天然ABO抗体缺失的分子机制研究

目的 从ABO基因水平探讨正常人群血型鉴定中出现天然抗体缺失的机制.方法 部分或全部缺失抗体导致ABO血型正反定型不一致的15个正常健康个体运用检验红细胞表面血型抗原最为敏感的方法-吸收放散试验未能检测出其抗原性.PCR扩增后直接序列分析ABO基因全长编码区及5'端调控(CBF/NF-Y)增强子区域多态性.结果 在常规的血清学反向定型实验中,这15个标本的血清中部分或全部缺失抗体,吸收放散实验与A或B型红细胞反应均为阴性.12个标本的ABO基因分析定型、增强子区域多态性与血清学结果相符合,1个O表型的标本中存在B101等位基因,2个B表型标本中检测出A102等位基因.结论 天然ABO抗体缺失的分子机制可能部分被揭示:ABO基因编码少量表达抗原,按照天然抗体产生规律,导致不能产生相应的ABO抗体.ABO基因分型在正反定型不符的疑难血液标本鉴定中,是血清学方法 非常有益的补充手段,是正确鉴定血型的有效方法.     

ABO~* B新等位基因的鉴定1例

目的鉴定1名B抗原弱阳性献血者的血型血清学特点及基因特征。方法采用正反定型及吸收放散试验鉴定其ABO血型,并用PCR技术对ABO基因的7个外显子和启动子分别扩增后测序。结果血型血清学鉴定该个体表达弱B抗原,ABO合子型为B/O,经比对,该标本ABO*B基因存在第6外显子的272T>C的突变。结论发现1例新的ABO*B等位基因。     

肿瘤患者疑难血型鉴定和基因分型的相关探讨

血液病和恶性肿瘤的部分患者,尤其是白血病和多发性骨髓瘤患者,常因病情及治疗导致ABO血型正反定型不符,表现为ABO血型的抗原或抗体减弱。本研究分析正反定型不一致的原因,进行正确的红细胞分型和基因分型,对12份肿瘤患者正反定型不一致血液样本进行的血型血清学试验和吸收放散试验。对存在疑问的标本进行PCR扩增第6、7外显子和5-7内含子,对外显子序列进行基因测序。结果表明,9例标本通过血型血清学、吸收放散定型,6例为A型,2例为O型,1例为B型;3例血型血清学和吸收放散无法鉴定其血型的标本,经测序分别定型为O46,B108和A102型,其中有2例因为PCR扩增效果差或者测序结果矛盾,未能给出ABO基因型。结论：对ABO血型正反定型不一致无法定型的肿瘤患者的血液样本,可以采用血型血清血方法、基因分型及吸收放散的方法正确鉴定ABO血型,以保证输血的安全性和有效性。     

献血者ABO血型正反定型不符的主要原因分析及解决方法

研究表明,ABO血型鉴定错误是导致溶血性输血反应的最主要原因。因此,为确保安全输血,在血清学技术中要求使用正反定型方法来保证AB0血型鉴定的正确性。AB0血型系统正定型是指用定型试剂和被检者红细胞反应所鉴定出的ABO血型,反定型是指用被检者血清和已知ABO血型的试剂红细胞进行反应所鉴定出的ABO血型。正定型可检出常见的ABO系统抗原有A抗原和B抗原,反定型可检出的常见抗体有抗一A和抗一B。由于ABO血型系统中缺失以上的常见抗原必然能检出相应抗体,反之缺失以上常见抗体必然存在相应的抗原,所以,正反定型的结果可以相互参照,正反定型相符才能确保AB0血型鉴定的正确性,若出现正反定型结果不符,则不能正确判定AB0血型。出现ABO血型正反定型不符的原因可以是技术错误,也可以是被检者自身ABO血型抗原或抗体存在问题,除去人为责任因素和试剂质量原因所导致的正反定型不符,笔者就献血者AB0血型正反定型不符的主要原因及解决方法报道如下。     

A×B亚型1例报道

目的通过对1例A×B亚型的鉴定,说明血型鉴定中正反定型及ABO亚型对输血的重要性。方法按照试剂所提供的操作方法进行血型血清学检测,进行ABO血型正反定型,抗人球蛋白检测。结果血清学试验表明,被检者的红细胞与A抗体发生凝集,与B抗体不发生凝集,与抗-AB发生凝集,被检者的血清与A1型红细胞、B型红细胞、O型红细胞不发生凝集,初步判定为A×B亚型。结论 ABO亚型是ABO抗原以外的抗原性较弱的亚型或变异,主要是由糖基转移酶基因突变或单碱基因缺失等原因导致A抗原或B抗原表达减弱,是导致正反定型不符,血型误判及配血不合的主要原因,给血型鉴定及患者输血带来困难。在临床工作中,应重视ABO血型亚型的存在,提高输血安全性。     

