薯蓣皂甙元通过miR-145-5p/KLF5/HIF-1α轴抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探究薯蓣皂甙元对结直肠癌细胞的影响及其可能的作用机制。方法体外培养人结直肠癌细胞SW480和人正常结肠上皮细胞CCD-841CoN,对数期生长的SW480细胞分组进行转染和慢病毒感染;RT-PCR检测SW480细胞中miR-145-5p表达、KLF5和HIF-1α mRNA表达;Western blotting检测细胞中KLF5和HIF-1α蛋白表达;CCK-8检测细胞活力;细胞克隆形成实验检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;荧光素酶报告实验检测miR-145-5p对KLF5表达的调控作用。结果与正常组相比,癌细胞组中KLF5和HIF-1α的mRNA和蛋白表达均显著上调(P0.05),miR-145-5p 表达显著下调(P0.05);与常氧组相比,缺氧组细胞中KLF5、HIF-1α的mRNA和蛋白表达均显著上调(P0.05);薯蓣皂甙元(10、20、40、80、160 μmol/L)可抑制SW480细胞活力(P0.05);与对照组相比,薯蓣皂甙元组SW480细胞中KLF5和HIF-1α的mRNA和蛋白表达、细胞克隆数、迁移和侵袭细胞数均显著下调(P0.05),上调KLF5可逆转薯蓣皂甙元对SW480细胞的作用,上调HIF-1α的表达(P0.05);miR-145-5p靶向调控KLF5;与对照组相比,薯蓣皂甙元组miR-145-5p 表达显著上调(P0.05),KLF5蛋白表达下调(P0.05);与薯蓣皂甙元组相比,薯蓣皂甙元组+miR-145-5p抑制物组miR-145-5p 表达显著下调(P0.05),KLF5蛋白表达上调(P0.05)。结论薯蓣皂甙元通过miR-145-5p/KLF5/HIF-1α轴抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

微RNA-129-5p靶向Fas相关死亡功能域蛋白基因对体外培养人椎间盘髓核细胞凋亡的影响

目的研究微RNA-129-5p(miR-129-5p)靶向Fas相关死亡功能域蛋白(FADD)基因对人椎间盘髓核细胞(hNPC)凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法运用脂质体法将miR-219-5p抑制子转染至hNPC中抑制miR-219-5p表达,将pcDNA-FADD转染至hNPC中使FADD过表达,将miR-219-5p抑制子和FADD siRNA共转染至hNPC中抑制miR-219-5p和FADD表达。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测抑制miR-219-5p表达后hNPC细胞中FADD、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Bcl-2和Bax蛋白表达量。通过Targetscan软件预测miR-129-5p和FADD靶向结合位点,采用双荧光素酶报告基因实验检测二者的靶向关系。结果抑制miR-219-5p、过表达FADD均可明显促进hNPC凋亡。Targetscan软件预测发现FADD 3′-UTR上存在miR-219-5p的结合位点,双荧光素酶报告基因实验证实miR-129-5p和FADD具有靶向结合关系。抑制miR-219-5p的表达后,hNPC中FADD表达上调,同时促凋亡蛋白Caspase-3表达上调,抑凋亡蛋白Bcl-2表达下调。抑制FADD可逆转miR-219-5p低表达对hNPC凋亡的促进作用。结论低表达miR-219-5p可促进hNPC凋亡,其机制可能与miR-129-5p靶向FADD有关。     

