叶酸缺乏对孕鼠子代心脏超微结构及心脏发育相关基因表达的影响

目的探讨叶酸缺乏孕鼠的子代心脏发育过程中GATA-4、NKx2.5基因表达和超微结构的改变。方法成熟雌性SD大鼠36只随机分为实验组和对照组,分别喂以缺乏叶酸和含叶酸饲料2周后与成熟SD雄性大鼠交配,分别取孕13.5d（E13.5d）、孕17.5d（E17.5d）胚胎及新生鼠心脏。用实时扩增聚合酶链反应（RT-PCR）检测胚胎及新生鼠心脏GATA-4、NKx2.5基因3个时期的表达。电镜观察新生鼠心脏的超微结构。结果1.经切片观察E13.5d胚胎实验组发现明显发育延迟占35.14%,E17.5d胚胎实验组发现明显心脏畸形占43.24%,新生鼠实验组发现明显心脏畸形占69.44%。2.GATA-4、NKx2.5基因在3个时期相对表达量实验组低于对照组（Pa〈0.05）。3.实验组新生鼠心脏电镜下肌细胞胞浆内膜性结构退行性变、肌丝明暗带（z带）不清、线粒体内基质凝结、肌浆网扩张;对照组正常或破坏很轻。结论孕鼠叶酸的缺乏影响子代心脏GATA-4、NKx2.5基因水平的表达,并导致心脏超微结构和大体结构的改变,从而造成心脏发育缺陷。     

Dickkopfl在肛门直肠畸形大鼠泄殖腔发育中的差异表达研究CSCD

目的 研究Wnt信号通路的细胞外拮抗物Dickkopf1（Dkk1）在正常胎鼠和肛门直肠畸形胎鼠的泄殖腔及后肠组织中的差异表达水平,探讨Dkk1与肛门直肠畸形（anorectal malformations,ARM）发生的相关关系。方法 用乙烯硫脲（ethylenethiourea,ETU）致畸Wistar孕鼠24只,制成ARM动物模型,根据切片观察,组成畸形组（n＝96）,胎龄在12～17、19、21 d。取相同胎龄的正常对照组孕鼠16只,对应胎龄胎鼠作为正常对照组（n＝96）。常规制备胎鼠冰冻切片,解剖显微镜下手工显微切割方法准确切取泄殖腔及后肠组织。实时定量聚合酶链反应（real-time polymerase chain reaction,RT-PCR）方法和蛋白印迹（Western blot）方法,检测正常和ARM不同胎龄胎鼠的泄殖腔及后肠组织中Dkk1的mRNA表达情况和蛋白水平。应用随机区组设计的两因素方差分析,比较正常和肛门直肠畸形胎鼠泄殖腔和后肠组织的Dkk1表达水平的差异。结果 在对照组和畸形组大鼠胚胎泄殖腔及后肠组织中均能检测出Dkk1 mRNA和蛋白表达。对照组Dkk1 mRNA及Dkk1蛋白表达在胎龄16 d的大鼠中表达达到峰值分别为2.77±0.06和3.20±0.76。畸形组泄殖腔及后肠组织Dkk1 mRNA及Dkk1蛋白表达呈波动态势,平均水平分别为0.96±0.14和0.87±0.14,与对照组2.00±0.52和1.98±0.65比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 Dkk1在胎鼠的泄殖腔及后肠组织中的低表达可能与ARM的发生有关,可能在ARM的发生中具有重作用。     

细胞外基质沉积在高氧致新生鼠肺损伤中的动态变化

目的 探讨细胞外基质（ECM）沉积在高氧致新生鼠肺损伤发生、发展中的动态变化。方法将新生足H鼠60例随机分为实验组和对照组，应用酶联免疫吸附法测定肺组织中Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白（FN）及透明质酸（HA）的含量，并同时观察肺组织的形态及肺内胶原沉积变化。结果实验组肺组织初期仅表现为肺泡炎症反应，继之肺闻质细胞开始增生，晚期大量成纤维细胞增生及肺内胶原沉积。实验组Ⅰ型胶原水平7d明显增加（P〈0．01），14d持续升高，21d达高峰（P〈0．001）；FN水平3d开始升高（P〈0．05），7d达高峰（P〈0．01），21d降至正常；HA水平1d开始升高（P〈0．05）．3d达高峰（P〈0．01），14d恢复至正常水平。结论（1）高氧致足月鼠肺损伤模型在病理过程和病理变化上符合肺纤维化的发生、发展特点；（2）ECM沉积伴随于高氧致足月鼠肺损伤的全过程，早期肺内HA沉积可能参与肺泡的炎症反应，继之FN及Ⅰ型胶原沉积可能是导致肺纤维化的病理机制之一。     

