复方灯盏花滴丸对谷氨酸致原代培养大鼠海马神经元凋亡的保护作用

目的:探讨复方灯盏花滴丸对谷氨酸致大鼠原代海马神经了亡凋亡的保护作用及其作用机制.方法:采用中药血清药理学方法,制备含药血清;实验分为空白对照组、模型组、尼莫地平组(0.05 g·kg~(-1)),复方灯盏花滴丸高、低剂量组(5.00,1.25 g·kg~(-1)).原代培养大鼠乳鼠大腑海马神经元,以谷氨酸(终浓度为500μmol·L~(-1))作用20 min复制损伤模型,以5%含药皿清干预,MTT法测定细胞存活率,榆测细胞内Ca~(2+)浓度,Hoechst33342和PI双染法荧光显微镜观察神经细胞形态学变化和细胞坏死和凋亡百分率,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:谷氨酸对原代培养的海马神经元有损伤作用,荧光显微镜观察到细胞核皱缩、碎裂及凋亡小体,海马神经元的存活率下降,坏死、凋亡明显高于对照组,复方灯盏花滴丸高、低剂量组和尼奠地平组能明显对抗谷氨酸引起的神经细胞形态改变,海马神经元存活率明显提高;复方灯盏花滴丸含药血清组细胞凋亡率较谷氨酸损伤组显著降低,细胞内钙超载明显减轻.结论:复方灯盏花滴丸对谷氨酸致大鼠海马神经元的凋亡具有保护作用,其作用机制可能与其能降低细胞内Ca超载有关.     

补骨脂素对淀粉样蛋白损伤海马神经元胆碱能系统的保护作用研究

目的:探讨补骨脂素对淀粉样蛋白(Aβ)诱导海马神经元胆碱能系统损伤的保护作用。方法:应用Aβ损伤补骨脂素预处理的体外培养海马神经元,分别测定海马神经元乙酰胆碱含量,乙酰胆碱酯酶和胆碱乙酰基转移酶活性。结果:补骨脂素可以提高乙酰胆碱酯酶活性和乙酰胆碱水平,对乙酰胆碱酯酶作用不明显。结论:补骨脂素对损伤神经元Aβ损伤海马神经元胆碱能系统有保护作用。     

茯苓生脉饮对自由基损伤的海马神经元保护作用的研究

目的 :探讨茯苓生脉饮含药血清对自由基损伤的海马神经元的保护作用。方法 :在细胞培养的第 6d加入黄嘌呤 (XO -HPX)体系产生超氧阴离子自由基 (O2 )成为衰老模型 ,观察培养的神经元形态结构的变化 ,并经尼氏染色 ,通过计算机图象分析 ,在细胞培养的第 2、4、8d测量尼氏小体的积分光度值。结果 :加入XO -HPX体系造模后 ,海马神经元突触、胞体长径和细胞存活数均有不同程度的减少 ;尼氏染色后经计算机图象分析 ,在不同时相测得茯苓生脉饮组尼氏小体积分光度值均高于空白对照组 (P <0 0 1)。结论 :茯苓生脉饮能有效地清除自由基 ,促进细胞内蛋白质的合成     

六味地黄汤及其活性组分含药血清对原代培养海马神经元的保护作用

目的：运用血清药理学方法观察六味地黄汤（LW）及其活性组分（CA4、CA4－3）含药血清对原代培养胚胎大鼠海马神经元的保护作用。方法：首先通过MTT法观察了LW及CA4、CA4－3对海马神经元存活的影响,进而采用流式细胞术观察LW及CA4、CA4－3对海马神经元线粒体膜电位的影响。结果：LW及CA4、CA4－3含药血清均可不同程度地提高海马神经元的存活率,并且稳定线粒体膜电位与其神经保护作用具有密切关系。     