CircTP53调节miR-873-5p/CCND1轴对甲状腺癌细胞增殖、凋亡和迁移侵袭的影响

目的:探讨环状TP53(CircTP53)调节miR-873-5p/细胞周期蛋白1(CCND1)轴对甲状腺癌细胞增殖、凋亡和迁移侵袭的影响。方法:体外培养人甲状腺癌细胞TPC-1,随机分为对照组、CircTP53 siRNA、CircTP53 siRNA阴性对照组、共转染组。检测各组TPC-1细胞CCND1上皮间质转化标志蛋白(Vimentin、E-cadherin)表达。结果:与人甲状腺正常细胞Nthy-ori 3-1相比,人甲状腺癌组织源细胞和人甲状腺癌细胞株TPC-1、C643、SW579中CircTP53、CCND1 mRNA表达升高(P<0.05),miR-873-5p表达降低(P<0.05)。与对照组相比,CircTP53 siRNA组凋亡蛋白Bax/Bcl-2比值、细胞miR-873-5p及E-cadherin蛋白表达均升高(P<0.05)。结论:敲低CircTP53可通过促进miR-873-5p分泌下调CCND1表达,抑制甲状腺癌细胞集落形成,降低细胞活力及迁移侵袭活性,并促细胞凋亡。     

山药多糖通过miR-98-5p/TGFβR1分子轴调控肝癌细胞凋亡的机制研究

目的探究山药多糖(CYPS)通过miR-98-5p/TGFβR1分子轴调控肝癌(HCC)细胞凋亡的分子机制。方法qPCR检测miR-98-5p在不同HCC细胞系中的表达情况,使用不同浓度的CYPS处理Huh-7细胞,CCK-8检测细胞增殖活力,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测TGFβR1和细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Bcl-2、Bax的表达,双荧光素酶报告基因系统验证miR-98-5p与TGFβR1的靶向关系。结果与人正常肝细胞HL-7702相比,miR-98-5p在HCC细胞系中表达升高(均P<0.05),且在Huh-7细胞中的表达高于其他HCC细胞(P<0.05);CYPS处理可明显抑制Huh-7细胞的增殖活力并诱导细胞凋亡(均P<0.05),且10-3 kg/L CYPS对细胞增殖活力的抑制作用比其他浓度明显。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-98-5p靶向调控TGFβ1。与10-3 kg/L CYPS组相比,miR-98-5p mimics可下调10-3 kg/L CYPS对细胞增殖活力(P<0.05)的抑制作用和对细胞凋亡(P<0.01)的促进作用,CYPS+miR-98-5p mimics+pcDNA-TGFβR1组中细胞增殖活力与CYPS+miR-98-5p mimics组相比明显降低(P<0.05),细胞凋亡水平明显升高(P<0.01)。结论CYPS可下调miR-98-5p,促进TGFβR1的表达,抑制Huh-7细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

MiR-490-3p靶向HMGA2在骨肉瘤细胞凋亡中的作用

目的以人骨肉瘤MG-63细胞为研究对象,探讨miR-490-3p诱导MG-63细胞凋亡的作用及其分子机制。方法分别设立miR-490-3p mimics组(对照组)、慢病毒lenti-sh miR-490-3p组(药物组),每组设6个复孔。采用MTT法检测miR-490-3p对细胞生长抑制作用;采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测不同实验条件下miR-490-3p对MG-63细胞凋亡率的影响;Western blot检测miR-490-3p对HMGA2、Bcl-2、BAX和Caspase-3蛋白表达的影响。结果 MiR-490-3p能抑制MG-63细胞增殖,药物组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。经3次实验结果,药物组的早期凋亡的细胞比例为58.90%±0.89%,明显高于对照组的5.34%±0.34%,差异有统计学意义(P0.05)。通过Western blot检测MG-63细胞中HMGA2、Bcl-2、Bax、Caspase-3、Survivin蛋白表达,结果显示miR-490-3p转染后,促进凋亡蛋白Bax表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,Bax或Bcl-2比率增高,而线粒体凋亡途径下游的Caspase-3蛋白被激活,表达量降低。结论 MiR-490-3p能显著抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与靶向HMGA2的表达、上调Bax/Bcl-2蛋白表达比例、激活Caspase-3蛋白级联反应和调控Survivin蛋白表达有关。     

