聚己内酯静电纺丝支架与人牙周膜干细胞的生物相容性

目的：观察荧光标记的人牙周膜干细胞在聚己内酯静电纺丝支架上的生长情况,评价聚己内酯静电纺丝支架与人牙周膜干细胞的生物相容性.方法：采用有限稀释法,体外分离培养人牙周膜干细胞.用荧光染料对牙周膜干细胞进行标记,检测细胞增殖情况,评价荧光标记对细胞生长特性的影响.制备聚己内酯静电纺丝支架,与牙周膜干细胞直接接触共培养7d,激光共聚焦显微镜观察细胞在支架材料上的黏附和增殖情况,扫描电镜观察细胞在支架材料上的生长状态.结果：成功分离培养人牙周膜干细胞;荧光染料标记后细胞发红色荧光,标记对细胞形态和生长特性无显著影响.激光共聚焦显微镜观察,可见牙周膜干细胞能够在聚己内酯静电纺丝支架上黏附增殖,局部细胞生长融合.扫描电镜观察,可见牙周膜干细胞在聚己内酯静电纺丝支架上黏附牢固,可进入支架内部复层生长.结论：荧光标记的牙周膜干细胞在聚己内酯静电纺丝支架上生长良好,聚己内酯静电纺丝支架与牙周膜干细胞具有良好的生物相容性,有望作为牙周组织工程的载体材料.     

辛伐他汀/聚己内酯静电纺丝膜的制备及其生物相容性评价

目的：制备辛伐他汀（simvastatin）/聚己内酯（Polycaprolactone,PCL）静电纺丝膜,评价其生物相容性.方法：制备PCL静电纺丝膜和simvastatin/PCL静电纺丝膜,通过扫描电镜观察两种膜片的形貌特征.选择人牙周膜成纤维细胞（periodontal ligament fibroblasts,PDLFs）与膜片浸提液共培养,检测细胞增殖情况,评价材料毒性;PDLFs接种于膜片共培养7d,扫描电镜观察细胞生长情况,以直接接触法检测膜片的细胞毒性.将PCL和simvastatin/PCL静电纺丝膜植入大鼠皮下,术后14d取出标本,HE和Masson染色法进行组织学观察.结果：成功制备出纤维直径为纳米级别的simvastatin/PCL静电纺丝膜.细胞增殖试验和直接接触试验结果显示,PCL和simvastatin/PCL静电纺丝膜的浸提液细胞毒性试验均合格,细胞在材料上伸展充分,连接成片.PCL和simvastatin/PCL静电纺丝膜植入皮下2周后均有包膜形成;与PCL静电纺丝膜相比,simvastatin/PCL静电纺丝膜与周围组织界限较明显,反应层炎症细胞较少.结论：simvastatin/PCL静电纺丝膜的生物相容性良好,细胞毒性和组织相容性均符合生物支架材料的要求.     

牙周膜成纤维细胞与三种可吸收引导组织再生膜生物相容性实验研究

目的：探讨牙周膜成纤维细胞与可吸收引导组织再生膜生物相容性，为牙周组织工程中支架材料选择提供依据。方法：将人牙周膜成纤维细胞与三种商品化引导组织再生膜：BME-10XR(中国医学科学院生物医学工程研究所)、BioMeshR(韩国Samyang公司)及Bio-GideR(美国Osteohealth公司)体外复合培养，进行形态学观察、细胞附着及增殖的检测。结果：人牙周膜成纤维细胞可在三种可吸收膜上附着、增殖，并复层生长。细胞在三种膜上的附着无显著性差异(P＞0．05)；在BMK-10XR及Bio-GideR上生长、繁殖明显好于BioMesh R(P＜0．05)。结论：BME-10X R及Bio-Gide R具有良好的生物相容性，有望成为牙周膜成纤维细胞的载体材料应用于牙周组织工程研究.     

聚己内酯电纺纤维支架培养人牙周膜细胞的体外研究

目的：研究聚己内酯（PCL）电纺纤维支架上人牙周膜细胞的生物学行为，初步探讨PCL电纺纤维支架材料应用于牙齿再生和牙周组织工程研究的可行性。方法：采用静电纺丝法制备PCL电纺纤维支架。组织块法培养人牙周膜细胞（PDLC），传代扩增后接种于PCL电纺纤维支架上。激光共聚焦显微镜、扫描电镜观察人PDLC在支架材料上的黏附、生长情况，MTT法检测PCL电纺纤维支架对PDLC增殖的影响。结果：PCL电纺纤维支架呈无纺多孔网状结构，直径范围为338～424nm，纤维形态光滑均一。激光共聚焦显微镜、扫描电镜显示PDLC在支架上贴附牢固，伸展充分，增殖旺盛并分泌大量的细胞外基质。MTT法检测显示：PCL电纺纤维支架材料对PDLC生长增殖的影响与对照组培养板相比无统计学差异（P〉0．05）。结论：PCL电纺纤维支架具有良好的生物相容性，有望作为一种新型的支架材料应用于牙周组织工程。     