天麻素对酸中毒诱导的大鼠海马神经元损伤的保护作用

脑组织pH值下降、酸中毒是很多疾病如脑外伤、癫痫、脑中风的病理现象,也是导致神经元损伤的主要致病因素[1,2]。天麻素是天麻的主要有效成分,具有抗谷氨酸兴奋性毒性和氧自由基损伤作用[3,4],并且广泛用于神经系统疾病的治疗。近年来,对天麻素的药理作用展开了广泛的研究,如抗     

黄芪甲苷对谷氨酸诱导大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的:探讨黄芪甲苷对谷氨酸诱导大鼠海马神经元损伤的保护作用及其机制。方法:将培养7~9天大鼠海马细胞随机分为对照组、黄芪甲苷组、谷氨酸损伤组、黄芪甲苷预处理组。采用噻唑蓝法测定细胞存活率,比色法测定培养液中乳酸脱氢酶含量,流式细胞仪测定细胞凋亡率;2,7-二氢二氯荧光黄双乙酸钠探针法检测细胞中活性氧的水平,酶联免疫吸附法检测细胞上清液中8-羟基脱氧鸟苷的含量。结果:0.1 mmol/L谷氨酸作用于海马神经元24小时后,细胞存活率下降、培养液中乳酸脱氢酶含量、细胞凋亡率、细胞中活性氧的水平及上清液中8-羟基脱氧鸟苷的分泌量均明显升高。于损伤前加入黄芪甲苷(0.08,0.40,2.00mg/L)孵育30 min可以不同程度提高细胞存活能力,减少乳酸脱氢酶的漏出,降低细胞凋亡率和上清液中8-羟基脱氧鸟苷的分泌量,但以0.40,2.00 mg/L黄芪甲苷预处理组效果更明显。单纯黄芪甲苷组存活率、细胞凋亡率与正常对照组相比无显著差异,但细胞中活性氧的水平以及上清液中8-羟基脱氧鸟苷的分泌量明显降低。结论:黄芪甲苷预处理能减轻谷氨酸诱导的海马神损伤,其机制可能与其抗氧化有关。     

厚朴酚对喹啉酸致海马神经元损伤的保护作用

已有研究表明谷氨酸能神经系统的异常与老年性痴呆的发病关系密切。厚朴酚（magnolol，Mag）是从传统中药厚朴（Magnolia officinalis Rehd．et Wils）中提取的一种含有酚羟基的生物活性物质。其脂溶性较高，能够通过血脑屏障，以肝代谢和肾排泄为主。以往研究表明Mag具有抗炎、抗菌、抗自由基、肿瘤抑制等作用。近来有报道Mag通过抗自由基作用对脑缺血有保护作用，     

左旋四氢巴马汀对大鼠海马神经元细胞钙超载损伤的保护作用

目的研究左旋四氢巴马汀（1-THP）对氯化钾所致大鼠海马神经元胞内钙超载的影响。方法原代培养大鼠海马神经元细胞,分为4组：空白对照组、1-THP1／lmol／L组、1-THP10ILmol／L组、1-THP100μmol／L组。应用激光扫描共聚焦显微镜实时扫描,观测大鼠海马神经元胞内钙的荧光强度变化。结果在静息状态下（1～100）／2μMol／L左旋IN氢巴马汀对胞内钙浓度（[Ca2＋]i）均无影响。左旋IN氢巴马汀对60mmol／LKCl诱导的外钙内流引起的胞浆钙升高有抑制作用。对照组、1μMol／L1—THP、10μmoL／L1—THP、100Hmol／L1THP的峰值荧光强度增加分别为（64．3±2．8）％、（46．3±3．1）％、（34．2±1．5）％、（20．8±1．2）％（P〈0．05）。左旋四氢巴马汀对10mmol／L。Caffeine诱导细胞内钙库的钙释放,引起的胞浆钙升高有抑制作用。对照纽、1μmol/L1-THP、10μmol／L1-THP、100μmol／L1—THP峰值荧光强度增加分别为（53．9±4．3）％、（48．2±3．9）％、（44．3±4．6）％、（35．5±3．2）％（P〈0．05）。结论左旋四氢巴马汀可以通过减轻损伤诱发的海马神经元细胞内钙超载程度来保护海马神经元。     

