HLA—DR基因分型中三种DNA提取法的比较

目的：寻找简便快速的ＨＬＡ－ＤＲ基因分型方法。方法：比较了标准酚－氯仿抽提法、ＮＰ－４９０法及快速盐析法抽提ＤＮＡ对ＨＬＡ－ＤＲ基因分型的影响。结果：３种方法抽提的ＤＮＡ含量、纯度、琼脂糖凝胶电泳结果及用于ＨＬＡ－ＤＲ基因分型的效果无差异,但酚－氯仿抽提法抽提ＤＮＡ所需时间比ＮＰ－４０法及快速盐析工。结论：ＮＰ＝４０法及快速盐析法可作为ＨＬＡ＿ＤＲ快速基因分型时提取ＤＮＡ的方法。     

人类白细胞抗原—I类抗原的DNA分型与临床应用

目的 采用顺序特异引物聚合酶链反应技术（ＰＣＲ－ＳＳＰ）建立汉族人群白细胞抗原－Ｉ（ＨＬＡ－Ｉ）类抗原Ａ、Ｂ位点ＤＮＡ分型方法。方法 设计合成８１个特异性引物和１对阳性对照引物,组成２０个ＰＣＲ反应用于Ａ位点分型、４１个ＰＣＲ反应用于Ｂ位点分型。结果 所有样本ＰＣＲ－ＳＳＰ基因分型均获得成功,无假阳性和假阴性出现,４０份样本的重复率１００％,总耗时５小时。分型结果经双盲验证完全符合。可准确分辨出Ａ     

HLA—DR两种分型方法的比较

目的 探讨肾移植供受体HLA-DR血清学分型与PCR-SSP基因分型方法的优缺点。方法 对已作HLA-DR血清学分型的供受体标本,进行PCR-SSP基因分型法作HLA-DR抗原分型;并对4例血清学分型为HLA-DR一个位点,而PCR-SSP为两个位点的受者,重新抽血作HLA-DR血清学业分型。结果 血清学法耗时80min,PCR-SSP法耗时145min;血清学方法误差率（不包括重新血清学分型的例数）为11.3%(受者14.7%,供者8.0%).重新作血清学分型的4例中,有1例结果为两个们点,与PCR-SSP结果一致,其余与原结果相同.结论 改进的血清学方法暂时还适合我国尸体供肾快速配型的需要.PCR-SSP法分型具有准确、简便、快速的优点,随着其方法学的不断发展将逐步取代血清学方法在HLA-DR分型中的应用。     

移植组织配型的HLA基因分型

移植已成为治疗终末期疾病的手段之一 ,而供、受体间的组织不相容性是激活免疫系统、引起移植物排斥的重要原因。ＨＬＡ系统是人类的主要组织相容性复合物 ,是一个具有高度多态性的复合遗传系统。世界范围数以万计的移植病例资料证明ＨＬＡ的相容程度对于延长移植物的存活时间相当重要 :无ＨＬＡ错配的肾移植受者的 1年、3年和 10年存活率接近亲属间活体供肾移植的水平〔1〕;越来越多的研究表明异基因骨髓移植后移植物存活率及移植后发生ＧＶＨＲ都与ＨＬＡ的基因型匹配密切相关〔2〕。由于反复输血、妊娠、再次移植而发展成具有多价细胞毒…     

质粒的制备

随着人类基因组计划的顺利进行 ,一个更为广阔且具活力和应用前景的研究领域人类基因组后计划已形成 ,并吸引全世界顶尖科学家和实验室参与。人类基因组后计划的研究内容主要涉及功能基因的分离、鉴定 ,其编码蛋白质的生物学功能及其可应用研究。本领域所采用的研究方法主要包括分子生物学、蛋白质组学和功能蛋白质学等实验方法。其中 ,分子生物学常用实验方法在研究中使用最广 ,可变性最大 ,且可选择最多。为提高我校广大科学研究者对分子生物学技术和实验方法有一较全面的了解和知晓本校可用的资源 ,特邀请本校分子生物学中心试验室根据其研究工作撰写有关分子生物学常用实验方法的介绍 ,并陆续在本刊上发表 ,供大家参考     

改进的PCR模板制备及DNA回收方法

直接用煮沸的细菌裂解液中的ＤＮＡ作为ＰＣＲ模板，扩增效果与用酚／氯仿抽提纯化的质粒ＤＮＡ作模板的结果一致，缩短了实验时间，利用简单材料因收酶切片段，省去了有机溶剂反复抽提和沉淀的步骤，回收率达了９０％，效果很好。     

