BCSC-1 过表达抑制肝癌Bel-7402细胞的增殖、侵袭、黏附和迁移

目的：研究人乳腺癌候选抑癌蛋白1基因（breast cancer suppressor candidate 1,BCSC-1）过表达对肝癌Bel-7402细胞的增殖、侵袭、黏附和迁移的影响,并探讨其可能的机制。方法：将pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1和空质粒pcDNA3.1/v5-HisB转染的Bel-7402细胞作为BCSC-1组和空载体组,Bel-7402细胞为野生型组。MTT法、Transwell实验、体外黏附实验和划痕实验分别检测BCSC-1过表达对Bel-7402细胞增殖、侵袭、黏附和迁移的影响,Real-time PCR检测BCSC-1过表达对Bel-7402细胞中与细胞增殖、黏附相关的 ICAM-1、PTTG、骨桥蛋白（osteopontin,OPN）mRNA表达的影响。结果：转染pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1后Bel-7402细胞中 BCSC-1 mRNA的表达水平显著高于空载体组和野生组细胞\[（10.58±0.56）vs（1.10±022）、（1.00±0.01）,均P＜0.01\],成功制备 BCSC-1 稳定过表达的Bel-7402细胞株。与空载体组和野生型组相比, BCSC-1组Bel-7402细胞生长速度明显减慢\[72 h：（0.29±0.003） vs （0.34±0.014）、（0.35±0.013）,均P<0.05\];侵袭率\[（76.20±1.85）% vs（93.42±3.24）%、（100.00±1.05）%,均P<0.01）\]、黏附率\[（58.57±0.84）% vs（97.14±0.84）%、（100.00±130）%,均P<0.01\]显著降低,迁移距离显著降低\[（116.60±10.58） vs （231.33±10.26）、（237.96±11.58）μm,均P<001\];同时过表达 BCSC-1的Bel-7402细胞的OPN mRNA表达量明显降低\[（0.12±0.06) vs (0.95±0.14）、（1.00±0.08）,均P<001\], ICAM-1、PTTG mRNA表达无明显变化。结论： BCSC-1过表达能够抑制Bel-7402细胞的增殖、侵袭、黏附和迁移能力,其机制可能与OPN基因表达下降有关。     

丙戊酸钠对白血病细胞Jurkat的增殖抑制作用

 目的　探讨丙戊酸钠（VPA）对Jurkat细胞增殖抑制作用及对组蛋白乙酰化修饰调控的影响。方法　采用CCK-8法检测VPA对Jurkat细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测VPA作用前后Jurkat细胞周期的变化情况;半定量RT-PCR检测VPA作用前后Jurkat细胞中组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）mRNA的表达变化;Western blotting检测VPA作用前后HDAC1及组蛋白H3、H4乙酰化蛋白水平的变化。结果　VPA对Jurkat细胞的增殖抑制作用呈时间-浓度依赖性;不同浓度的VPA处理细胞48 h后,细胞周期检测显示随浓度增加,G0／G1期比例增高,S期比例下降,细胞被阻滞在G0／G1期（P＜0.05）;RT-PCR证实VPA能够抑制HDAC1 mRNA水平的表达;Western blotting方法分析证实,不同浓度VPA作用细胞48 h后降低HDAC1蛋白水平,提高组蛋白H3、H4乙酰化表达水平。结论　VPA能抑制Jurkat细胞增殖,阻滞细胞周期于G0／G1期,这可能与VPA抑制HDAC1表达,上调组蛋白H3、H4乙酰化水平有关。     

