三氧化二砷诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡作用的研究

目的 观察三氧化二砷(ATO)对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)凋亡的作用.方法 将HFLS-RA分为单纯培养基空白对照组和0.5、2、8 μmol/L ATO实验组.ATO作用72 h后,电镜下观察细胞的病理改变,采用四唑氮法(MTT)检测ATO对HFLS-RA生长的影响.结果 ATO可以诱导HFLS-RA的凋亡,ATO呈现时间和剂量依赖性抑制HFLS-RA生长的作用.结论 ATO可以抑制HFLS-RA的生长,促进HFLS-RA的凋亡.     

类风湿关节炎滑膜细胞凋亡过程中白藜芦醇的诱导作用及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的活化

目的 探讨来自植物中的天然活性成分白藜芦醇诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡过程中，凋亡执行因子天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的活化状态及其参与作用，并分析其浓度与时间作用。方法：实验于2003-05／10在中南大学湘雅二医院中心实验室完成。人类风湿关节炎滑膜组织取自中南大学湘雅二医院骨科2003-05诊治的1例男性50岁患者。①将手术切取的滑膜组织，剔除脂肪及纤维组织后经清洗、剪碎、消化、离心、培养、传代、获得3-5代细胞，电子显微镜观察滑膜细胞生长过程中的形态变化。②将细胞分为3组，对照组(未用药处理的滑膜细胞)；白藜芦醇组(50，100，200，400μmol／L白藜芦醇处理12h的细胞及用200μmol／L白藜芦醇处理4，8，12，18，24h的细胞)；天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3抑制剂+白藜芦醇组(先用1mmol几天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3抑制剂预处理2h，再用白藜芦醇处理的滑膜细胞)，各组均设3复管。③比色法测定用200μmol/L白藜芦醇处理后的类风湿关节炎滑膜细胞的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的相对活性；不同浓度的白藜芦醇处理12h后的类风湿关节炎滑膜细胞的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的相对活性。④采用Western-blot分析不同浓度白藜芦醇处理24h的类风湿关节炎滑膜细胞，天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3酶原的裂解。⑤实验设计为分组匹配对照。结果：①滑膜细胞培养过程中形态学改变：组织块贴壁后三四天，周边有少量滑膜细胞游走爬出。细胞呈多边形或长梭形，有两个或多个突起。培养7d左右，细胞数目增多，逐渐融合。得到第1代滑膜细胞。传代2次以上的滑膜细胞性状稳定，细胞形态以成纤维样细胞为主。②用200μmol／L白藜芦醇分别处理类风湿关节炎滑膜细胞4，8，12，18，24h．天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3活性于4h后明显升高，12h达高峰，持续至24h以上，白藜芦醇组不同处理时间与对照组比较，均显著增高(P&;lt;0．05)。③对照组及用50，100，200，400μmol／L白藜芦醇处理滑膜细胞12h，天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3活性分别为(1．00&;#177;0．07)、(1．80&;#177;0．17)、(1．96&;#177;0．18)、(2．45&;#177;0．17)、(3．25&;#177;0．24)，呈浓度依赖性的升高，白藜芦醇组不同浓度与对照组均显著增高(P&;lt;0．05)。④对照组及用50，100，200，400μmol／L处理培养的类风湿关节炎滑膜细胞24h，天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3酶原的表达随药物浓度的增加而减少，100μmol/L时开始出现活性裂解片断P11(Mr11000)，400μmol/L时P11增加。结论：①不同浓度的白藜芦醇处理类风湿关节炎滑膜细胞12h和200μmol／L白藜芦醇处理类风湿关节炎滑膜细胞时，天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的相对活性在4h开始升高，12h达高峰后缓慢下降，提示此现象具有浓度和时间的依赖性。②白藜芦醇浓度为400μmol／L时出现天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的活性裂解片断P11(Mr11000)吸光度积分值高于100μmol／L，证实了在白藜芦醇诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡过程中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3被活化，并发挥了作用。     

