羊膜移植治疗急性角膜碱烧伤的实验研究--基质金属蛋白酶及其抑制剂表达的测定

目的 探讨新鲜羊膜移植术在早期角膜碱烧伤治疗中的作用机制。方法36只新西兰大白兔制作角膜碱烧伤模型，分为新鲜羊膜移植组、保存羊膜移植组和对照组。术后每日观察新生血管生长情况，并于术后7天、14天应用计算机图像分析系统对角膜表达基质金属蛋白酶(MMPs)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)进行半定量测定。结果术后新鲜羊膜移植组角膜新生血管发展缓慢，MMFs角膜表达降低而TIMP-1表达升高。结论羊膜移植可通过提高角膜表达基质金属蛋白酶抑制剂-1的水平来抑制基质金属蛋白酶的活性，从而在早期角膜碱烧伤的治疗中起抑制角膜溃疡和新生血管形成的作用，且这一作用新鲜羊膜要明显优于保存羊膜。     

羊膜移植对兔角膜碱烧伤后局部白介素-6分泌的影响

目的观察羊膜移植对兔角膜碱烧伤后泪液中白介素-6（interieukin-6，IL-6）分泌的影响。方法制作30只新西兰白兔角膜碱烧伤模型，分为羊膜移植组（20只）与对照组（10只）。术后3周内每3日1次分别检测两组兔泪液中IL-6的含量。结果①烧伤后24h内，两组兔泪液中IL-6的水平相似。②此后羊膜移植组泪液中IL-6水平略有升高，1周后开始降低，第21天时基本测不出；而对照组持续升高，第21天时仍保持较高的水平。结论羊膜移植可有效抑制局部炎症细胞IL-6的释放，在角膜碱烧伤后的抗炎治疗方面具有重要的临床意义。     

羊膜移植及丝裂霉素对碱烧伤大鼠角膜缘基质微环境的影响

目的观察羊膜移植及丝裂霉素C（MMC）对碱烧伤大鼠角膜缘基质微环境的影响。方法采用SD大鼠角膜缘碱烧伤模型。将大鼠随机分为5个组：A组为正常组,B组为羊膜移植组,C组为羊膜移植联合MMC组,D组、E组为未干预组（D组为碱烧伤1周组,E组为碱烧伤2周组）。通过苏木精-伊红染色观察病理学改变,免疫组织化学技术观察髓过氧化物酶（MPO）、肝细胞生长因子（HGF）免疫染色阳性细胞数的变化。结果干预组（B组、C组）较未干预组（D组、E组）角膜上皮完整、基质细胞浸润减轻、新生血管减少,组织病理学染色证实角膜缘及其周边上皮细胞为多层结构,角膜新生血管减少及基质中炎性细胞浸润减轻。免疫组织化学结果显示MPO及HGF含量明显减少,B组、C组之间MPO含量差别不明显,C组中的HGF含量明显减少,上皮细胞层数轻微减少。结论羊膜移植和羊膜移植联合MMC可以改善角膜缘碱烧伤大鼠模型中的角膜缘基质微环境,MMC可能通过抑制成纤维细胞分泌HGF而影响上皮细胞的增生和移行。     

羊膜移植对碱烧伤大鼠角膜缘干细胞的影响

目的观察羊膜移植对碱烧伤大鼠角膜缘干细胞的影响。方法SD大鼠40只制作眼碱烧伤模型,单眼行眼碱烧伤;随机选取20只大鼠（20眼）为实验组,20只大鼠（20眼）为对照组;实验组行新鲜羊膜移植,对照组不处理,观察大鼠眼表情况。并于术后1周、2周、3周、4周取角膜缘组织,采用免疫组化技术观察p63蛋白在角膜缘干细胞的表达情况。结果p63在实验组和对照组的角膜缘干细胞中均有表达,位于角膜缘上皮细胞基底层的细胞核内。但实验组明显高于对照组,两者比较有统计学意义（P〈0．05）。且随着烧伤时间的延长,p63的表达呈线性下降趋势。结论眼碱烧伤后行羊膜移植,能促进角膜缘干细胞的增生、分化,利于角膜上皮的修复。     

