肌源神经营养因子(MDNF)对体外培养大鼠脊髓运动神经元划伤后Bcl-2表达的影响

为检测大鼠肌源神经营养因子对体外培养大鼠脊髓运动神经元划痕损伤后 Bcl-2表达的影响 ,本实验从成鼠和乳鼠骨骼肌中提取出肌源神经营养因子。在胎鼠脊髓运动神经元培养第 7d时将其随机分成对照组和实验组 (成鼠组和乳鼠组 ) ,取 10 0μl肌源神经营养因子 ( 0 .1μg/ ml)加入实验组 ,对照组加入等量的 PBS,同时进行划痕损伤。损伤后第 3d计数各组存活的运动神经元 ,行 Nissl染色和免疫组化反应 ,计数 Bcl-2免疫反应 ( Bcl-2 -IR)阳性神经元数量 ,并在图像分析仪上对 Bcl-2 -IR阳性神经元作光密度分析。结果发现 ,损伤后第 3d,实验组运动神经元存活数 ,Bcl-2 -IR阳性神经元数和平均光密度均明显高于同期对照组 ,而乳鼠肌源神经营养因子组功效优于成鼠肌源神经营养因子组。结果提示 ,大鼠肌源神经营养因子对体外培养的受损运动神经元具有增强 Bcl-2表达、减少凋亡和损伤修复等作用 ,且乳鼠的此因子效能尤佳     

肌源神经营养因子(MDNF)对体外培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧时p53表达的影响

本研究目的是观察缺氧时肌源神经营养因子(MDNF)对体外培养的大鼠脊髓运动神经元p53蛋白表达的影响。从成鼠和胎鼠骨骼肌中提取MDNF。在胎鼠脊髓运动神经元培养第7 d时将其分成对照组和实验组(包括成鼠MDNF组和胎鼠MDNF组),取100μl MDNF(0.1μg/ml)加入培养大鼠脊髓运动神经元的培养液中,对照组加入等量的PBS。然后用液体石蜡封闭液面造成神经元缺氧损伤,缺氧3 d后,应用Nissl染色、原位末端标记、免疫组化方法,对损伤的大鼠脊髓运动神经元进行检测。结果表明:培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧3 d后,经MDNF孵育可使脊髓运动神经元TUNEL、p53表达均较对照组明显减弱,神经元损伤程度减轻,神经元存活数明显高于对照组,且胎鼠MDNF的效果更好。提示:大鼠脊髓运动神经元缺氧后可出现神经细胞凋亡,但胎鼠MDNF较成鼠MDNF更能减弱缺氧时脊髓运动神经元p53的表达,抑制缺氧后神经元的死亡。     

肌源神经营养因子（MDNE）对体外培养大鼠脊髓神经元划伤后Bcl—2表达的影响

为检测大鼠肌源神经营养因子对体外培养大鼠脊髓运动神经元划痕损伤后Bcl-2表达的影响，本实验从成鼠和乳鼠骨骼肌中提取出肌源神经营养因子。在胎鼠脊髓运动神经元培养第7d时将其随机分成对照组和实验组（成鼠组和乳鼠组），取100μl肌源神经营养因子（0.1μg/ml)加入实验组，对照组加入等量的PBS，同时进行划痕损伤。损伤后第3d计数各组存活的运动神经元，行Nissl染色和免疫组化反应，计数Bcl-2免疫反应（Bcl-2－IR）阳性神经元数量，并在图像分析仪上对Bcl-2－IR阳性神经元作光密度分析。结果发现，损伤后第3d，实验组运动神经元存活数，Bcl-2-IR阳性神经元数和平均光密度均明显高于同期对照组，而乳鼠肌源神经营养因子组功效优于成鼠肌源神经营养因子组。结果提示，大鼠肌源神经营养因子对体外培养的受损运动神经元具有增强Bcl-2表达，减少凋亡和损伤修复等作用，且乳鼠的此因子效能尤佳。     

牙髓炎症时胶质源性神经营养因子的表达

目的　探讨胶质源性神经营养因子 (GDNF)在人炎症牙髓中的表达及意义。方法　应用免疫组织化学方法比较正常和炎症牙髓中GDNF的表达变化。结果　正常人牙髓组织GDNF染色呈阴性 ,炎症牙髓组织GDNF染色呈阳性 ,主要分布在神经纤维 ,特别是血管周围的神经纤维。结论　GDNF可能参与人牙髓感染后的修复性反应 ,对神经末梢再生发芽有促进作用     

