶(TGase)和转肽酶(TPase)活性片段序列和活性区结构特点及其活性发挥进行分析,设计TG-TPase嵌合药靶,并通过引物设计从MRSA菌株中克隆PBP2的TG基因片段和PBP2a的TP基因片段,进一步用引物延伸法、酶切连接等分子生物学操作构建TG-TPase嵌合基因并亚克隆至原核表达质粒pET30b中,转化Rosetta(DE3)plysS大肠埃希菌,用IPTG进行诱导表达,并小量发酵重组菌,对嵌合基因表达产物进行初步纯化和Western blotting鉴定。结果设计的TG-TPase嵌合药靶包括PBP2分子的TGase活性区、绞链区的N-端,PBP2a分子绞链区C-端及完整的TPase结构域,融合基因为1 935 bp,编码645个氨基酸,等电点为7.10,相对分子质量72 000。用PCR法从MRSA菌株中成功克隆了青霉素结合蛋白PBP2的TG片段和PBP2a的TP片段,构建了TG-TPase嵌合基因及其原核表达质粒,并在大肠埃希菌中表达出药靶蛋白,表达结果与预期设计相符合。融合蛋白纯化分析表明,融合蛋白以包涵体形式存在,在变性条件下经Ni-NTA亲和柱纯化,纯度达90%以上。结论成功设计、构建了耐药性金葡菌TG-TPase嵌合基因及其重组表达工程菌,并对融合蛋白进行了初步纯化,为进一步利用其酶学活性进行抗耐药性金葡菌抑制剂的筛选奠定基础。     

CpGODN对树突状细胞抗肝癌作用的影响

目的:研究CpGODN在BALB/C小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)抗肝癌免疫中的作用。方法:CpGODN联合肿瘤抗原(TAg)体外刺激BMDC,流式细胞术检测受刺激BMDC表达CD80的阳性率,ELISA检测受刺激BMDC分泌IL-12(p70)的水平,MTT法检测活化BMDC刺激T细胞的增殖能力,联合CpGODN和TAg体内预激小鼠获得CTL,检测CTL对肝癌细胞株Hca-F的特异性杀伤作用。结果:CpGODN联合TAg体外可明显激活BMDC,诱导BMDC膜表面CD80的表达,刺激BMDC分泌高水平IL-12,促进BMDC刺激T淋巴细胞增殖;体内联合应用CpGODN和TAg诱导的CTL对Hca-F具有强大的特异性杀伤作用,其诱导作用明显强于TAg,与细菌脂多糖和金黄色葡萄球菌肠毒素B相近。结论:CpGODN体外能有效促进小鼠BMDC的分化、增殖和成熟,体内与TAg联合应用可显著增强CTL对肿瘤细胞的特异性杀伤作用。     

人参皂苷Rg3逆转人肝癌细胞BEL-7402多药耐药的实验研究

目的 观察人参皂苷Rg3对逆转人肝癌细胞BEL-7402耐药作用.方法 MTT法测定人参皂苷Rg3与长春新碱(VCR)联合对肝癌细胞BEL-7402生长抑制率,反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测人参皂苷Rg3作用于肝癌细胞MDRImRNA的表达量.结果 不同浓度的人参皂苷Rg3( 10、20、30、40、60 mg/L)与长春新碱(0.02 mg/L)联合作用后,其对细胞增殖抑制率较单独用药时作用增加(P＜0.05),相互作用指数CDI＜1.人参皂苷Rg3 40.0μg/mL作用于肝癌细胞BEL-7402不同时间(24、48、72h)后MDR1mRNA的表达量明显下降[(79.21±2.23)％,(62.58±2.46)％,(45.46±1.13)％],与对照组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 人参皂苷Rg3与长春新碱联合应用具有协同抑制作用,能逆转BEL7402对VCR的耐药.人参皂苷Rg3能抑制BEL-7402细胞MDR1 mRNA的表达.     