lncRNA XIST靶向miR-302a-3p对IL-1β诱导软骨细胞损伤的调控机制

目的 探讨lncRNA X染色体失活特异转录因子（XIST）靶向miR-302a-3p对白细胞介素-1β（IL-1β）诱导软骨细胞损伤的调控机制。方法 SW1353细胞分为Control组、IL-1β组、IL-1β+si-NC组、IL-1β+si-XIST组、IL-1β+si-PDK1组、IL-1β+si-XIST+miR-NC inhibitor组、IL-1β+si-XIST+miR-302a-3p inhibitor组。检测XIST、miR-302a-3p以及3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1（PDK1）mRNA表达;噻唑蓝（MTT）实验测定细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;qRT-PCR检测炎症因子（TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10）水平;双荧光素酶报告基因检测实验证实miR-302a-3p与XIST或PDK1的靶向关系;免疫印迹法检测凋亡蛋白（Bcl-2、Bax）及PDK1蛋白表达。结果 与IL-1β组相比,IL-1β+si-XIST组XIST表达下调,细胞活力升高,凋亡率降低,Bax表达及TNF-α、IL-1β、IL-6水平下降,Bcl-2表达及IL-4、IL-10水平升高（P<0.05）。XIST直接靶向下调miR-302a-3p表达,miR-302a-3p下调可恢复si-XIST介导的促增殖、抗凋亡和炎症反应作用（P<0.05）。PDK1是miR-302a-3p的靶基因,沉默PDK1可抑制细胞的炎症反应（P<0.05）。结论 敲低XIST可提高IL-1β诱导软骨细胞的细胞活力,减轻OA样软骨细胞损伤,其作用机制与靶向上调miR-302a-3p进而抑制PDK1表达有关。     

miR-6827-3p靶向CXCL16调控结直肠癌细胞HT-29凋亡的机制研究

目的:研究miR-6827-3p靶向CXCL16调控结直肠癌细胞HT-29的凋亡的机制。方法 :使用MiRBase在线分析MiRBase与CXCL16信使RNA的结合位点;将分析出的结合位点克隆进PmirGLO质粒,使用luciferase assay分析miR-6827-3p是否靶向这些结合位点;在结直肠癌细胞HT-29中过表达或者敲低miR-6827-3p后,使用Western blot分析CXCL16以及细胞凋亡关键蛋白的表达情况。结果:MiRBase分析后,发现miR-6827-3p与CXCL16具有3处匹配区域;克隆PmirGLO-CXCL16-3’UTR后,luciferase assay发现miR-6827-3p靶向CXCL16;当过表达miR-6827-3p时,CXCL16的表达量下降,细胞凋亡标志蛋白cleaved-caspase3、cleaved-caspase9、BAX表达量下降,Bcl-2表达量上升(P0.05);当敲低miR-6827-3p时,CXCL16的表达量上升,细胞凋亡标志蛋白cleaved-caspase3、cleaved-caspase9、BAX表达量上升,Bcl-2表达量下降(P0.05)。结论:miR-6827-3p可以通过靶向CXCL16抑制结直肠癌细胞HT-29的凋亡。     