胶质细胞源性神经营养因子体外对脊髓运动神经元的作用

目的 :观察不同浓度的胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF) ,对大鼠胚胎脊髓运动神经元生长活性的作用。方法 :取大鼠胚胎脊髓腹侧组织体外分离 ,进行原代细胞培养 ,应用抗神经微丝单克隆抗体 (mAb)SMI32进行运动神经元的免疫细胞化学染色 ,从细胞形态学及应用MTT比色法 ,研究GDNF对大鼠脊髓运动神经元的影响。结果 :GDNF能明显促进体外培养的大鼠脊髓运动神经元存活及突起的生长 (P <0 .0 5 ) ,且具有剂量依赖的趋势。结论 :不同浓度的GDNF对体外培养的大鼠胚胎脊髓运动神经元 ,有不同程度的促生长作用     

脑源性神经营养因子在大鼠海马CA3区发育过程中的表达

采用免疫组织化学ＡＢＣ 法,研究脑源性神经营养因子在大鼠海马ＣＡ３ 区发育过程中的表达,观察其免疫反应产物的分布。结果表明：脑源性神经营养因子阳性物质在生后零天（Ｐ０）组位于ＣＡ３ 区细胞周围间质内;Ｐ１０,Ｐ１５ 和Ｐ２０ 组脑源性神经营养因子免疫反应产物位于锥体细胞内,幅射层内可见阳性苔藓纤维终末,这些终末随生后日龄增加而增加。Ｐ３０ 组脑源性神经营养因子免疫反应产物仅见于细胞周围间质内,未见细胞胞浆内有阳性物质分布,但偶见脑源性神经营养因子阳性细胞核位于ＣＡ３ 区锥体细胞层,辐射层内有较多的苔藓纤维阳性终末。本研究结果提示,发育早期大鼠海马ＣＡ３ 区脑源性神经营养因子分布于细胞周围间质而生后１０ 至２０ 天发育期间,ＣＡ３ 区锥体细胞合成脑源性神经营养因子并可沿神经元轴突顺行运输、传递信息。     

脂肪源性干细胞促进大鼠受损坐骨神经传导及脊髓脑源性神经营养因子和睫状神经营养因子的表达

目的:探讨脂肪源性干细胞(ADSCs)对坐骨神经损伤大鼠神经传导功能以及脊髓脑源性神经营养因子(BDNF)和睫状神经营养因子(CNTF)表达的影响。方法:将第4代ADSCs移植入脱细胞神经移植物(ANA)中,构建组织工程神经。大鼠随机分为正常组、杜氏改良Eagle培养基营养混合物F12(DMEM)组和ADSC组。DMEM组和ADSC组均建立坐骨神经损伤模型,后用相应的组织工程神经桥接损伤神经的断端。术后6周采用神经电生理记录仪检测各组大鼠坐骨神经传导速度和波幅,采用免疫荧光和Real-time PCR检测各组大鼠脊髓脑源性神经营养因子(BDNF)、睫状神经营养因子(CNTF)蛋白和mRNA的表达。结果:ADSC组大鼠坐骨神经传导速度、波幅和脊髓BDNF和CNTF蛋白及mRNA表达均显著高于DMEM组。结论:ADSCs可增加坐骨神经传导速度和波幅、上调脊髓BDNF和CNTF的表达。     

GDNF和HSV-GDNF对培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧后的Bcl-2表达的影响

目的:观察细胞胶质源性神经营养因子(Glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)和单纯疱疹病毒介导的GDNF(GDNF transformed by herpes simplex virus vector,HSV-GDNF)对体外培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧-复氧时的作用和Bcl-2表达的影响。方法:观察缺氧2h、4h和缺氧4h后恢复供氧24、72h时,脊髓运动神经元存活数,并用抗Bcl-2抗血清行免疫组织化学染色,对Bcl-2免疫反应阳性神经元作平均光密度分析。结果:经GDNf、HSV-GDNF孵育的脊髓运动神经元缺氧-复氧后Bcl-2表达较对照组明显增强,神经元损伤程度减轻,神经元存活数明显高于对照组,且HSV-GDNF组的效果更好。结论:GDNF、HSV-GDNF对缺氧-复氧的大鼠脊髓运动神经元有保护作用,HSV-GDNF比GDNF更能增强缺氧-复氧后脊髓运动神经元Bcl-2的表达,提高神经元存活数,抑制缺氧后神经元的死亡。     

牙髓炎症时胶质源性神经营养因子在三叉神经节内的表达

目的 :探讨胶质源性神经营养因子 (GDNF)在大鼠磨牙开髓后不同时段三叉神经节中表达变化及意义。方法 :应用免疫组织化学方法比较大鼠磨牙开髓后不同时段三叉神经节中表达变化。结果 :正常对照组三叉神经节中 GDNF在神经细胞及纤维染色呈阴性 ,开髓后三叉神经节内 GDNF呈阳性其主要分布在神经细胞胞浆和神经纤维 ,染色强度随开髓后不同时段表达不同。结论 :GDNF可能参与炎症牙髓修复性反应。     