抗微生物药及抗寄生虫药使用情况调查分析

本文应用微机统计分析了我院第一附属医院1990年3月至1991年2月门诊9239张处方,其中抗微生物药及抗寄生虫药处方4619张,出现率为50％。各科室使用本类药调查表明,儿科出现率最高(66.7％),其中0.1—6岁组使用率最高(70.80％),与文献报道相似。全年处方总平均年龄X±SD=33.0.±18.7岁,抗微生物药及抗寄生虫药处方平     

核因子-κB在P-糖蛋白介导卵巢癌细胞多药耐药性中的作用

目的观察卵巢癌中核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)在活化及抑制状态时多药耐药基因1表达产物P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达情况,探讨二者之间的关系。方法用多西他赛(Docetaxel)及NF-κB活化抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)作用于卵巢癌SKOV-3细胞,Western Blot法分析胞核P65蛋白表达,流式细胞仪检测细胞膜P-gp表达及细胞凋亡,MTT法观察细胞生长抑制。结果单用Docetaxel组胞核P65蛋白、胞膜P-gp表达均增多,加用PDTC可逆转此现象;Docetaxel(≥1 mg/L)或PDTC(≥10μmol/L)均明显抑制SKOV-3细胞的生长,引起细胞凋亡;小剂量PDTC(2.5μmol/L、5μmol/L)和Docetaxel(0.01 mg/L)联合应用与单用Docetaxel比较,可明显抑制细胞生长,增加细胞凋亡率。结论P-gp表达可能与NF-κB活化有关;抑制NF-κB活化可增强卵巢癌细胞对Docetaxel的敏感性。     

重楼皂苷Ⅰ抗肝癌细胞作用的初步研究

目的:本文旨在研究重楼皂苷Ⅰ对肝癌细胞株Huh7和HepG2的抑制作用并探讨其是否具有抑制肝癌干细胞的功效.方法:不同剂量的重楼皂苷Ⅰ处理肝癌细胞后,MTT方法检测细胞存活情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Transwell实验检测细胞迁移能力;磁珠分选出CD133+-Huh7和CD133--HepG2细胞后,成球实验...     

乳腺癌多药耐药性机制及逆转方法研究近况

乳腺癌严重威胁着女性健康,化学药物治疗在乳腺癌的治疗中起着举足轻重的作用,但临床治疗中常因乳腺癌细胞产生多药耐药性而导致化学药物治疗的失败。笔者就乳腺癌细胞多药耐药性的相关蛋白及基因、酶类等多药耐药性相关机制进行了详细论述．并介绍了化学药物、基因技术、中药、药物载体在逆转乳腺癌多药耐药性中的应用及目前研究进展。     

妊娠期间的女性可以安全治疗多药耐药性结核

据6月1日《临床感染性疾病》杂志（Clin Infect Dis，2005；40：1689—1692）上的一项报告，多药耐受性结核（MDR-TB）的女性患者在怀孕期可以安全治疗。     

纳米微粒偶联抗OX40/抗AFP抗体在细胞毒性T细胞抗肝癌中的作用

目的探讨乳酸-羧基乙酸共聚物(PLGA)制备的纳米微粒偶联抗OX40及抗AFP抗体(抗OX40/抗AFP-NP)对甲胎蛋白AFP158-166抗原肽特异性细胞毒性T细胞(CTL/AFP158-166)体外杀伤肝癌细胞的影响。方法用溶剂蒸发法制备纳米微粒(NP),并与抗OX40和抗AFP共价偶联。用扫描电镜观察所制得PLGA-NP纳米颗粒的形态;ZetaPlusTM粒度测定仪检测纳米微粒的粒径及电荷;用BCA蛋白定量方法检测纳米微粒偶联抗体的效率;用人外周血单核细胞诱导形成树突状细胞(DC),用AFP158-166抗原肽负载DC诱导AFP特异性的CTL/AFP158-166;分别用2-(4-碘苯)-3-(4硝基苯)-5-(2,4-磺苯基四氮唑)-2H-四唑单钠盐-1法(WST-1)法、ELISA及乳酸脱氢酶(LDH)法分别检测抗OX40/抗AFP-NP对CTL/AFP158-166细胞增殖能力、分泌IL-2和IFN-γ及杀瘤活性的影响。结果所制得的PLGA-NP为圆形,大小较均一,粒径约为(300±42)nm,带负电荷,约为-(25.12±5.34)mV。蛋白定量显示每mg的PLGA-NP偶联约100μg抗体,偶联效率为25%;增殖和活化实验显示偶联有抗OX40的纳米微粒能显著刺激CTL的增殖、IL-2和IFN-γ的分泌;杀伤实验显示,抗OX40/抗AFP-NP能显著增强AFP特异性CTL/AFP158-166细胞对HepG2细胞特异性杀伤作用,而对SMMC-7721杀伤作用无明显效果。结论抗OX40/抗AFP-NP能刺激CTL/AFP158-166细胞的增殖、细胞因子的分泌并增强CTL/AFP158-166细胞对AFP阳性肝癌细胞的特异性杀伤作用。     

