己酮可可碱对高糖诱导肾小球系膜细胞结缔组织生长因子表达信号通路的影响

目的 探讨高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞结缔组织生长因子（CTGF）表达的变化及其作用通路,并且研究己酮可可碱（PTX）对CTGF表达的影响。 方法 体外培养大鼠系膜细胞,观察不同浓度的高糖在不同时间对系膜细胞转化生长因子β（TGF-β）、CTGF、 p-Smad2/3、Smad7及纤连蛋白（FN）表达的影响;并在高糖培养液中加入TGF-β中和抗体及不同浓度的PTX观察其对上述各指标表达的影响。 结果 高糖可以诱导系膜细胞TGF-β、CTGF mRNA及蛋白表达增加（均P < 0.05）,且呈时间、剂量依赖性,同时伴有p-Smad2/3蛋白表达的增加及Smad7蛋白表达的减少。阻断TGF-β可使高糖诱导的CTGF mRNA及蛋白表达分别下降86.4%及91.8%（均P < 0.05）。PTX可以抑制高糖诱导的系膜细胞CTGF mRNA及蛋白表达,随着PTX浓度的增加其抑制作用更为显著（P < 0.05）,但对于TGF-β的表达没有影响。结论 高糖可通过TGF-β-Smads通路使CTGF mRNA表达增加进而影响其蛋白表达。PTX可以有效的抑制CTGF的表达而对于TGF-β的表达没有直接的抑制作用。     

细胞间粘附分子对肾小球系膜细胞增殖的影响

近年来免疫病理学研究已证实细胞间粘附分子-1(ICAM-1)作为细胞粘附分子中免疫球蛋白超家族成员之一,通过与炎性细胞表面同族型配体之间相互作用形成粘附,在免疫监督、炎症反应和动脉粥样硬化等过程中起着重要的作用。因此,有关ICAM-1与肾小球系膜细胞增殖的相关研究对进一步阐明肾小球炎性疾病的发病机理及治疗的进展具有重大意义。 一、材料与方法 1.按经典方法培养、鉴定C57BL/6小鼠肾小球系膜细胞及巨噬细胞,选取第4～6代细胞用于本实验。 2.取系膜细胞,胰酶消化后,将制成的浓度为1.0×10~4/L细胞悬液加入24孔培养板内,正常对照组和     

细胞间黏附分子-1刺激系膜细胞增生及己酮可可碱和氯沙坦的抑制作用

肾小球系膜细胞（ＭＣ）是肾小球炎性疾病，尤其是系膜区炎症发生、发展中病理生理变化的重要组成部分，在致病因素的作用下，ＭＣ产生了表型的转化并增殖。研究表明在此过程中。细胞黏附分子及其黏附机制可能与ＭＣ增殖、基质增加及系膜区域扩大有关［１］。我们采用体外ＭＣ与巨噬细胞共同培养的方法，探讨细胞黏附分子中免疫球蛋白超家族成员之一，细胞间黏附分子－１（ＩＣＡＭ－１）在肾小球ＭＣ增殖过程中的作用，并观察肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）、血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）对ＭＣ与巨噬细胞黏附的影响及中药己酮可可碱（ｐｅｎ…     

OX-LDL诱导活化的巨噬细胞对肾小球系膜细胞增殖的影响

目的:采用细胞共培养方法,研究氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导活化的巨噬细胞对肾小球系膜细胞增殖的影响.方法:用OX-LDL刺激大鼠腹腔巨噬细胞,ELISA测定上清液中IL-1浓度鉴定巨噬细胞活化程度;用普通培养皿和细胞共培养皿分别将活化巨噬细胞上清液和活化巨噬细胞与大鼠肾小球系膜细胞共培养;用MTT法和流式细胞检测细胞周期测定细胞增殖.结果:OX-LDL刺激后大鼠腹腔巨噬细胞上清液中IL-1浓度明显升高;无论是活化的巨噬细胞还是其上清液均能明显促进系膜细胞增殖,但以共培养组最为显著.结论:在细胞共培养状态下由于脂质诱导活化的巨噬细胞及其上清液可能通过促进系膜细胞增殖导致肾脏损伤.     