老龄大鼠海马结构脑源性神经营养因子表达的改变

目的：探讨大鼠海马结构脑源性神经营养因子（BDNF）表达的老龄性改变，为脑衰老提供可靠的免疫组织化学资料。方法：选用雌性Wistar大鼠24只，分为青年组和老龄组。应用免疫组化方法结合图像分析技术对2组大鼠海马结构BDNF阳性产物进行定性、定量分析。结果：老龄组海马CA3和CA1区神经元BDNF含量比青年组分别下降了13．3％、10．4％，然而，齿状回从青年到老年变化不显著。结论：老龄时海马CA3和CA1区神经元的BDNF表达发生了明显的变化，其含量明显降低。提示老龄大鼠海马CA3和CA1区神经元BDNF表达的改变，可能是老龄动物海马结构营养及学习记忆障碍的形态学基础。     

脑源性神经营养因子在部分去传入猫脊髓背角的表达

为探讨脑源性神经营养因子在部分去传入猫脊髓背角的表达状况 ,对成年雄性家猫切除 L1 ～ L5 ,L7～ S2 背根节、保留L6 节及背根 ,术后分别存活 3、6、12 d,对 L6 节段脊髓进行脑源性神经营养因子免疫组织化学反应。结果表明 :正常时 ,阳性反应物主要分布在脊髓 I、II板层的神经终末、膨体与少量神经元胞体内。术后 3 d,术侧 II板层阳性神经终末和膨体密度开始减少 ,6d减少至高峰 ,到第 12 d时两者又均恢复到正常水平 ,而阳性神经元胞体的数量却无明显变化。作者认为 3 d、6d的减少主要与邻近背根节切除后 ,其神经纤维和膨体溃变有关 ;12 d时 ,保留的 L6 背根逐渐侧支出芽 ,且与靶细胞再建功能联系 ,故脑源性神经营养因子阳性神经纤维和膨体数均趋于恢复。说明脑源性神经营养因子既参与脊髓的正常生理功能 ,也与其损伤后的可塑性有关。     

GDNF及HSV—GDNF对坐骨神经损伤大鼠脊髓运动神经元Bcl—2表达的影响

目的：观察胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）及单纯疱疹病毒（HSV）载体介导的GDNF（HSV－GDNF）对坐骨神经损伤大鼠脊髓运动神经元了Bcl-2表达的影响。方法：分别取坐骨神经损伤后4d、7d和14d大鼠（）分成对照组、GDNF组和HSV－GDNF组）的腰段脊髓）L4－6）,行石蜡包埋,切片、;用抗Bcl-2抗血清进行免疫组织化学染色,观察Bcl-2免疫反应（Bcl-2－IR）神经元数目,并在图像分析仪Bcl-2－IR阳性神经元作光密度的色谱分析。结果：1．坐骨神经损伤后4d、7d,GDNF组和HSV－GDNF组损伤侧脊髓运动神经Bcl-2－IR阳性神经元的数量和平均光密度均明显高于对照组损伤测,2．坐骨神经损伤后14d时,对照组、GDNF组和HSV－GDNF组损伤侧脊髓运动神经元对Bcl-2的表达已无明显差别。结论GDNF与HSV－GDNF能够增强坐骨神经扣内务 大鼠脊髓运动神经元Bcl-2的表达,减少神经元的退化死亡。     

睫状神经营养因子对体外培养的星形胶质细胞细胞周期及Fos蛋白表达的影响

目的研究睫状神经营养因子（CNTF）对体外培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞（Ast）细胞周期及Fos蛋白表达的影响。方法通过体外纯化培养获取大鼠大脑皮质Ast,将CNTF加入培养液,作用相应的时刻点后,应用流式细胞仪测定细胞周期的变化,采用免疫细胞化学方法研究Fos蛋白的表达。结果CNTF作用Ast6垢,可显著促进细胞周期进程,表现为G0／G1期细胞百分比降低;S期＋G2／M期细胞百分比（增殖指数,poliferation index,PI值）升高。12h促增殖作用达高峰,24h、48h有所恢复,但PI仍明显高于对照组。CNTF作用于Ast 2 h后即可引起Fos蛋白的显著表达,并持续至24h,而糖皮质激素预处理可明显抑制Fos蛋白表达。结论CNTF可促进Ast增殖及Fos蛋白表达。     

