非处方妇科外用药--甲硝唑

甲硝唑又名甲硝基羟乙唑;灭滴灵;灭滴唑;为白色或乳白色晶粉末;略有臭,稍具苦咸味. 甲硝唑有强大的杀灭滴虫作用,通过在虫体内转变为原形式而破坏其DNA结构,从而损害DNA模板功能,为治疗阴道滴虫病的首选药物.     

何谓DNA探针技术?其用途如何?

DNA探针技术是近年来新建立的应用于诊断乙型肝炎病毒(HBV)感染的DNA:DNA分子杂交技术。其原理是根据HBV内含有内源性DNA多聚酶(DNAP)活性,以原HBVDNA为模板,使两条具有互补碱基顺序的DNA链在一定条件下重组形成一个双链结构,将放射性核素标记于HBV、DNA上,即为DNA探针(如~(88)P-HBV DNA,~3H-HBV DNA等)。用此探针与病人血清中HBV DNA进行杂交,     

DNA编码化合物库技术新进展及其在生物医药领域的应用与展望

随着医药领域对靶向调节特定生命活动过程的新分子化合物的需求日益增加,高效、低成本地发现亲和配体分子的新型小分子药物筛选技术——DNA编码的化合物库(DNA encoded compound library,DEL)筛选技术应运而生。DEL作为组合化合物库,可以是简单小分子化合物的集合,也可以是具有高级空间结构的复杂小分子库,每个化合物都以共价方式与特异的DNA序列偶联,因而可将库中所有化合物与靶标蛋白进行合并筛选,随后使用高通量测序对DNA编码序列进行测序来鉴定结合的配体分子。近年来,应用DEL技术筛选开发候选药物的例子已越来越多地被报道,本文回顾和总结了DEL技术的实施流程,特别是DEL库构建和亲和筛选方法的最新研究进展,展示了利用DEL技术筛选开发的最新亲和配体分子,并对DEL技术在生命科学领域的应用前景作了展望。     

DNA疫苗的临床前安全性研究

DNA疫苗具有很多优点,应用前景广泛.目前已证实DNA疫苗有可靠的安全性.本文就DNA疫苗进入临床试验前在动物体内所进行的安全性研究作一综述.     

齐拉西酮分子印迹聚合物的制备及其识别特性

目的 用分子印迹技术制备以齐拉西酮为模板分子的分子印迹聚合物(MIP),并检测齐拉西酮在体内的含量.方法 以齐拉西酮为模板分子、甲基丙烯酸为功能单体、乙二醇甲基丙烯酸乙酯为交联剂,按模板分子-功能单体(1:4)制备齐拉西酮一甲基丙烯酸MIP.在底物为齐拉西酮溶液中放入MIP,于25℃中震荡12 h后,取上清液检测吸光度,计算相应吸附量.结果 齐拉西酮-甲基丙烯酸MIP对齐拉西酮溶液有一定的特异性吸附.结论 齐拉西酮-甲基丙烯酸MIP可以检测齐拉西酮的含量.     

RAPD技术在中药鉴定及相关领域应用的研究进展

RAPD(random amplified polymorphic DNA,随机扩增多态性DNA)技术自1990年由Williams及Welsh等人几乎同时发展起来后,该技术在中药鉴定方面得到了较广泛的应用。其基本原理是采用随机序列的较短的单个随机引物(10碱基寡核苷酸),以提取的药材总DNA为模板,引物与     

APHIDICOLIN对疱疹病毒诱导的DNA聚合酶的抑制作用

Aphidicolin抑制HSV-1、HSV-2、CMV及EBV诱导的DNA聚合酶的ID_(50)分别为0.7、2.7. 6.8及11μM.以HSV-1 DNA聚合酶对aphidicolin最敏感。抑制作用依赖于所使用的模板-引物。对HSV-1、HSA-2 DNA聚合酶抑制方式,当反应系统内模板-引物为饱和浓度时,aphidicolin对底物显示非竞争性抑制;当四种底物为饱和浓度时,aphidicolin对模板-引物表现为反竞争性抑制。Aphidicolin和Foscarnet在酶分子上的作用点可能不同。     

DNA疫苗药代动力学研究进展

 DNA疫苗在临床应用前需进行体内药代动力学试验,由于DNA疫苗是一类特殊的生物制品,故其药代动力学特性不同于通常的药物.随着分子生物学技术的迅速发展,研究DNA疫苗药代动力学的方法也在不断改进.本文就DNA疫苗药代动力学特点及其研究方法的新进展作一综述.     