角膜碱烧伤新鲜羊膜移植治疗对自由基反应的影响

目的 探讨新鲜羊膜移植在早期角膜碱烧伤治疗中与自由基反应的关系。方法 48只兔制作角膜碱烧伤模型,分为新鲜羊膜移植组、保存羊膜移植及对照组,烧伤后24小时分别实施手术。术后14天及30天处死实验兔取材房水及角膜组织,检测其超氧化物歧化酶活力及丙二醛含量。结果 新鲜羊膜移植组及保存羊膜移植组的丙二醛含量均低于对照组,超氧化物歧化酶活力均高于对照组。术后14天新鲜羊膜移植组角膜超氧化物歧化酶活力高于保存羊膜组。术后30天新鲜羊膜组角膜及房水丙二醛含量均低于保存羊膜组。结论 新鲜羊膜移植在早期角膜碱烧伤治疗中能减轻自由基质应对照组织的损伤,其效果优于保存羊膜移植。     

羊膜移植对实验性HSK中基质金属蛋白酶表达的影响

目的研究羊膜移植（AMT）对单纯疱疹性角膜炎（HSK）中基质金属蛋白酶（MMP-2，-9）表达的影响。方法40只BALB／c小鼠角膜感染Ⅰ型单纯疱疹病毒（HSV-1），实验组角膜行AMT。术后第0、2、7、14d取出角膜。常规病理切片、免疫组化染色和计算机图像分析检测角膜中MMP-2及-9的表达及平均光度值的变化。结果对照组20只鼠眼中17只发生HSK；AMT组仅有9只眼发生，差异有显著统计学意义（P〈0．01）。AMT组角膜上皮、基质病变程度及新生血管发生率明显低于对照组（P〈0．05）。免疫组化及图像分析显示对照组角膜细胞和浸润炎性细胞中表达的MMP-2及-9在第2d增加，14d时达高峰。AMT组各时间点MMP-2及-9表达低于对照组，差异有显著统计学意义（P〈0．05）。结论羊膜移植可能通过抑制角膜细胞及浸润的炎症细胞产生MMPs，从而抑制HSK的发生和发展。     

羊膜移植对兔角膜碱烧伤早期MMP-2和TIMP-2表达的影响

目的研究羊膜移植在兔角膜碱烧伤早期治疗中的作用机制。方法对60只新西兰白兔随机分为碱烧伤组、羊膜移植组及正常对照组,实验组建立角膜碱烧伤模型,羊膜移植组于烧伤后30min实施羊膜移植手术。术后14、30、60d,观察分析角膜病理组织学改变;并应用计算机图像分析系统对角膜组织中基质金属蛋白酶-2（Matrix metalloproteinase-2,MMP-2）和基质金属蛋白酶组织抑制剂-2（Tissue inhibitors of metalloproteinase-2,TIMP-2）的表达进行半定量测定。结果羊膜移植组角膜浸润及角膜基质坏死溃疡程度均较同期碱烧伤组为轻,角膜MMP-2的表达显著降低（P〈0.05）,而TIMP-2表达显著升高（P〉0.05）。结论羊膜移植可提高角膜TIMP-2表达的水平并抑制MMP-2的活性,从而在角膜碱烧伤的早期治疗中起到抑制角膜炎症和溃疡的作用。     

GM6001对碱烧伤角膜组织中基质金属蛋白酶表达及活性的影响

目的 检测正常和碱烧伤后不同时间角膜组织中明胶酶(MMP-2，MMP-9)和胶原酶(MMP-1)的表达，探讨在角膜融解发生中的作用．方法 兔角膜碱烧伤20眼，分为对照组和GM600l治疗组，于伤后12、24、48、72h，1、2周和1个月取材，酶谱法检测角膜组织中明胶酶MMP-2、MMP-9的表达，Western blot检测胶原酶MMP-1的表达。结果 在正常兔角膜中，仅检测到微弱的明胶酶原MMP-2，碱烧伤后1周后开始明显升高，至烧伤后1个月维持较高水平，并在2周时出现MMP-2活性酶的表达，并持续至烧伤后1个月。明胶酶MMP-9在正常角膜组织中检测不到，但烧伤后24h开始表达，于烧伤后1周达到最高，然后逐渐下降，至伤后1个月已检测不到。胶原酶MMP-1在正常组织中检测为阴性，从伤后24h开始升高，1个月内无下降。GM6001治疗组角膜组织MMP-2、MMP-9及MMP-1的表达均明显低于对照组。结论 基质金属蛋白酶参与碱烧伤角膜组织的融解，GM6001可抑制MMPs的活性，进而抑制角膜融解的发生。     

