姜黄素对骨肉瘤细胞增殖、凋亡影响及作用机制研究

目的:探讨姜黄素对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法:选用骨肉瘤MG-63细胞株,分别采用不同浓度的姜黄素进行处理。采用MTT比色法检测骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制率,采用流式细胞仪检测骨肉瘤MG-63细胞凋亡情况,采用Western Blot法检测骨肉瘤MG-63细胞凋亡相关蛋白表达水平。结果:①干预12、24、48 h后,与对照组比较,姜黄素各浓度组骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制率较高,且姜黄素5μmol/L组10μmol/L组15μmol/L组及20μmol/L组,差异有统计学意义(P0.05)。②干预48 h后,与对照组比较,姜黄素各浓度组骨肉瘤MG-63细胞凋亡率较高,且姜黄素5μmol/L组10μmol/L组15μmol/L组,差异有统计学意义(P0.05)。③与对照组比较,黄素各浓度组骨肉瘤MG-63细胞P53、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Caspase-9前体(proCaspase-9)蛋白表达水平较低,且姜黄素5μmol/L组10μmol/L组15μmol/L组,差异有统计学意义(P0.05)。④与对照组比较,姜黄素各浓度组骨肉瘤MG-63细胞Bcl相关蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt-C)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平较高,且姜黄素5μmol/L组10μmol/L组15μmol/L组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:姜黄素能剂量依赖性的抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖,并促进其凋亡,其作用可能与下调P53、Bcl-2、proCaspase-9蛋白表达,上调Bax、Cyt-C、Caspase-3蛋白表达,激活线粒体凋亡途径有关。     

姜黄素诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡以及对c-myc、caspase-3表达的影响

目的 探讨姜黄素诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡及其对c-myc、Caspase-3表达的影响。方法 姜黄素处理A375细胞,MTT法检测细胞的生长活性,应用倒置显微镜和透射电镜进行形态学观察,采用AnnexinV/PI双染法和DAN片段化分析检测细胞凋亡,SABC免疫组化法和原位杂交检测细胞内c-myc、Caspase-3表达水平。结果 姜黄素能抑制A375细胞增殖,并呈剂量和时间依赖性。经30 μmol/L姜黄素处理A375细胞48h,细胞呈现凋亡形态学改变;DAN片段化分析可见到明显的DNA梯带形成;流式细胞仪定量检测出20 μmol/L以上浓度姜黄素诱导细胞凋亡的发生率较对照组有显著性差异。c-myc表达水平减少,而Caspase-3表达增加。结论 姜黄素能抑制A375细胞增殖和诱导其凋亡,c-myc和Caspase-3基因可能参与凋亡过程。     

PDTC影响骨肉瘤U-2 OS细胞凋亡的研究

目的:观察在NF-KB抑制剂PDTC诱导骨肉瘤细胞发生凋亡的过程中,NF-KB活性抑制后,Livin和aspase-3表达水平变化.方法:以不同浓度(0、50、100、200、400 μmol/L)PDTC作用于骨肉瘤U-2 OS细胞不同时间(24小时,48小时)后,采用MTT法和流式细胞仪测定U-2 OS细胞凋亡,采用Western Blot检测U-2 OS细胞Livin和caspase-3蛋白表达.结果:①不同浓度PDTC作用24小时、48小时后对U-2 OS细胞生长有明显抑制作用,并呈时间、剂量依赖性.②50、100、200和400μmol/L PDTC作用24小时后的凋亡率与对照组相比差异有显著性,且各浓度组之间差异均有显著性(P＜0.01).③PDTC作用于U-2 OS细胞后可降低Livin蛋白的表达,增加caspase-3蛋白表达,呈现剂量依赖性.结论:PDTC可明显抑制人骨肉瘤U-2 OS细胞,并使细胞周期受到阻滞,进一步诱导肿瘤细胞凋亡,抑制细胞与诱导凋亡呈剂量依赖关系.     

姜黄素抗急性白血病机制研究

目的:探讨姜黄素抗急性白血病的作用机制。方法:不同浓度(0.0,6.3,12.5和25.0μmol/L)姜黄素作用急性白血病HL60细胞后,用噻唑蓝法检测姜黄素对细胞生长的抑制作用;倒置相差显微镜观察细胞的形态变化,DAPI染色后用荧光显微镜观察细胞的形态变化,caspase 3试剂盒检测其活性,流式细胞仪分析细胞周期。结果:姜黄素对HL60细胞的生长有抑制作用,并呈时间-剂量依赖性,48 h的IC50为20.4μmol/L。25.0μmol/L姜黄素作用48 h后,相差倒置显微镜和荧光染色可见典型的细胞凋亡的形态改变。caspase 3酶活性检测发现,随着姜黄素浓度的增加,caspase 3酶活性也逐渐升高。流式细胞仪检测发现,姜黄素浓度为6.3,25.0μmol/L时,细胞阻滞在S期,而12.5μmol/L时,则在G2/M期。结论:姜黄素可诱导HL60细胞凋亡和周期阻滞,不同浓度姜黄素可使细胞分别阻滞在S和G2/M期,caspase 3参与其凋亡和细胞周期阻滞过程。     

紫草素通过调节PI3K/AKT途径抑制骨肉瘤生长和作用机制研究

目的 研究紫草素(shikonin,SK)的抗骨肉瘤作用及其机制.方法 不同浓度的SK处理人骨肉瘤U2OS和MG63细胞及人成骨细胞HFOB1.1924 h或用SK 1μmol/L分别处理24、48和72 h后,CCK-8检测细胞活性;SK 0、0.01、0.1、1μmol/L处理U2OS细胞,克隆形成实验检测细胞增殖...     