雷帕霉素对肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察不同浓度雷帕霉素对大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。 方法 使用不同浓度雷帕霉素（1 μg/L、2 μg/L、4 μg/L、8 μg/L、16 μg/L）处理大鼠肾小球系膜细胞,并设正常对照组。MTT法测不同浓度雷帕霉素干预24 h、48 h、72 h后对细胞增殖的影响,并描记生长曲线。干预72 h后,采用RT-PCR和Western印迹法分别检测各浓度雷帕霉素组细胞周期负调蛋白p27和p53的mRNA和蛋白表达变化;用流式细胞计量术检测各浓度雷帕霉素组细胞周期及凋亡率。 结果 小剂量雷帕霉素（1 μg/L）对系膜细胞增殖即具有明显的抑制作用,停滞于G1期的细胞数明显增加,但对系膜细胞凋亡无明显影响。较大剂量雷帕霉素(8~16 μg/L)能够明显增加肾小球系膜细胞凋亡。雷帕霉素能够增加肾小球系膜细胞p27、p53 mRNA和蛋白表达,且呈剂量依赖性。 结论 雷帕霉素可能通过增加p27、p53表达抑制肾小球系膜细胞增殖和促进系膜细胞凋亡。     

肝素对人肾小球系膜细胞增殖及细胞因子产生的作用

系膜细胞（ＭＣ）的增生及细胞因子的分泌在肾小球疾病的进展中起重要作用。我们旨在探讨肝素对脂多糖（ＬＰＳ）诱导人肾小球ＭＣ增殖及分泌白细胞介素６、肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）的影响作用，为临床治疗肾小球疾病提供一定的实验依据。一、资料与方法１．按经典...     

地塞米松对肾小球系膜细胞表达细胞间粘附分子的影响

细胞粘附分子是近年免疫学研究最有活力的领域之一,其介导的细胞与细胞、细胞与基质粘附作用在免疫炎症反应等多种病理过程中起着关键性作用。目前知道,肾小球系膜细胞(MC)表面低表达细胞间粘附     

氨氯地平防治肾小球系膜细胞肥大与增殖的实验研究

钙通道阻滞剂（ＣＣＢ）对于肾脏的作用是目前研究热点之一。ＣＣＢ可能存在抗系膜细胞肥大、增殖的肾脏保护效应。本研究旨在观察双氢吡啶类ＣＣＢ－氨氯地平（ａｍｌｏｄｉｐｉｎｅ）能否抑制系膜细胞的肥大与增殖；同时将ａｍｌｏｄｉｐｉｎｅ与ＡＣＥＩ－ｂｅｎａｚｅｐｒｉｌａｔ ＬＺ及 Ａｎｇ ＩＩ受体拮抗剂（ＡＴＩＲＡ）－ｌｏｓａｒｔａｎ比较，观察单用或合用的不同作用。 一、材料与方法 １．材料与试剂：包括自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）、正常血压大鼠（ＷＫＹ）（上海市高血压研究所动物房），ＡｕｇⅡ（Ｓｉｇｍａ），血小…     

中药对肾小球系膜细胞增殖作用机制研究进展

肾小球系膜细胞（mesangial cell,MC）属于肾脏血管周围固有细胞,在正常情况下,MC的数量、形态和位置均保持相对稳定,其合成基质的能力也较小;但在慢性肾脏病发展过程中MC不仅是受害者,而且是病变过程中的主动参与者。MC增生是慢性肾脏病进展至肾小球硬化和纤维化的关键环节。     