长链非编码RNA LINC00313与miR-342-3p/膜联蛋白A2轴在肝细胞癌细胞中的作用与机制

背景与目的 肝细胞癌（HCC）是造成癌症相关性死亡的常见原因之一，研究表明长链非编码RNA（lncRNA）调控微小RNA（miRNA）的表达，进而通过抑制靶mRNA翻译或促进mRNA降解来参与肿瘤发生及进展过程。LINC00313作为一种具有致癌活性的lncRNA参与肿瘤发生及进展过程；膜联蛋白A2（ANXA2）在包括HCC的多种恶性肿瘤中表达上调，促进恶性表型的发生，并可能受上游miR-342-3p的调控。因此，本研究探讨LINC00313、miR-342-3p、ANXA2在HCC细胞中的表达及其相互关系。方法 用qRT-PCR与Western blot检测人肝实质细胞及HCC细胞系（Li-7、HuH-7、Hep3B2.1-7）中LINC00313、miR-342-3p及ANXA2表达。将体外培养的Li-7细胞分为空白对照组（无处理）、LINC00313 siRNA组（转染LINC00313 siRNA）、miR-342-3p模拟物组（转染miR-342-3p模拟物）、共转染阴性对照组（转染阴性siRNA序列与阴性miRNA序列）、共转染组（转染LINC00313 siRNA及miR-342-3p抑制物），用qRT-PCR与Western blot检测各组细胞LINC00313、miR-342-3p及ANXA2表达；MTT实验及平板集落形成实验检测各组细胞增殖；进行TUNEL染色检测各组细胞凋亡；Transwell侵袭及Western blot分别检测各组细胞侵袭数目及上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白波形蛋白（vimentin）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达；免疫荧光染色检测各组细胞Bcl-2关联X蛋白（Bax）/B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）；双荧光素酶报告实验分析Li-7细胞中LINC00313对miR-342-3p、miR-342-3p对ANXA2的靶向调控。建立皮下裸鼠异种移植瘤模型，验证LINC00313沉默对Li-7细胞体内生长的影响。结果 与人肝实质细胞比较，Li-7、HuH-7、Hep3B2.1-7细胞的LINC00313、ANXA2 mRNA及蛋白表达均明显升高，而miR-342-3p表达均明显降低（均P<0.05）。与对照组比较，LINC00313 siRNA组、miR-342-3p模拟物组细胞ANXA2 mRNA及蛋白表达、增殖率、集落生成率、侵袭细胞数目、vimentin蛋白表达均明显降低（P<0.05），miR-342-3p表达、凋亡率、E-cadherin蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显升高（均P<0.05）；与LINC00313 siRNA组比较，共转染组细胞ANXA2 mRNA及蛋白表达、增殖率、集落生成率、侵袭细胞数目、vimentin蛋白表达均明显升高，而miR-342-3p表达、凋亡率、E-cadherin蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显降低（均P<0.05）。Li-7细胞中，LINC00313可靶向下调miR-342-3p表达，miR-342-3p可靶向下调其ANXA2表达（均P<0.05）。体内实验结果显示，与无处理的Li-7细胞移植瘤比较，LINC00313敲低的Li-7细胞移植瘤的体积与质量均明显降低，肿瘤组织中LINC00313、ANXA2 mRNA及蛋白表达均明显降低，而miR-342-3p表达明显升高（均P<0.05）。结论 LINC00313在HCC细胞中的表达上调，LINC00313可能通过抑制miR-342-3p而增加后者靶基因ANXA2的表达，进而促进HCC细胞的恶性表型。     

miR-21在TGF-β1引起的肝卵圆细胞上皮间质转化中的作用

[摘 要] 目的 探讨microRNA-21（miR-21）在TGF-β1引起的肝卵圆细胞（hepatic oval cell,HOC）上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）中的作用。方法 体外培养大鼠肝卵圆细胞,用10 ng/mL TGF-β1刺激HOC 1、3、5、7 d后,Western blotting检测EMT相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin和Vi-mentin）表达情况;用10 ng/mL TGF-β1刺激HOC 5 d后,实时荧光定量PCR检测miR-21的表达情况;分别用miR-21增强和抑制慢病毒转染HOC构建稳定的细胞株,PCR检测miR-21的表达情况;接着用TGF-β1刺激miR-21抑制慢病毒转染的HOC 5 d,Western blotting检测E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达;用miR-21增强慢病毒转染HOC后,Western blotting检测E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达。结果 TGF-β1刺激HOC 1、3、5、7 d后,E-cadherin逐渐减低,N-cadherin和Vimentin逐渐升高。TGF-β1刺激HOC 5 d后miR-21的表达增强了4.32倍。分别用增强和抑制慢病毒转染HOC后,miR-21的表达增强了3.82倍和抑制了0.22倍。下调miR-21表达后,TGF-β1致HOC的EMT作用减弱。miR-21过表达后,HOC发生了EMT。结论 抑制miR-21的表达可以减少TGF-β1引起的HOC的EMT作用,从而减轻肝纤维化。     