急性白血病组蛋白乙酰化修饰及其对错配修复基因表达的调控作用

 目的　探讨急性白血病患者组蛋白乙酰化修饰规律,并探索组蛋白乙酰化对错配修复基因hMSH2 和hMLH1差异表达的调控作用。方法　用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测56例急性白血病患者和30名健康志愿者单个核细胞（MNC）的错配修复基因hMSH2 和hMLH1 mRNA的表达,用Western blot法检测组蛋白H3、H4、去乙酰化酶（HDAC1）、hMSH2 和hMLH1基因的蛋白表达情况。用组蛋白去乙酰转移酶抑制剂（TSA）诱导30例白血病患者MNC乙酰化,并检测处理后MNC的组蛋白H3、H4、HDAC1、hMSH2 和hMLH1的表达状态变化。结果　急性白血病组的hMSH2 和hMLH1、组蛋白H3、H4的蛋白表达量分别为0.4610±0.1211、0.4013±0.1143、0.4103±0.1241和0.4251±0.1081,均明显低于健康志愿者组的蛋白表达量（0.9461±0.1841、0.9960±0.2021、0.8971±0.1194、0.9513±0.1953）,差异均有统计学意义（t值分别为3.341、3.935、2.843、3.575,P＜0.05）;而急性白血病患者组的HDAC1表达（0.8841±0.2018）高于健康志愿者组的表达量（0.5142±0.1340）,差异有统计学意义（t＝2.634,P＜0.05）;TSA作用于白血病单个核细胞后,组蛋白H3、H4、hMSH2 和hMLH1的表达上调,分别比阴性对照组表达上调2.9倍、3.4倍、1.5倍和1.6倍,而HDAC1的蛋白表达出现明显的抑制,表达下调为阴性对照组的40 %。结论　急性白血病患者的组蛋白乙酰化呈低表达现象,组蛋白乙酰化在急性白血病患者中对错配修复基因差异表达具有调控作用。     

丁酸钠对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖及p27^kip1蛋白表达影响的研究

目的：通过观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histon—deacetylase inhibitors，HDACIs）丁酸钠（sodium butyrate，NaB）对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞的增殖影响以及p27^kip1蛋白表达改变，探讨NaB调控乳腺癌细胞增殖的分子机制。方法：乳腺癌MCF-7细胞经不同浓度NaB作用后，相差显微镜观察细胞形态变化和细胞增殖情况，流式细胞仪分析细胞周期分布，免疫组化检测p27^kip1蛋白表达。结果：NaB对MCF-7细胞有显著的增殖抑制作用，呈时间剂量依赖性，处理后的MCF-7细胞出现凋亡形态变化；细胞周期阻滞于（G0／G1期，NaB2 mmol／L组G0／G1，期达（62．2±2．2）％，4mmol／L组G0/G1，期达（78．1±3．8）％，空白组G0／C0期达（53．1±2．4）％，P〈0．05；p27蛋白表达水平上调。结论：NaB可抑制乳腺癌细胞的生长，该作用可能与p27蛋白表达增加有关。     

p38MAPK 在结肠癌细胞凋亡中的作用及与COX-2 的关系

 目的 探讨结肠癌细胞p38MAPK介导celecoxib（COX-2选择性抑制剂）抗肿瘤的作用及与COX-2的关系。方法 用MTT法检测celecoxib对人结肠癌HT-29细胞生长的作用，用Western blot法测定各组细胞COX-2和Phosph—p38MAPK蛋白表达量，采用流式细胞术检测celecoxib和SB203580（p38MAPK特异性抑制剂）作用后HT-29细胞凋亡和细胞周期分布。结果 p38MAPK和COX-2蛋白表达量与对照组（0．23±0.12）（0.95±0．14）相比，celecoxib可使p38MAPK蛋白表达水平明显升高（0．62±0．11），而使COX-2蛋白表达水平降低（0、44±0．11）；SB203580使p38MAPK（0.12±0．05）及COX-2蛋白（0、23±0．13）表达水平均降低；SB203580和celecoxib共同作用后，p38MAPK表达量介于celecoxib和SB203580作用之间（0．43±0．12），COX-2表达量下降最为显著（0．15±0．10））。celecoxib和eeleeoxib＋SB203580均可显著诱导HT-29细胞凋亡（P〈0．01和P〈0．05），与对照纽（4．31％）相比，其凋亡率分别为40．95％、26．24％。结论 在HT29细胞中，celecoxib可通过活化p38MAPK而诱导结肠癌细胞凋亡，p38MAPK是COX-2的上游激酶，COX-2的表达水平受p38MAPK调控，并且COX-2可能对p38MAPK有负反馈调节作用。celecoxib是通过COX-2及其以外的p38MAPK通路诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用的。     

