国人脂蛋白脂肪酶基因突变的筛查

目的筛查天津地区脂蛋白脂肪酶基因突变情况,并探讨其对血脂水平的影响。方法利用聚合酶链反应—单链构象多态性分析技术对386例样本(血脂正常组278例,血脂异常组108例)的脂蛋白脂肪酶基因进行突变筛查,对可疑突变的扩增样品进行DNA序列测定。对于频率较高的多态性位点,引入限制性核酸内切酶位点利用聚合酶链反应限制片长多态性进行鉴定。结果在386例样本中,共检出4种突变,检出率为14.5%,其中1例为目前国内外未见报道的外显子3 Leu103→Leu同义突变杂合子,1例为目前亚洲首报的外显子5 Pro207→Leu突变杂合子,3例内含子3受位剪接点上游6 bp的C→T转换的突变杂合子,1例Ser447→stop突变纯合子,50例Ser447→stop突变杂合子。结论我国天津地区人群存在着广泛的脂蛋白脂肪酶基因变异,既具有与大多数国家相同的Ser447→stop多态性位点,也具有自身的特点。     

脂蛋白脂肪酶基因Ser~(447)→stop变异对血脂水平的影响

目的探讨国人脂蛋白脂肪酶基因外显子9特别是Ser447→stop变异对血脂水平的影响.方法利用聚合酶链反应-单链构象多态性技术筛查基因突变,利用DNA测序和聚合酶链反应-限制片长多态性技术确定突变的性质,并分析突变与血脂水平的关系.结果在420例甘油三酯正常(<1.7 mmol/L)人群检出78例突变,其中1例为纯合子,77例为杂合子;经DNA测序和聚合酶链反应-限制片长多态性技术分析突变均为Ser447→stop无义突变.Stop447携带频率和等位基因频率分别为18.6%和9.4%.Stop447携带组的甘油三酯水平(1.05±0.32 mmol/L)低于Stop447非携带组(1.13±0.28 mmol/L)(P<0.05);Stop447携带组的高密度脂蛋白胆固醇水平(1.28±0.28 mmol/L )虽然高于Stop447非携带组(1.25±0.27 mmol/L),但无统计学差异(P>0.05 ).结论国人基因外显子9突变单一,仅表现为Ser447→stop多态性,Ser447→stop变异可能有较弱的降低甘油三酯的作用.     

脂蛋白脂肪酶与糖尿病

脂蛋白脂肪酶(LPL)是甘油三酯(TC)水解的限速酶,其基因缺失和基因多态性与糖、脂代谢紊乱的发生、发展密切相关.LPL功能紊乱可引起胰岛素抵抗甚至糖尿病,其可能机制包括:脂质异位沉积与胰岛素信号转导通路受损、内质网应激、氧化应激、炎性反应.明确LPL在糖尿病发生、发展中的作用,为防治糖尿病提供了新的思路.     

脂蛋白脂肪酶基因突变研究进展

脂蛋白脂肪酶是脂蛋白代谢的关键酶。其主要功能是将乳糜微粒和极低密度脂蛋白中的甘油三酯水解为甘油和脂肪酸，为影响富含三脂酰甘油脂蛋白代谢的关键性因素。其结构和功能的变异可以导致导致以高乳糜微粒血症为主的异常脂蛋白血症。近年来随着分子生物学技术的发展和普及，脂蛋白脂肪酶相关突变及其临床意义的研究有了瞩目的进展。本文在简要介绍检测脂蛋白脂肪酶突变常用技术基础上，重点介绍已报告的脂蛋白脂肪酶基因突变种类和可能造成的影响。     

载脂蛋白M基因1号内含子T53→C和4号内含子C59→A突变的家系分析

目的分析1个中国汉族家系的载脂蛋白M（ApoM）基因1号内含子眄3→C、4号内含子C59→A突变的家系遗传。方法应用聚合酶链反应DNA直接测序法，检测了1个携带ApoM基因1号内含子T53→C、4号内含子C59→A突变的先证者及其5名家系成员这2个位点的基因型及血脂情况。结果此2个位点突变分别在先证者、其长女（子代1）和其子（子代3）中检出，其妻子及其余2个女儿检测为阴性；先证者65岁患脑梗死，其父67岁死于脑梗死；先证者、其父和子代3分别于55，57及31岁患糖尿病，提示2个突变位点可能来源于其父。先证者和子代3血清总胆固醇及三酰甘油增高，高密度脂蛋白胆固醇降低。结论所检测基因突变为亲代遗传，而非个体基因变异；可能与糖尿病和（或）脑梗死发病以及脂质代谢异常有关。     

