影响人类胚胎冷冻保存结果的因素

自第一次人类胚胎冷冻成功并获妊娠至今已有十多年的历史,探求人类胚胎冷冻保存的影响因素一直是该领域的重要课题之一。影响人类胚胎冷冻保存结果的因素众多,主要有胚胎的质量和分裂阶段、母体年龄及移植时机以及冷冻保护剂和冷冻融解程序等几方面,其中,尤以胚胎质量及母体年龄起重要作用。在多种冷冻方法中,现较多采用慢速冷冻、快速融解方法,但其它方法也有其优势;蔗糖等非渗透性保护剂和渗透性保护剂联合使用常取得较好效果。胚胎质量、分裂阶段、移植数目等也影响最终结果,随着其它技术如胞浆内单精子注射(ICSI)、辅助孵化的不断成熟,进一步提高了冷冻融解胚胎的妊娠率和植入率。母体年龄及选择最佳的胚胎移植时机是决定冷冻胚胎能否发生妊娠的最后关键因素。     

乙二醇在人类胚胎慢速冷冻中的应用研究

由于乙二醇(EG)比丙三醇 (PROH)分子量小 ,为了阐述二者在人类胚胎慢速冷冻中的不同效果 ,本研究分别采用EG和PROH作为冷冻保护剂 ,通过观察鼠胚冷冻复苏后的发育情况以及人冻胚移植后的妊娠结局 ,对EG的渗透性及毒性作一评价。6 2位实验组病人来自于 1999年 1月至 2 0 0 0年 5月汉城IVF中心行IVF ET者 ,其移植后的剩余胚胎采取了EG作为冷冻保护剂的慢速冷冻法保存 ;以 1997年 8月至 1998年 12月的 6 0位同类病人作为对照 ,对照组以PROH为保护剂 ,冷冻方法同上。冷冻保护液的组成如下 :①基础液 :含 10 %HFF的PBS +0 .2mol L…     

雄性生殖细胞冷冻保存研究进展

随着单精子及精子细胞卵胞浆内显微受精技术的发展,雄性生殖细胞冷冻保存技术已成为辅助生殖技术的重要内容,为男性因素不育患者的临床助孕提供了物质保障基础。目前,雄性生殖细胞冷冻方法包括程序化冷冻和玻璃化冷冻;冷冻保护剂可有效降低细胞的冷冻损伤,根据其特性分为渗透性保护剂和非渗透性保护剂两大类;冷冻载体中冷冻环、冷冻叶片等应用较广泛。雄性生殖细胞冷冻的效果与冷冻方法、冷冻保护剂和冷冻载体等密切相关。     

慢速冷冻中糖浓度对卵母细胞纺锤体和染色体构型的影响

卵母细胞冷冻是目前人类体外受精（IVF）和生殖科学的前沿技术，人卵母细胞对冷冻有特异的敏感性，与是否实施慢速冷冻法还是玻璃化冷冻法无关。在实施慢速冷冻过程中，细胞内冰晶的形成、冷冻保护剂的毒性、渗透压、pH值、活性氧等因素均可以破坏卵母细胞的发育潜能。由于目前尚不能解决卵母细胞的安全性问题，所以研究旨在比较运用两种不同糖浓度的非渗透性冷冻保护剂进行慢速冷冻对MⅡ期卵的纺锤体形态及染色体构型的影响。     

人类胚胎冻融技术及其影响因素

为探讨冻融胚胎的方法,提高试管婴儿妊娠成功率,我们对人体外受精(IVF)及卵浆内单精子显微注射(ICSI)后的348个早期胚胎加保护剂(丙二醇、蔗糖),采用Testart慢速冷冻方法保存。将其中79个胚胎用快速融解法解冻,有57个胚胎存活,存活率72.16％。57个胚胎分别给13例患者移植,结果5例生化妊娠,其中4例发展为临床妊娠,1例已出生健康婴儿。结论:采用冻融胚胎技术可以提高一次取卵的总妊娠率。     