咪唑立宾对大鼠肾小球系膜细胞增殖的抑制作用

目的探讨咪唑立宾（MZ）对肾小球系膜细胞增殖的抑制作用及其对细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制物p27^kip1表达的影响。方法大鼠系膜细胞同步后分为无血清组、20％FCS刺激组、20％FCS＋MZ组。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞数。BrdU标记法检测S期细胞。流式细胞仪检测细胞周期。Western印迹检测p27^kip1蛋白的表达。结果MZ可抑制20％FCS刺激所致的系膜细胞增殖，呈剂量依赖性。与20％FCS刺激组比较，20％FCS＋MZ组S期细胞的百分比显著降低[（10．28±1．26）％比（21．04±5．38）％，P〈0．05]。MZ可改善由20％FCS刺激诱导的GO／G1期细胞减少[（83．53±2．50）％比（71．15±1．25）％]和S期细胞增加[（12．22±1．22）％比（23．19±0．38）％，P〈0．051。20％FCS刺激后p27^kip1蛋白表达显著下降，MZ上调p27^kip1蛋白表达。结论MZ能够有效抑制系膜细胞增殖，作用时相在G1／S期转化，其抑制系膜细胞增殖的作用部分是通过上调p27^kip1蛋白表达实现的。     

地塞米松对肾小球系膜细胞中细胞因子产生与基因表达的影响

目的 观察地塞米松(DEX)对内毒素(LPS)诱导的肾小球系膜细胞(MC)中细胞因子的产生及其基因表达的影响。方法 采用免疫学和分子生物学方法。结果 1.细胞因子在正常MC中分泌量极微,其mRNA表达处于低水平。2.LPS诱导MC细胞因子的产生及mRNA表达增加。3.DEX对细胞因子的产生及mRNA表达有明显的抑制作用,呈剂量依赖关系。结论 DEX是MC产生细胞因子的较强抑制剂,为今后临床上治疗肾小球肾炎,提供了理论及实验依据。     

反义单核细胞趋化蛋白1对大鼠系膜细胞增生的影响

目的研究反义单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）对系膜细胞MCP—1分泌及增生的影响。方法用逆转录病毒感染体外培养的系膜细胞，得到转染反义MCP—1的系膜细胞，经PCR及Southern印迹鉴定外源基因在系膜细胞基因组DNA上的整合。脂多糖（LPS）刺激反义MCP-1系膜细胞，以正常系膜细胞及转染空白载体的系膜细胞为对照，观察其增生情况。用RT-PCR法检测MCP-1、CC趋化因子受体2（CCR2）的mRNA表达。ELISA法检测细胞上清中MCP-1蛋白的分泌。结果经逆转录病毒转染得到的反义MCP-1的系膜细胞，其基因组DNA中有外源基因的整合。在正常的培养条件下，反义组与对照组系膜细胞的增生差异无统计学意义；MCP-1、CCR2的mRNA均有少量表达；MCP-1的蛋白也有微弱表达。在LPS的刺激下，反义组与对照组MCP-1的mRNA的表达均增高；MCP-1蛋白的分泌均增多。与对照组比较，反义组系膜细胞的增生受抑制[（16．83±1．16）×10^4／ml比（19．63±1．85）×10^4／ml]，MCP—1的mRNA的表达较少（0．424比0．866，P〈0．01），MCP—1蛋白的分泌减少。CCR2的mRNA表达与MCP-1的变化一致。结论（1）逆转录病毒载体pLXSN可有效地介导MCP-1 cDNA在系膜细胞的转染。（2）反义MCP-1可降低系膜细胞MCP—1的转录和翻译。（3）反义MCP—1的转染可降低系膜细胞在炎症状态时的增生。（4）大鼠系膜细胞具有CCR2的表达，在炎症状态时形成MCP-1、CCR2的自分泌环路。     