三氧化二砷对类风湿性关节炎滑膜细胞凋亡影响的体外研究

目的 类风湿性关节炎(Rheumatoid arthrithis,RA)滑膜细胞体外原代培养并传代至第三代,定量分析三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对滑膜细胞凋亡诱导作用.方法 双酶消化法体外传代人关节滑膜细胞.采用3代滑膜细胞;应用MTT、流式细胞术对BA滑膜细胞凋亡进行分析.结果 ①MTT法显示不同浓度的As203作用48 h后,能够抑制BA滑膜细胞增殖,且在10～80 μmol/L浓度范围内其抑制作用呈剂量依赖性.②流式细胞仪检测发现不同浓度的As2O3作用48 h后,RA滑膜细胞发生不同比率凋亡,并且在10～80 μmol/L浓度范围内其作用呈剂量依赖性.结论 不同浓度的As2O3作用48 h后RA滑膜细胞均发生凋亡并且呈剂量依赖性.     

雷公藤多甙对类风湿关节炎患者滑膜细胞凋亡的影响

目的观察雷公藤多甙（Tripterygium Glycosides,TG）对类风湿关节炎（rheumatoidarthritis,RA）患者滑膜细胞凋亡的影响,以揭示TG治疗RA可能的作用机制。方法体外培养RA患者滑膜细胞,加入不同浓度的TG,24h光镜观察其凋亡的形态学特征,并用流式细胞仪及TUNEL法检测滑膜细胞的凋亡。结果TG组凋亡细胞百分率（55±11.2）%,显著高于骨折（NC）组（P〈0.01）。结论TG可诱导滑膜细胞凋亡,这可能是其治疗RA的作用机制之一。     

类风湿关节炎滑膜细胞凋亡过程中白藜芦醇的诱导作用及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的活化

目的:探讨来自植物中的天然活性成分白藜芦醇诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡过程中,凋亡执行因子天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的活化状态及其参与作用,并分析其浓度与时间作用。方法:实验于2003-05/10在中南大学湘雅二医院中心实验室完成。人类风湿关节炎滑膜组织取自中南大学湘雅二医院骨科2003-05诊治的1例男性50岁患者。①将手术切取的滑膜组织,剔除脂肪及纤维组织后经清洗、剪碎、消化、离心、培养、传代,获得3-5代细胞,电子显微镜观察滑膜细胞生长过程中的形态变化。②将细胞分为3组,对照组(未用药处理的滑膜细胞);白藜芦醇组(50,100,200,400μmol/L白藜芦醇处理12h的细胞及用200μmol/L白藜芦醇处理4,8,12,18,24h的细胞);天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3抑制剂+白藜芦醇组(先用1mmol/L天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3抑制剂预处理2h,再用白藜芦醇处理的滑膜细胞),各组均设3复管。③比色法测定用200μmol/L白藜芦醇处理后的类风湿关节炎滑膜细胞的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的相对活性;不同浓度的白藜芦醇处理12h后的类风湿关节炎滑膜细胞的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的相对活性。④采用Western-blot分析不同浓度白藜芦醇处理24h的类风湿关节炎滑膜细胞,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3酶原的裂解。⑤实验设计为分组匹配对照。结果:①滑膜细胞培养过程中形态学改变:组织块贴壁后三四天,周边有少量滑膜细胞游走爬出。细胞呈多边形或长梭形,有两个或多个突起。培养7d左右,细胞数目增多,逐渐融合。得到第1代滑膜细胞。传代2次以上的滑膜细胞性状稳定,细胞形态以成纤维样细胞为主。②用200μmol/L白藜芦醇分别处理类风湿关节炎滑膜细胞4,8,12,18,24h,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3活性于4h后明显升高,12h达高峰,持续至24h以上,白藜芦醇组不同处理时间与对照组比较,均显著增高(P<0.05)。③对照组及用50,100,200,400μmol/L白藜芦醇处理滑膜细胞12h,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3活性分别为(1.00±0.07)、(1.80±0.17)、(1.96±0.18)、(2.45±0.17)、(3.25±0.24),呈浓度依赖性的升高,白藜芦醇组不同浓度与对照组均显著增高(P<0.05)。④对照组及用50,100,200,400μmol/L处理培养的类风湿关节炎滑膜细胞24h,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3酶原的表达随药物浓度的增加而减少,100μmol/L时开始出现活性裂解片断P11(Mr11000),400μmol/L时P11增加。结论:①不同浓度的白藜芦醇处理类风湿关节炎滑膜细胞12h和200μmol/L白藜芦醇处理类风湿关节炎滑膜细胞时,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的相对活性在4h开始升高,12h达高峰后缓慢下降,提示此现象具有浓度和时间的依赖性。②白藜芦醇浓度为400μmol/L时出现天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的活性裂解片断P11(Mr11000)吸光度积分值高于100μmol/L,证实了在白藜芦醇诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡过程中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3被活化,并发挥了作用。     