影响冷冻胚胎移植结果的相关因素分析

目的探讨影响冷冻胚胎移植结果的相关因素。方法回顾性分析2004年1月-2006年5月在本生殖中心进行的96个冷冻胚胎移植周期中患者年龄、受精方式、胚龄及冻胚移植周期的方案、子宫内膜厚度及移植胚胎个数对冷冻胚胎移植结果的影响。结果96个冻胚移植周期中,解冻胚胎总数344个,复苏后成活298个(86.63%),获得临床妊娠29例(30.21%),胚胎种植率16.13%。患者年龄、受精方式、胚龄、冻胚移植周期的方案及移植胚胎个数均对冷冻胚胎移植后妊娠率、种植率没有明显影响。子宫内膜厚度对冷冻胚胎移植后妊娠率、种植率的影响比较明显。结论在诸多因素中,子宫内膜厚度对冻胚移植结果的影响较显著。     

脯氨酸作为细胞冷冻保护剂的研究进展

细胞冷冻保存应用广泛,但冷冻会损伤细胞导致代谢紊乱,而冷冻保护剂可缓解该过程。脯氨酸是一种渗透性冷冻保护剂,可快速透过细胞膜进入细胞内,与细胞内水氢键结合抑制低温下冰晶形成,同时可与细胞内水结合减少细胞内水流失,保护细胞内蛋白质的结构和功能,保护细胞膜。脯氨酸可提高植物、动物及人类体细胞冷冻复苏后存活率。在生殖细胞冷冻...     

人类囊胚玻璃化冷冻研究进展

1985年Rail和Fahy首次应用玻璃化法冷冻保存小鼠胚胎以来，玻璃化冷冻技术以其简单、有效、经济受到关注。在人类辅助生殖技术中，囊胚的培养和移植对于提高妊娠率、减少多胎妊娠的发生具有重要意义．因此需要将剩余囊胚有效冷冻保存，玻璃化法可望成为有效冷冻保存多余囊胚的新技术。在玻璃化冷冻技术中．不同的冷冻装置、冷冻保护剂的类型和浓度、解冻方法的不同、囊胚冷冻前的不同处理。都是影响囊胚冷冻后复苏的关键因素。     

卵子玻璃化冷冻保存生育力的研究进展

随着人类辅助生殖技术的发展,卵子冷冻技术已经成为人们关注的课题,在拓宽目前辅助生殖技术服务的范围和保存女性生育能力方面有重要的价值.近年来玻璃化冷冻被认为是深低温保藏卵母细胞很有前途的选择.玻璃化冷冻卵母细胞冻融后存活率、受精率、卵裂率及移植妊娠活婴率较前有所提高,但迄今为止,人们仍缺少标准的玻璃化冷冻方案,对保护剂和载体的选择及冷冻程序等仍未达成共识.该文就玻璃化冷冻人类卵母细胞意义、卵子玻璃化冷冻的应用现状及冷冻保护剂、低温冷冻复苏对卵子的潜在危害及应用前景等研究作以综述.     

玻璃化冷冻人类早期胚胎的研究进展

人类胚胎已经成功冷冻保存并在辅助生殖技术（ART）中起重要作用，目前多采用慢速冷冻-快速复温方法冷冻保存人早期胚胎，并取得较高的胚胎存活率，但此法需要昂贵的仪器、耗时，并且对于囊胚冷冻效果差。近年发展的玻璃化冷冻因其简单、快速、不需要昂贵仪器等优点越来越受到重视。就玻璃化冷冻在人类早期胚胎冷冻保存中的应用及其影响因素作一综述。     