大鼠胚胎小脑提取液神经营养活性成分的分析

本实验观察了不同胎龄大鼠的小脑提取液（ｃｅｒｅｂｅｌｌｕｍ ｅｘｔｒａｃｔｓ, ＣＥ）对体外培养小脑及脊髓神经细胞的影响。并采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ ＰＡＧＥ）法鉴定了各胎龄的ＣＥ 的蛋白成分差异。制备不同蛋白浓度的１４、１６、１８、２０ ｄ 胎鼠（Ｅ１４,Ｅ１６,Ｅ１８,Ｅ２０）及新生１ ｄ 鼠（Ｐ１）的ＣＥ,加入原代培养的Ｅ１８ 胎鼠小脑及脊髓神经细胞悬液中,２４ ｈ 后以微量快速自动比色法检测细胞活性,发现实验各胎龄鼠的ＣＥ均能促进培养小脑及脊髓神经元的存活,并有蛋白浓度依赖关系,各胎龄都有各自不同的最适浓度,Ｅ１４、Ｅ１６ 和Ｅ１８ 的ＣＥ 显示了更强的神经营养活性,与对照组及其它实验组相比有极显著性差异（Ｐ＜ ０．００１）。以蛋白浓度为０．４ ｇ／Ｌ的Ｅ１８ 的ＣＥ培养新生３ ｄ 鼠（Ｐ３）脊髓细胞的结果表明,此ＣＥ可促进培养脊髓神经元的成熟和分化,抑制胶质细胞的增殖。电泳结果表明,Ｅ１６ 与Ｅ１８ 的ＣＥ中含有Ｐ１ 的ＣＥ中所没有的蛋白带,分子量分别约为２５．８ ｋＤ、４５．１ ｋＤ、８９．１ｋＤ 和１７９．５ ｋＤ,为寻找新的神经营养因子提供了线索。     

小鼠坐骨神经损伤后内源性BDNF对脊髓前角运动神经元内突触素Ⅰ mRNA表达的调节

本研究旨在探讨小鼠坐骨神经损伤后内源性BDNF是否参与调节脊髓前角运动神经元内突触素ImRNA的表达。在小鼠坐骨神经压榨损伤后,腹腔注射BDNF抗体中和内源性BDNF,动物存活1～2周,用组织原位杂交技术观察突触素ImRNA在脊髓腰骶膨大部前角运动神经元内的表达。结果显示:注射BDNF抗体后坐骨神经损伤侧脊髓前角突触素ImRNA阳性运动神经元的数目和平均光密度与实验对照组相比显著下降(P<0.01)。本研究结果提示,小鼠坐骨神经损伤后内源性BDNF可参与脊髓前角运动神经元内突触素ImRNA表达的调节。     

GDNF和HSV-GDNF对体外培养发育的大鼠骨骼肌卫星细胞Bcl-2表达的影响

为了进一步探索治疗神经系统损伤的新途径 ,本研究用传代培养的骨骼肌卫星细胞加入胶质细胞源性神经营养因子(GDNF )和单纯疱疹病毒介导的 GDNF(HSV-GDNF) ,取培养 2、4、8、16、2 4、48、72 h的细胞进行 Bcl-2单克隆抗体的免疫组织化学反应 ,观察了 GDNF和 HSV-GDNF对体外培养发育的大鼠骨骼肌卫星细胞 Bcl-2表达的影响。结果发现 :GDNF、HSV-GDNF组的肌卫星细胞 Bcl-2表达较对照组明显增强 ,细胞存活数量高于对照组 ,但 GDNF组、HSV-GDNF组两组之间无显著性差异。提示 :GDNF、HSV-GDNF可促进骨骼肌卫星细胞的增殖、分化 ,并对其发育有保护作用     

大鼠脊髓全横断后TrkA和TrkB在前角运动神经元的表达

为了探讨脊髓全横断损伤后神经营养因子受体表达的变化 ,本研究取大鼠 C6 和 L5节段脊髓进行 Trk A和 Trk B的免疫组织化学反应。用 HPIAS-10 0 0高清晰度彩色图像细胞测量系统检测免疫阳性神经元的数量和平均灰度。结果显示 ,大鼠脊髓全横断后 ,两种受体 Trk A和 Trk B在运动神经元的表达均出现短暂上调 ,其中 Trk A在颈段的表达高峰出现在损伤后 14 d而腰段为损伤后 7d;与此不同 ,Trk B在颈段和腰段两个部位的表达高峰均出现在 3d。在高峰之后 ,两种受体的表达均下降 ,至术后2 8d已接近或低于正常水平。提示 ,大鼠脊髓全横断损伤后 ,神经营养因子特异性受体 Trk A和 Trk B的表达有一定的时空规律 ,即损伤后 Trk B的表达由短暂上调到表达下降 ,随之出现 Trk A的表达高峰 ,意味着 Trk B的表达下降可能促进 Trk A的表达