益智饮对血管性痴呆大鼠学习记忆能力及海马神经元保护作用的实验研究

目的 :观察中药自拟方益智饮对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆能力及海马神经元超微结构的影响。方法:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、益智饮组、吡拉西坦组,采用大鼠双侧颈总动脉反复夹闭并再通,同时腹腔注射硝普钠降低血压的方法复制VD模型。用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力;电子显微镜观察VD大鼠海马神经元超微结构的变化。结果 :益智饮能明显缩短VD大鼠平台逃避潜伏期,增加VD大鼠平台穿越次数;减轻VD大鼠海马神经元损伤。结论:益智饮能改善VD模型大鼠的学习记忆能力,保护海马神经元。     

Neuroprotection of n-Butanol Extract from Roots of Potentilla anserina on Hypoxic Injury in Primary Hippocampal Neurons

Objective To investigate the protective effect of n-butanol extract from the roots of Potentilla anserina (NP) on hypoxic hippocampal neurons in neonatal rats. Methods Primary cultured hippocampal neurons were pretreated with different concentration of NP (0.25, 0.0625, and 0.0156 mg/mL) before incubation in a low oxygen (0.1%) environment for 4 h. Cell viability was evaluated by Trypan blue staining assay. Lactate dehydrogenase (LDH) released by neurons into the medium was measured. The activity of superoxide dismutase (SOD) in cell cytosol was determined using nitroblue tetrazolium. Morphological changes and mitochondrial function were observed by transmission electron microscopy. Results Hypoxic injury could decrease the cells viability of neuron, enhance LDH release (P < 0.05), decrease SOD activity, and increase mitochondrial injury. Pretreatment with NP significantly increased cell viability, decreased LDH release (P < 0.05), promoted SOD activity (P < 0.05), and remarkably improved cellular ultra-microstructure compared with the model group. Conclusion NP could protect the primary hippocampal neurons from hypoxic injury by attenuating mitochondrial cell death.     

大鼠海马神经细胞体外原代培养与鉴定

目的建立较为简便的新生乳鼠海马神经细胞原代培养方法。方法急性分离新生24h内的大鼠乳鼠海马组织,用胰蛋白酶消化与机械吹打相结合的方法分离海马神经细胞,以含10%胎牛血清的培养基种植、无血清饲养液维持饲养,神经微管相关蛋白2(Map-2)鉴定神经元纯度。结果培养8d,神经元胞体清晰,结构完整,神经元纯度最高达到85.71%。结论该法无需严格控制消化时间,也不使用阿糖胞苷纯化细胞,即能够获得生长状态良好、纯度较高的神经元。     

脱氢表雄酮对原代培养大鼠大脑皮质神经元谷氨酸释放的影响

 目的观察脱氢表雄酮对大鼠大脑皮质神经元谷氨酸释放的影响。方法原代培养的SD大鼠大脑皮质神经元经不同浓度(1×10^-7、1×10^-6、1×10^-5mol·L^-1)和不同作用时间(0.5,1,1.5,2,5,24,36,48,72h)的脱氢表雄酮处理后,采用OPA-巯基乙醇柱前衍生,荧光检测-高效液相色谱法测定细胞培养液中谷氨酸的含量。结果与对照组相比,不同浓度的脱氢表雄酮处理后,细胞培养液中谷氨酸的水平均下降(P<0.05或P<0.01);与对照组相比,脱氢表雄酮处理组1,1.5,2,5,24,36,48,72h细胞培养液中谷氨酸的水平均下降(P<0.05或P<0.01)。结论脱氢表雄酮可抑制神经元谷氨酸的释放,这可能介导了其对抗谷氨酸兴奋性毒性的作用。     