叶酸缺乏对孕鼠子代心脏发育中糖原合成酶激酶3β表达影响

目的探讨孕鼠叶酸缺乏（FD）对子代心脏发育过程中GSK3β基因表达的影响。方法成熟雌性SD大鼠36只随机分为实验和对照组各18只,分别喂以缺乏叶酸和添加叶酸纯合饲料。2周后与成熟SD雄性大鼠交配,分别取孕13.5、17.5d胚胎鼠及新生鼠心脏。用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测GSK3β基因mRNA表达。结果GSK3βmRNA在孕13.5、17.5d胚胎心脏及新生鼠心脏中的表达量,实验组均显著低于对照组（Pa〈0.05）。结论叶酸缺乏可影响GSK3β基因表达水平,可能导致心脏发生发育中形态改变,造成心脏功能缺陷。     

HoxA13基因在尿道下裂胎鼠阴茎中的表达及意义

目的研究尿道下裂胎鼠阴茎中HoxA13核酸及其蛋白的表达,探讨其与尿道下裂发生的相关性。方法选用清洁级C57BL／6小鼠,用邻苯二甲酸二（2-乙基）己脂（DEHP）诱导并建立先天性尿道下裂模型;交配怀孕后,孕鼠随机分为玉米油对照组、实验组（DEHP500mg·kg^-1·d^-1）;各组持续灌胃;于怀孕第19天取出仔鼠,测量各组雄鼠体重、AGD;统计各组胎鼠尿道下裂的发生率,并观测阴茎的组织病理学变化;应用常规RT-PCR及免疫组织化学方法检测诱导出的尿道下裂胎鼠及正常对照胎鼠阴茎组织中HoxA13的mRNA及蛋白表达水平。结果对照组、实验组的AGD值分别为（0．208±0．01）cm、（0．181±0．12）cm,P〈0．01;尿道下裂发生率分别为0％、75．7％,P〈0．01。实验组胎鼠尿道板及包皮于阴茎腹侧隆起融合落后,该组尿道与腹侧皮肤间的皮下组织明显减少。DEHP500mg·kg^-1·d^-1诱导的尿道下裂胎鼠阴茎组织中HoxA13mRNA及蛋白表达较对照组明显降低。结论DEHP能影响胎鼠的生长发育及体重,并导致雄鼠外生殖器发育异常;HoxA13mRNA及蛋白的表达在DEHP诱导的尿道下裂胎鼠阴茎中均较正常对照组降低,提示HoxAl3基因异常表达可能是尿道下裂的发生机制之一。     

组蛋白乙酰化酶对心脏发育核心转录因子Mef2c的动态调控作用

目的 观察心脏发育过程中组蛋白乙酰化酶P300、PCAF、SRC1对心脏发育核心转录因子Mef2c的动态修饰作用，为明确先天性心脏病的发生机制奠定基础。方法 选取胎龄14.5 d和16.5 d胎鼠及生后0.5 d和7 d小鼠的正常心脏组织，采用染色质免疫共沉淀技术，运用抗P300、PCAF、SRC1、乙酰化组蛋白（ac-H3）抗体免疫沉淀与其相结合的DNA，Real-Time-PCR扩增抗体所富集的DNA，观察小鼠心脏发育过程中Mef2c启动子区域组蛋白乙酰化酶的动态修饰及ac-H3水平；同时运用Real-Time-PCR检测Mef2c mRNA表达量。结果 小鼠心脏发育过程中P300、PCAF、SRC1均参与Mef2c启动子区域的乙酰化修饰，其结合水平在心脏发育的不同阶段差异均有统计学意义（均PPP结论 小鼠心脏发育过程中Mef2c基因呈现动态表达，提示Mef2c基因在心脏发育中具有重要作用；同时Mef2c启动子区域乙酰化水平的变化受组蛋白乙酰化酶P300、PCAF、SRC1的动态调控。     