脂蛋白脂肪酶基因突变致高甘油三酯血症性急性胰腺炎1例临床分析

目的 分析脂蛋白脂肪酶（LPL）基因突变致高甘油三酯血症性急性胰腺炎（HTG-AP）的临床特征。方法 回顾1例LPL基因突变致HTG-AP患者的病历资料,分析其诱发因素、临床表现、基因突变位点以及诊治情况。结果 该病例为青年女性,因“上腹痛伴恶心、呕吐1 d”入院。入院前1 d暴饮暴食后出现中上腹持续性绞痛,呈阵发性加重,并向腰背部放射,同时伴恶心、呕吐。既往因异位妊娠予甲氨蝶呤治疗。门诊急查血淀粉酶342.4 U/L、血脂肪酶3 132.0 U/L;腹部CT平扫符合胰腺炎并周围渗出表现。入院后立即予中高流量吸氧、液体复苏、醋酸奥曲肽抑制胰液分泌、乌司他丁抑制胰蛋白酶活性、持续胰岛素泵入快速降脂、抗感染以及营养支持等对症治疗。入院后3 h,患者病情急性加重,考虑诊断重症急性胰腺炎。静脉采血可见乳糜血,TG达到63.66 mmol/L,诊断为HTG-AP。经DNA测序发现,该患者LPL:NM＿000237.2:c. 89-1G>C、LPL:NM＿000237.2:c. 900G>A;p.(Gly300=)杂合突变,其父母上述两个位点DNA测序结果均未见异常,考虑该患者LPL基...     

PCR-单链构象多态性分析在中国大陆日本血吸虫品系研究中的应用

聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）是一种将ＰＣＲ扩增的ＤＮＡ片断变性后在中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳，检测点突变和ＤＮＡ多态性的有效方法。本实验采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析对我国江苏、云南、湖南及湖北４省的日本血吸虫染色体ＤＮＡ中１个２８０ｂｐ的ｒＤＮＡ片断进行了比较分析，结果显示：４地血吸虫２８０ｂｐ的ｒＤＮＡ片断有一定的多态性和碱基序列的差异，其中江苏和云南两地样品带型相似，而湖南和湖北两地样品带型相似     

中国特发性扩张型心肌病患者与δ-肌聚糖基因的相关性研究

目的探讨中国特发性扩张型心肌病是否与δ-肌聚糖基因（SGCD）的突变相关。方法用人工合成的寡核苷酸引物，通过聚合酶链反应（PCR）-单链构象多态性分析（SSCP）-DNA测序法对70名特发性心肌病患者和70例健康对照SGCD基因的全部9个外显子进行分析。结果在病例组和对照组外显子2，3，6，9m，9p的单链构象多态性图谱均呈相同形态，DNA测序发现两组的核苷酸序列没有差异；经反复改变电泳条件仍未能分离出外显子4，5，7，8的SSCP电泳条带。结论未证实δ-肌聚糖基因（SGCD）是特发性心肌病患者的致病基因。     

姐妹2人同患家族性高胆固醇血症家系LDL-R基因突变分析

目的：对临床确诊的家族性高胆固醇血症（FH）两姐妹及其家系成员进行低密度脂蛋白受体（LDL-R）基因突变分析,探讨其发病机制。方法：提取患者外周血基因组DNA,聚合酶链反应分别扩增启动子和18个外显子片断,采用单链构象多态性（PCR-SSCP）结合银染技术,对异常电泳条带进行核苷酸序列分析。结果：姐妹2人及其父亲,叔叔,祖母均发现LDL-R基因第13外显子存在一个错义突变,与GeneBank对照证实第1879位G→A碱基置换,氨基酸的改变为丙氨酸→苏氨酸（A606T突变）,其母亲和女儿经测序并未发现此突变位点。结论：姐妹2人均为LDL-R基因存在A606T杂合错义突变,并均来自其父系亲属；可能是该家系发病的分子基础。     

高胆固醇血症低密度脂蛋白受体基因点突变的研究

目的：建立低密度脂蛋白－受体（ＬＤＬ－Ｒ）基因点突变监测方法,从基因水平对３０例原发性高胆固醇血症患者进行筛选、明确诊断。 方法：将聚合酶链式反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）与银染技术相结合,用１９对引物对ＬＤＬ－Ｒ基因的全部１８个外显子进行检测,３０例患者中,对筛查出的突变用ＰＣＲ产物直接测序或克隆测序的方法明确突变的性质和位置。 结果：确立的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ条件稳定,银染方法灵敏度高、重复性好,且避免了同位素污染。３０例患者中,发现１例定位于外显子１４的杂合子点突变患者,ＰＣＲ产物直接测序证实第６７１位密码子发生错义突变：ＣＣＣ→ＣＧＣ,导致脯氨酸→精氨酸;１例纯合子家族性高胆固醇血症患者外显子７发生点突变,克隆测序证实密码子３０８位发生错义突变：ＴＡＣ→ＴＧＣ,导致半胱氨酸→酪氨酸;２例杂合子患者外显子４的３’部分ＳＳＣＰ出现相同异常带型。查阅文献,测序证实的突变皆是新的突变。 结论：建立的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法可用于高胆固醇血症患者ＬＤＬＲ基因点突变的筛检。研究结果从基因水平证实中国家族性高胆固醇血症患者ＬＤＬ－Ｒ基因突变具有多样性的特点。     