曲古菌素A对胃癌细胞系BGC-823组蛋白H4乙酰化水平及细胞凋亡的作用

[目的]探讨组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂曲古菌素A（TSA）对胃癌细胞系BGC-823中组蛋白H4乙酰化水平及细胞凋亡的影响。[方法]免疫细胞化学法检测TSA干预前后胃癌细胞系BGC-823中乙酰化组蛋白H4的表达，流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率。[结果]TSA干预后胃癌细胞系BGC-823中乙酰化组蛋白H4的表达水平明显升高，乙酰化组蛋白H4阳性细胞数从1．38±1．02上升至31．6±1．02，与未干预相比两者表达有显著性差异（P〈0．01），流式细胞仪分析显示G2期细胞增多，从0．01％上升至19．17％，细胞凋亡率增加到29．9％。[结论]TSA可促进胃癌细胞系BGC-823中乙酰化组蛋白H4的表达，诱导BGC-823细胞凋亡。     

FK228阻断细胞生存信号通路诱导前列腺癌细胞凋亡

目的：研究组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂FK228诱导前列腺癌细胞系DU145凋亡的作用机制。方法：MTT比色法测定FK228抑制DUl45细胞增殖及其对细胞的杀伤效应；瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态的变化；流式细胞术分析细胞周期的改变；蛋白印迹实验检测细胞内蛋白表达水平的变化。结果：FK228明显抑制DU145细胞体外增殖，并介导细胞死亡；12．5ng／ml FK228作用细胞48h后，细胞存活率降至63．7％；伴有细胞形态改变及细胞周期阻滞于G0／G1期；细胞内多种重要的激酶蛋白，包括EGFR、Her2、Raf-1、Src、Cdk4、Akt及凋亡抑制蛋白Survivin均发生了不同程度的降解，细胞内两条重要的生存信号通路Raf-MEK—ERK及P13K／Akt被阻断，细胞发生凋亡。结论：FK228可以通过清除细胞内重要信号蛋白、阻断细胞生存信号通路来诱导DU145细胞发生凋亡。     

香加皮杠柳苷对人食管癌细胞TE-13生长抑制作用

目的：分析中药香加皮醇提物杠柳苷（periplocin from cortex periplocae，CPP）对食管癌细胞株TE-13的生长抑制作用，探讨其诱导细胞周期阻滞的机制。方法：应用MTr法检测CPP对TE-13细胞的抑制作用；Gimsa染色法分析TE-13细胞的形态学变化；FCM法检测细胞周期分布和凋亡率；Western印迹法检测TE-13细胞经药物处理前后细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4、CDK2蛋白表达的变化。结果：CPP对TE-13细胞增殖具有明显的抑制作用（P〈0．01），并呈时间和浓度依赖性，药物浓度越大，作用时间越长，抑制效应越强，CPP作用48h时，对TE-13细胞的半数抑制浓度（IC50）为0．61μg／mL。经2μg／mL的CPP作用48h后，TE-13细胞发生明显的凋亡形态学变化；G0／G1期细胞明显增多（P〈0．01），S期细胞明显减少（P〈0．01），G2／M期细胞没有明显变化（P〉0．05）。不同浓度CPP作用48h后能降低TE-13细胞中CDK4蛋白的表达（P〈0．01），对CDK2蛋白的表达则没有明显影响（P〉0．05）。结论：CPP能显著抑制，TE-13细胞的增殖，其作用机制可能与CPP诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡有关。     

HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α、P53、Bcl-2表达及凋亡的影响

背景与目的：本实验研究缺氧诱导因子HIF-1α反义寡核苷酸（antisense oligonueleotides，ASODN）在缺氧环境下对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α、P53、Bel-2表达及细胞凋亡的影响，进一步探讨HIF-1α在缺氧诱导肿瘤细胞凋亡的过程中的作用机制。方法：设计针对HIF-1α RNA亚基的反义、正义寡核苷酸（sense oligodeoxynueleotides，SODN），并建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型，观察缺氧培养不同时相（8、16、24h）5μmol／L的HIF-1α反义寡核苷酸对骨肉瘤MG-63细胞HIF-1α、P53、Bel-2表达及细胞凋亡的影响。半定量RT—PCR方法检测HIF-1α、P53和Bcl-2 mRNA的转录水平，免疫组化（SP法）和免疫印迹（Western Blot）检测HIF-1α、P53和Bcl-2蛋白表达情况。流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：HIF-1α转录水平（8～24h）单纯缺氧组（22．0％～22．6％）及SODN缺氧组（22．0％～22．8％）与常氧组（20．2％～20．9％）比较未见明显改变，而在ASODN缺氧组（16．8％～18．5％）显著降低（P〈0．01）。其蛋白表达单纯缺氧组（33．1％～88．9％）、SODN缺氧组（32．5％～88．7％）随缺氧时间延长明显升高；而P53、Bel-2 mRNA水平单纯缺氧组、SODN缺氧组较常氧组均显著增强（3．4～7．5倍不等）（P〈0．05）。其蛋白的表达这二组也较常氧组均显著增强（2～大于37倍不等）（P〈0．05）。然而在ASODN缺氧组P53、Bel-2 mRNA活性明显减弱（11．5％～13．9％）（P〈0．05），蛋白表达水平也显著降低（13．6％～35．4％）（P〈0．05）：细胞凋亡率其他三组未见明显变化，但ASODN缺氧组显著增加（P〈0．05）。结论：缺氧可以通过诱导野生型P53的突变使HIF-1α和Bcl-2的过表达，从而抑制肿瘤细胞的凋亡。而HIF-1α反义寡核苷酸抑制HIF-1α活性后，可以抑制野生型P53的突变，降低Bcl-2的表达，导致细胞凋亡的增加。     