脯氨酸作为细胞冷冻保护剂的研究进展

细胞冷冻保存应用广泛, 但冷冻会损伤细胞导致代谢紊乱, 而冷冻保护剂可缓解该过程。脯氨酸是一种渗透性冷冻保护剂, 可快速透过细胞膜进入细胞内, 与细胞内水氢键结合抑制低温下冰晶形成, 同时可与细胞内水结合减少细胞内水流失, 保护细胞内蛋白质的结构和功能, 保护细胞膜。脯氨酸可提高植物、动物及人类体细胞冷冻复苏后存活率。在生殖细胞冷冻中, 研究表明脯氨酸可用于卵母细胞冷冻, 可提高小鼠卵母细胞冷冻后存活率及保护线粒体功能, 但其对于精子的冷冻效果报道尚不一致。脯氨酸冷冻保护剂涉及多种细胞类型且冷冻效果较强, 其未来可能更广泛应用于低温生物学领域。本文总结了脯氨酸作为天然小分子冷冻保护剂的应用研究进展, 希望能够帮助人们更好地了解生殖细胞冻存的低温生物学机制, 为改良生育力冷冻保存技术提供参考。     

海藻糖在生育力保存中的应用

肿瘤诊疗技术的进步显著提高了患者的生存率,但放化疗可能造成人类生育力的下降乃至丧失。如何有效保存生育力已成为近年来研究的热点。海藻糖属于非渗透性冷冻保护剂,是一种具有特殊生物学性能的双糖,能够在干燥、脱水、冷冻等恶劣条件下有效保护蛋白质等大分子不变性失活。随着研究的逐步深入,海藻糖已被广泛应用于生育力保存等医学领域中,有学者将其用于保存精子、精原干细胞、卵母细胞、胚胎、卵巢组织和睾丸组织并取得了显著成果。综述海藻糖的生物学性质、作用机制假说以及在生育力保存中的应用研究现状和最新进展。     

患者对于捐赠多余冷冻胚胎用于治疗和研究的态度

约1／3行辅助生殖治疗的夫妇有多余的好的胚胎．一般多冷冻保存用于以后的移植。但仍有一部分胚胎被弃置。许多国家法律规定胚胎冷冻超过一定期限必须销毁．丹麦的胚胎冷冻最大期限是24个月，超过期限的胚胎或用于不孕症研究或销毁或用于干细胞研究，但供胚是被法律禁止的。丹麦每年约有2500个胚胎被销毁。而多余胚胎用于供胚或干细胞研究会遇到许多伦理、情感和法律上的问题。     

玻璃化冷冻胚胎、配子及卵巢组织安全性研究进展

近年来玻璃化冷冻技术逐渐应用于生殖医学,多数学者认为,玻璃化冷冻胚胎的存活率、发育率、种植率和妊娠率高于程序化冷冻,且经济、便捷、快速,有取代传统慢速冷冻技术的趋势。但玻璃化冷冻胚胎、配子及卵巢组织历史短,其安全性一直受到关注,并认为其造成的细胞膜、透明带、遗传物质和代谢功能损伤是不可避免的。但选择不同的冷冻保护剂和冷冻载体对不同时期的胚胎、配子、卵巢组织进行玻璃化冷冻所造成的冷冻损伤不同。因此,寻求一种安全可靠的冷冻方法是生殖医学工作者追求的目标。     

人类囊胚玻璃化冷冻研究进展

1985年Rall和Fahy首次应用玻璃化法冷冻保存小鼠胚胎以来,玻璃化冷冻技术以其简单、有效、经济受到关注.在人类辅助生殖技术中,囊胚的培养和移植对于提高妊娠率、减少多胎妊娠的发生具有重要意义,因此需要将剩余囊胚有效冷冻保存,玻璃化法可望成为有效冷冻保存多余囊胚的新技术.在玻璃化冷冻技术中,不同的冷冻装置、冷冻保护剂的类型和浓度、解冻方法的不同、囊胚冷冻前的不同处理,都是影响囊胚冷冻后复苏的关键因素.     

玻璃化冷冻胚胎、配子及卵巢组织安全性研究进展

近年来玻璃化冷冻技术逐渐应用于生殖医学,多数学者认为,玻璃化冷冻胚胎的存活率、发育率、种植率和妊娠率高于程序化冷冻,且经济、便捷、快速,有取代传统慢速冷冻技术的趋势.但玻璃化冷冻胚胎、配子及卵巢组织历史短,其安全性一直受到关注,并认为其造成的细胞膜、透明带、遗传物质和代谢功能损伤是不可避免的.但选择不同的冷冻保护剂和冷冻载体对不同时期的胚胎、配子、卵巢组织进行玻璃化冷冻所造成的冷冻损伤不同.因此,寻求一种安全可靠的冷冻方法是生殖医学工作者追求的目标.     