逆转录PCR（RT-PCR）实验操作要点

RT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。以RNA为模板,首先在依赖于RNA的DNA聚合酶的催化作用下体外合成cDNA的第一条链。以此条cDNA链为模板,又可继续进行PCR。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA．要得到理想的结果．关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。而确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染,关键是要做好实验前的准备,注意实验操作的一些细节。     

樟脑胺氯乙酸铂对DNA模板的影响

本文报道樟脑胺氯乙酸铂(camphoramine chloroacetic platinum,CCP)对DNA模扳的影响。采用同位素、紫外光谱,粘度测定等技术,分析和讨论了CCP与DNA结合方式和对DNA二级结构的影响。结果表明,CCP可能以顺式双配位基形式与DNA发生共价结合,产生链内及链间交联,从而损伤了DNA模板,使DNA对碱及温度的敏感性增加,分子变短,粘度下降,最终抑制了DNA复制。     

抗体药物的设计及其研究进展

先进的展示技术为重组抗体的筛选和改造提供了有效而灵活的方法.通过展示技术可以获得更适用于诊断和治疗的优化分子,而后者不能直接通过动物免疫接种的方式获得.展示技术可通过自动化或与新一代测序技术和阵列技术联合应用得到进一步提高,形成高通量筛选技术平台,用于筛选多种对应大量基因组编码靶标的抗体.从头设计抗体已开始成为制造新抗体的一种策略,但仍具有技术挑战性.然而,抗体-抗原结构数据库的不断增加和计算工具的不断开发,都表明这些挑战是可以克服的.预计未来以物理分子模拟知识为基础的计算方法,将成为提高抗体设计准确性和成功性的主要驱动力.     

重叠延伸PCR方法的建立与应用

目的建立一种新型PCR技术（重叠延伸PCR）并用于腺病毒早期基因E1A与内核蛋白体进入位点IRES（internal ribosome entry site）的直接连接,为构建复制型腺病毒载体作准备.方法以PcAE1A质粒与PIRES-EGFP质粒为模板,通过引物设计,使E1A基因3＇端与IRES基因5＇端具有相互重叠的一段序列,用该组引物行PCR分别扩增E1A基因与IRES基因,再以这两种PCR产物的混合物作为模板,进行重叠延伸PCR扩增E1A-IRES基因片段.结果经酶切及测序鉴定重叠延伸PCR方法成功构建了E1A-IRES基因片段.结论重叠延伸PCR法能将任意两段DNA序列连接起来,其在分子生物学的领域中具有潜在应用价值.     

用于PCR实验的毕赤酵母基因组DNA制备方法的比较

目的：比较4种用于PCR实验的毕赤酵母基因组DNA的制备方法，以寻求一种稳定、简便的DNA模板制备方法，用于毕赤酵母重组子的分析。方法：分别用玻璃珠法、煮沸法、煮—冻—煮法以及直接法制备毕赤酵母基因组DNA模板，在相同条件下进行PCR扩增并比较其差异。结果：煮—冻—煮法与玻璃珠法制备的模板进行PCR均可取得理想的实验结果。以煮沸法制备模板作PCR时结果受所用模板浓度的影内很大，稳定性较差。直接法(即直接用未经处理的菌体作模板)的PCR结果随机性较大，实验结果最不理想。结论：煮—冻—煮法所需时间少、费用低、操作简便而且结果稳定，是采用毕赤酵母表达系统进行PCR鉴定时制备模板DNA的首选方法。     

LAMP联合基因芯片技术在肺炎衣原体检测中的应用

目的 开发一种可以快速、准确检测肺炎衣原体的检测方法.方法 采用环介导等温核酸扩增技术(LAMP)对肺炎衣原体的特异性DNA保守片段进行扩增,将扩增的DNA与基因芯片进行杂交,观察是否可在芯片相应的区域出现杂交信号.结果 只有肺炎衣原体DNA经LAMP反应后出现特异性的扩增条带,经LAMP扩增后的产物与基因芯片杂交,仅肺炎衣原体区域出现杂交信号.结论 LAMP技术联合基因芯片技术具有高度敏感性、高度特异性的特点,可快速准确地检测肺炎衣原体.     