核心肽对类风湿关节炎滑膜细胞增殖与凋亡的影响

背景:前期研究发现,在类风湿关节炎关节腔中注入核心肽,可以明显抑制病情活跃度且抑制滑膜的浸润增生.但由于T细胞和滑膜细胞之间联系密切,核心肽是通过直接作用于滑膜细胞还是通过T细胞介导抑制滑膜细胞尚缺乏研究.目的:对比观察核心肽对类风湿关节炎和骨性关节炎滑膜细胞增殖与凋亡的影响.方法:采用酶消化法分离类风湿关节炎和骨性关节炎患者手术切取的病变滑膜组织滑膜细胞,MTT法检测滑膜细胞增殖率.取第3代类风湿性关节炎和骨性关节炎滑膜细胞分5组干预:空白对照组、甲氨蝶呤组、10,25,50 μmol/L核心肽组.MTT法检测各组滑膜细胞增殖率变化;采用流式细胞仪检测各组滑膜细胞凋亡情况.结果与结论:类风湿关节炎滑膜细胞体外增殖速度较骨性关节炎滑膜细胞快(P<0.05).3种剂量的核心肽均可抑制骨性关节炎滑膜细胞的增殖,诱导其凋亡,且具有剂量相关性,高剂量时,核心肽更明显表现出对骨性关节炎滑膜细胞凋亡的诱导作用.而对于类风湿关节炎滑膜细胞,只有中、高剂量核心肽显示出明显的诱导细胞凋亡作用,但未见明显的剂量依赖性.核心肽对类风湿关节炎滑膜细胞的凋亡诱导作用明显小于其对骨性关节炎细胞的凋亡诱导作用.结果提示核心肽对滑膜细胞具有一定的直接作用,高剂量核心肽在体外可抑制类风湿关节炎滑膜细胞的过度增殖,而中、高剂量核心肽可诱导类风湿关节炎滑膜细胞的凋亡.     

滑膜细胞代谢在类风湿关节炎中作用的研究进展

类风湿关节炎（RA）是一种全身性、难治性、自身免疫性疾病，其主要病理特点是滑膜细胞增生、衬里层增厚、多种炎性细胞浸润、血管翳形成等。这些病理改变是多种因素共同作用的结果。近年来，针对RA的发生机制展开了大量的实验研究，研究方向集中在滑膜增生、炎性因子、基因调控等方面。本文聚焦于滑膜细胞代谢在RA中的作用研究进展进行综述，期望能为其临床诊治提供新的模式及靶点。     