洛伐他丁对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的：研究他丁类降脂药物对肾小球系膜细胞增殖的影响。方法：应用羟甲基戊二酰辅酶A（HMG－CoA)还原酶抑制剂洛伐他丁来观察其对培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响。用含有或没有洛伐他丁和甲羟戊酸及其代谢产物的10％胎牛血清或血小板源生长因子（PDGF）刺激培养的大鼠肾小球系膜细胞，然后用测定溴化脱氧尿嘧啶核苷（BrdU)的整合来评估DNA的合成并测定细胞的数量，结果：洛伐他丁对10％的胎牛血清刺激系膜细胞DNA的合成抑制是剂量依赖性，并且能够抑制细胞的生长，甲羟戊酸，焦磷酸牛儿基牛儿酯能够显著地逆转洛伐他丁的抑制作用。结论：洛伐他丁通过影响甲羟戊酸的合成抑制鼠肾小球第膜细胞的增殖，这可能为治疗系膜增殖性肾小球疾病提供一个新的方法。     

晚期糖化蛋白刺激系膜细胞合成和分泌内皮素的研究

目的　观察晚期糖化蛋白对系膜细胞合成和分泌内皮素 (ET)的影响。方法　体外正常培养系膜细胞 ,将系膜细胞分泌的基质与 6 磷酸葡萄糖孵育 ,快速制备晚期糖化基质蛋白 ;进而检测该糖化终产物作用后 ,系膜细胞中ET 1和内皮素A受体 (ET AR)mRNA表达的改变 (采用RT PCR) ,以及细胞上清液中内皮素浓度的变化 [用放射免疫法 (放免法 )测定 ]。同时 ,观察高糖对系膜细胞中内皮素表达产生的效应。结果　经晚期糖化蛋白作用的系膜细胞 ,与对照相比 ,其对ET 1和ET AR的mRNA表达明显增加 ,分别为对照组的 1.74倍和 1.47倍。加入氨基胍 (AG)抑制系膜基质糖化和交联后 ,系膜细胞中ET 1和ET AR的mRNA表达随之下降 ,以ET 1mRNA表达下降明显 ,约 5 3% ,ET ARmRNA表达仅下降 18%。系膜细胞对内皮素的分泌亦受糖化基质的作用而显著增加 ,为对照组的 7.15倍 ,氨基胍干预后 ,其分泌明显减少 ,内皮素浓度下降 73.49%。用高糖干预的系膜细胞组 ,却以高糖产生的高渗效应最为明显 ,细胞中ET 1mRNA水平为对照组的 10 .1倍。结论　高糖状态下 ,转变为糖化终产物的细胞外基质对系膜细胞合成和分泌内皮素有直接的上调作用 ,且不依赖于高糖环境。     

转化生长因子β1对系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物1表达的影响

目的观察转化生长因子(TGF)β1对肾小球系膜细胞(GMC)纤溶酶原激活物抑制物(PAI)-1表达的影响,并探讨反应性氧基(ROS)在TGF-β1诱导的PAI-1表达中的作用。方法体外培养大鼠GMC,分别用TGF-β1(2ng/ml)和葡萄糖氧化酶(GO)(10mU/ml)刺激,并用BSO和抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)进行干预处理。采用Western印迹检测PAI-1蛋白表达;RT-PCR和Northern杂交检测PAI-1mRNA表达;合成的荧光素纤溶酶底物测定纤溶酶活性。结果外源性TGF-β1和GO可显著上调大鼠系膜细胞PAI-1蛋白和mRNA的表达并降低纤溶酶活性。BSO可显著增强TGF-β1和GO诱导的系膜细胞PAI-1mRNA的表达;而NAC可显著地逆转由TGF-β1和GO诱导的PAI-1mRNA表达的上调作用。结论TGF-β1可显著上调系膜细胞PAI-1的表达并抑制纤溶酶活性。ROS在TGF-β1诱导的系膜细胞PAI-1表达上调的信号传递途径中可能起了信号传递分子的作用。     

牛磺酸对系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察牛磺酸对系膜细胞增殖及凋亡的影响，并探讨其作用的可能机制。方法 用噻唑蓝MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期及凋亡，吖啶噔活体染色观察细胞凋亡形态，免疫细胞化学结合计算机图文分析系统检测cjn,cfos表达。结果 在5－50mmol/L浓度范围内牛磺酸能剂量依赖性地抑制系膜细胞增殖，可使G0－G1期细胞增多，S期细胞减少，并能明显抑制c-jun,c-fos的表达（P＜0．01），而牛磺酸并不诱导系膜细胞的凋亡。结论 牛磺酸可显著抑制系膜细胞增殖，使系膜细胞阻滞于G0－G1期；牛磺酸对系膜细胞增殖的抑制作用与其抑制c-jun,c-fos的表达有关。牛磺酸对系膜细胞凋亡无诱导作用。     