反义 miR-224在结肠癌组织中的表达及其对癌细胞增殖的影响

目的探讨微小 RNA(miRNA)miR-224在结肠癌组织中的表达,以及对体外癌细胞增殖和凋亡的影响。方法收集2011年2月至2014年3月行手术治疗的134例结肠癌和癌旁组织标本,利用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测标本中 miR-224表达情况;对人结肠癌细胞 SW480进行 miR-224反义寡核苷酸转染并培养,利用克隆形成实验和流式细胞仪检测 miR-224反义寡核苷酸对 SW480细胞增殖和凋亡的影响,利用 Real-time PCR 和 Western blot 法对不同转染组细胞中 Bcl-2表达情况进行检测。结果miR-224在结肠癌组织中相对表达水平显著高于癌旁组织(P <0.05);反义 miR-224组人结肠癌 SW480细胞克隆形成率显著低于对照组,而细胞凋亡指数则高于对照组,差异均具有统计学意义(P <0.05);反义 miR-224组细胞 Bcl-2相对表达量和蛋白相对表达量均低于对照组(P <0.05)。结论miR-224在结肠癌组织中呈高表达,减少 miR-224表达可抑制结肠癌细胞增殖,并加速细胞凋亡,有可能成为结肠癌早期发现及基因治疗的新靶位。     

miR-7-5p通过靶向抑制成纤维生长因子受体 4影响胆囊癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨miR-7-5p对胆囊癌细胞增殖和迁移的影响及作用机制。方法:选取胆囊癌细胞GBC-SD，检测miR7-5p和成纤维生长因子受体4(FGFR4)表达情况；通过TargetScan数据库检索调控FGFR4的miRNA，并用双重荧光素酶基因检测系统检测FGFR4与miR-7-5p结合情况；通过慢病毒将miR-7-5p转染GBC-SD细胞，检测FGFR4、miR-7-5p mRNA和FGFR4蛋白表达，MTT检测细胞活性，Transwell检测细胞侵袭。结果:在GBC-SD细胞中miR-7-5p低表达且FGFR4高表达(P＜0.05)；TargetScan预测FGFR4特异结合miR-7-5p，并在双重荧光素酶基因检测系统得到验证；GBCSD细胞慢病毒转染miR-7-5p后，FGFR4 mRNA和蛋白表达水平下调，细胞增殖率下降，穿膜细胞数减少，差异有统计学意义(P＜0.05)；沉默miR-7-5p后，FGFR4 mRNA和蛋白表达水平上升，细胞增殖率升高，穿膜细胞数增加，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论: miR-7-5p通过靶向抑制FGFR4而抑制胆囊癌细胞的增殖和迁移。     

miR-7856-5p通过靶向作用3对结直肠癌细胞SW480迁移和增殖的影响

目的探索微小RNA(miRNA,miR)-7856-5p对EPH受体A3(EPHA3)基因表达的调控作用及对结直肠癌细胞SW480迁移和增殖的影响。方法实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测结直肠癌组织和细胞系中miR-7856-5p的表达。脂质体转染法分别将miR-7856-5p模拟物和miR-NC转入结直肠癌细胞SW480,分别定义为miR-7856-5p组和miR-NC组。Real-time PCR检测转染效果。Transwell实验和CCK-8实验检测转染后细胞迁移和增殖能力。生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因系统验证miR-7856-5p的靶基因。Real-time PCR和Western blot检测转染后细胞中EPHA3的表达。符合正态分布的计量资料以均数±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果miR-7856-5p在结直肠癌组织的表达明显低于癌旁组织(P<0.01)。miR-7856-5p在结直肠癌细胞系的表达明显低于正常肠黏膜上皮细胞(P<0.05),在SW480细胞中表达最低(P<0.01)。miR-7856-5p组miR-7856-5p的表达明显高于miR-NC组,差异有统计学意义[(9.49±1.09)比(1.06±0.18),P<0.01]。miR-NC组和miR-7856-5p组迁移细胞数量分别为(125.70±14.05)个和(42.01±8.98)个,miR-7856-5p组细胞迁移能力明显下降(P<0.01)。与miR-NC组比较,miR-7856-5p组细胞增殖能力明显降低(P<0.05)。生物信息学软件显示miR-7856-5p的靶基因是EPHA3。双荧光素酶报告基因系统证实miR-7856-5p可靶向结合EPHA3基因(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-7856-5p组SW480细胞中EPHA3的表达明显降低(P<0.05)。结论miR-7856-5p可通过靶向调控EPHA3的表达,抑制结直肠癌细胞SW480的迁移和增殖能力。     