中国南京地区汉族人HLA－DR4DNA的快速分型

应用ＡＲＭＳ（ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｆｒａｃｔｏｒｙｍｕｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ）方法对南京地区１００例汉族健康人ＨＬＡ－ＤＲ４进行基因分型，结果表明，本地区汉族人ＨＬＡ－ＤＲ４基因纯合子占６％，杂合子占１５％，非ＤＲ４占７９％。本法较ＰＣＲ／ＳＳＯ法简单、快速，结果可靠，可用于ＨＬＡ配型。检测结果为ＨＬＡ相关联疾病及人类学的研究提供了参考依据     

血清学业民DNA方法用于人类白细胞抗原—Ⅰ类分型的比较研究

双盲比较血清学和聚合酶链反应－单链构象多态性分析方法用于汉族人群人类白细胞抗原１（ＨＬＡ－Ⅰ）类分型的结果。方法临床样本５２５份,采用微量淋巴细胞毒技术血清学方法和ＰＣＲ－ＳＳＰ技术ＤＮＡ方法行ＨＬＡ－Ａ、Ｂ抗原分型,比较其准确性、重复性和临床实用性。     

用样本工作站批量提取全血中DNA方法的建立

目的 建立一种用斯达尔样本工作站提取全血中DNA的方法,并评价DNA的纯度和产量.方法 使用斯达尔样本工作站提取全血DNA;DNA的纯度和含量用紫外分光光度法测定,并与手工提取方法进行比较.结果 斯达尔样本工作站与手工提取的DNA相比,在纯度与得率方面无差异,但更快速、简单.结论 本方法可以快速、高效地从大批量全血中提取较高质量的DNA,所得DNA适用于HLA的分型实验.     

造血干细胞移植中HLA—A、B、C基因分型影响因素的探讨

目的：为提高造血干细胞移植供—受体HLA-I类配型的准确度、特异性和分辨率，对HLA—A、B、C位点基因分型的影响因素进行探讨。方法：分别采用2％EDTA钠盐、钾盐和肝素抗凝血标本，提取200例造血干细胞移植供—受体的外周血DNA，采用美国PEL—FREEZ微量SSP^TM HLA—1类分型试剂盒对该200例标本进行基因分型，并对其影响因素进行分析。结果：2％EDTA钠盐抗凝血标本扩增效果好于2?TA钾盐抗凝和肝素抗凝。DNA浓度范围为25-200ng／μl，最佳浓度为100ng／μ1，A260／A280比例在1．65—1．80之间。溴化己锭(EtBr)浓度为0．2—0．5μg／ml，EtBr量不足将导致无反应带或反应带变弱，EtBr量过多使凝胶本底偏高，影响阳性带的判定。DNA Tag酶的最终反应浓度为0．05U／μl，其活性的高低将直接影响反应结果。结论：确立了HLA——A、B、C位点基出分型PCR—SSP的最佳实验条件，必将提高临床造血干细胞移植供—受体HLA—1类配型的准确度、特异性和分辨率。     

一种简单快速制备动物线粒体DNA的方法

目的探索通过核质分离的方法制备mtDNA。方法利用TritonX 100等非离子型去污剂能溶解除核被膜以外的所有细胞膜的特点 ,通过适当离心 ,分离细胞核/细胞质来获取mtDNA。结果所得mtDNA样品纯度产率较高 ,且无核DNA污染。结论此方法简单快速 ,方法重复性好 ,值得推广应用。     

LAS样本前处理流程监控的实现

目的 建立临床实验室信息系统(clinical laboratory information system CLIS)对实验室自动化系统(laboratory automation system LAS)的样本检测前处理流程进行实时监控,实现"高品质、高效率、高自动化"管理.方法 在临床实验室信息系统的信息流管理支撑下,根据医嘱条码信息,实现CLIS实时监控LAS上的样本按检测项目分类及随机编号、离心与开盖及根据实验要求完成样本分杯和将离线检测样本传送到特定区域待检的前处理流程.结果 建立完善实验室内检测的信息化监管系统,利用LAS强大的样本处理功能,改变以往样本检测前处理流程中无法有效节点实时监控,规范实验室检测管理.结论 CLIS对LAS的样本检测前处理流程的实时监控,实现CLIS有效的实验室业务流监控机制,对于规范实验室管理具有重要意义.     

