高危白血病移植后复发行供者淋巴细胞输注治疗的疗效分析

目的:探讨供者淋巴细胞输注(donor lymphocyte infusion,DLI)治疗异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后复发的高危白血病患者的疗效。方法:回顾性分析2000年8月至2015年4月期间在南方医科大学珠江医院行allo-HSCT后复发而予以供者淋巴细胞输注的15例高危白血病患者,以及期间行allo-HSCT后复发而未予以供者淋巴细胞输注的13例高危白血病患者,并对两类患者的1和3年OS率进行对比。结果:行DLI的15例患者的1和3年生存率分别为58.3%和46.7%,1和3年DFS率分别为22.0%和11.0%,患者的死亡原因主要为疾病复发(5例),急性GVHD反应(1例)。未行DLI术的13例患者1年和3年OS率分别为29.9%和15.0%,1年DFS率为11.2%,患者的死亡原因主要为疾病复发(9例)。移植后复发行DLI治疗的患者与未行DLI的患者相比,移植后复发行DLI治疗的患者的1和3年OS率均高于未行DLI患者,但两者OS率差异无统计学显著性(P=0.069)。结论:DLI治疗仍然是目前治疗移植后复发的较为有效的方法,联合其他方式或改变供者淋巴细胞的细胞输注类型或将可以提高DLI的疗效。     

异基因造血干细胞移植后细胞嵌合状态动态监测的临床意义

目的 研究异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后各系细胞嵌合状态与移植物植入、急性移植物抗宿主病(aGVHD)、移植物被排斥和疾病复发的关系.方法 对65例患者进行allo-HSCT,在移植后定期采集所有患者的外周血和骨髓.用流式细胞术分选了65例患者的CD3+T淋巴细胞,52例分选了CD3-CD56+CD16+NK细胞,32例分选了CD15+粒细胞,20例分选了CD19+B淋巴细胞.进行PCR扩增短串联重复序列检测各系细胞嵌合状态.结果 移植后NK细胞早期植入比例(55.5%)最高,T细胞最晚(+21 d)达到完全供者嵌合状态.+7 d T淋巴细胞供者嵌合比例(DC)≥70%和+14 d T淋巴细胞DC≥95%属aGVHD发生的高危患者.除急性淋巴细胞白血病外,出现移植物被排斥的分子生物学征象者和疾病复发者,都以T淋巴细胞供者嵌合状态下降为主.在过继免疫治疗中,动态检测嵌合状态可以判断疗效和指导进一步的治疗.结论 allo-HSCT后T淋巴细胞嵌合状态动态检测可以早期预测发生aGVHD的高危患者、判断移植物植入、发现移植物被排斥和疾病复发并指导免疫调节治疗的时机和疗效.     

异基因造血干细胞移植后白血病复发伴活动性移植物抗宿主病患者的临床研究

目的 探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后白血病复发伴活动性移植物抗宿主病(GVHD)患者GVHD与GVL效应的分离.方法 分析11例接受allo-HSCT后在白血病复发时存在活动性GVHD的患者其原发病、疾病状态、复发时GVHD类型、供者淋巴细胞输注(DLI)疗效及转归等对GVL效应的影响.结果 11例患者包括急性淋巴细胞白血病5例,急性髓系白血病6例,其中5例曾行预防性DLI,复发时伴有活动性DLI后GVHD,包括2例Ⅱ度急性GVHD(aGVHD),1例原局限型慢性GVHD(cGVHD)加重+新发Ⅱ度aGVHD,2例广泛型cGVHD;这5例患者复发后,2例行化疗+治疗性DLI,DLI后在广泛型cGVHD反复加重情况下,1例达完全缓解(CR)后再次复发,1例未达CR.另6例患者复发前未行预防性DLI,白血病复发时亦均存在活动性GVHD,包括3例广泛型cGVHD、1例Ⅰ度aGVHD及2例Ⅲ～Ⅳ度aGVHD,复发后行化疗+治疗性DLI,之后2例达CR后再次复发,4例未达CR.结论 allo-HSCT后活动性GVHD不一定伴随可抑制白血病复发的有效GVL效应.     