NF-κB、cyclin D1和p27在非细胞肺癌中的表达及意义

目的：探讨核转录因子-KB（NF-κB）、细胞周期素DI（cyclin D1）和p27在非小细胞肺癌中的表达及临床意义。方法：应用免疫组化S-P法检测58例非小细胞肺癌（NSCLC）和15例正常肺组织中NF-κBp65、cyclin D1、p27的表达。结果：NSCLC组织中NF-κBp65和cyclin D1的表达明显高于正常肺组织中的表达（P〈0．01），p27表达则明显低于正常肺组织（P〈0．01）。NF-κBp65表达与NSCLC瘤体大小、淋巴结转移、临床分期密切相关（P〈0．05）cyclin D1表达与瘤体大小、肿瘤分化、淋巴结转移、临床分期密切相关（P〈0．05）；p27表达与瘤体大小、肿瘤分化密切相关（P〈0．05）。NF-κBp65与cyclin D1在NSCLC组织中的表达呈正相关（P〈0．05），cyclin D1与p27的表达呈负相关（P〈0．05），NF-κBp65与p27的表达无相关性（P〉0．05）。结论：NF-κB、cyclin D1、p27与非小细胞肺癌的发生、发展有关，检测三种蛋白的表达可以间接判断NSCLC的生物学行为。     

组蛋白去乙酰化酶1相互作用蛋白的筛选

目的：筛选与组蛋白去乙酰化酶1（histone deacetylase 1,HDAC1）相互作用蛋白。方法：将带有Flag标签的HDAC1表达质粒分别转染食管癌细胞EC109和结肠癌细胞HCT116,采用免疫印迹检测外源基因的表达。然后采用Flag抗体进行亲和沉淀,收集蛋白样品进行质谱测定。结果：采用RT－PCR技术成功地构建了含Flag标签的HDAC1。转染后检测显示该表达质粒可高效表达于EC109和HCT116细胞中。亲和沉淀所获得的蛋白样品经质谱检测后,分别从EC109细胞和HCT116细胞中筛选出107和17个可能与HDAC1相互作用的蛋白质。结论：通过质谱筛选出可能与HDAC1相互作用的蛋白,为进一步研究HDAC1基因功能及其在肿瘤中的生物学意义奠定基础。     

Romidepsin treatment for relapsed or refractory peripheral and cutaneous T‐cell lymphoma: Real‐life data from a national multicenter observational study