昆明山海棠与类风湿关节炎滑膜细胞体外增殖和凋亡

背景:昆明山海棠应用于类风湿关节炎治疗已被证实有确切疗效,但对于其作用机制目前尚不明确.目的:验证昆明山海棠对类风湿关节炎滑膜巨噬样细胞和成纤维样细胞体外增殖活性及对其凋亡影响,分析其剂量效应关系.设计、时间及地点:细胞学体外分组对照实验,于2003-08/2007-06在汕头大学医学院第一附属医院中心实验室和南方医科大学细胞生物实验室完成.材料:类风湿关节炎6例及正常滑膜组织3例,来源于汕头大学医学院第一附属医院骨科和南方医院脊柱骨病科患者术中获得的标本.昆明山海棠制备水提取液,含生药0.667 g/mL..方法:收集获得的滑膜组织,通过消化法获得原代类风湿关节炎及正常滑膜细胞,第2-4代细胞用免疫磁珠法筛选滑膜CD68~+细胞和CD68~-细胞,在接种72 h后加入实验各组分别在培养液中加入最终体积分数分别为5,10,20 mL/L的昆明山海棠药液处理24 h和48 h.同时设立不加药物的阴性对照及不加细胞空白对照.主要观察指标:相差倒置显微镜、扫描电镜观察细胞形态,用MTT法测定细胞增殖情况,流式细胞仪检测和TUNEL.法检测细胞凋亡.结果:分选后滑膜CD68~-细胞为成纤维样细胞,滑膜CD68~+细胞为滑膜巨噬样细胞.施予干预因素后,各组有部分细胞体积缩小,胞膜皱缩,微绒毛和伪足减少或消失,部分细胞可见团块脱落形成凋亡小体.当昆明山海棠体积分数为2%时,各组细胞均有不同程度抑制,显示昆明山海棠有细胞毒性,对类风湿关节炎滑膜CD68~-、CD68~+细胞的抑制效应和诱导细胞效应强于同种正常滑膜细胞(P<0.01).在药物体积分数为1%时,对类风湿关节炎滑膜细胞有明显抑制效应(P<0.01).昆明山海棠对诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡作用有明显时间依赖性和剂量依赖性,且凋亡率与相同条件下的抑制率表现出较好的直线相关关系(r=0.497,P<0.01).结论:昆明山海棠对于类风湿关节炎滑膜巨噬样细胞和滑膜成纤维样细胞有诱导凋亡和明显抑制异常增殖作用.在一定浓度下,昆明山海棠对于正常滑膜细胞毒性较小且对类风湿关节炎滑膜细胞的有较明显抑制异常增殖和诱导细胞凋亡的效应.     

青藤碱对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的影响

目的 研究青藤碱对Ⅱ型胶原蛋白诱导性大鼠关节模型（CIA）滑膜细胞凋亡的影响。方法 原位细胞凋亡检测试剂盒检测各组原代大鼠滑膜细胞凋亡的水平。结果 青藤碱组CIA大鼠滑膜细胞的凋亡数明显增加。结论 青藤碱治疗类风湿性关节炎的机制可能与诱导滑膜细胞凋亡有关。     

青藤碱对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的影响

目的研究青藤碱对Ⅱ型胶原蛋白诱导性大鼠关节模型(CIA)滑膜细胞凋亡的影响。方法原位细胞凋亡检测试剂盒检测各组原代大鼠滑膜细胞凋亡的水平。结果青藤碱组CIA大鼠滑膜细胞的凋亡数明显增加。结论青藤碱治疗类风湿性关节炎的机制可能与诱导滑膜细胞凋亡有关。     

丹参对类风湿关节炎患者滑膜细胞肿瘤坏死因子α表达的影响

目的探讨丹参对类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达的影响。方法抽取RA患者关节液进行体外培养分离滑膜细胞,在细胞培养至3～5代时,给予丹参处理,在处理48h后收集培养上清,ELISA检测TNF-α的表达水平。结果当丹参浓度依次以0,6.25,12.5,25,50,100mg/L递增时,TNF-α浓度分别为（161.68±7.55）pg/ml、（161.68±8.79）pg/ml、（163.49±25.68）pg/ml、（137.33±35.98）pg/ml、（81.32±22.84）pg/ml和（86.89±28.48）pg/ml。丹参浓度为50mg/L和100mg/L时,与加入丹参前比较差异有统计学意义（P值分别为0.001和0.004）。结论丹参可以抑制RA滑膜细胞TNF-α的分泌,并且这一抑制作用可能是其用于RA治疗的理论基础。     