碱烧伤小鼠行羊膜移植后MMP及TIMP表达的变化

目的:通过检测羊膜移植对小鼠角膜碱烧伤后不同时间点基质金属蛋白酶(metalloproteinases,MMP-2,8,9)及金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMP-1,2)的表达,探讨羊膜移植在碱烧伤病程中所起的作用。方法:将40只Balb/c小鼠随机分为实验组和对照组,采用1mol/L氢氧化钠溶液烧伤小鼠角膜;实验组小鼠右眼行羊膜移植加睑裂缝合术,对照组仅行睑裂缝合术。分别在羊膜移植后的第0,2,7,14d处死小鼠,应用Western blot检测不同时间点MMP-2,8,9及TIMP-1,2的表达,增强化学发光法(enhanced chemiluminescent,ECL)对结果进行分析。结果:对照组角膜中MMP-2,8,9在第2d出现表达,第14d达到峰值,且表达主要位于基质层及上皮下的炎性细胞中。碱烧伤后第2d TIMP-1仅微弱表达,第7d可见表达增加,第14d到达峰值。TIMP-2第2d即可见表达增加,后持续增强。实验组各时间点MMP-2,8,9表达均低于对照组(P<0.01),TIMP-1,2的表达均高于对照组(P<0.01)。结论:行羊膜移植可通过抑制MMP的表达,促进TIMP表达,从而抑制和延迟碱烧伤后角膜炎性浸润及溃疡的发生和发展,对碱烧伤后角膜的重塑起着重要作用。     

新鲜羊膜移植对碱烧伤大鼠角膜缘干细胞增殖效应的影响

目的：观察新鲜羊膜移植对碱烧伤大鼠模型角膜缘干细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达的影响。

方法：SD大鼠40只40眼制作眼碱烧伤模型; 随机选取20只20眼行新鲜羊膜移植为实验组,对照组为不处理的烧伤模型眼。于术后1,2,3,4wk取角膜缘组织,采用免疫组化技术观察PCNA在角膜缘干细胞的表达情况。

结果：PCNA在实验组和对照组的角膜缘干细胞中均有表达,位于角膜缘上皮细胞基底层的细胞核内,但羊膜移植组显著高于对照组,两者比较有统计学意义(P<0.05); 羊膜移植术后1,2,3,4wk时PCNA蛋白在角膜缘干细胞的表达不一致,呈线性趋势,1wk达到高峰,以后逐渐降低。

结论：眼碱烧伤后行羊膜移植术可促进角膜缘干细胞的增殖表达,利于角膜上皮的修复。     

新鲜羊膜移植治疗兔角膜碱烧伤的光镜和电镜观察

目的观察新鲜羊膜移植治疗兔角膜碱烧伤的组织学变化。方法21只（42眼）新西兰大白兔制作角膜碱烧伤模型；15只（30眼）为实验组，6只（12眼）为对照组；实验组行新鲜羊膜移植术，对照组不处理。分别取术后第1周、第2周、第4周的角膜进行光镜及电镜观察。结果术后第1周、第2周及第4周观察发现，对照组眼表面及角膜基质中有较多的炎性细胞浸润，上皮形状不规则，排列不整齐，第4周表现最明显；实验组炎性细胞浸润较少，上皮排列较整齐，显示新鲜羊膜有较强的抑制炎症并促进上皮生长的作用。通过透射电镜观察，发现新鲜羊膜移植组角膜上皮生长良好、表面有丰富的微绒毛、胶原纤维排列整齐，细胞间桥粒连接较多；对照组无上皮生长，胶原纤维排列紊乱。结论新鲜羊膜移植术在角膜碱烧伤治疗中有抑制炎症反应、促进上皮生长的作用，能够有效地促进角膜上皮的愈合及细胞之间的紧密连接。     