胶原改性PLGA电纺纤维的制备及其细胞相容性研究

目的：制备胶原改性的聚羟基乙酸-聚乳酸共聚物（PLGA）电纺纳米纤维支架,检测其对真皮成纤维细胞生长和增殖的影响。方法：采用静电纺丝法制备PLGA电纺纤维,并且利用低温等离子体技术对电纺纤维进行改性,在其表面接枝Ⅰ型胶原蛋白。将体外培养的真皮成纤维细胞接种至材料表面,采用MTT法和扫描电镜研究成纤维细胞在改性前后材料表面的生长和增殖情况,评价改性后PLGA电纺纤维支架的细胞相容性。结果：MTT结果表明,真皮成纤维细胞在胶原接枝改性的PLGA电纺纤维表面的生长明显优于未经处理的纤维。电镜观察显示所制备的PLGA电纺纤维直径均一,呈相互连通的多孔网状结构,成纤维细胞在改性后的材料表面具有良好的生长形态。结论：经过等离子体改性-胶原接枝,PLGA电纺纤维的细胞相容性得到有效提高,在组织工程支架领域有良好的应用前景。     

电纺聚己内酯/Ⅰ型胶原蛋白/纳米锆酸钙复合支架的制备及其生物相容性的研究

目的:制备聚己内酯(PCL)/Ⅰ型胶原(COLI)/纳米锆酸钙(nCZ)复合支架用于骨组织再生,评价其性能及对人牙周膜细胞(PDLCs)生物相容性及成骨分化的影响.方法:用静电纺丝法制备PCL/COLI、PCL/COLI/纳米羟基磷灰石(nHA)和PCL/COLI/nCZ复合支架,通过扫描电子显微镜表征支架形貌,能量色...     

PLGA/鱼皮胶原共轭静电纺丝膜生物相容性分析

目的： 对一种新型聚乳酸-羟基乙酸（polylactic acid-glycolic acid，PLGA）/鱼皮胶原共轭静电纺丝膜的生物相容性进行分析。方法： 以PLGA和医用级鱼皮Ⅰ型胶原为原材料，通过共轭静电纺丝技术制备出高取向性的纳米纤维膜，然后分别以小鼠成纤维细胞L929为研究模型，初步评价其细胞、组织相容性，为其用于种植骨组织再生（guided bone regeneration，GBR）提供实验依据。结果： 纤维细胞在纤维膜表面黏附生长良好，有大量细胞伸出伪足，沿着纤维的取向进行铺展排列。结论： PLGA/鱼皮胶原共轭静电纺丝膜有利于成纤维细胞生长，可望用于种植骨组织再生。     

离子化胶原作为牙周组织工程支架材料的实验性研究

目的：检测具有不同表面电荷性质的离子化胶原材料对体外培养的人牙周膜成纤维细胞粘附、生长增殖的影响。方法：MTT法检测人牙周膜成纤维细胞在不同支架（天然胶原、甲基化胶原、琥珀酰化胶原）上的粘附、生长增殖情况,并用扫描电镜进行观察。结果：MTT法：与天然胶原比较,甲基化胶原更有利于人牙周膜成纤维细胞粘附（P〈0.05）,琥珀酰化胶原则减弱了细胞粘附（P〈0.05）。结论：相对于不具有表面电荷性质的天然胶原,具有表面正电荷性质的甲基化胶原材料促进了人牙周膜成纤维细胞粘附、生长增殖,为新型牙周组织工程支架材料的研究提示了一种方向。     

电纺左旋聚乳酸和左旋聚乳酸羟基磷灰石纳米纤维细胞相容性的比较研究

目的：用MTT法检测电纺左旋聚乳酸和左旋聚乳酸/羟基磷灰石PLLA和PLLA/HA纳米纤维材料,对人牙周膜细胞生长曲线的影响,评价两种材料的细胞相容性。方法：通过电纺技术制备PLLA、PLLA/HA纳米纤维材料,体外分离、培养并鉴定人牙周膜细胞,用MTT法检测人牙周膜细胞在两种材料上的生长曲线,评价两种材料的细胞相容性及其用于口腔组织工程的可能性。结果：成功分离、培养了人牙周膜细胞,通过免疫组织化学染色鉴定细胞来源于中胚层,为牙周膜细胞。电纺法制备的PLLA、PLLA/HA纳米纤维材料具有三维网状空间结构,与人牙周膜细胞共培养,MTT检测结果显示,细胞能够在材料上生长增殖,在第七天时PLLA/HA组细胞增殖好于PLLA组和对照组。结论：电纺PLLA和PLLA/HA纳米纤维材料生物相容性良好,PLLA/HA组较单纯PLLA组能够促进细胞的增殖,有望成为良好的新型口腔组织工程支架材料。     

人牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞的培养和生物学特征

目的：探讨采用不同方法建立体外培养人牙龈成纤维细胞和人牙周膜成纤维细胞并对其生物学特性作初步探讨。方法：分别采用消化培养法和组织块培养人的牙龈和牙周膜成纤维细胞。通过倒置显微镜活体观察，以及光镜、透射电镜、免疫组化和生长曲线等方法对其生物学特性作初步观察。结果：消化培养法成功率低于组织块培养法。光镜下和透射电镜下观察两种细胞在形态和结构上相似。免疫组化染色证实此两种细胞均来源于中胚层的纤维母细胞。生长曲线表明牙龈成纤维细胞的倍增时间比牙周膜成纤维细胞稍短，而牙周膜成纤维细胞的增殖活性比牙龈成纤维细胞高。结论：组织块培养法适用于此二种细胞的培养。细胞生物学特征方面有许多相似形，提示这两种细胞来于同一个细胞群。     

人牙周韧带细胞在聚羟基乙酸支架上体外三维培养的实验研究

目的：应用聚羟基乙酸(polyrglycolic acid，PGA)作为人牙周韧带细胞(periodontal ligament cell，PDLC)的三维体外培养支架，观察细胞的形态学特征和生物学性状。方法：将人牙周韧带细胞与PGA三维支架进行体外复合培养，用倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞形态结构及其与支架的粘附性和组织相容性，并用Ⅰ型胶原抗体检测细胞的Ⅰ型胶原分泌情况。结果：光镜和扫描电镜显示，人PDLC在PGA三维支架上粘附良好，分泌基质旺盛。免疫组化染色显示细胞支架复合物中Ⅰ型胶原表达阳性。结论：人PDLC在PGA三维支架上能够维持其形态学特征及生物学性状。聚羟基乙酸具有良好的粘附性和生物相容性，适宜进一步作为构建组织工程化牙周韧带的支架材料。     

胶原基纳米骨的遗传毒性及对体外培养细胞影响的研究

目的：体外研究胶原基纳米骨的遗传毒性,及对原代培养的人牙周膜成纤维样细胞、兔成骨细胞的影响。方法：采用Ames致突变试验、MTT法及碱性磷酸酶（ALP）检测法,测定不同浓度胶原基纳米骨（nHAC）的浸提液对鼠伤寒沙门菌的致突变比值的影响和对人牙周膜成纤维样细胞及兔成骨细胞的影响。结果：nHAC的浸提液各剂量组对鼠伤寒沙门菌的致突变比值均小于2,nHAC不会引起鼠伤寒沙门菌的回复突变数增加。不同时间点用不同浓度浸提液培养的人牙周膜成纤维样细胞正常增殖,浸提液不影响兔成骨细胞的功能表达。结论：胶原基纳米骨无遗传毒性,不影响人牙周膜成纤维样细胞的增殖活性和兔成骨细胞的成骨活性,是一种组织工程骨支架的良好材料。     

人牙周膜成纤维细胞在纯钛表面附着的电镜观察

目的：研究人牙周膜成纤维细胞(PDLF)在纯钛金属表面的结合形式和超微结构。方法：将纯钛试件放在12孔培养板内，取生长良好的第五代人牙周膜成纤维细胞接种在试件表面，培养72h后取出，原位包埋法制作透射电镜标本，透射电镜观察。结果：人牙周膜成纤维细胞在纯钛表面附着形式不同于上皮细胞在金属表面的附着形式，细胞与金属结合界面中未观察到典型半桥粒结构。人牙周膜成纤维细胞胞浆中，细胞器发达，富含与蛋白质合成、代谢及增殖等生物学功能有关的细胞超微结构，如粗面内质网、线粒体、核糖体、细胞核等。结论：人牙周膜成纤维细胞在钛金属表面的附着形式，不同于上皮细胞的附着形式，表现为蛋白合成旺盛，可能为细胞直接附着，其具体附着形式还待进一步研究。     

人牙周韧带成纤维细胞与壳聚糖-磷酸三钙复合材料相容性的扫描电镜观察

目的：探讨人牙韧带成纤维细胞与壳聚糖—磷酸三钙复合材料的生物和容性。方法：采用冷冻干燥法制备壳聚糖-磷酸三钙复合材料，组织块法培养人牙周韧带细胞，传代扩增后接种到材料上，体外继续培养，扫描电镜观察。结果：扫描电镜下可见材料具有良好的多孔网状结构，人牙周韧带细胞伸出多个伪足样突起，紧密贴附在材料表面，细胞沿材料的孔隙边缘生长并连接成片。结论：人牙周韧带成纤维细胞与壳聚糖-磷酸三钙复合材料具有良好的生物相容性。     