供者淋巴细胞输注联合化疗治疗异基因造血干细胞移植后白血病复发的护理

探讨供者淋巴细胞输注(DLI)联合化疗治疗异基因造血干细胞移植( Allo - HSCT)后白血病复发的疗效、并发症及护理方法.对Allo - HSCT后白血病复发的6例患者予分次逐渐提高单次剂量方案(EDR)的DLI联合化疗治疗,观察输注后白血病血液学完全缓解(CR)率、无病生存(DFS)率、移植物抗宿主病(GVHD)和骨髓抑制发生率、输注时尿常规,患者的反应情况.输注过程仅有2例轻微发热,6例均获得血液学CR,CR率100％,STR - PCR测定证实恢复为供者基因型;随访70 d至14个月,2例DLI后50 d发生慢性GVHD,发生率33.2％,无1例发生急性GVHD,2例全血细胞减少骨髓抑制,发生率33.2％;5例DFS,1例于DLI后70 d死于CMV性间质性肺炎.随访至今,5例DFS患者血象和骨髓象一直正常.EDR、DLI联合化疗治疗Allo - HSCT后白血病复发疗效显著、副作用小、应用安全.     

淋巴细胞输注的临床应用及研究进展

移植物抗宿主疾病 (GVHD)和复发是干细胞移植后的两个主要死因。最有效的防止GVHD的方法是去除移植物中的T细胞 ,但这又增加了复发危险 ,因为缺乏移植物抗白血病 (GVL)效应 ,GVL效应被认为是干细胞移植后抗白血病的重要效应 ,尤其在慢性髓细胞性白血病 (CML)中。GVL效应和原始T淋巴细胞的作用被证实后 ,研究者就把供者淋巴细胞输给干细胞移植后的CML复发患者 ,于是供者淋巴细胞输注 (DLI)得到发展。现对DLI在临床上的应用和最新研究进展作一综述。     

非清髓同种异基因小鼠外周血造血干细胞移植模型的建立及其相关研究

目的探讨不同方式异基因外周造血干细胞移植(allo-PBHSCT)后联合供者淋巴细胞输注(DLI)对嵌合率及移植物抗宿主病(GVHD)发病率的影响。方法 C57BL/6受鼠(H-2b)接受全身照射(TBI)预处理后,4 h内分别经尾静脉(IV)或髓腔内(IBM)输注BALB/c小鼠(H-2d)经rhG-CSF动员后的外周造血干细胞3×107个,并予5×106个供鼠DLI,第2天腹腔注射200 mg/kg环磷酰胺。结果移植后第7天各组均为混合嵌合状态,IBM-PBCST-DLI组嵌合率明显高于其他各组;尾静脉移植组均出现不同程度GVHD症状,以IV-PBSCT-DLI组较为显著,而髓腔内移植组均无明显GVHD症状;IV-PBSCT-DLI组CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)比例明显下降,髓腔内移植组则显著升高。结论经rhG-CSF动员后髓腔内注射可以成功建立非清髓性allo-PBHSCT小鼠移植模型,DLI进一步促进了供者嵌合;IBM明显降低了GVHD的发病率,其机制可能与T细胞亚群的改变有关。     

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因转导在供者淋巴细胞输注中的应用

供者淋巴细胞输注(DLI)作为治疗BMT后白血病复发的重要手段已被广泛应用,但GVHD是DLI的主要并发症。将单纯疱疹病毒胸苷激酶基因转导至供者外周血淋巴细胞,输给去T细胞的alloBMT术后复发患者,这样不仅建立了移植物抗白血病作用,而且如有严重的GVHD发生方可用丙氧鸟苷选择性去除体内供者淋巴细胞。     

单倍体相合造血干细胞移植后细胞免疫重建的动力学的临床研究

异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)属于造血免疫细胞移植,NK细胞是HSCT后最早开始恢复的淋巴细胞亚群.NK细胞受体分子(KIR)在HSCT中与移植物抗宿主病(GVHD)发生以及与移植后复发的关系引人注目[1].异基因供者移植物中的CD4+ CD25+细胞群(Tmg)细胞比例与GVHD发生有关[2-3].我们前期的实验研究发现供者未成熟DC细胞可以防止骨髓移植后GVHD发生而不减弱移植物抗白血病(GVL)效应[4].这些与GVHD密切相关的细胞在单倍体相合移植后免疫功能恢复状况及其与临床表现的关系值得深入研究.我们以相关不相合HSCT患者为研究对象,探讨移植后DC亚群、CD16+ CD158b+细胞和CD4+ CD25+细胞等免疫细胞造血恢复与GVHD发生和复发的关系.     