TrkA、p75NTR mRNA在肛门直肠畸形胎鼠直肠末端的表达

目的通过检测肛门直肠畸形(ARM)胎鼠直肠末端神经生长因子受体TrkA、p75NTR mRNA的表达水平,探讨ARM直肠末端肠神经系统发育情况。方法成年SD孕鼠16只。其中实验组10只,对照组6只。实验组孕鼠在孕11 d、13 d 2次给予10 g.L-1乙烯硫脲(125 mg.kg-1)灌胃,制作先天性ARM动物模型;对照组灌胃注入等量9 g.L-1盐水。2组孕鼠在孕20 d时行剖宫手术取出胎鼠,取其直肠末端并保存于-80℃冰箱;采用反转录/实时定量PCR(RT-PCR)方法检测正常胎鼠和ARM胎鼠直肠末端TrkA、p75NTR mRNA表达情况。结果 TrkA、p75NTR mRNA在正常胎鼠直肠末端的相对表达量分别是162.221±104.675,129.778±51.976,在ARM胎鼠直肠末端中表达分别是78.937±33.425,87.145±25.812,两组比较差异均有统计学意义(Pa<0.05);琼脂糖凝胶电泳显示TrkA、p75NTR基因扩增后产物cDNA片段与引物设计的扩增片段完全吻合,TrkA、p75NTR基因条带亮度对照组均高于实验组。结论 TrkA、p75NTR mRNA在ARM胎鼠直肠末端的表达异常,提示神经生长因子及受体TrkA、p75NTR可能参与ARM肠神经系统的发育。     

叶酸缺乏对孕鼠子代心脏中NKx2.5基因表达的影响

目的探讨叶酸缺乏孕鼠子代心脏发育过程中NKx2.5基因和蛋白表达改变。方法成熟雌性36只SD大鼠随机分为实验组和对照组各18只,分别喂以缺乏叶酸和添加叶酸的纯合饲料。2周后与成熟SD雄性大鼠交配,分别取孕13.5 d、孕17.5 d胚胎鼠及新生鼠心脏。用RT-PCR检测NKx2.5基因mRNA表达。Western-blotting测GATA-4蛋白表达水平。结果NKx2.5基因mRNA及其蛋白在孕13.5 d、孕17.5 d胚胎心脏及新生鼠心脏中的表达量,实验组均显著低于对照组(P均<0.05)。结论叶酸缺乏影响NKx2.5基因和蛋白表达水平,可能导致心脏发生发育中形态改变,从而造成心脏功能缺陷。     

肛门直肠畸形胎鼠直肠末端Gli2、BMP4基因的表达

目的探讨乙烯硫脲（ETU）致畸胎鼠直肠末端Gli2、BMP4基因在胎鼠直肠肛门及其畸形发生过程中的表达和作用。方法取妊娠SD大鼠30只,按受孕时间配对分成2组,实验组（n=15）于孕10d灌胃注入10g／LETU （125mg／kg）,对照组n=15）予等量蒸馏水。两组分别于孕13d、14d、15d、16d和17d剖宫取胎鼠直肠末端1cm提取RNA,采用RT—PCR和RealtimePCR法检测Gli2、BMP4基因在直肠肛门发育不同时期的表达情况。结果采用RT-PCR法检测Gli2、BMP4基冈在直肠肛门发育不同时期的表达情况．发现在胎鼠第13～17天,实验组直肠末端Gli2、BMP4mRNA的表达水平均明显低于正常胎鼠直肠末端（P〈0．05）。而Realtime PCR检测Gli2、BMP4mRNA表达时,发现实验组Gli2的表达在胚胎第13天、第14天、第15天分别为（0．73＋0．07、0．60＋0．09、0．81＋0．06）,勺对照组相比显著降低（P〈0．05）,而在孕第16天、第17天实验组Gli2表达比对照组虽有下降,但无统计学意义;实验组BMP4的表达在孕第3～17天均较对照组下降,差异有统计学意义。结论直肠肛门的正常发育需要Shh信号通路的正常表达,Shh信号通路中转录因子Gli2和靶基囚BMP4的异常表达在肛门直肠畸形发生过程中起重要作用,ETU可能影响Shh信号转导通路和肛门直肠畸形发生。     