丹参体外抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的研究

目的 检测丹参体外对类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLSs）增殖的影响。方法 用不同浓度丹参处理RA FLSs 24 h后,采用MTT法检测RA FLSs的增殖水平;用流式细胞仪检测其凋亡百分率。结果 加入不同浓度丹参处理RA FLSs 24 h后,细胞增殖受到抑制（P＜0.05）,并在一定丹参浓度范围内（0～1.56 mg/ml）呈现剂量相关性,当丹参浓度达到1.56 mg/ml时,细胞增殖抑制达到平台期。对照组与不同浓度丹参处理组凋亡细胞百分率比较,在丹参浓度为0.195 mg/ml时差异不明显,当丹参浓度为0.39 mg/ml时差异有显著统计学意义（P＜0.05）。结论 丹参在体外抑制RA FLSs增殖,可诱导细胞凋亡。     

类风湿关节炎滑膜CD68阳性细胞筛选的意义

目的：探讨用CD68作为细胞标志筛选类风湿关节炎和正常滑膜组织中的滑膜巨噬细胞CD68^+细胞，并观察筛选后细胞的活性及特性。方法：滑膜组织来源于2003-02／2004-03南方大学南方医院脊柱骨病科收治的12例住院患者。类风湿关节炎组6例源自全膝关节置换术或经关节镜滑膜切除术的类风湿关节炎患者，正常滑膜组6例来自无关节炎病史的半月板损伤患者，均经病理诊断证实。从滑膜组织中分离滑膜细胞，免疫磁珠法筛选滑膜CD68^+和CD68^-细胞，用流式细胞仪检测筛选效能；用免疫组化染色观察类风湿关节炎组和正常滑膜组筛选前后滑膜CD68^+细胞所占比例；以四甲基偶氮唑盐比色法观察筛选后细胞体外培养增殖活性。结果：所获12例滑膜组织全部进入结果分析。①滑膜细胞分离后观察：滑膜细胞24h后贴壁生长，滑膜巨噬样细胞在类风湿关节组的比例较正常滑膜组高。②筛选后滑膜细胞的观察结果：免疫磁珠法筛选的CD68^+和CD68^-细胞均在2h内开始贴壁，24h后CD68^-细胞呈极向排列生长，贴壁能力强于CD68^+细胞。筛选后的滑膜CD68^+细胞与磁珠结合在一起，具有巨噬样细胞形态，胞周可有突起，分裂增殖较慢，但在体外能传数代；CD68^-细胞未与磁珠结合，表现为长梭形成纤维细胞样形态，细胞分裂增殖迅速。③CD68^+细胞的纯度分析：经流式细胞仪分析细胞纯度为93．6%，主峰右移，细胞平均体积增大。滑膜CD68^-细胞不能被FITC标记。④滑膜细胞CD68的表达观察：筛选后CD68^+细胞均为棕黄色。细胞核大、较疏松，细周有突起。CD68^-细胞基本为成纤维样细胞，胞浆未被黄染，细胞核位于细胞中央，呈卵圆形，核仁明显。⑤两组滑膜细胞体外增殖速度：在体外均有不同程度增殖活性。类风湿关节炎和正常滑膜CD68^-细胞增殖速度快于同一组织来源滑膜CD68^+细胞的增殖速度[(0．680&;#177;0．047)，(0．236&;#177;0．014)；(0．605&;#177;0．031)，(0．195&;#177;0．019)；τ=21．989，P&;lt;0．05]。类风湿关节炎滑膜CD68^+细胞增殖速度快于正常滑膜CD68^+细胞的增殖速度[(0.236&;#177;0．014)，(0．195&;#177;0．019)；τ=4．149，P&;lt;0．05]。结论：CD68可作为一种标志来筛得滑膜细胞中的巨噬细胞和其他滑膜细胞，筛选后滑膜细胞均具有良好增殖活性。CD68^+细胞具有典型巨嗜样细胞形态，CD68^-细胞主要为成纤维样细胞，两种细胞区分程度好有助于临床对疾病活动期和严重程度判断。     