新疆维吾尔族抑郁症基因样本库的初步建立及应用

目的：初步建立标准的新疆维吾尔族抑郁症 DNA样品库,并进行 TPH-2基因多态性的研究。方法收集2010年1月-2013年1月于新疆医科大学第一附属医院精神科及新疆其他精神病院治疗的800例维吾尔族抑郁症患者的一般人口学资料、临床信息及DNA样本。DNA样品经质量控制后,保存于新疆医科大学第一附属医院重大疾病资源标本库,并建立与之一一对应的临床资料数据库,进行危险因素的评估。采用 DNA直接测序法进行TPH-2基因多态性与抑郁症自杀倾向的关联性研究。结果（1）初步应用DNA样品库后发现 rs7305115位点中基因型成功测定率为99．6％。（2）不同文化程度、职业的患者 HAMD-17评分差异均有统计学意义（P均＜0．05）;（3）基因型 A/A、A/G、G/G的 HAMD-17评分差异无统计学意义（P ＞0．05）;（4）无自杀倾向组和有自杀倾向组间 rs7305115位点等位基因与基因型分布频率差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论初步建立了标准的新疆维吾尔族抑郁症DNA样品库,文化程度和职业可影响疾病的严重程度,未发现 TPH-2基因与抑郁症自杀倾向存在明显关联。     

一种从凝胶中直接回收DNA进行PCR的方法

分子生物学实验中，常常需要从琼脂糖凝胶或聚丙酰胺凝胶中回收DNA，进行纯化、探针标记或进一步扩增等。鉴于PCR反应具有高度敏感性，微量模板即可扩增出阳性产物。我们从琼脂糖凝胶中直接回收DNA进行PCR，取得较满意的结果，报道如下。     

肿瘤坏死因子αDNA疫苗的制备及其对肿瘤的治疗作用

目的观察pcTNFα真核表达质粒对小鼠Lewis肺癌瘤局部注射的治疗效果及相关免疫机理。方法用双酶切的方法由pBluescdpt／TNFα载体上切下TNFα基因片段，构建真核表达载体，转染COS及Hda细胞，并对小鼠Lewis瘤体内注射pcTNFα重组质粒，观察疗效。结果构建了携带TNFα的重整pcTNFα真核表达质粒，肿瘤局部注射pcTNFα组肿瘤生长缓慢，存活期比对照组明显延长。结论pcTNFα真核表达质粒对小鼠Lewis瘤局部注射，有一定的抗肿瘤效应。     

依赖于STR的法医学DNA分型技术研究进展

ＤＮＡ分型技术 ,又称ＤＮＡ指纹技术 ,是对人类基因组中具有多态性的重复序列进行基因分型的技术。该技术首先出现在 2 0世纪 80年代中期 ,它的出现使法医学实验室根据一个人的体液进行个体识别的能力有了划时代的进步 ,从而摆脱以前依赖于血型、血清酶型和ＨＬＡ等技术而无法对个体识别做出肯定结论的尴尬境况。在过去的 16年里 ,现代分子生物学技术在法医遗传学中的应用使个体识别和亲权鉴定技术得到飞速发展 ,现在分析样本所需ＤＮＡ的量仅为 1985年英国遗传学家ＡｌｅｃＪｅｆｆｒｅｙｓ进行第一次ＤＮＡ分型所需量的 1/2 5～ 1/10 0 ;…     

随机扩增多态性DNA分型法用于酵母菌基因分型

目的 研究酵母菌随机扩增多态性DNA分型法(RAPD)的最佳实验条件。方法 在改变引物、Mg^2 、模板浓度、Taq多聚酶用量等不同条件下，采用RAPD法对酵母菌进行基因分型。结果 经优化后的RAPD方法能清晰地对酵母菌进行基因分型。结论 RAPD是从分子水平对酵母菌感染进行病原学、流行病学研究的一种快速、可靠的分子生物学分型方法。     

乙肝病毒基因分型与HBV—DNA水平及HBeAg之间关系的探讨

目的：探讨HBV基因型与HBV—DNA水平及HBeAg之间关系。方法：对85例表面抗原阳性患者进行基因分型、HBV—DNA水平的检测及ELISA法检测HBeAg后进行分析。结果：基因分型为B型9例，C型70例，BC混合型1例，未分型5例。烟台地区HBV基因型以C型为主，占82．3％（70／85）。C型HBV—DNA水平及HBeAg阳性率分别为92．8％（65／70）、62．9％（44／70）.C型HBV—DNA水平显著高于B型，C型HBeAg阳性率明显高于B型。结论：烟台地区HBV基因型主要以C型为主，B型次之，在慢性乙型肝炎患者中性别不是基因型构成差别的因素。C基因型肝脏损害比B型重。