ABO血型正反定型不符41例原因分析及解决方法

目的:分析ABO血型正反定型不符的原因,寻找解决问题的方法,并初步建立起血型正反定型不符时的操作规程.方法:对41例ABO血型正反定型不符的标本分别选用洗涤、改变反应温度、吸收放散试验,直接、间接抗人球蛋白实验,以及检测血型物质等实验方法.结果:经确认试验,分别判定为:22例抗体减弱,13例冷凝集,2例红细胞抗原表达减弱,2例白蛋白/球蛋白比例失调引起正反定型不符,1例由于血液中可溶性血型物质过多引起正反定型不符,1例金黄色葡萄球菌感染引起血型抗原改变.结论:ABO血型鉴定出现正反定型不符时,应根据表现型的具体情况和患者的临床资料设计血清学试验,正确鉴定ABO血型.     

ABO血型正反定型不一致原因分析及对策探讨

目的探讨ABO血型定型中正反定型不一致的原因和解决方法。方法对正反定型不一致血液标本进行不同的血型血清学试验,对存在疑问的标本进行基因分型、测序,分析正反定型不一致的原因,进行正确的红细胞分型。结果共检查ABO血型正反定型不一致标本45例,其中冷自身抗体5例、亚型11例、抗体缺失及减少7例、抗原性减弱10例、因输血或妊娠发生同种抗体5例,自身免疫性贫血7例。对其中9例血型血清学难鉴定标本和亚型标本进行PCR扩增,测序,确定其基因型。结论对ABO血型正反定型不一致无法定型的血液标本,可以采用基因分型及其他辅助手段正确鉴定ABO血型,以保证输血安全性和有效性。     

Tn多凝集红细胞合并抗-cE联合抗体致疑难鉴定1例

目的探讨1例ABO血型正反定型不符及不规则抗体筛查阳性的原因。方法通过ABO血型鉴定、酶处理、ABO基因测序、Rh分型、直接抗球蛋白试验、吸收放散实验及抗体鉴定试验对患者ABO血型及不规则抗体疑难原因进行分析。结果患者红细胞上Tn抗原暴露,血清中检出抗-cE联合抗体。结论运用不同血型血清学方法和分子生物学方法,能准确鉴定出患者血型和血清中存在的多种同种抗体。     

ABO亚型B(A)04鉴定及家系调查

目的对罕见的ABO亚型标本进行ABO血型鉴定及家系调查分析。方法采用血型血清学方法对家系标本进行ABO血型鉴定,同时采用PCR-SSP方法检测红细胞ABO血型基因及ABO cisAB与B(A)血型基因分型,并分析血型遗传规律。结果该家系调查发现2例血清学结果正反定型结果不符,均为血清学结果为正定型AB型,反定型B型,ABO基因型为B(A)04/O2型。结论对ABO血型血清学正反定型不符的标本,可以用家系调查和分子生物学方法进行辅助验证,并能阐述ABO血型弱表达现象的分子基础。     

Bel亚型与α1,3半乳糖基转移酶基因G952A多态性关系的研究

目的 研究红细胞ABO血型系统中B放散型的ABO基因分子遗传基础.方法 通过标准血型血清学试验鉴定了3例Bel亚型及15例对照B型样本,采用ABO基因分型PCR序列特异性引物、ABO基因第6及第7外显子PCR产物直接测序及克隆测序等方法进行ABO基因及亚型的定型.结果 在1例血型血清学检测为Bel亚型标本中,发现一个新的B等位基因.该等位基因与B101标准等位基因相比,差异仅在于ABO基因的第7外显子上nt952位G>A突变,导致多肽链Val318Met,定为B放散型(Bel)新基因,GenBank注册号为EF117687.而其余2例Bel型样本及15例对照B型样本含正常标准B基因.结论 首次在ABO基因编码区核苷酸930位后的错义突变中发现并报道了新B等位基因,表明1,3半乳糖基转移酶基因G952A多态性可能是Bel分子遗传机制之一.     