沙利度胺对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞影响的体外研究

目的研究沙利度胺(Thalidomide)对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维样细胞(FLS)体外培养时的增生殖分化特性的影响。方法关节镜、关节活检针取RA患者滑膜组织,分离培养和鉴定FLS,MTT法和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法观察沙利度胺对FLS细胞存活分数(SF)和c-fos、COX-2mRNA表达。结果RA-FLS体外培养呈良性增生。沙利度胺对RA-FLS的SF值的抑制作用最强(P<0.05)。生理剂量的沙利度胺干预时的浓度与FLS的SF值呈负相关。RA-FLS的c-fos、环氧化酶2(COX-2)mRNA表达率高,加入沙利度胺共孵育3天后c-fos和COX-2mRNA的表达率均明显下降。结论培养和鉴定RA滑膜细胞,证实体外培养传代的RA-FLS为非恶性无限制增生。实验剂量下沙利度胺通过抑制c-fos、COX-2的表达、降低FLS增殖能力等不同途径,发挥对RA滑膜细胞的免疫调节作用。     

流式细胞术检测类风湿关节炎滑液对中性粒细胞凋亡的影响

目的观察骨关节炎(OA)和类风湿关节炎(RA)患者滑液对中性粒细胞凋亡的影响。方法通过流式细胞仪及荧光显微镜检查19例RA和11例OA患者对体外培养粒细胞凋亡的影响。结果流式细胞仪及荧光显微镜检测的体外培养粒细胞自发凋亡发生率分别为43.6%和37.4%,加RA滑液组分别为18.3%和13.7%(P<0.01),加OA滑液组则分别为40.3%和31.2%(P>0.05)。结论RA滑液可显著降低粒细胞凋亡发生率,流式细胞仪检测凋亡较荧光显微镜检查更具敏感性。     

高频超声对类风湿关节炎指关节滑膜病变的研究

目的 探讨高频超声诊断类风湿性关节炎(RA)患者指关节滑膜病变的价值.方法 对临床诊断为RA的42例患者及30例健康志愿者双手指关节进行高频超声检查,观察RA患者指关节有无关节积液、滑膜的厚度、滑膜血管过度增生声像图表现及血流特点.结果 RA组共检出256个关节积液,检出率42.38%;检出223个关节滑膜增厚,检出率26.55%;检出51个关节内血管过度增生,检出率6.07%.结论 高频超声能显示RA患者手指关节病变的各种表现,可为临床诊断提供依据.

Abstract：

Objective To study the synovial lesions of finger joint of rheumatoid arthritis (RA) with high frequency ultrasound ( HFUS). Methods HFUS examination of finger joints of both hands were performed in 42 patients with RA and 30 healthy volunteers. The ultrasound findings of the finger joints in RA patients included intra-articular fluid,the thickness of synovial membrane,vascular proliferation. and the blood flow characteristics. Results The intra-articular fluid was found in 256 joints and the detection rate was 42. 38% (256/840). Synovial membrane hyperplasia was found in 223 joints with the detection rate of 26.55% (223/840). The detection rate of HFUS for vascular proliferation was 6.07% (51/840). Conclusions HFUS is an easy, safe and effective method for the diagnosis of RA thus providing useful evidences for clinical diagnosis.     