孕鼠维生素A缺乏对子代鼠肾发育及肿瘤发生的影响

目的 建立维生素A缺乏的孕鼠模型,观察孕鼠维生素A缺乏对子代鼠胚胎发育和肿瘤发生的作用.方法 取Wismr雌鼠9只,12周龄,体重200～220g.将其分成2组:①维生素A缺乏饮食组6只,受孕前2周起无维生素A饮食直至产后;②正常对照组3只,给予正常饮食.所有雌鼠喂养2周后与健康Wistar公鼠交配成孕鼠.二组孕鼠产后均给予正常饮食,于哺乳期结束后立即处死.分娩后第二天每组分别随机抽取15只新生子代鼠立即处死.其余子代鼠生后给予正常饮食,至生后365 d处死、解剖(如发现中途死亡,即刻解剖).观察二组大鼠产子情况、新生子代鼠血清维生素A浓度、新生子代鼠肾发育形态、子代鼠肿瘤发生率和组织中RXRαmRNA表达.结果 维生素A缺乏饮食组孕鼠产子代鼠51只;正常对照组孕鼠产子代鼠44只.维生素A缺乏饮食组的新生子代鼠血清维生素A浓度为(0.51±0.13)μmol/L,明显低于对照组的新生子代鼠的血清维生素A浓度(0.81±0.15)μmol/L,P=0.000.二组新生子代鼠中均未发现肿瘤组织,但维生素A缺乏饮食组的新生鼠组织中未成熟的肾小球和肾小管较对照组多见.维生素A缺乏组的新生子代鼠双肾中肾源性剩余检出率为60.0%,明显高于对照组(26.7%,P=0.018).维生素A缺乏饮食组子代鼠36只,1只中途死亡,肾母细胞瘤发生率13.9%.对照组的子代鼠无肿瘤发生.维生素A缺乏饮食组子代鼠肾源性剩余检出率30.6%,明显高于对照组子代鼠肾源性剩余检出率(6.9%,P=0.001).子代鼠中肾母细胞瘤组织的RXRαmRNA表达强度为(3.17±0.15),明显低于对照组肾脏组织中RXRαmRNA表达强度(3.58±0.20),P=0.000.结论 大鼠孕期维生素A缺乏会导致子代鼠肾发育差,肾源性剩余增加,肾母细胞瘤发生率增高.维生素A可能通过上调RXRαmRNA的表达来促进肾脏分化和降低肿瘤发生.     

术中判断肠活力三种方法的比较

术中准确地评价肠活力是外科医师面临的一个普遍问题。应用兔肠缺血模型，比较静脉荧光素、表面血氧测定和激光多普勒三种技术判断肠活力的精确性。结果：诊断效率静脉荧光素法为７８％，表面血氧测定为６８％，激光多普勒为９５％。后者精确度显著优于前二者，且操作简便、迅速，具有临床应用前景。     

早产儿视网膜病的危险因素分析及随访调查

研究早产儿视网膜病(retinopathy of prematurity,ROP)的发生率、高危因素、治疗与随访情况。方法对2005年7月-2007年12月温州医学院附属第一医院NICU收治的符合ROP筛查标准的早产儿,于生后2周开始由资深眼科医师开始行间接眼底镜检查眼底,并进行随访。结果434例早产儿中ROP的发生率为5.5%(24/434例),24例ROP中Ⅰ期19例,Ⅱ期3例,Ⅲ期2例。Ⅲ期阈值病变者行激光光凝治疗,全部患儿均恢复正常。对434例早产儿行单因素分析得出,胎龄、出生体重、住院时间、吸氧、吸氧浓度、吸氧时间、呼吸暂停、新生儿肺透明膜病(RDS)、肺表面活性剂(PS)的应用、机械通气、输血、光疗时间、感染与ROP的发生有相关性(P<0.05)。Logistic回归分析显示胎龄、出生体重、胎数、吸氧时间、光疗时间、代谢性酸中毒、母亲妊高症、颅内出血是影响ROP发生的主要因素。结论早产是ROP的根本原因,防治各种并发症、合理的氧疗是预防ROP的关键。建立完善有效的ROP筛查制度,早期发现、早期治疗ROP,可改善ROP的预后。     

主动脉缩窄的治疗研究进展

主动脉缩窄(coarctation of aorta,CoA)是主动脉的局限性狭窄,狭窄最常见于峡部,是一种常见的先天性心血管畸形,占所有先天性心脏病的5％ ～8％.缩窄导致上肢血压升高,下肢血压降低,并可引起心功能下降,未经治疗的CoA预后不佳.治疗方式包括外科治疗及经皮介入治疗,不同治疗方式的并发症发生率不同,术后长期监测其并发症、心功能是评估预后的重要指标.该文对主动脉缩窄的治疗方式及术后并发症、心功能情况的研究进展作一综述.     