供者淋巴细胞输注治疗HLA不合造血干细胞移植后白血病复发

目的 观察HLA不合造血干细胞移植(HSCT)后白血病复发患者中进行供者淋巴细胞输注(DLI)的有效性及安全性.方法 对HLA不合HSCT后复发患者进行G-CSF动员的DLI联合移植物抗宿主病(GVHD)预防、部分联合化疗,并观察GVHD发生、白血病缓解以及长期生存情况.结果 24例HSCT后白血病复发患者DLI后8例发生Ⅲ～Ⅳ度GVHD.短期GVHD预防可显著减少重度GVHD发生(P=0.020).8例发生慢性GVHD.3例出现骨髓抑制.16例白血病患者获完全缓解.9例无病存活,随访时间1310(961～1914)d.移植后1年和2年无病存活率分别为60%和40%.复发时骨髓幼稚细胞数量影响DLI后的缓解率和生存率,DLI后发生慢性广泛型GVHD与白血病完全缓解呈正相关(P=0.046).3例Ph阳性急性淋巴细胞白血病全部死于复发.结论 经G-CSF动员的DLI联合GVHD预防、部分联合化疗可以作为HLA不合HSCT后白血病复发的治疗手段.     

撤离免疫抑制剂联合白细胞介素2治疗同种异基因造血干细胞移植后白血病复发患者临床疗效观察

异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)是当今治疗白血病的最有效手段,但移植后白血病复发严重影响其疗效,对allo-HSCT复发患者当前最有效的方法之一是供者淋巴细胞输注(DLI),但对于非血缘关系供者移植复发患者因受供者来源的限制,不能使所有患者受益.     

STR峰高与峰下面积在干细胞移植后状态判断的应用探讨

目的 探讨短串联重复序列（STR）信息位点的峰高与峰下面积在异基因造血干细胞移植后嵌合状态判断中的作用,寻找适合于异基因造血干细胞移植状态判断的指标.方法 分别采集两名无关供者及M2患者及其HLA全相合供者两组血标本,以白细胞含量为依据制备不同比例混合血样,提取DNA,使用STR试剂盒,建立PCR扩增体系,在ABI3100仪上检测扩增片段,筛选得到理想的信息位点,获取其峰高及峰面积进行移植嵌合率的计算.结果 各筛选位点以峰高或面积得出的模拟嵌合率间差异均无统计学意义,且各位点模拟嵌合率与制备的浓度梯度之间的相关系数均在0.9965以上.结论 峰高或峰下面积均可作为嵌合状态的定量监控指标.     

游离缘指甲DNA检测异基因造血干细胞移植后供受者嵌合状态的变化

目的 探讨异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)后用患者指甲游离缘标本进行短片段重复序列(short tandem repeat,STR)基因分型和供受者嵌合率检测的适用性,并观察移植后患者指甲中供受者嵌合状态变化.方法 选取2009年7月至2011年9月在北京市道培医院行allo-HSCT的25例患者及25名供者.采集患者及其供者外周血、骨髓、指甲游离缘和口腔黏膜标本.提取标本中基因组DNA,进行15个STR位点的基因分型和嵌合状态分析.将患者分为2组:第1组包括12例患者,在接受allo-HSCT后1个月内分别同时采集患者的指甲游离缘标本和口腔黏膜标本,并做嵌合状态的比较;第2组包括13例患者,观察患者行allo-HSCT后3个月指甲标本中的嵌合状态,并对其中3例患者进行多次指甲标本采集和嵌合状态检测.结果 在第1组12例患者中,指甲标本均检测为患者自身的STR基因型;在4份口腔黏膜标本中检测到供受者混合嵌合状态,供者STR基因型所占比例分别为16.7％、32.1％、35.8％和60.7％.在第2组13例患者中,5例患者存在供受者细胞的混合嵌合状态,即受者指甲中出现供者的STR基因型,嵌合率在6.7％至82.6％之间.3例行allo-HSCT后多次检测指甲嵌合率的患者中,1例始终未检测到供者基因型的嵌合,另2例患者中检测到持续存在的供者基因型的嵌合.结论 移植后1个月内采集的指甲游离缘标本可用于患者STR基因型鉴定和供受者嵌合率分析,优于口腔黏膜标本.供者的移植物中具有可以分化成为皮肤组织的细胞,部分患者移植后皮肤中可长期存在供者来源细胞的嵌合状态.     