聚合酶链反应检测肝病患者中HBV的感染

聚合酶链反应(polymerase chain reac-tion,PCR)是一种在体外模拟自然DNA复制过程的核酸扩增技术。基本过程是一种模板DNA进行反复变性成单链DNA,与加入的一对特定寡核苷酸引物“退火”,在DNA合成的原料(dNTP)和     

肺癌与DNA修复

DNA是机体生命活动最重要的生命物质,其分子结构的完整性和稳定性的保持对于细胞的存活和正常生理活动的发挥具有重要意义.生物体基因组完整性的维持有带于体内相互独立但又密切联系的两套系统:DNA的修复和凋亡.     

浅谈聚合酶链反应在输血医学中的应用

聚合酶链反应简称——PCR技术.是近年来发展的一种体外高效扩增特异DNA或RNA序列的新技术.1985年由美国cetus公司创建以来,很快就成为分子生物学发展史上的又一里程碑.目前,我国仅有部分大、中型医院在开展此项工作.但由于技术操作工程较复杂,成本也较高.无法用于输血工作中对献血员的筛选.现就PCR技术在现代输血中的主要作用进行以下几方面的简述.1 聚合酶链反应技术1.1一般程序PCR技术与常规的分子生物技术在扩增靶DNA方面的比较,前者在方法上简便而快速.其一般程序包括:①模板DNA的提取.②引物的设计.③靶DNA的扩增.④扩增产物的分析判断.目前已有许多检测方法可用PCR扩增产物和测定.这些方法在灵敏度、特异型以及具体应用还是比较好     

毕赤酵母重组子PCR模板制备方法的比较

目的比较5种用于PCR实验的毕赤酵母(Pichia pastoris)重组子基因组DNA的制备方法,以寻求一种稳定、可靠、简便的DNA模板制备方法,用于毕赤酵母重组子的分析。方法分别用酵母基因组提取试剂盒法、蜗牛酶法、煮沸法、煮-冻-煮法、微波法制备重组毕赤酵母基因组DNA模板,在相同条件下进行PCR扩增并比较其差异。结果以5种方法制备的重组酵母DNA作为模板进行PCR,其结果均可达到鉴定酵母重组子的效果,其中酵母基因组提取试剂盒法和微波法可以鉴定酵母重组子的基因表型。结论微波法所需时间短、费用低、操作简便而且结果稳定,并能够鉴定酵母重组子的基因表型,是采用毕赤酵母表达系统进行PCR鉴定时制备模板DNA的首选方法。     

应用噬菌体肽库筛选NMDA受体抗原表位

目的利用噬菌体展示随机肽库技术,进行NMDAR1抗原表位研究.方法以R1JHL单克隆抗体作为筛选分子,生物淘洗噬菌体展示随机12肽文库.经过4轮的筛淘,ELISA结合实验鉴定阳性克隆,提取阳性克隆噬菌体单链DNA进行序列分析.结果对阳性噬菌体进行递呈肽氨基酸序列分析,获得一阳性克隆序列HYNLSSDRKVRL,与R1JHL单克隆抗体识别序列相比,两者存在一致性序列DRK.结论 DRK可能为NMDA受体抗原表位.     

PCR快速鉴定actinobacteria三种模板制备方法的比较

目的 本研究旨在建立准确、简便、快速的放线细菌鉴定技术，为普通和极端环境放线细菌资源的调查和开发利用创造条件。方法 从放线细菌固体培养基上挑取少量菌体，用微波炉法快速制备基因组DNA作为PCR模板，与液体培养法得到的菌体以超声波法或冻融法制备的模板进行了PCR扩增效果的比较研究。结果P CR检测结果表明微波炉法制备的模板可进行有效的体外扩增，目的条带特异，而超声波法或冻融法并不对所有菌株有效，并有非特异扩增产物产生。结论 组合微波炉法快速制备放线细菌基因组DNA技术和23S rRNA特异插入序列PCR扩增技术建立了准确、简便、快速的actinobacteria鉴别体系。