小儿法洛四联症根治术106例临床分析

目的探讨小儿法洛四联症根治术的特点,以提高手术疗效。方法对1998-02—2005-07在河南省郑州市第七人民医院接受法洛四联症根治术的106例患儿的临床资料进行回顾性分析。结果治愈103例,死亡3例,病死率为2.9%。术后随访率100%,随访3～93个月,无晚期死亡。全部病例心功能皆恢复至Ⅰ或Ⅱ级(NYHA)。结论绝大部分法洛四联症患儿可施行一期根治术,提高手术成功率的关键在于合理的体外循环灌注、严密修补室间隔缺损和恰当疏通右室流出道。     

Outcome of the Treatment of Inborn Errors of Metabolism

The use of specific dietary restrictions, cofactor administration, mobilisation of insoluble substances, environmental modifications, product replacement and selective enzyme inhibition are now established for the treatment of some inborn errors of metabolism. There is no generally accepted application for enzyme administration, cytopharmacology (manipulation of the cytoskeleton) or for cell transplantation except for bone marrow transplantation in disorders where the bone marrow is primarily at fault. The other uses of bone marrow transplantation which have been proposed require further evaluation. Results of recent research suggest that the scope of this approach is gradually being widened. There is also scope for development in the field of organ transplantation taking advantage of recent technical¹ and immunological progress. The treatment of inborn errors of metabolism by genetic modification is not yet on a practical clinical level; more laboratory and animal studies are needed before this can be attempted in man. Adenosine deaminase deficiency appears to be the disease in which this will be first attempted using a retroviral vector to insert the gene into the genome of pluripotential bone marrow cells.     

Reliability of subjective estimates of exercise capacity after total repair of tetralogy of Fallot

Sixty-nine patients (age 10 × 3.5 years, median 9.7 years) operated on for tetralogy of Fallot, underwent excercise testing 5.1 × 2.5 years after total correction. Aerobic capacity was assessed by the ventilatory threshold method. After the exercise test, parents completed a validated standardized questionnaire to evaluate the habitual level of physical activity of their child. They were then asked to place their child into one of three groups, describing their child's activity level, compared to normals (below average, average and above average). In the average and above-average groups, 73% and 65% of the patients were misclassified when compared to objective exercise testing. However, in the below-average group, no misclassifications were found. Subjective estimates of activity level, and consequently exercise tolerance, were poorly associated with objective measurements of exercise performance in these patient groups. Our results question the reliability of self-reported estimates of physical activity level and consequently exercise capacity in children after surgical correction of tetralogy of Fallot.     

早产儿脑病研究进展

早产儿脑病是复杂的原发性脑损伤和继发性脑发育异常疾病.过去几年对该病有了较为深刻的认识,该文就最新的有关早产儿脑病概念演变,脑损伤后的细胞分子机制和损伤后发育障碍,尤其是活化小胶质细胞介导的少突胶质细胞损伤机制、神经/髓鞘受损和丘脑、板层下神经元及大脑皮层的受损机制或发育成熟障碍进行综述,以便对该病有更深刻的认识.     

Spectrum of clinical presentations of vein of Galen aneurysm

Aneurysm of the vein of Galen is a rare intracranial vascular malformation. It is known to have diverse manifestations and varying severity. Four cases with different modes of presentation and outcome are reported. A mortality of 50 per cent was encountered. Among the survivors, one had neurologic sequelae whereas the other had attained age-appropriate developmental milestones. The former was a rare case of spontaneous thrombosis of the aneurysm while the latter was a boy who underwent therapeutic embolization.     

婴幼儿法乐四联症手术治疗近期疗效的影响因素

目的 探讨影响婴幼儿法乐四联症手术治疗近期疗效的各相关因素.方法 将2003年8月至2011年2月经作者一期手术纠治的117例年龄≤3岁的法乐四联症患儿分为疗效良好、疗效较差两组.分析手术时患儿年龄、体重、术前HCT值、McGoon指数、EDVI、主动脉阻断时间、转流时间、室间隔缺损大小、升主动脉与肺动脉干直径比、...