异基因造血干细胞移植后B细胞自我平衡的研究进展

异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)是血液病的有效治疗方法.allo-HSCT后,免疫功能的迅速恢复可以降低血液病患者感染、疾病复发及继发性肿瘤的发生风险.B淋巴细胞自我平衡在allo-HSCT后患者的免疫功能重建中起至关重要的作用.B淋巴细胞自我平衡的影响因素包括B淋巴细胞刺激因子(BAFF)水平、慢性移植物抗宿主病(cGVHD)、骨髓造血龛、T淋巴细胞活性.笔者就目前allo-HSCT后B淋巴细胞自我平衡的研究进展进行综述.     

异基因造血干细胞移植后B淋巴细胞重建及其影响因素

异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后患者的免疫重建与其移植结果密切相关.移植后B淋巴细胞重建是allo-HSCT后患者机体主动免疫重建的重要组成部分.移植物来源及组成、预处理方案、移植物抗宿主病(GVHD)的发生及其治疗均可影响allo-HSCT后患者的B淋巴细胞重建,而allo-HSCT后B淋巴细胞及其亚群的快速重建可降低GVHD的发生率.笔者就影响allo-HSCT后B淋巴细胞重建的因素及B淋巴细胞重建对移植结果的影响作一综述.     

STR-PCR分析嵌合体在同种异基因造血干细胞移植中的应用

利用荧光标记的多重PCR扩增短串联重复序列（STR-PCR）结合毛细管电泳检测供者细胞嵌合率（DC）,以探讨该方法的连续检测对异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后转归的预警作用,采集27例清髓性外周血干细胞移植患者移植前、移植后不同时段的外周血或骨髓,DNA样本用Profiler Plus和Cofiler Plus商品化试剂盒扩增后,用ABI310遗传分析仪进行毛细管电泳,确定基因位点及峰面积,根据基因型的差异选择嵌合率计算公式。结果表明：两种试剂盒测得的DC嵌合率一致;在27对中能区别出供受差别的STR位点,Profiler Plus为6.3（4-9）个,Cofiler Plus为4.9（2-6）个。26例患者均在移植后28天出现供者细胞,1例患者未出现供者细胞。14例患者DC100%,均获得持久植入,至今仍无白血病生存;另有9例患者出现不稳定混合嵌合（MC）状态（DC为0%-90.2%）,其中5例为血液学复发。27例病人中有6例死亡。上述5例复发患者均在出现临床症状前发生DC量下降;供者细胞完全嵌合组移植物抗宿主病（GVHD）的发生率高于MC组。结论：动态检测DC可用于移植动力学研究,对移植物早期植入或被排斥、疾病复发以及GVHD的发生均有预警作用,对早期实施临床干预治疗有重要的指导意义。     

Transfusion policy: when to stop the use of extremely rare blood for an allogeneic hematopoietic progenitor cell transplant recipient with a history of red cell alloimmunization

BACKGROUND: Decisions for when to select, and when to discontinue, antigen-negative blood in hematopoietic progenitor cell transplantation (HPCT) recipients with red blood cell (RBC) antibodies can be confusing. In HPCT performed for sickle cell anemia patients who require extremely rare antigen-negative blood, the balance of caution and practicality is further complicated. CASE REPORTS: Four sickle cell anemia patients with current or historic RBC antibodies underwent allogeneic HPC transplantation. One required extremely rare (group O D-, hr(B)-) blood. None of the antibodies caused significant hemolysis after transplant. In the case requiring rare blood, antigen-negative blood was requested after donor RBC engraftment because of incomplete donor white blood cell (WBC) chimerism. CONCLUSIONS: RBC antibodies derived from a recipient of allogeneic HPCT rarely cause significant hemolysis, in contrast to the more severe picture sometimes seen with donor-derived antibodies. When donor WBC chimerism is delayed past the time of donor RBC engraftment, there can be concern for the possibility of future recipient-type antibody production. Even 100 percent donor lymphocyte chimerism is no guarantee of total host plasma cell ablation. Immunoglobulin allotyping, when informative, can suggest chimerism for several years. Recipient-type blood, when extremely rare, may not be available for that duration.     