Genotyping of samples lacking expected antibodies in ABO blood group

We report nine donations with ABO inconsistency in reverse typing caused by partly or entirely missing antibodies. A and B antigens and antibodies were examined by serological blood typing, and ABO deoxyribonucleic acid (DNA) analyses were performed by sequence-specific priming and sequencing. A B101 allele was demonstrable in a case with O phenotype. The molecular mechanisms in deficiency of natural ABO antibody could be partly clarified. The ABO genotyping technique is an accurate method for determining the blood samples involved in ABO grouping discrepancies and is a valuable complement to serology for correct determination of donor blood status. The mechanisms involved in the absence of potent natural antibodies directed against A and B antigen lacking on an individual's own red cell membranes remain to be further investigated.     

α-1,3-N-乙酰半乳糖胺基转移酶基因742C>T突变导致A2亚型

本研究探讨2例ABO亚型A2B的分子机制。利用单克隆抗体检测先证者红细胞ABO血型抗原,用标准A、B、O细胞检测先证者血清中的ABO抗体,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增先证者ABO基因的第5至7外显子序列,其PCR产物经酶切后直接测序分析。同时,PCR产物经TOPO TA克隆到质粒载体中获得单链,对所得克隆进行ABO基因第6、7外显子双向测序分析。结果表明,先证者红细胞有A、B抗原,同时其血清中存在抗A1抗体。直接测序分析发现,第261位无缺失,第297位A/G、467C/T、526C/G、657C/T、703G/A、742C/T、796C/A、803G/C、930G/A杂合。克隆测序得到B101和1个新的A等位基因。与A102相比,新A等位基因仅在第742位C→T突变,导致第248位精氨酸变成色氨酸,新等位基因已被正式命名为A213。结论 :α-1,3-N-乙酰半乳糖胺基转移酶基因第742位C→T突变导致产生A2表型,表型个体血清中可含有抗A1抗体。     

A_2亚型相关等位基因的CBF/NF-Y增强子区域多态性的研究

目的鉴别中国汉族人群ABO血型系统中A2亚型的ABO基因CCAAT-连接因子/NF-Y增强区域多态性。方法从2 940个随机选择的A或AB型中国人中筛选出的24个A2表现型,已确认其ABO基因型。PCR扩增所有样本的ABO基因5端调控(CBF/NF-Y增强子)区域,得到不同长度的片断产物,经胶回收后进行直接序列测定。结果7个含A201等位基因的样本在ABO基因CBF/NF-Y增强子区域,是4个43碱基长度重复的微卫星序列,15个含A205等位基因的样本在此区域是1个43碱基长度重复的微卫星序列,且核苷酸41位有碱基替代(G>A)。2个基因型为A102/B101的样本中未发现异常分子背景。结论A2相关等位基因的CBF/NF-Y增强子区域具有微卫星片段长度多态性。描述了中国汉族人群A2型相关等位基因的CBF/NF-Y增强子区域多态性。     

中国汉族人群检出新的B(A)641T>C等位基因

目的明确稀有ABO表现型的遗传学基础。方法对ABO血清学常规定型正反不一致的样本,采用PCR-RFLP方法作初步基因分型,对8例血清学表现为AwB,而基因分型具有O基因的个体,进行ABO基因第6和7外显子PCR产物的TA克隆及核苷酸序列测定。结果8例样本除1对为母女关系外,其余无任何亲缘关系,血清学表现相似,红细胞上含有接近正常的B抗原和少量A抗原,H抗原含量较正常B细胞显著增高,血清中存在抗-A,初定为AwB,基因分型均为BO。克隆测序表明除具有正常O1或者O1V基因外,他们的B基因第7外显子在正常B等位基因的基础上,均发生单碱基突变,4例发生nt700C>G点突变,导致Pro234Ala,2例无关个体为nt640A>G点突变,导致Met214Val,1对母女均表现nt641T>C点突变,导致Met214Thr。证实所有8例样本真正血型应为B(A)表现型,其基因型均为B(A)/O型。结论在中国汉族人群中检出3种B(A)血型,除了已在我国台湾首先被发现的B(A)700C>G和笔者以前报道的B(A)640A>G之外,新发现1种B(A)641T>C等位基因。     