三种太金属表面处理方法对牙周膜成纤维细胞附着和生长的影响

目的：比较三种不同表面处理方法对牙周膜细胞在钛金属表面附着和生长影响。方法：将三种经不同方法表面处理的钛金属（纯钛，钛75，钛表面氮化处理）试件放在12孔培养板内，取生长良好的第5代人牙周膜成纤维细胞（PDLF）接种在试件表面，分别在接种后24h和72h进行贴壁细胞计数，并在扫描电镜下观察细胞在金属表面附着情况.结果：接种24h后纯钛表面的贴壁细胞数多于钛75金属表面的细胞数（P＜0．05），但在接种后72h时这种差异消失，不论接种后24h或72h钛表面氮化处理金属表面的细胞数都明显少于另外两种金属表面的细胞数（P＜0．05），扫描电镜结果表明PDLF在纯钛和钛75表面伸展，而在钛表面氮化处理的金属表面细胞基本不伸展。结论：人PDLF在纯钛，钛75表面的生物性附着优于在表面氮化处理的钛金属表面。     

Tissue engineering of a periodontal ligament-alveolar bone graft construct

PURPOSE: This paper reports on a 2-phase study of a novel membrane-scaffold graft construct, its ability to support periodontal ligament fibroblast (PDLF) and alveolar osteoblast (AO) growth in vitro, and its use for tissue engineering a PDL-AO interface in vivo. MATERIALS AND METHODS: Human PDLFs were seeded onto perforated poly(epsilon-caprolactone) membranes (n=30) at 78,000 cells/cm2; human AOs were seeded on poly(epsilon-caprolactone) scaffolds (n=30) with fibrin glue at 625,000 cells/cm3. Cell attachment, morphology, viability, and metabolic activity were monitored for 3 weeks in vitro. Subsequently, cell-seeded membrane-scaffold constructs (experimental group, n=9) and nonseeded constructs (control group, n=4) assembled with fibrin glue were implanted subcutaneously into 7 athymic mice for 4 weeks. RESULTS: PDLFs formed confluent layers on membranes, whereas AOs produced mineralized matrices within scaffolds upon osteoinduction in vitro. Well-vascularized tissue formation was observed after implantation. Integration at the membrane-scaffold interface was enhanced in the experimental group. Type I collagen, type III collagen, fibronectin, and vitronectin were found adjacent to membranes and within constructs. Bone sialoprotein expression and bone formation were undetectable. DISCUSSION: Membrane perforation and scaffold porosity facilitated tissue integration and vascularization at the construct-recipient site. However, the interaction between PDLF and AO could have interfered with osteogenesis at the interface of soft and mineralizing tissues. CONCLUSIONS: Both matrices supported PDLF and AO attachment and proliferation in vitro. The membrane-scaffold construct facilitated tissue growth and vascularization while providing strength and form in vivo.     

FN对牙龈和牙周膜成纤维细胞生物学活性的影响

目的：观察纤维结合蛋白（FN）对牙龈成纤维细胞（GF）、牙周膜成纤维细胞（PDLF）的影响。方法：采用细胞培养、MTT比色测定、碱性磷酸酶（ALP）测定法、考马斯亮蓝法和茜素红染色法。结果：FN能促进两种细胞的增殖，对PDLF的碱性磷酸酶活性和蛋白合成也有促进作用，但对其矿化结节形成能力无显著影响。结论：FN能促进牙龈和牙周膜成纤维细胞的增殖及蛋白合成，但其促进细胞分化的能力有限，尚需其它生长因子的协助以促进组织再生。     

Cell Survival within Pulp and Periodontal Constructs

The purpose of this study was to measure cell survival and degradation within tissue-engineered dental constructs. Dental pulp stem cells (DPSCs) and periodontal ligament stem cells (PLSCs) were seeded on three types of tissue engineering scaffolds: a synthetic open-cell D,D-L,L-polylactic acid (polymer) scaffold, a bovine collagen scaffold (collagen), and a calcium phosphate bioceramic (calcium phosphate) scaffold. The dental pulp and periodontal constructs (n = 144) were maintained in cell culture for between 3 and 14 days. The cell survival and degradation within the constructs were measured using histologic criteria. The DPSC and PLSC survival was optimal in the polymer and collagen constructs but not the calcium phosphate constructs, especially over longer time periods. These in vitro results suggest that both the polymer and collagen scaffolds and the DPSCs and PLSCs can be combined to create pulp and periodontal constructs for use in future regenerative dental treatments.