Antibody-drug conjugates plus Janus kinase inhibitors enable MHC-mismatched allogeneic hematopoietic stem cell transplantation

Despite the curative potential of hematopoietic stem cell transplantation (HSCT), conditioning-associated toxicities preclude broader clinical application. Antibody-drug conjugates (ADCs) provide an attractive approach to HSCT conditioning that minimizes toxicity while retaining efficacy. Initial studies of ADC conditioning have largely focused on syngeneic HSCT. However, to treat acute leukemias or induce tolerance for solid organ transplantation, this approach must be expanded to allogeneic HSCT (allo-HSCT). Using murine allo-HSCT models, we show that pharmacologic Janus kinase 1/2 (JAK1/2) inhibition combined with CD45- or cKit-targeted ADCs enables robust multilineage alloengraftment. Strikingly, myeloid lineage donor chimerism exceeding 99% was achievable in fully MHC-mismatched HSCT using this approach. Mechanistic studies using the JAK1/2 inhibitor baricitinib revealed marked impairment of T and NK cell survival, proliferation, and effector function. NK cells were exquisitely sensitive to JAK1/2 inhibition due to interference with IL-15 signaling. Unlike irradiated mice, ADC-conditioned mice did not develop pathogenic graft-versus-host alloreactivity when challenged with mismatched T cells. Finally, the combination of ADCs and baricitinib balanced graft-versus-host disease and graft-versus-leukemia responses in delayed donor lymphocyte infusion models. Our allo-HSCT conditioning strategy exemplifies the promise of immunotherapy to improve the safety of HSCT for treating hematologic diseases.     

间期双色双融合荧光原位杂交监测慢性髓系白血病异基因造血干细胞移植后bcr/abl融合基因

本研究探讨bcr/abl双色双融合荧光原位杂交（DD-FISH）的敏感性及临床应用价值.对19例慢性髓细胞白血病（CML）异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后微小残留病灶（MRD）用DD-FISH进行监测,同时与常规细胞遗传学（CC）、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）结果相比较.样本取自骨髓,少数来源于骨髓片或外周血.结果表明：14例CML患者在Allo-HSCT后CC显示持续正常供者核型,RT-PCR转为阴性,移植2月后均为完全供者嵌合（DC）,DD-FISH检测结果持续为阴性,平均随访11.25月,MRD无增加.1例CC及RT-PCR阴性,而性染色体FISH为混合嵌合,DD-FISH阳性,监测无MRD增加,临床未治疗,疾病稳定.3例骨髓复发患者的DD-FISH及性染色体FISH均提示MRD明显增加,RT-PCR转为阳性,却只有1例CC异常,供者淋巴细胞输注（DLI）及甲磺酸伊马替尼治疗后均为DC,DD-FISH阴性,RT-PCR阴性.1例骨活检证实髓外复发患者骨髓或外周血样本的DD-FISH、CC及PCR均阴性,供受者完全嵌合.结论：间期双色双融合FISH可应用于CML异基因造血干细胞移植后MRD的监测,其操作简易快速,灵敏度高,且骨髓或外周血均可采用.动态监测能及时发现扩大的白血病细胞克隆.     

非清髓造血干细胞移植后致敏供者淋巴细胞输注对嵌合状态及GVHD影响的实验研究

本研究目的是探讨经受者皮肤致敏后的异基因供者淋巴细胞输注(DLI)是否能在促进形成完全供者嵌合(CC)的同时减轻移植物抗宿主病(GVHD)。以C57BL/6小鼠(H-2b,B6)为受者,于第0天接受60Coγ线全身照射(TBI),总剂量为5.5Gy,照射当天移植经粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员后的BALB/c小鼠(H-2d,BA)外周血干细胞(2×107个),移植后第2天腹腔注射环磷酰胺200mg/kg,并分别于移植后第28天输注致敏/未致敏的供者淋巴细胞2×106。结果显示,致敏后DLI的受鼠(黑色)无1例出现GVHD,60天时转变为完全供者嵌合,表型明显呈现为供鼠(白色)特征,CD4+/CD8+T淋巴细胞比值在DLI后早期下降,半月后有所升高,但仍低于正常水平;未致敏的DLI受鼠出现不同程度的GVHD,嵌合率稍有上升,仍表现为混合嵌合体(MC),CD4+/CD8+比值在DLI后早期升高,后期降至正常水平。结论:经受者皮肤致敏后的DLI在诱导CC的同时降低GVHD发病率,CD4+/CD8+比值与GVHD发病率间具有良好的相关性。