下调PAR基因表达对前列腺癌PC3细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax的影响

目的:本研究以RNA干扰技术下调PAR(prostate androgen regulated)基因表达,探讨其对前列腺癌PC3细胞增殖、凋亡及其相关蛋白Bcl-2/Bax表达水平的影响。方法:PC3细胞转染靶向PAR基因的siRNA,MTT法检测细胞增殖,用流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果:PC3细胞PAR基因表达水平下调,此时处于G2-M期的细胞增加,为(29.95±3.25)%;细胞凋亡率亦明显增加,为(20.61±2.73)%,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.01),同时Bcl-2蛋白表达下降,Bax表达水平升高,Bax/Bcl-2比值升高。结论:PAR基因表达下调可诱导细胞G2-M期阻滞和凋亡,其机制为抑制凋亡相关蛋白Bcl-2表达,同时促进Bax表达。     

沉默 Notch-1 基因影响人膀胱癌 RT4 细胞生物学行为的体外实验研究

目的：研究沉默 Notch-1 基因对人膀胱癌 RT4 细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间质转化等生物学行为的影响。方法： 设计并构建 Notch-1 shRNA,选取 RT4 细胞作为研究对象分别进行转染。实验细胞分为 Notch-1 阴性对照组（shRNA NC）, Notch-1 干扰组（Notch-1 shRNA）。细胞转染 48 h 后,MTT 法检测细胞增殖水平变化;Transwell 检测细胞侵袭力的改变;流式细胞术检测细胞凋亡水平情况;RT-PCR 和 Western blot 检测凋亡相关蛋白（Bax、Bid、Bcl-2）及上皮间充质转化（EMT） 因子（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）在 mRNA 和蛋白水平上的改变。结果：与 shRNA NC 组相比,Notch-1 shRNA 组细胞增殖率明显下降（t =4.629,P =0.010）,侵袭力减弱（t = 8.193,P=0.001）,细胞凋亡率明显升高（t= –18.441,P<0.001）,Bad（t = –12.521,P<0.001 ;t = –6.983,P =0.002）、Bid（t = –9.231,P<0.001 ;t= –8.871,P=0.001）、E-cadherin（t= –13.457,P<0.001 ;t= –5.610,P=0.005）mRNA 和蛋白表达量增多,Bcl2（t=10.651,P<0.001 ;t=6.973,P=0.002）、N-cadherin（t=6.505,P<0.001 ;t=10.132,P=0.001）、Vimentin（t=9.135,P<0.001 ;t =5.630,P =0.005）mRNA 和蛋白表达量显著降低。结论：沉默 Notch-1 的表达能够抑制人膀胱癌 RT4 细胞的增殖和侵袭迁移,促进其细胞凋亡,其机制可能与诱导 Bad、Bid、E-cadherin,抑制 Bcl2、N-cadherin、Vimentin 的表达有关。     