新鲜羊膜移植术对角膜新生血管抑制作用的实验研究

目的探讨新鲜羊膜移植术对角膜碱烧伤后角膜新生血管和上皮愈合作用的影响,并与保存羊膜作比较.方法用48只新西兰大白兔制作角膜碱烧伤模型,烧伤后48h设立新鲜羊膜移植组(fAMT)、保存羊膜移植组(pAMT)和对照组(C).术后每日观察角膜新生血管和上皮愈合情况.并于术后14、30d以计算机图像分析系统定量测定新生血管和上皮愈合面积.结果术后30dfAMT组、pAMT组、C组角膜新生血管面积分别为87.87mm2±3.57mm2、96.66mm2±12.00mm2、105.13mm2±6.70mm2.统计分析显示,fAMT组角膜新生血管面积小于pAMT组(P＜0.05),上述2组均小于C组(P＜0.05).结论新鲜羊膜移植术可抑制碱烧伤后角膜新生血管生长,其作用优于保存羊膜移植术.     

新鲜羊膜移植治疗急性期眼碱烧伤的临床观察

目的 观察新鲜羊膜移植治疗急性期眼部碱烧伤的疗效。方法 采用新鲜羊膜移植治疗急性期眼部碱烧伤22例（24眼）。结果 所有患者眼表迅速稳定，平均随访11．5月，病情未进展。结论 新鲜羊膜移植可有效重建眼表面，且新鲜羊膜来源广，是临床上治疗急性期眼部碱烧伤的一种有效的手段。     

羊膜移植抑制兔角膜碱烧伤后新生血管增殖的研究

目的　比较采用保存羊膜和新鲜羊膜移植抑制角膜碱烧伤后新生血管增殖的效果 ;探讨应用保存人羊膜移植防治角膜碱烧伤后新生血管的手术时机。方法　制备角膜碱烧伤后新生血管增殖的动物模型 ;2 2只家兔 ( 2 2眼 )随机分为4组 :A组 ( 4眼 )作为对照组 ;B组 ( 6眼 )在碱烧伤的急性期行新鲜羊膜移植 ;C组 ( 6眼 )在急性期行保存人羊膜移植 ;D组 ( 6眼 )在瘢痕期行保存人羊膜移植。应用计算机彩色图像处理系统测定角膜新生血管面积。结果　 3个移植组和对照组比较 ,角膜新生血管面积的差异均有显著性意义 (P <0 0 1) ;B组与C组比较无显著性差异 (P >0 0 5 ) ;C组的新生血管面积明显少于D组 (P <0 0 1)。结论　保存羊膜和新鲜羊膜移植均能有效地抑制角膜碱烧伤后新生血管的增殖 ,治疗效果无显著性差异 ;在角膜碱烧伤的急性期施行羊膜移植防治新生血管增殖的效果要优于在瘢痕期手术。     

角膜碱烧伤早期羊膜移植治疗对t-PA和PAI-1活性的影响

目的 探讨羊膜移植在治疗早期兔角膜碱烧伤中的疗效及其对组织型纤溶酶原激活剂（tissue-type plasminogenactivator,t-PA）和1型纤溶酶原激活剂抑制剂（plasminogen activator inhibitor 1,PAI-1）活性的影响.设计随机对照实验研究.研究对象72只新西兰白兔,随机分为碱烧伤组、新鲜羊膜移植组、保存羊膜移植组及正常对照组,每组18只.右眼为实验眼.方法 制作角膜碱烧伤模型,烧伤后30分钟实施手术.术后第14、30、60天,通过计算机图像分析系统分析角膜情况;并用发色底物法检测角膜组织浸液中t-PA和PAI-1的活性.主要指标角膜上皮荧光染色、角膜烧伤斑面积和平均光密度,t-PA及总PAI-1活性,t-PA/PAI-1比值.结果 术后第14、30、60天,新鲜羊膜移植组及保存羊膜移植组t-PA活性和t-PA/PAI-1与碱烧伤组相比均显著下降（P＜0.01）.术后第14天,新鲜羊膜移植组t-PA活性明显低于保存羊膜移植组（P=0.022）,而总PAI-1活性明显高于保存羊膜移植组（P=0.001）;术后第14、30天,t-PA/PAI-1明显低于保存羊膜移植组（P=0.000,P=0.030）.结论 羊膜移植术后t-PA活性和t-PA/PAI-1显著下降,证实羊膜具有抑制炎症、抑制瘢痕、促进上皮愈合的功能;新鲜羊膜优于保存羊膜.     