Romidepsin is a class I selective histone deacetylase (HDAC) inhibitor approved by the Food and Drug Administration (FDA) for relapsed/refractory (R/R) cutaneous T‐cell lymphoma (CTCL) and peripheral T‐cell lymphoma (PTCL), treated with at least one prior systemic therapy. Currently, there is paucity of real‐life data on the efficacy and safety of romidepsin in R/R T‐cell lymphoma. This national, multicenter study presents real‐life data on the efficacy and safety of romidepsin in R/R T‐cell lymphoma. Patients diagnosed and treated with romidepsin for R/R CTCL or PTCL between 2013 and 2018 were retrospectively reviewed. Outcomes included overall survival (OS), event‐free survival (EFS), overall response rate (ORR), complete response (CR), and adverse events. Fifty‐three patients with R/R PTCL (n = 42) or CTCL (n = 11) were included. Among CTCL patients, median OS was not reached, ORR was 25%, and none achieved CR. Among PTCL patients, median OS was 7.1 months, EFS was 1.9 months, ORR rate was 33%, and 12.5% achieved CR. In a univariate analysis, predictors for longer EFS include any response to therapy, number of previous lines, and PTCL subclass (with better results for angioimmunobalstic T‐cell lymphoma). In a univariate and multivariate analysis for OS, treatment response was the only factor predicting OS (OR 4.48; CI 95%, 1.57‐12.79; P = .005). Most grade 3 and 4 adverse events were hematological (35%). Infections were reported in 34% of patients. This real‐life experience with romidepsin confirms the results of the pivotal phase II trials. PTCL subtype and the number of previous lines of therapy have an impact on EFS. In addition, patients who had good response to romidepsin benefited most in terms of both EFS and OS. Efforts should be done to identify those patients.     

MS-275抑制肠癌细胞增殖与侵袭及其机制的研究

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)MS-275对肠癌增殖及侵袭的影响。方法:采用MTT法检测MS-275对肠癌细胞Caco-2增殖的抑制作用,用Transwell实验检测MS-275对肠癌细胞Caco-2侵袭能力的影响,蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶-7(MMP-7)蛋白表达量的变化。结果:经MS-275处理后,Caco-2细胞的增殖活性明显降低,8μmol/L的MS-275处理细胞48h,其对细胞活性抑制率高达54.50%,与对照组比较,差异有统计学意义,P<0.01;经MS-275处理后,Caco-2细胞侵袭能力明显降低,8μmol/L的MS-275处理细胞24h,细胞侵袭率降低至15.70%,与对照组细胞相比较,差异有统计学意义,P<0.01;MMP-7的蛋白表达随着MS-275的浓度升高而降低,其中8μmol/L的MS-275处理细胞24h,与对照组相比,MMP-7蛋白表达量降低至18.00%,差异有统计学意义,P<0.01。结论:MS-275能有效抑制结肠癌细胞Caco-2的增殖活性;MS-275能有效抑制结肠癌细胞Caco-2中MMP-7蛋白表达量;MS-275通过抑制MMP-7蛋白的表达能有效抑制结肠癌细胞Caco-2的侵袭能力。     

Antitumor effects of a novel sulfur‐containing hydroxamate histone deacetylase inhibitor H40

Histone deacetylase (HDAC) inhibitors are among the most promising targeted anticancer agents and are potent inducers of growth arrest, differentiation, and/or apoptotic cell death of transformed cells. In this study, antitumor effects of a novel sulfur‐containing hydroxamate HDAC inhibitor, H40, were observed and compared with a typical HDAC inhibitor SAHA. In biochemical HDAC assay, H40 showed a potent HDAC inhibition. It induced histone H3 hyperacetylation, correlating with inhibition of cancer cell proliferation, induction of cell differentiation and cell cycle blockage. A broad cytotoxicity was observed across cell lines from different tumor entities. The autophagy rather than apoptosis inducing activity for both H40 and SAHA was observed in prostate cancer PC‐3M cells. HDAC inhibitor‐induced p21^CIP/WAF1 expression was evident in PC‐3M and HL‐60 cell lines. The in vivo efficacy of H40 against a murine prostate carcinoma TRAMP‐C2 was compared with that of SAHA, which showed that H40 exerted a favorable antitumor action when only administered twice a week. We conclude that H40 might have clinical value in cancer chemotherapy and warrants further investigation in this regard. © 2008 Wiley‐Liss, Inc.     

Telomerase Activity In Preleukemia And Acute Myelogenous Leukemia

The development of acute leukemia from preleukemia involves the appearance of clones with increasing proliferative potential. The studies described here demonstrate that telomerase activity progressively increases as the bone marrow cells acquire increasing proliferative potential. This was demonstrated by measuring telomerase activity in normal bone marrow, in post-treatment lymphoma marrows with skewed Lyonization, and in MDS and AML marrows. The greater telomerase activity in myelodysplastic marrow than in normal marrow is not due to a higher proportion of blast cells or to a higher proliferative rate of the MDS marrow. These data demonstrate that the increasing proliferative potential of the marrow which occurs during the development of AML is associated with a simultaneous increase in telomerase activity.