类风湿关节炎滑膜CD68阳性细胞筛选的意义

目的:探讨用CD68作为细胞标志筛选类风湿关节炎和正常滑膜组织中的滑膜巨噬细胞CD68+细胞,并观察筛选后细胞的活性及特性。方法:滑膜组织来源于2003-02/2004-03南方大学南方医院脊柱骨病科收治的12例住院患者。类风湿关节炎组6例源自全膝关节置换术或经关节镜滑膜切除术的类风湿关节炎患者,正常滑膜组6例来自无关节炎病史的半月板损伤患者,均经病理诊断证实。从滑膜组织中分离滑膜细胞,免疫磁珠法筛选滑膜CD68+和CD68-细胞,用流式细胞仪检测筛选效能;用免疫组化染色观察类风湿关节炎组和正常滑膜组筛选前后滑膜CD68+细胞所占比例;以四甲基偶氮唑盐比色法观察筛选后细胞体外培养增殖活性。结果:所获12例滑膜组织全部进入结果分析。①滑膜细胞分离后观察:滑膜细胞24h后贴壁生长,滑膜巨噬样细胞在类风湿关节组的比例较正常滑膜组高。②筛选后滑膜细胞的观察结果:免疫磁珠法筛选的CD68+和CD68-细胞均在2h内开始贴壁,24h后CD68-细胞呈极向排列生长,贴壁能力强于CD68+细胞。筛选后的滑膜CD68+细胞与磁珠结合在一起,具有巨噬样细胞形态,胞周可有突起,分裂增殖较慢,但在体外能传数代;CD68-细胞未与磁珠结合,表现为长梭形成纤维细胞样形态,细胞分裂增殖迅速。③CD68+细胞的纯度分析:经流式细胞仪分析细胞纯度为93.6%,主峰右移,细胞平均体积增大。滑膜CD68-细胞不能被FITC标记。④滑膜细胞CD68的表达观察:筛选后CD68+细胞均为棕黄色。细胞核大、较疏松,细周有突起。CD68-细胞基本为成纤维样细胞,胞浆未被黄染,细胞核位于细胞中央,呈卵圆形,核仁明显。⑤两组滑膜细胞体外增殖速度:在体外均有不同程度增殖活性。类风湿关节炎和正常滑膜CD68-细胞增殖速度快于同一组织来源滑膜CD68+细胞的增殖速度[(0.680±0.047),(0.236±0.014);(0.605±0.031),(0.195±0.019);t=21.989,P<0.05]。类风湿关节炎滑膜CD68+细胞增殖速度快于正常滑膜CD68+细胞的增殖速度[(0.236±0.014),(0.195±0.019);t=4.149,P<0.05]。结论:CD68可作为一种标志来筛得滑膜细胞中的巨噬细胞和其他滑膜细胞,筛选后滑膜细胞均具有良好增殖活性。CD68+细胞具有典型巨嗜样细胞形态,CD68-细胞主要为成纤维样细胞,两种细胞区分程度好有助于临床对疾病活动期和严重程度判断。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对类风湿关节炎滑膜细胞的影响

目的探讨重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(hTRAIL)对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASF)的作用。方法原代培养RASF,不同浓度hTRAIL(0、100、200、400、800、1000 ng/ml)干预4 h,检测hTRAIL对RASF的增殖和凋亡及其相应受体DR5 mRNA和蛋白表达的影响。结果 100、200、400、800、1000 ng/ml hTRAIL干预可抑制RASF增殖;可上调DR5 mRNA(0.801±0.036、0.947±0.032、0.969±0.048、1.052±0.031、0.992±0.072)和蛋白(0.650±0.118、0.803±0.142、0.968±0.130、0.945±0.136、0.864±0.160)表达(F=78.478,F=18.627,均P<0.01);高浓度hTRAIL(400、800、1000 ng/ml)可诱导RASF发生凋亡[(5.82±0.43)%、(7.32±0.49)%、(8.78±0.81)%](F=304.573,P<0.01)。结论 hTRAIL可诱导类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡。