同时测定血清中苯巴比妥、苯妥英及卡马西平的反相高效液相色谱法

为了探讨高效液相色谱法同时测定苯巴比妥（ＰＢ）、苯妥英（ＰＨＴ）、卡马西平（ＣＢＺ）血药浓度的最佳实验条件，将标本在ｐＨ７．６条件下用二氯甲烷提取后经高纯度氮气在５０℃水浴中吹干，再用甲醇重溶后进行色谱分析。色谱条件：ＹＷＧ－Ｃ１８柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，１０μｍ），流动相甲醇：水为６０∶４０，流速１ｍｌ／ｍｉｎ，柱温４０℃，波长２５４ｎｍ。结果ＰＢ、ＰＨＴ、ＣＢＺ的最低检出浓度各为０．６７μｇ／ｍｌ、０．９４μｇ／ｍｌ和０．３１μｇ／ｍｌ。在三个不同水平下，ＰＢ、ＰＨＴ、ＣＢＺ的平均回收率各为９８．１４％、９６．７２％和９９．３６％，日内和日间变异均低于６．２５％，内源性物质及１０种常用药物未见干扰，在分析范围内具有良好的线性关系。该方法操作简便、快捷、准确，可满足临床和科研的需要。     

反相高效液相色谱法同时测定苯巴比妥、苯妥英和卡马西平的血药浓度

目的建立同一条件下采用反相高效液相色谱法同时测定苯巴比妥、苯妥英、卡马西平血药浓度的方法。方法采用ZORBAX 80AExtend-C18(5μm,4.6mm×150mm)为分析柱,CH_3OH：[0.1mol／L CH_3COONa：0.05％β-CYD(32：18)](68：32)为流动相,UV检测波长为230nm,流速为0.8ml／min。结果苯巴比妥、苯妥英、卡马西平分离良好,分离度皆≥1.5；最低检测浓度分别为0.380 2μg／ml、0.182 3μg／ml、0.144 4μg／ml；线性范围分别为0.4～60.0μg／ml、0.2～30.0μg／ml、0.2～30.0μg／mlμ相关系数分别为0.999 50、0.999 27、0.999 38；回收率分别为97.04％、96.52％及97.09％；日內和日间相对标准偏差皆≤5.80％。结论本方法简便、快速,重现性好,结果可靠,适用于临床常规检查。     

高效液相色谱法同时测定血中苯巴比妥、苯妥英和卡马西平的浓度

采用LC-6A系统液相色谱仪同时测定血中苯巴比妥、苯妥英和卡马西平三种药物的血药浓度。标本在pH7.6的条件下经二氯甲烷提取后,经高纯氮气在50℃的水浴中吹干,再用甲醇重溶后进行色谱分析。色谱条件为:C_(18)ODS6×150mm柱,流动相甲醇:水为60:40,流速1ml/min,柱温35℃,波长为254nm。     

HPLC法同时快速测定血清中苯妥英、卡马西平的浓度

用反相高效液相色谱法同时测定人血清中苯妥英、卡马西平两种抗癫痫药物。以苯胺作内标物。血样处理用乙腈沉淀蛋白后，于ＯＤＳ色谱柱上分离，甲醇：乙腈：水（３０：２０１５０）为流动相，流速１．５ｍｌ／ｍｉｎ，检测波长２１４ｎｍ，两种药物分离良好，样品预处理过程快速简便，整个过程仅需２０ｍｉｎ即可检出，适用于临床病人抗癫痫药物血浓度监测     

HPLC法同时测定苯巴比妥、苯妥英钠及卡马西平的血药浓度

目的：本法建立了高效液相色谱法(HPLC)同时测定抗癫痫药苯巴比妥(PB)、苯妥英钠(DPH)及卡马西平(CBZ)的血药浓度。方法：将样本在PH7．6条件下用二氯甲烷提取后经纯净的空气在50℃水浴中吹干，再用甲醇重溶后进行色谱分析。色谱条件：ELITEC18柱，流动相：甲醇-水(60：40)，流速：1mL／min，柱温：室温，检测波长：235nm。结果：PB、DPH、CBZ的保留时间分别为3．55min、5．89min、7．14min，最低检出浓度分别为1．21μg／ml、0．79μg/ml和0．44μg/ml。在三个不同浓度下，PB、DPH、CBZ的平均回收率各为100．18％、98．32％和100.06％，日内和日间变异均低于9．87％，其他常用抗癫痫药物未见干扰，在分析范围内具有良好的线性关系。结论：该方法操作简便、快捷、准确，可满足临床快速监测的需要。     

高效液相色谱法同时测定苯巴比妥、卡马西平及苯妥英钠的血药浓度

苯巴比妥、卡马西平、苯妥英钠为常用的抗癫痫药物(AEDS)。苯巴比妥对肝药酶诱导作用而影响其它药物的正常代谢,导致血药浓度降低;卡马西平在治疗血药浓度范围内出现副作用,自身诱导代谢使得血药浓度和清除发     

RP-HPLC同时测定人血清中苯巴比妥、苯妥英、卡马西平的浓度

目的　建立反相高效液相色谱法同时测定人血清中抗癫药苯巴比妥 (PB)、苯妥英 (PT)、卡马西平(CBZ)的浓度。方法　以巴比妥 (BB)为内标 ,样品用乙醚提取 ,45℃水浴吹干有机层 ,残留物用 15 0 μL甲醇复溶后进样。用反相柱YWGC18( 4.6mm× 3 0 0mm ,10 μm)分析 ,柱温 45℃ ,流动相甲醇 水 ( 5 5∶45 ) ,流速 0 .5mL/min ,紫外检测波长 2 3 0nm。结果　PB、PT、CBZ的保留时间分别为 11.77、17.5 3和 2 2 .2 9min ;检测限分别为 0 .2 5、0 .15、0 .0 5 μg/mL ;线性范围分别为 0 .5～ 80 (r =0 .9997)、0 .2 5～ 40 (r =0 .9996)、0 .2 5～ 2 0 (r =0 .9991) μg/mL ;相对回收率分别为 10 1.44 %、10 0 .0 7%、10 2 .0 9% ;日内RSD分别为 2 .77%、4.2 6%、1.5 4% ;日间RSD分别为 5 .95 %、3 .3 7%、5 .0 2 %。结论　此方法简便、结果准确 ,适用于临床抗癫药物的监测及药动学的研究     

RP-HPLC同时测定苯巴比妥、苯妥英和卡马西平的血药浓度

目的采用反相高效液相色谱法同时测定苯巴比妥（PB）、苯妥英（PHT）和卡马西平（CBZ）血药浓度。方法色谱柱为Agilent Zorbax 8nm Extend—C18（5μm,4．6mm×150mm）,流动相为y（甲醇）：v[v（o．1mol／L乙酸钠）：v（o．05％β环糊精）=32：18]=68：32,柱温为室温,流速为0．8mL／min,检测波长为230nm,进样量为20μL。结果PB、DPH和CBZ分离良好,分离度皆大于1．5;最低检测浓度分别为0．3802、0．1823和0．1444μg／mL;线性范围分别为0．4-60、0．2-30和0．2-30μg／mL;回收率分别为97．04％、96．52％和97．09％;日内和日问相对标准偏差皆小于5．80％。结论本方法简便、快速、重现性好,结果可靠,适用于临床常规检查。     

HPLC法同时测定苯巴比妥、苯妥英钠及卡马西平的血药浓度

目的 :本法建立了高效液相色谱法 (HPLC)同时测定抗癫痫药苯巴比妥 (PB)、苯妥英钠 (DPH)及卡马西平(CBZ)的血药浓度。方法 :将样本在PH7.6条件下用二氯甲烷提取后经纯净的空气在 5 0℃水浴中吹干 ,再用甲醇重溶后进行色谱分析。色谱条件 :ELITEC18柱 ,流动相 :甲醇 -水 (6 0∶4 0 ) ,流速 :1mL/min ,柱温 :室温 ,检测波长 :2 35nm。结果 :PB、DPH、CBZ的保留时间分别为 3.5 5min、5 .89min、7.14min ,最低检出浓度分别为 1.2 1ug/ml、0 .79ug/ml和 0 .4 4ug/ml。在三个不同浓度下 ,PB、DPH、CBZ的平均回收率各为 10 0 .18%、98.32 %和 10 0 .0 6 % ,日内和日间变异均低于 9.87% ,其他常用抗癫痫药物未见干扰 ,在分析范围内具有良好的线性关系。结论 :该方法操作简便、快捷、准确 ,可满足临床快速监测的需要     

反相高效液相色谱法同时测定苯巴比妥钠、苯妥英钠和卡马西平全血浓度

目的　研究建立反相高效液相色谱法 (HPLC)测定苯巴比妥钠 (PB)、苯妥英钠 (DPH)和卡马西平 (CBZ)全血浓度的方法。方法　建立简便易行的血样提取方法 ,采用C1 8柱 ,甲醇和水为流动相 ,氯仿分离药物 ,紫外检测器测定。结果　PB和CBZ的线形范围为 5～ 40mg L、DPH为 2 .5～ 40mg L ,PB、DPH和CBZ提取回收率和方法回收率分别为 (86 .8± 1 .1 ) %、(88.5± 1 .3) %、(89.6± 1 .6) %和 (99.5± 1 .8) %、(99.7± 1 .6) %、(99.9± 1 .8) % ,无其他常用药物的干扰。结论　本方操作简便、快速、准确 ,可用于临床治疗药物血药浓度的监测和药动学研究。     

RP-HPLC法测定血清中苯巴比妥、苯妥英与卡马西平的浓度及临床应用

目的建立测定血清中苯巴比妥(phenobarbital,PBB)、苯妥英(phenytoin,PHT)、卡马西平(carbamazepine,CBM)浓度的HPLC法。方法色谱柱为ShimadzuODS柱(150mm×4.6mm,5μm),保护柱为C18柱(1cm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈∶甲醇∶水(2∶50∶50,内含1%醋酸和0.25%三乙胺,pH5.0),流速为0.8mL·min-1,检测波长:230nm,室温检测,以乙腈为提取剂。结果PBB、PHT、CBM高、中、低3种浓度的平均回收率分别为98.2%,101.7%,102.1%,日内、日间RSD均低于5%,三种药物在1.0～50.0mg·L-1浓度范围之间线性良好。对119例患者血清浓度监测,临床效果满意。结论方法灵敏、准确、快速,可用于PBB、PHT和CBM的临床血药浓度监测。     

高效液相色谱法测定血清叶黄素和玉米黄素

目的:建立C30-高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)内标法测定血清叶黄素、玉米黄素和β-胡萝卜素。方法:应用Develosil C30-UG色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相A为乙腈∶甲醇(体积比60∶40),流动相B为甲基叔丁基醚,梯度洗脱。流速1 mL/min,检测波长450 nm,进样量20μL,柱温25℃。内标物为全反式-β-阿扑-8'-胡萝卜醛。结果:血清叶黄素、玉米黄素和β-胡萝卜素的分离效果良好,保留时间分别为9.9min、10.3 min和21.2 min,日内相对标准差分别为3.22%、3.81%和1.60%。血清叶黄素、β-胡萝卜素在0.012 5～12.5 mg/L(r=0.999 5、r=0.999 7),玉米黄素在0.005～5.0 mg/L(r=1)范围内呈良好线性关系。58名正常老年人(年龄50岁)血清叶黄素、玉米黄素和β-胡萝卜素的平均浓度分别为0.410μmol/L、0.054μmol/L和0.128μmol/L。结论:该C30-HPLC内标法是定量分析血清叶黄素、玉米黄素和β-胡萝卜素的可靠方法之一。     

高效液相色谱法检测结核分枝杆菌链霉素耐药基因突变

目的 采用变性高效液相色谱(DHPLC)法和测序法来分析结核分枝杆菌链霉素耐药基因rpsL和rrs基因突变,从而检测是否对链霉素耐药.方法 215株结核分枝杆菌临床分离株(经常规方法证实,115株为链霉素耐药,100株为敏感),测定链霉素最小抑菌浓度(MIC),同时采用DHPLC和测序法检测rpsL和rrs基因突变.结果 85.2%(98/115)的链霉素耐药株携有rpsL和(或)rrs基因突变,其中rpsL基因突变占大多数(76.5%,88/115).对98株带有基因突变的菌株的分析表明,rpsL,rrs基因的突变类型与MIC之间未见密切关系.100株敏感株未检出基因突变.DHPLC法与测序法结果完全一致.结论 本工作建立的DHPLC法可以认为是结核分枝杆菌链霉素耐药分析的一种有效的工具.     

变性高效液相色谱分析检测人类糖皮质激素受体基因变异

目的：以变性高效液相色谱分析(DHPLC)检测糖皮质激素受体基因(NR3C1)在中国人群中的变异情况：方法：提取64例中国人基因组DNA，参照文献所报道的引物序列，PCR方法扩增糖皮质激素受体基因编码区(2～9α外显子)及其邻近的部分内含子序列，琼脂糖凝胶电泳鉴定产物后，以DHPLC检测PCR产物，对洗脱曲线异常者进行DNA测序。结果：经DHPLC分析和DNA测序证实，研究人群的NR3C1基因中存在8处变异，5处为新发现；其中有2组变异呈紧密连锁的单倍型，均为首次报道，它们在人群中的基因型频率达3．1％与14.1％；另一处变异出现频率相对较低。结论：成功地建立了以DHPLC检测NR3C1基因变异的方法及技术参数，证实在中国人群中NR3C1基因存在变异，其中2种频率较高的单倍型为新发现。     

变性高效液相色谱法检测CpG岛胞嘧啶甲基化

目的 建立一种新型的ＣpＧ岛胞嘧啶甲基化快速检测方法。方法 用亚硫酸氢钠处理ＤＮＡ,丙用链特异性聚合酶链反应（ＰＣＲ）对错配修复基因hＭＬＨ１启动子含ＣpＧ位点的靶序列进行扩增;利用变性高效液相色谱法（ＤＨＰＬＣ）在部分变性温度下测定靶序列的保留时间,并与亚硫酸氢钠－酶切法测定结果进行比较。结果 用ＤＨＰＬＣ对结肠癌细胞株ＲＫＯ和胃癌细胞株ＰＡＣＭ８２的hＭＬＨ１启动子进行测定,发现ＲＫＯ细胞ＰＣＲ产物的保留时间显长于ＰＡＣＭ８２细胞ＰＣＲ产物的保留时间（６．７min比６．２min）。ＲＫＯ细胞ＰＣＲ产物保留时间的延长是亚硫酸氢钠处理后的模板中胞嘧啶和鸟嘌呤含量较ＰＡＣＭ８２高所致。从此结果分析,可以判断出ＲＫＯ的hＭＬＨ１启动子已甲基化,而ＰＡＣＭ８２细胞未甲基化。此结果与酶切法结果完全一致。结论 新方法可以快速检测ＣpＧ岛胞嘧啶甲基化。     

高效液相色谱-串联质谱法测定牛奶中9种青霉素类药物的残留量

目的:建立一种HPLC-MS/MS方法快速测定牛奶中9种青霉素类药物的残留量。方法:前处理方法采用乙腈沉淀蛋白,正己烷液液萃取除脂;经高效液相色谱C18柱分离,选用pH 3.1甲酸水溶液和乙睛-pH3.1甲酸水溶液为流动相,11 min内在线梯度洗脱;在优化的质谱条件下,采用多反应监测(MRM),外标法定量。结果:方法的线性范围为0.4～400μg/L,9种青霉素类药物在牛奶基质中均有良好的线性关系(r>0.990);方法最低检测限为0.1～0.8μg/L,定量限为0.3～2.6μg/L;方法回收率均在80%以上,重复性良好,日内精密度<8.5%。结论:该方法测定9种青霉素药物的残留量简便、快速、准确,可以满足对青霉素残留的监测要求。     

非索非那定对映体柱前手性衍生化反相高效液相色谱分析方法的建立

目的：建立适用于体外细胞模型的OATP1B1手性底物非索非那定柱前手性衍生化分析方法,为测定细胞中非索非那定对映体提供分析手段。方法：选择R-(+)-苯乙基异氰酸酯作为手性衍生化试剂,与非索非那定生成氨基甲酸酯衍生物,应用液相色谱-串联质谱法确定对映体衍生物色谱峰,通过反相高效液相色谱法实现对映体的分离分析。结果：在建立的手性分离条件下,成功实现非索非那定对映体分离分析,非索非那定两个对映体衍生物在25 ~100 ng/ml浓度范围内线性关系良好 (R²=0.9992, 0.9989),日内、日间精密度均小于10%。结论：本实验建立的非索非那定对映体柱前手性衍生化反相高效液相色谱分析方法灵敏、准确,可用于体外细胞模型中盐酸非索非那定立体选择性分析。     

高效液相色谱法测定小鼠脑组织中2,4 二羟基二苯甲酮

目的：建立和优化小鼠脑组织中2,4-二羟基二苯甲酮（2,4-dihydroxybenzophenone,BP-1）的测定方法。方法：采用正交试验设计优化样品预处理条件,Waters Symmetry^®C18（4.6 mm×250 mm,5 μm）色谱柱分离,等度洗脱,流动相为含3%（体积分数）乙酸的甲醇-水（体积比为3∶1）,pH为3.40,流速为1.0 mL/min,紫外检测器检测,检测波长为290 nm,高效液相色谱法测定小鼠脑组织中BP-1,保留时间定性,以内标法定量。结果：在优化的实验条件下,BP-1在0.2~10.0 mg/L浓度范围内线性关系良好,相关系数为0.999 8;BP-1的加标回收率为96.8%~104.5%;日内和日间精密度分别为3.5%~5.7%和4.5%~6.4%;低、中、高3种浓度BP-1的提取回收率分别为90.5%、89.5%和97.7%;低、中、高3种浓度BP-1的基质效应分别为102.9%、102.7%和90.9%。结论：该方法简便、准确,适用于小鼠脑组织中BP-1的测定。