姜黄素诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡以及对c-myc、caspase-3表达的影响

目的 探讨姜黄素诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡及其对C-myc、Caspase-3表达的影响。方法 姜黄素处理A375细胞，MTT法检测细胞的牛长活性，应用倒置显微镜和透射电镜进行形态学观察．采用Annexin V／PI双染法和DAN片段化分析检测细胞凋亡，SABC免疫组化法和原位杂交检测细胞内c-myc、Caspase-3表达水平：结果姜黄素能抑制A375细胞增殖，并呈剂量和时间依赖性：经30μmol／L姜黄素处理A375细胞48h，细胞旱现凋亡形态学改变。DAN片段化分析可见到明显的DNA梯带形成；流式细胞仪定量检测出20μmol／L以上浓度姜黄素诱导细胞凋亡的发生率较对照组有显著性差异。c-myc表达水平减少，而Caspase-3表达增加。结论 姜黄素能抑制A375细胞增殖和诱导其凋亡，c-myc和Caspase一3基因可能参与凋亡过程。     

姜黄素联合STI571对K562细胞的作用及其对组蛋白去乙酰化酶8的影响

目的研究姜黄素单用及联合STI571对K562细胞增殖与凋亡的影响,及其对组蛋白去乙酰化酶8(histonedeacetylase 8,HDAC8)的作用,探讨其克服STI571耐药的可能机制。方法四唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖活性;Annexin-ⅤFITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡;SABC法检测细胞HDAC8的表达。结果①姜黄素和STI571分别以时间和浓度依赖的方式抑制K562细胞增殖,其36 h的IC50分别为(22.23±2.15)μmol/L和(0.21±0.03)μmol/L,而联用后对K562细胞增殖的抑制作用更为显著。STI571 0.2μmol/L与姜黄素15、30μmol/L联用36 h后的增殖抑制率分别为(72.59±2.81)%和(88.93±1.58)%。②联用姜黄素与STI571能显著增强其诱导K562细胞凋亡的能力。STI571 0.2μmol/L与姜黄素10、30μmol/L联合作用18 h后的凋亡率分别为(15.44±2.92)%和(28.16±3.22)%。③姜黄素能明显抑制K562细胞HDAC8的表达。结论姜黄素与STI571联合能明显增强其抑制K562细胞增殖、诱导凋亡的能力;抑制HDAC8的活性可能是其机制之一。     

姜黄素对人肝癌细胞SMMC-7721生长抑制和诱导凋亡的初步研究

目的:观察姜黄素对人肝癌细胞SM MC - 7721生长抑制和诱导凋亡的影响.方法:以不同浓度(10μmol/L、30μmoL/L、90μmol/L)的姜黄素作用于体外培养的SMMC - 7721细胞48h,MTT法检测姜黄素对细胞的生长抑制率;基于AnnexinV - FITC/PI双染的流式细胞方法检测不同浓度姜黄...     

姜黄素对人肝癌细胞株HepG2凋亡和细胞周期的影响

目的 本实验拟研究姜黄素对人肝癌细胞株HepG2凋亡与细胞周期的影响.方法 不同浓度姜黄素DMEM稀释液培养HepG2细胞,分别作用24、48、72h后,流式细胞术检测凋亡和细胞周期分布变化,并以正常培养细胞作为对照.结果 对照组正常生长HepG2细胞24、72h凋亡率分别为3.1%、4.2%、5.2%,加入姜黄素后凋亡率明显增加,并呈现时间和剂量依赖性.10μmol/L浓度组24、48、72h凋亡率分别为13.6%、22.9%、41.1%.细胞周期分布测定中.姜黄素药物组HepG2细胞出现明显的G2/M期阻滞,相比对照组有统计学意义(P<0.05).结论 姜黄素能抑制HipG2细胞生长,并且诱导其凋亡,阻滞细胞周期于G2/M期,其抗肿瘤活性具有广阔的应用前景,值得进一步研究.     

U266细胞在组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275诱导下凋亡观察

目的：研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人多发性骨髓瘤U266细胞的增殖和凋亡的影响.方法：台盼蓝拒染法观察MS-275对细胞活力的影响;瑞氏—姬姆萨染色观察药物对细胞形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期;West-ernBlot检测凋亡信号通路中Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9活化及蛋白聚ADP核糖聚合酶[poly（ADP-ribose）polymer-ase,PARP]裂解情况.结果：MS-275呈时间和剂量依赖性抑制U266细胞增殖,阻断细胞周期于G0/G1期.MS-275作用48h的IC50为1.39μmol/L;2μmol/LMS-275作用细胞24h后,G0/G1期64.57%;36h占82.20%.瑞氏—姬姆萨染色显示细胞发生明显变化.WesternBlot检测表明MS-275作用U266细胞后,Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9被裂解活化,其底物蛋白聚ADP核糖聚合酶发生剪切,细胞发生凋亡.结论：MS-275可抑制细胞增殖,并使细胞阻滞在G0/G1期,通过激活细胞内外2条凋亡级联信号通路诱导U266细胞凋亡.