一家族性高胆固醇血症家系低密度脂蛋白受体基因突变分析

为分析一家族性高胆固醇血症家系低密度脂蛋白受体的基因突变，提取患儿及其父母外周血基因组DNA，用聚合酶链反应扩增低密度脂蛋白受体基因的18个外显子。用单链构象多态性分析检测聚合酶链反应产物，对单链构象多态性分析电泳结果异常者进行DNA序列分析。结果发现，单链构象多态性分析发现患者及其母亲第10外显子存在一异常条带。DNA测序结果证实患者第10外显子的471位密码子由AGA同义突变为AGG，483住密码子由TGG突变为TAG，导致在483住提前出现终止密码子。本研究利用聚合酶链反应一单链构象多态性分析方法报道了一个新的低密度脂蛋白受体突变位点。     

应用RNA干扰技术体外抑制脂蛋白脂肪酶基因的表达

目的给探讨脂蛋白脂肪酶基因作为动脉粥样硬化基因治疗靶点提供实验基础.方法利用RNA干扰技术在细胞水平抑制脂蛋白脂肪酶基因的表达,根据人脂蛋白脂肪酶基因设计靶序列短发夹RNA,构建重组干扰质粒pSIREN-DNR-shRNA,将干扰质粒与人脂蛋白脂肪酶真核表达质粒pCDNA3-hLPL以脂质体方法共转染COS-7细胞,通过实时荧光定量聚合酶链反应、Western blot和活性检测等方法判断脂蛋白脂肪酶基因抑制的效果.结果转染干扰质粒的细胞中脂蛋白脂肪酶mRNA、蛋白表达以及酶活性均明显降低,抑制率可达70%以上.结论所选靶序列可以有效抑制细胞中脂蛋白脂肪酶基因的表达,为进一步的体内研究奠定了基础.     

脑出血患者脂蛋白脂酶基因PvuⅡ酶切多态性的观察

目的探讨脂蛋白脂酶基因PvuⅡ多态性与脑出血的关系。方法采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP),对55例脑出血患者和正常对照组58例脂蛋白脂酶基因PvuⅡ多态性分析。结果(1)正常对照组PvuⅡ等位基因频率分别为P 67.24%,P-32.76%;脑出血组PvuⅡ等位基因频率为P 63.63%,P-36.37%;脂蛋白脂酶基因PvuⅡ等位基因频率在脑出血组与正常对照组之间差异无显著性。(2)与正常对照组相比,脑出血患者组血清TG、LDL-c水平较对照组升高(P<0.05);脑出血患者组血清HDL-c、ApoAI水平较对照组降低(P<0.05)。结论脂蛋白脂酶PvuⅡ酶切多态性与脑出血无明显关联。     

胆固醇酯转运蛋白D~(442)→G突变对高密度脂蛋白胆固醇水平的影响

目的探讨胆固醇酯转运蛋白D442→G变异对国人血脂水平的影响。方法收集天津地区189例健康人群,检测其血脂水平,并应用聚合酶链反应限制片长多态性分析方法对胆固醇酯转运蛋白D442→G突变进行检测。结果高密度脂蛋白胆固醇水平较高组与对照组D442→G等位基因频率分别为6.03%和1.53%,具有统计学差异(P<0.05)。D442→G基因变异携带组高密度脂蛋胆固醇水平显著高于对照组(P<0.01),其它血脂水平无显著性差异。结论胆固醇酯转运蛋白第15外显子D442→G突变与高密度脂蛋白胆固醇水平升高密切相关。     

慢性乙型肝炎患者HBV C基因启动子变异的临床意义

目的:探讨慢性乙型肝炎中C基因启动子(BCP)变异的临床意义。方法:采用错配PCR与限制性长度片段多态性分析(RFLP)相结合,检测35例慢性乙型肝炎患者BCP区核苷酸(nt)1762碱基A→T和1764G→A联合突变及前C区nt1896G→A终止变异。结果:在35例慢性乙型肝炎中检出BCP区T1762A1764变异8例(23％),其中6例血清HBeAg( ),2例抗HBe( ),而7例前C区A1896变异中HBeAg( )2例,抗HBe( )5例,未见T1762A1764变异和A1896变异同时出现者。结论:提示HBV毒株BCP区T1762A1764变异可能与前C区A1896变异不同,它的出现不足以导致HBeAg(—)型的慢性肝炎。     