葡萄籽原花青素对原代培养海马细胞氧化应激的影响

目的:研究葡萄籽原花青素(GSP)对过氧化氢(H2O2)诱导大鼠原代培养海马细胞氧化应激损伤的影响。方法:采用原代培养的方法,建立H2O2致海马细胞氧化损伤模型,观察细胞形态学变化;MTT法测定细胞活力;化学比色法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,以及活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量。结果:1 mmol/L的H2O2诱导海马细胞24 h,细胞活力下降(均P<0.01),细胞内ROS和MDA含量增加,SOD、CAT及GSH-Px活性下降。而GSP可明显减少细胞损伤,使细胞内SOD、CAT及GSH-Px活性增加,并减少细胞内ROS和MDA含量。结论:GSP对H2O2诱导的海马神经细胞氧化应激损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高海马细胞的抗氧化能力有关。     

丹参酸B抗体外培养的海马神经元OGD损伤的作用机制研究

目的 建立SD乳鼠海马神经元离体糖氧剥夺(OGD)模型,探讨丹酚酸B保护神经元的作用机制.方法 将原代培养的海马神经元随机分为空白组、OGD模型组、丹酚酸B组(小、中、大剂量)和丹红注射液组;倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法测定细胞活力;采用黄嘌呤氧化酶法测量SOD活性和硫代巴比妥酸比色法(TBA)测定MDA含量.结果 OGD模型组中SOD活性下降,MDA含量增加;丹酚酸B组能提高SOD活性与降低MDA含量,且中剂量组疗效最佳.结论 丹酚酸B在抗自由基损伤方面对缺血缺氧再灌注损伤的海马神经元具有保护作用.     

《外科证治全生集》与《洞天奥旨》学术思想的比较研究

通过对《外科证治全生集》与《洞天奥旨》的比较研究,发现二者在重视阴阳辨证治疗、力主内治,反对轻用外治,以及温药治疗阴证等方面有着相同的学术主张,二者存在学术渊源关系。《外科证治全生集》主要在阴疽的治疗上更具优势,《洞天奥旨》相关论述内容更早且更为丰富,见解较为合理。因此,就通常所论的外科全生派及力主内治的外科学派来说,不能忽视《洞天奥旨》的学术贡献,应该从外科学术流派的角度给予它更高的学术地位。     

异虎耳草素对原代海马神经元细胞抑制性神经递质及其受体基因表达的影响

目的:观察异虎耳草素对原代海马神经元细胞γ-氨基丁酸(GABA),5-羟色胺(5-HT)含量及受体基因表达的影响,探讨其催眠作用机制。方法:体外培养SD乳鼠原代海马神经元细胞,在细胞生长状态最佳时,经神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组化鉴定纯度并给药。分为空白组,地西泮组(25 mg·L~(-1)),异虎耳草素低、中、高剂量组(5,10,20 mg·L~(-1)),共5组,给药24 h后流式细胞术检测海马神经元细胞早期凋亡率,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清液GABA,5-HT含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞内γ-氨基丁酸A型受体(GABAA)基因GABRA_1,GABRA_5,GABRB_2,γ-氨基丁酸B型受体(GABAB)基因GABBR1,5-羟色胺1A型受体(5-HT1_A)基因5-HT1_(A(A)),5-HT1_(A(B)),5-HT1_(A(C))表达的变化。结果:第7天海马神经元细胞生长状态良好,鉴定纯度 90%;与空白组比较,海马神经元细胞早期凋亡率异虎耳草素中、高剂量组显著降低(P 0. 01),GABA含量异虎耳草素高剂量组显著升高(P 0. 01),GABRA_1,GABRA_5,5-HT1_(A(A)),5-HT1_(A(C))mRNA表达异虎耳草素中、高剂量组显著升高(P 0. 05,P 0. 01),GABBR_1,5-HT1_(A(B))mRNA表达异虎耳草素各组均显著升高(P 0. 05,P 0. 01)。结论:异虎耳草素催眠作用机制可能与抑制海马神经元细胞凋亡,升高抑制性神经递质GABA含量,上调GABA与5-HT相关受体基因表达有关。     