华蟾素诱导膀胱癌细胞凋亡的实验研究

目的:探讨华蟾素对人膀胱癌细胞株BIU87细胞凋亡的影响.方法:采用MTT法测定华蟾素对体外膀胱癌细胞的抑制作用,倒置显微镜、TUNEL法观察细胞形态变化,用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期的变化;半定量RT-PCR法检测凋亡相关基础Bcl-2、bax、caspase-3mRNA表达的变化,比色法测定caspase-3活性变化.结果:MTT法显示,华蟾素对膀胱癌细胞有显著的增殖抑制作用与华蟾素的浓度和作用时间有关,0.2 mg/L华蟾素作用72 h可以杀死50%以上的细胞;可诱导BIU87细胞凋亡,细胞周期停滞在S-和G2期;凋亡相关基因Bcl-2表达减少,bax无明显变化,caspase-3表达及活性增高.结论:华蟾素在体外有较强的抗膀胱癌作用,细胞凋亡的发生可能与细胞周期阻滞,Bcl-2和caspase-3基因表达及活性变化有关.     

小干扰RNA-紫杉醇固体脂质纳米粒克服肿瘤多药耐药性的体外细胞学研究

肿瘤多药耐药性(MDR)是临床上肿瘤化疗失败的主要原因,其中由多药耐药基因(MDR1)编码的P-糖蛋白(P-gp)又在MDR发生机制中占重要作用。本实验设计合成特异性沉默MDR1基因的小干扰RNA(siRNA),协同抗肿瘤药物紫杉醇(PTX)共同包裹于固体脂质纳米粒(SLNs)中,利用基因治疗和化学治疗的协同作用,以期克服肿瘤多药耐药性。实验包括制备siRNA-紫杉醇固体脂质纳米粒(siRNA-PTX-SLNs);检测载药SLNs对肿瘤细胞的增殖抑制作用;测定给药后PTX的细胞摄取率;采用实时荧光定量PCR和流式细胞法评价siRNA-PTX-SLNs对MDR1表达的沉默作用。结果显示在耐药细胞MCF-7/ADR中siRNA-PTX-SLNs能够显著提高PTX细胞摄取率,有效沉默MDR1的表达,抑制P-gp的外排作用,促进P-gp底物在细胞的蓄积。因此siRNA-PTX-SLNs可发挥克服肿瘤多药耐药性的协同治疗作用。     

沉默miR-8063促进结直肠癌细胞获得多药耐药性及机制研究北大核心CSCD

目的:探讨沉默miR-8063促进结直肠癌SW480、HT29细胞多药耐药性及分子机制。方法:分别采用miR-8063-inhibitor-GFP-PURO慢病毒载体和阴性对照病毒(NC-GFP-PURO)转染SW480、HT29细胞,建立实验组(SW480-sh-miR-8063、HT29-sh-miR-8063)和对照组(SW480-sh-NC、HT9-sh-NC),RT-qPCR检测miR-8063表达;CCK-8测定5-氟尿嘧啶(5-FU)和奥沙利铂(OXA)对两组细胞24 h、48 h及72 h的生长抑制率;RT-qPCR和Western blot检测耐药基因P-gp、ABCG2 mRNA和蛋白表达;Western blot检测WNT/β-catenin信号通路关键指标WNT3A、WNT5A及β-catenin蛋白表达。结果:与对照组相比,实验组miR-8063基因表达显著降低(P<0.01),48 h、72 h时5-FU和OXA对细胞的抑制率显著降低(P<0.01),耐药基因P-gp、ABCG2 mRNA及蛋白表达显著提高(P<0.01),WNT3A、WNT5A及β-catenin蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论:沉默miR-8063基因可促进CRC细胞耐药基因P-gp、ABCG2表达,使CRC细胞SW480和HT29获得多药耐药性,其分子机制可能与激活WNT/β-catenin信号通路有关。