细胞外信号调节蛋白激酶介导醛固酮诱导的肾小球系膜细胞增殖

Objective To determine the role of extracellular signal-regulated kinases (ERK1/2) in aldosterone-induced rat mesangial cells (RMCs) proliferation. Methods RMCs were obtained from intact glomeruli of 4- to 6-week-old Sprague-Dawley rats and characterized according to published methods. RMCs between passages 5 and passages 10 were used. Protein levels of mineralocorticoid receptor(MR) in RMCs were analyzed by Western blotting. The cells were divided into the following groups: control group, PD98059(10 ?滋mol/L) group, eplerenone (1 ?滋mol/L) group, aldosterone (100 nmol/L) group, aldosterone (100 nmol/L) ＋PD98059 (10 ?滋mol/L) group, aldosterone(100 nmol/L)＋eplerenone (1 ?滋mol/L) group. ERK1/2 activity was measured by Western blotting. Cell proliferation of RMCs was evaluated by [3H]-thymidine uptake measurements. Results MR protein expression in RMCs was confirmed by Western blotting. Aldosterone activated ERK1/2, and the maximal ERK1/2 activation induced by aldosterone was at a concentration of 100 nmol/L. Aldosterone (100 nmol/L)-induced activation of ERK1/2 peaked at 10 minutes (P<0.05). Pretreatment with a selective MR antagonist eplerenone (1 ?滋mol/L) significantly attenuated aldosterone-induced ERK1/2 phosphorylation. Aldosterone (100 nmol/L) treatment for 30 hours increased [3H]-thymidine incorporation of RMCs (135%±8% of controls, P<0.05). Cellular proliferation induced by aldosterone could be prevented by pretreatment with eplerenone or an ERK (MEK) inhibitor PD988059. Conclusion Aldosterone induces RMCs proliferation through MR and ERK1/2 activation, which may contribute to the pathogenesis of glomerular mesangial injury.     

Suppressive effects of Sairei-to on mesangial proliferation in a rat model of glomerulonephritis

Background Sairei-to (TJ-114) is a Japanese herbal medicine of standardized quality, originating from traditional Chinese medicine. In the present in vivo study, we investigated the suppressive effects of TJ-114, Shosaiko-to (TJ-9), and Saiboku-to (TJ-96) on mesangioproliferative glomerulonephritis (MsPGN) in rats. We evaluated the efficacy of these drugs on proteinuria, mesangial cell proliferation, and superoxide dismutase (SOD) activity.Methods MsPGN was induced in Wistar rats by intravenous injection of rabbit anti-rat thymocyte serum (ATS). TJ-114, TJ-9, or TJ-96 (500mg/kg per day) was orally administered to the rats in drinking water from the day of ATS injection (day 0) to day 8, when rats were killed and kidney specimens were collected. The degree of mesangial cell proliferation was evaluated by immunostaining for proliferating cell nuclear antigen (PCNA) or macrophage antigen (ED-1). SOD activity in the homogenate of the renal cortex was also evaluated.Results The amount of urinary albumin was significantly decreased only in the TJ-114-treated group compared with the disease control group (P < 0.05). The number of PCNA- or ED-1-positive cells was significantly decreased in all the treatment groups (P < 0.05, respectively, compared with the disease control group). SOD activity in the renal cortex homogenate was significantly augmented in all the treatment groups, most markedly in the TJ-96- and TJ-114-treated groups (P < 0.01, respectively, compared with the disease control group).Conclusions These results suggest that TJ-114 suppresses the proliferation of mesangial cells through its antioxidative activity.