调心方对β淀粉样蛋白所致原代培养海马神经元细胞毒模型的影响

目的：建立β淀粉样蛋白（Aβ）所致的神经细胞毒模型，探讨调心方的药敏及作用机理。方法：原代培养大鼠海马神经元，用25μmol/L 集状态的Aβ1－42建立神经细胞毒模型。采用乳酸脱氢酶（LDH）释放量来检测神经元存活率，通过透射电镜、流式细胞仪检测判断神经元凋亡，应用免疫细胞化学法研究凋亡相关基因的表达蛋白（Bcl-2、Bax、 c-Jun）。结果：神经元经Aβ1－42处理后，LDH释放增加；电镜显示细胞体积缩小、染色质固缩、或浓聚成块状位于核周边、滑面内质网扩张；流式细胞仪检测可见亚二倍体峰；Bcl-2减少，而Bax与c－Jun增加。调心方使LDH释放减少，电镜下具有凋亡形态特征的细胞减少，流式细胞仪检测显示凋亡率下降，Bcl-2增加，Bax减少，而c-Jun变化不明显。四氢氨基吖啶（THA）组神经元存活率增加，但其他指标的变化不明显。结论：调心方对Aβ1－42神经细胞毒有保护作用，可提高细胞存活率，抑制凋亡，其抑制凋亡作用的机制可能是通过提高bcl-2、降低bax基因的蛋白表达而实现。THA对神经元存活率有提高作用，但抑制神经元凋亡的作用似不明显。调心方对抑制Aβ所致神经元凋亡明显优于THA。     

星蒌承气汤和补阳还五汤对脑缺血大鼠海马神经元损伤的影响

目的:通过观察和比较星萎承气汤和补阳还五汤对脑缺血大鼠海马神经元的保护作用,明确两方治疗脑缺血的时相性特点.方法:大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、星蒌承气汤和补阳还五汤组;线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞;大鼠给药剂量为尼莫地平10.8 mg·kg-1、星蒌承气汤5.0 g·kg-1、补阳还五汤13.0 g·kg-1,造模前4d灌胃用药,脑缺血术后每天用药1次;大鼠分别于1,3,7d进行神经功能评分后取脑,测定脑组织含水量和脑梗死面积,观察海马神经元密度和病理损伤.结果:模型组大鼠神经功能明显降低(18.00±0.00 vs 7.43±1.27,8.86±1.34,10.25±1.03)、脑组织含水量增多(71.00±1.33)％ vs (79.85±1.73)％,( so.84±0.98)％,(82.86±1.15)％、脑梗死面积增大(0.00±0.00)％vs(16.73±1.13)％,(17.89±1.54)％,(19.32±1.21)％、海马神经元密度减小(153.57±15.62,118.71±9.98,79.38±6.02)、脑组织病理损伤加重;各用药组的神经功能、脑含水量、神经元密度和脑组织病理损伤均较模型组改善,尼莫地平组3d和7d、各中药组的脑梗死面积较模型组减小;与尼莫地平组比较,补阳还五汤各组的神经评分增高,7d的脑含水量减少、病理损伤减轻,两方药组的海马神经元密度增大;补阳还五汤组7d的神经功能(13.29±1.11)、脑含水量(77.94±2.00)％、海马神经元密度(124.29±11.64)、脑组织病理损伤均较星蒌承气汤改善明显.结论:星蒌承气汤和补阳还五汤对脑缺血海马神经元受损均具有保护作用,二者在缺血早期(1d和3d)的作用未见明显差异,但随着缺血时间的延长(7 d),补阳还五汤方显示出更为全面和显著的神经保护和功能修复作用.