冷冻胚胎经序贯共培养用于建立人胚胎干细胞系

目的:利用长期冷冻人卵裂期胚胎经序贯共培养形成的囊胚建立人类胚胎干细胞系。方法:将冷冻≥10年的卵裂期胚胎复苏后,采用单层卵丘细胞序贯共培养至囊胚期,经辅助孵出,置鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层全胚培养,原代培养6d后加入20%MEF条件培养基培养至形成原代克隆。观察人胚胎干细胞集落的生长状态并通过碱性磷酸酶染色、Oct-4基因表达、核型分析及体外分化实验等方法进行生物学鉴定。结果:9枚冷冻卵裂期胚胎经序贯共培养,有6枚发育到囊胚期,最终获得1株胚胎干细胞系。经鉴定该细胞系具有碱性磷酸酶活性、表达Oct-4胚胎干细胞特异标记、形成拟胚体、在体外形成具有自动节律性的心肌细胞、并具有46,XY核型等5种特性。结论:冷冻胚胎经序贯共培养能够改善胚胎发育潜能,有助于建立人胚胎干细胞系。     

影响冻融胚胎存活的相关因素分析

目的:探讨年龄、受精方式、胚胎冷冻方法及胚胎冻存时间对冻融胚胎存活的影响.方法:回顾分析冻融胚胎移植(FET) 1255个周期,根据年龄、受精方式、胚胎冷冻方法及胚胎冻存时间进行分组,比较各组的冻融胚胎存活率、完全存活率及临床妊娠率.结果:玻璃化冷冻组冻融胚胎存活率、完全胚胎存活率及临床妊娠率分别为93.4％、95.9％、48.8％,程序化冷冻组冻融胚胎存活率、完全胚胎存活率及临床妊娠率分别为81.2％、54.9％、30.1％,两组差异有统计学意义(P＜0.05);年龄、受精方式、胚胎冻存时间对冻融胚胎存活率及完全胚胎存活率无明显影响(P＞0.05).结论:玻璃化冷冻胚胎技术比程序化冷冻胚胎技术能获得更高的冻融胚胎存活率、完全胚胎存活率及临床妊娠率,3年内的冻融胚胎可不考虑冻存时间对胚胎存活的影响.     

人卵的冷冻保存

在体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization—embryo transfer，IVF—ET）治疗中由于广泛采用超排卵（superovulation）方法，获得的卵子数目往往多于一次移植1～3个胚胎所需的数量，有一定的卵子或胚胎的浪费。随着辅助生育技术的发展，冷冻生物学在人类生殖医学领域也得到了迅速的应用和发展。人类胚胎冷冻已经广泛应用于不孕症患者的常规治疗，并获得了良好的结果。尽管也有利用冷冻卵子的健康婴儿出生报道，然而由于卵子本身的生物学特征等原因，目前卵子冷冻后的存活率、受精率、卵裂率都不尽人意，导致冷冻复苏后进行IVF的成功率极低，与胚胎冷冻相比较，卵子冷冻仍处于探索、     

卵巢组织冷冻和体外培养的现状及展望

卵巢组织冷冻对于生育力的保存有重要的作用，可以将多个原始卵泡保存起来，对于人类也可以避免伦理方面的难题。将原始卵泡培养成熟并发育成胚胎也是研究的热点之一，但是由于冷冻及体外培养系统的不完善，对于原始卵泡的体外成熟，尤其是人类的卵泡体外成熟仍然需要进一步的研究。对于卵巢组织冷冻的影响因素、冷冻方法、冷冻后的分析及卵泡体外成熟的培养液、培养方法及研究现状进行综述。