TRB3在糖尿病肾病中的表达及调控Notch信号通路对人肾小管上皮细胞增殖凋亡的实验研究

目的:TRB3在糖尿病肾病中的表达及调控Notch信号通路对人肾小管上皮细胞增殖凋亡的影响。方法:以正常肾组织为对照,Western blot检测TRB3在糖尿病肾病中的表达;将实验分为低糖组、高糖组、siRNA-NC+高糖组、TRB3-siRNA+高糖组,Western blot检测TRB3-siRNA沉默效果;各实验组细胞培养48 h后,CCK8试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR检测E-cadherin、α-SMA表达;Western blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved caspase3、Hes1、NICD1、Jagged1蛋白表达。结果:糖尿病肾病中TRB3的表达显著高于正常肾组织(P0.05);TRB3-siRNA组TRB3蛋白表达水平显著低于对照组(P0.05);高糖组细胞凋亡率及E-cadherin、α-SMA、Bax、Cleaved caspase3、Hes1、NICD1、Jagged1蛋白表达显著高于低糖组,细胞存活率及Bcl-2蛋白表达显著低于低糖组(P0.05),siRNA-NC+高糖组细胞存活率、细胞凋亡率及E-cadherin、α-SMA、Bcl-2、Bax、Cleaved caspase3、Hes1、NICD1、Jagged1蛋白表达与高糖组比较差异无统计学意义(P0.05);TRB3-siRNA组细胞凋亡率及E-cadherin、α-SMA、Bax、Cleaved caspase3、Hes1、NICD1、Jagged1蛋白表达显著低于高糖组,细胞存活率及Bcl-2蛋白表达显著高于高糖组(P0.05)。结论:TRB3在糖尿病肾病中高表达,高糖能诱导人肾小管上皮细胞系HK-2细胞的增殖,抑制细胞凋亡及转分化,而沉默TRB3的表达能减弱这种效果,其机制与Notch信号通路的调控有关。     

表观沉默蛋白Bmil在结直肠癌组织中的表达及其对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究人结直肠癌中表观沉默蛋白Bmil表达与结直肠癌病理特征的关系,探讨Bmil蛋白对结直肠癌细胞增殖凋亡的影响。方法应用免疫组织化学技术检测85例结直肠癌组织及其邻近正常肠黏膜中Bmil蛋白表达：用BmilsiRNA转染结肠癌细胞系SW480．运用MTY法检测细胞增殖状态：流式细胞仪观察其对细胞凋亡的影响．Westemblot检测Bmil及Bcl-2蛋白的表达。结果结直肠癌组织中Bmil蛋白表达的阳性率为56．5％（48／85）．明显高于正常肠黏膜[17．6％（15／85）]（P〈0．05）;其阳性表达与肿瘤分化程度、分期及淋巴结转移有关（P〈0．05）。SW480转染BmilsiRNA后,细胞增殖受到抑制,凋亡明显;转染24、48和72h后,其抑制率分别为13．1％、16．5％和18．3％．细胞凋亡率分别为15．7％、45．6％和40．2％：同时,Bmil表达水平在转染48h后下降,Bcl-2表达水平也降低（P〈0．01）。结论结直肠癌中Bmil表达与肿瘤病理学特征关系密切,阻断Bmil表达可抑制结肠癌细胞的增殖．促进其凋亡。     

LncRNA PCAT1对结直肠癌Colo320细胞的影响及作用机制研究

目的：探讨长链非编码RNA(LncRNA)前列腺癌相关转录本1(PCAT1)对Colo320细胞增殖、侵袭和化疗敏感性的影响及其作用机制。方法：实时荧光定量PCR检测LncRNA PCAT1、miR-145-5p和肌动蛋白结合蛋白1(FSCN1)在结直肠癌组织、Colo320和5-Fu耐药细胞株中的表达;分析LncRNA PCAT1和miR-145-5p、miR-145-5p和FSCN1之间的作用靶点。检测下调PCAT1、miR-145-5p、FSCN1对Colo320细胞增殖和侵袭的影响;检测5-Fu耐药细胞株细胞活力和凋亡率的变化;检测上调LncRNA PCAT1对Colo320细胞增殖、侵袭和化疗敏感性的影响。结果：结直肠癌组织和Colo320细胞中LncRNA PCAT1和FSCN1表达上调,miR-145-5p表达下调;5-Fu耐药细胞株中LncRNA PCAT1和FSCN1表达下调,miR-145-5p表达上调。LncRNA PCAT1靶向miR-145-5p;miR-145-5p靶向FSCN1。上调LncRNA PCAT1通过miR-145-5p促进Colo320细胞增殖...     