B(A)血型分子机制研究及其家系分析

目的 研究罕见B(A)血型的血清学特性和分子机制,为B(A)血型的临床输血提供理论基础.方法 利用单克隆抗体检测1例先证者、家系成员及献血者红细胞ABO血型抗原,用标准A、B、O红细胞检测其血清中的ABO抗体.采用盐水法、凝聚胺法和抗球蛋白法进行先证者与献血者交叉配合试验.采用PCR技术扩增ABO基因的第6、7外显子序列,对先证者、家系成员、献血者标本的ABO基因外显子6、7和侧翼内含子序列进行测序分析,并对先证者标本进行单倍体序列分析.结果 先证者及其2位家系成员红细胞上有A、B抗原,同时血清中存在抗A_1抗体,血清学表型为A_2B.直接测序分析发现先证者标本第6、7外显子存在261G/del、297A/G、526C/G、657C/T、700C/G、703A/G、796A/C、803G/C、930A/G杂合,可推断为B(A)_(02)/O_(01)基因型杂合子;家系中其母亲基因型为B(A)_(02)/B_(101),外祖母为B(A)_(02)/O_(01).先证者单倍体序列分析得到2个等位基因B(A)_(02)和O_(01);与B_(101)序列相比,B(A)_(02)位第700位C>G,导致1个氨基酸改变:第234位脯氨酸变成丙氨酸.既往血清学特性为A_2B的2个献血者,1个基因型为B(A)_(02)/O_(01),另1个基因型是A_(208)/B_(101).B(A)血型先证者与这2名献血者进行交叉配血试验均相合,临床输注后无不良反应.结论 α-1,3-半乳糖基转移酶等位基因(B等位基因)700C>G突变可导致形成B(A)血型,其血清学特性显示为A_2B表型.B(A)血型临床输血相配合的供者可选择A_2B表型的献血者.     

B抗原减弱表型的表型频率与ABO基因分析

目的对血清学表现为B抗原减弱的血液样本进行筛查和ABO基因分析,了解其分布特征和分子遗传学基础。方法筛查并收集B抗原减弱（与抗-B血清试管法凝集强度中等）的样本,采用血型血清学方法进行鉴定分析,采用直接测序的方法对ABO基因的第6、7外显子及第6内含子进行序列分析,对可追踪家庭进行家系分析。结果从241952份样本中检出13例B抗原减弱表型,其中B型9例、AB型4例;所有样本的红细胞与抗-H反应均增强;其中2例可检出不规则抗-B;ABO基因型分别为A102／Bw12（1例）、BIOI／B101（2例）、B10I／002（3例）、A102／B101（3例）、B101／001（4例）。在1例基因型为B101／001个体的家系成员（父亲）中检出相同表型。结论该类表型在B型人群中的频率约为1：7000;除1例样本的B等位基因存在278C〉T突变（Bw12）外,其余样本在第6、7外显子和第6内含子中均未检出突变;ABO基因酶催化活性区域编码序列以外的基因变异,可能是导致B抗原减弱的原因之一。     

ABO血型新等位基因O61的分子生物学研究

本研究探讨ABO新等位基因O61的分子机制。利用单克隆抗体检测标本红细胞ABO血型抗原,标准A、B、O红细胞检测标本血清中的ABO抗体。采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增ABO基因的第5至7外显子序列,PCR产物经双酶切后直接测序分析6和7外显子。1例B表型标本采用基因组单链抽提技术分离杂合基因型标本的2条单体型,对分离的单体型扩增后进行ABO基因测序分析。结果表明,在417例标本中发现3个标本743位碱基发生突变,其中2例表型为O型,1例为B型。2例O型直接测序分析显示,6和7外显子有261G缺失及743G/C杂合。1例B型直接测序结果为261G/缺失及297A/G、526C/G、743G/C、657C/T、703G/A、796C/A、803G/C、930G/A杂合。采用基因组单链抽提技术将B型标本的两条单体型进行分离,对分离的单体型扩增后进行ABO基因测序分析,结果显示,2条链分别为B101和突变的O型。将突变的新O型基因提交血型抗原基因突变数据库,被正式命名为O61。结论:ABO基因7号外显子743GC为1个新的突变点,发现1个ABO新等位基因O61。     

Mother-newborn ABO group discrepancy caused by a rare BW.17 variant

Several ABO gene mutations are known to determine rare subgroups: these ABO variants are often responsible for weak or null phenotypes and may cause an incorrect determination of the serotype. Here we describe for the first time the phenotypic discrepancy of a rare B allele within the same Caucasian family that depends on the co-inheritance with A or H antigen. Blood samples from newborns, mothers, and grandmothers were analysed through routine serotype and genotype testing. Blood compatibility test was performed for red blood cells or serum of the grandmother. ABO exons were investigated through PCR and sanger sequencing. According to serology, the phenotype of the mother was AB, while it was O for the newborn. Genotype analysis confirmed that the mother was AB, while the newborn was found to be B. Sanger sequencing revealed the presence of a rare mutation in both individuals (784 G>A, D262N), corresponding to the ABO*BW.17 allele. The grandmother was found to have the same genotype/serotype of the newborn. Crossmatch testing suggested that subjects with this genotype/serotype might be considered O donors and recipients.