羊膜移植治疗眼重度碱烧伤的护理

目的探讨新鲜羊膜移植治疗眼表急性重度碱烧伤的护理方法。方法术前采取有效的护理措施和针对性心理护理,术后严密观察植片生长和角膜创面愈合情况,保护眼部,加强点眼护理,去除引起泪膜异常的因素,做好出院指导等措施。结果采取以上护理措施,35例38眼均保全了眼球,眼表损伤迅速稳定,角膜不再继续融解,无穿孔发生,无新生血管长入,无睑球粘连并发症发生。结论系统的术前、术后护理以及针对性心理护理是提高手术成功率和减少术后并发症的重要保证。     

羊膜移植术治疗眼碱烧伤后角膜溃疡

目的观察羊膜移植术对治疗严重眼表碱烧伤后角膜溃疡的临床疗效。方法严重角膜碱烧伤患者20例（23眼）,Ⅲ度13眼,Ⅳ度10眼,根据病情不同施行新鲜羊膜1次或多次冷冻保存羊膜移植治疗,随访1个月,通过观察患者术后视力及眼表的完整性来评价疗效。结果10眼行1次羊膜移植术,6眼行2次羊膜移植术,4眼行3次羊膜移植术,2眼行永久性睑裂缝合术,1眼行眼球摘除术。术后1个月,20只行羊膜移植术的患眼眼表稳定,角膜溃疡愈合,荧光染色阴性,角膜呈半透明,残留云翳或斑翳。8眼的视力保持术前的水平,12眼的术后视力提高一行或一行以上,3眼视力下降。结论羊膜移植术能促进眼表碱烧伤后角膜溃疡的修复愈合,减少穿孔的发生,保存部分有用的视力。     

新鲜羊膜移植治疗眼部重症碱烧伤的临床观察

目的:探讨早期新鲜羊膜移植在治疗眼部重度碱烧伤的作用。方法:取健康的新鲜羊膜,对20例重度眼部碱烧伤患者伤后1～2d行坏死结膜清除,将羊膜上皮面向上覆盖在眼球表面,间断缝合,加压包扎2d后开放点眼。结果:除1例因烧伤后没及时处理,手术后角膜仍发生溶解而摘除眼球外,其余病例均成功保住眼球,无严重的睑球粘连,视力恢复到0.02者3眼、0.05者2眼、0.08者6眼、0.1者5眼、0.12者2眼、0.15者2眼、0.3者1眼。结论:早期新鲜羊膜移植治疗严重的眼部碱烧伤是一种简单可行、实用有效的方法。     

早期新鲜羊膜移植治疗眼部重度碱烧伤临床分析

目的:评价早期新鲜羊膜移植术治疗眼部重度碱烧伤的疗效。方法:对48例67眼重度碱烧伤患者按就诊时间分为A,B两组,烧伤0.5h～7d(包括7d)就诊者26例38眼(A组);烧伤7～20d(不包括7d)就诊者22例29眼(B组)。两组均采用新鲜羊膜移植术,术后均配戴软性角膜接触镜。3mo后观察眼表状况。结果:A组:角膜全透明者28眼,半透明者5眼,全混浊者3眼,角膜白斑者2眼,睑球粘连者2眼,有新生血管者2眼,视力≥0.4者28眼,<0.4者10眼;B组:角膜全透明者12眼,半透明者7眼,全混浊者6眼,角膜白斑者4眼,睑球粘连者13眼,有新生血管者15眼,视力≥0.4者11眼,<0.4者18眼。两组结果比较均有统计学意义(P<0.05)。结论:早期新鲜羊膜移植术可以更好的重建眼表,提高视力,是眼部重度碱烧伤的最佳治疗方法。     

重度眼表碱烧伤早期羊膜移植治疗的研究

目的 探讨新鲜羊膜早期移植在重度眼表碱烧伤的治疗效果.方法 采用新鲜羊膜早期移植治疗重度眼表碱烧伤35例38眼.结果 术后所有患眼眼表迅速稳定,20眼角膜恢复透明,10眼形成角膜白斑,4眼全角膜浑浊,3个月后24眼脱盲,视力≥0.2者11眼.结论 重度眼表碱烧伤早期进行新鲜羊膜移植可促进角膜上皮修复、抑制角膜新生血管侵入,防止睑球粘连.