异丙酚通过调控miR-506对骨肉瘤细胞增殖、迁移侵袭及凋亡的影响

目的:研究异丙酚是否通过调控微小RNA(miRNA/miR)-506影响骨肉瘤细胞增殖、迁移侵袭及凋亡。方法:骨肉瘤HOS细胞分为NC组(未处理)、Pro-L组(1 μg/mL异丙酚)、Pro-M组(5 μg/mL异丙酚)、Pro-H组(10 μg/mL异丙酚)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-506组(转染miR-506 mimic)、Pro+anti-miR-NC组(转染antimiR-NC+10 μg/mL异丙酚)、Pro+anti-miR-506组(转染miR-506 inhibitor+10 μg/mL异丙酚)。应用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法测定细胞增殖,免疫印迹实验(Western blotting)评估细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,Transwell实验检测迁移侵袭,流式细胞术分析细胞凋亡,荧光定量PCR测定miR-506表达。结果:与NC组比较,Pro-L、Pro-M、Pro-H组HOS细胞的抑制率、p21、Bax蛋白水平、凋亡率和miR-506表达水平逐渐增加,CyclinD1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白水平、迁移细胞数和侵袭细胞数逐渐减少,且呈浓度依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-506组HOS细胞的抑制率、凋亡率、p21、Bax蛋白水平比miR-NC组升高,迁移细胞数、侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白水平比miR-NC组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Pro+anti-miR-506组较Pro+anti-miR-NC组降低HOS细胞中miR-506表达水平、抑制率、凋亡率、p21、Bax蛋白水平,提高迁移细胞数、侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论: 1、5、10 μg/mL异丙酚上调miR-506的表达,抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移侵袭,并且促进其凋亡。     

LncRNA MIR205HG靶向miR-299-3p调控肺癌细胞增殖、凋亡的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA MIR205HG(LncRNA MIR205HG)与微小RNA-299-3p(miR-299-3p)的相互关系及其影响肺癌细胞增殖、凋亡的分子机制。方法 检测肺癌组织和细胞中MIR205HG、miR-299-3p的表达。H1299细胞分为si-MIR205HG组、si-NC组、miR-299-3p组、miR-NC组、si-MIR205HG+anti-miR-299-3p组、si-MIR205HG+anti-miR-NC组。MIR205HG与miR-299-3p的相互作用；检测增殖、凋亡及蛋白表达。结果 肺癌组织和细胞系中MIR205HG表达水平升高(P<0.05),miR-299-3p表达水平降低(P<0.05)。MIR205HG能与miR-299-3p特异性结合，可调控miR-299-3p的表达。干扰MIR205HG表达或miR-299-3p过表达后可降低肺癌细胞增殖能力，促进细胞凋亡，且CyclinD1、p21表达降低，Bcl-2、Bax表达增高(P<0.05)。抑制miR-299-3p可逆转干扰MIR205HG表达对肺癌细胞增殖及凋亡...     

siRNA靶向抑制GHR对人结肠癌SW480细胞增殖的影响

目的利用小分子干扰RNA(siRNA)技术抑制人结肠癌SW480细胞人生长激素受体(GHR)基因的表达,观察GHR基因沉默对SW480细胞增殖的影响。方法设计特异性siRNA,构建针对人GHR真核质粒的表达载体(pcDNATM6.2-GW/EmGFP-siRNA-GHR),用电转染法转染人结肠癌SW480细胞,培养48~72 h后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性;Western Blot检测GHR蛋白表达;实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测GHRmRNA水平变化。结果转染siRNA后,与对照组相比,转染组细胞增殖速率、GHR的蛋白表达量、GHRmRNA水平均明显降低(均P<0.05)。结论构建的pcDNATM6.2-GW/EmGFP-GHRsiRNA能有效地下调SW480细胞中GHR的表达,从而抑制SW480细胞的增殖。