冠心病患者脂蛋白脂肪酶多态性的分布分析

为了探讨脂蛋白脂肪酶基因内含子6区（PvuⅡ）和8区（HindⅢ）位点变异与冠心病的关系，应用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性方法分析106例心肌梗塞存活病人及106例正常健康人的脂蛋白脂肪酶基因PvuⅡ、HindⅢ位点多态性。并采用非条件的lo-gistic单元及多元回归分析。结果发现，糖尿病史、吸烟史、高血压、脂蛋白脂肪酶等位基因P-和单倍体H P-是冠心病独立的危险因素，其中P-和H P-在多元回归分析后其比值比为3．59和2.54，载脂蛋白A／B的比值比为0．06。因此认为除传统的危险因素外，脂蛋白脂肪酶P-和单倍体H P-也是冠心病独立的危险因素，载脂蛋白A／B比值可能是较其他血脂指标更好的冠心病独立的预测危险因素。     

应用骨髓移植研究巨噬细胞脂蛋白脂酶对严重高甘油三酯血症小鼠脂代谢的作用

目的 研究骨髓中巨噬细胞来源的脂蛋白脂酶(LPL)对遗传性极高甘油三酯血症小鼠血浆脂蛋白代谢的作用.方法 将8只雌性脂蛋白脂酶基因缺陷(LPL-/-,LK)小鼠随机分为两组,用1 000 rad~(137)Cs照射,6 h后分别尾静脉注射脂蛋白脂酶基因缺陷的雄性小鼠及野生型(WT)雄性小鼠的骨髓.骨髓移植后通过眶静脉采血收集小鼠血浆,监测血浆甘油三酯、胆固醇、血浆脂蛋白脂酶活性等指标的变化,并用快效液相色谱技术检测血浆脂蛋白的分布.结果 移植后第4周,与LPL-/-→LPL-/-骨髓移植组相比,WT→LPL-/-骨髓移植组小鼠血浆甘油三酯水平降低83.2%(P<0.05,n=4),胆固醇水平降低74.4%(P<0.05,n=4).与骨髓移植前相比,WT→LPL-/-骨髓移植组小鼠血浆甘油三酯水平降低86.2%(P<0.05,n=4),胆固醇水平降低78.8%(P<0.01,n=4),脂蛋白脂酶活性增加4.5倍(P<0.05,n=4).LPL-/-→LPL-/-骨髓移植组小鼠血浆甘油三酯、胆固醇水平以及血浆脂蛋白脂酶活性较移植前均无明显改变.结论 骨髓巨噬细胞来源的脂蛋白脂酶对脂代谢具有重要的调节作用,可有效改善遗传性极高甘油三酯血症小鼠的高脂血症.     

K-ras基因点突变对胰腺癌的诊断价值

背景传统的放射或超声检查早期诊断胰腺癌非常困难.目的研究胰腺良、恶性病变中的K-ras基因12密码子点突变情况,探讨K-ras基因点突变对早期胰腺癌的诊断价值.方法取23例胰腺癌和12例胰腺良性病变标本,经DNA提取后,行半巢式聚合酶链反应(PCR),扩增产物借助聚丙烯酰胺凝胶电泳检测有无K-ras基因点突变.结果胰腺癌和胰腺良性病变石蜡包埋组织的K-ras基因12密码子点突变率分别为65.2%(15/23)和33.3%(4/12)(P＜0.05).结论K-ras基因12密码子点突变的检测可能有助于胰腺癌,尤其是早期胰腺癌的诊断.     

脂蛋白脂肪酶-447C/G基因多态性与老年脑梗死的关系

目的 探讨脂蛋白脂肪酶基因-447C/G多态性与我国老年脑梗死的关系.方法 采用病例-对照研究,对206例老年脑梗死患者和203例非脑血管病患者(对照组)采用多聚酶链反应-限制性片长多态性对-447C/G基因多态性进行分析.结果 脑梗死组中CC、CG+ GG基因型和C、C等位基因的频率分别是83.98％、16.02％和91.75％、8.25％;对照组中CC、CG+ GG基因型和等位基因C、G的频率分别是81.77％、18.23％和90.89％、9.11％.-447C/G基因型分布和等位基因频率在脑梗死组与对照组之间差异无显著性(P＞0.05);各基因型之间血脂、血压水平差异无显著性(P＞0.05).脑梗死多因素回归方程的主要危险因素包括吸烟史、糖尿病史、家族史.结论 (1)-447C/G基因多态性可能与老年脑梗死的发病无关.(2)-447C/G基因多态性与老年人的血脂及血压可能无关.