ERCC1表达对结肠癌患者术后辅助化疗疗效及预后的影响

目的：探讨结肠癌术后患者核苷酸切除修复交叉互补基因1（ exsicion repair cross-complementing group 1,ERCC1）的表达对术后辅助化疗疗效及预后的影响。方法：选取初次诊断为结肠癌并行结肠癌根治术且术后分期为Ⅱ、Ⅲ期的患者60例,所有患者术后均采用FOLFOX6（ L-OHP＋5-Fu＋CF）方案辅助化疗,并进行3年随访。运用免疫组织化学方法检测患者癌组织中ERCCl蛋白。结果：60例结肠癌患者组织中ERCC1的阳性表达率为41.67％,低分化腺癌患者中ERCC1阳性表达率较高分化患者低,差异有统计学意义（ P＜0.05）。 Kaplan-Meier生存曲线显示：ERCC1阴性表达者3年DFS优于阳性表达者,差异有统计学意义（ P＜0.05）。多因素Cox回归模型分析表明,ERCC1是结肠癌患者DFS的影响因素（ RR＝3.45,95％CI：1.47-7.54,P＝0.012）。其中在同一ERCC1表达水平下,分化程度越高的患者,预后越好（ RR＝0.41,95％CI：0.22-0.75,P＝0.023）。结论：ERCC1表达水平可以作为预测结肠癌Ⅱ、Ⅲ期患者术后辅助化疗无病生存时间的预测指标。 ERCC1阴性表达的患者无病生存时间延长,可以从奥沙利铂为主的FOLFOX方案中受益。     

大肠癌原发灶及淋巴结转移灶中TS和Topo-Ⅱ表达的对比分析

目的 探讨胸苷酸合成酶(TS)和拓扑异构酶Ⅱ (Topo-Ⅱ)在大肠癌原发灶及淋巴结转移灶的表达及临床意义.方法 应用组织芯片及免疫组化技术,检测TS和Topo-Ⅱ在135例大肠癌和60例淋巴结转移灶的表达情况.结果 TS在135例大肠癌和癌旁正常黏膜组织中的阳性表达率分别为54.81％和42.96％,差异无统计学意义(P＞0.05),大肠癌TS表达与各临床病理参数无关(P＞0.05),60例大肠癌淋巴结转移灶中TS阳性表达率为41.67％,与原发灶TS阳性表达率(53.33％)比较差异无统计学意义(P＞0.05)及无相关性(r=0.045,P=0.732).Topo-Ⅱ在135例大肠癌和癌旁正常黏膜组织中的阳性表达率分别为53.33％和21.48％,差异有统计学意义(P＜0.05),Topo-Ⅱ阳性表达率与大肠癌组织学分级有关,中分化腺癌高于高分化腺癌(P＜0.05),60例大肠癌原发灶中Topo-Ⅱ阳性表达率(56.67％)显著高于淋巴结转移灶(31.67％,P＜0.05)且呈正相关(r=0.261,P=0.044).结论 大肠癌原发灶与淋巴结转移灶TS和Topo-Ⅱ蛋白表达存在一定的差异,淋巴结转移灶耐药蛋白表达的检测对术后体内残存肿瘤细胞耐药性评估可能更为客观.     

胸苷酸合成酶在大肠癌原发灶和相应淋巴结转移灶表达的差异

目的:研究是否存在大肠原发癌与相应淋巴结转移灶胸苷酸合成酶(TS)表达水平的差异.方法:收集石蜡包埋的大肠癌组织51例,淋巴结转移组织21例,正常大肠组织15例,大肠腺瘤组织8例,应用免疫组化方法研究了TS在正常大肠粘膜、大肠腺瘤,原发大肠癌和淋巴结转移癌中的表达规律.结果:(1)正常大肠粘膜组织及腺瘤组织均不表达TS,51例大肠癌组织中30例呈阳性表达,阳性率为58.8%.大肠癌组织TS表达水平与正常大肠粘膜组织及腺瘤组织相比有显著升高(P＜0.01);(2)淋巴结转移灶TS的表达在表达水平、染色范围和染色深度三个方面均高于原发灶,二者TS表达水平存在显著差异(P＜0.05).结论:大肠癌原发灶和淋巴结转移灶之间的TS表达水平存在显著差异,原发灶TS蛋白表达水平不能预测转移灶对以5-FU为基础的化疗的反应,应根据转移灶本身的TS表达水平选择化疗方案.     

Bcl-2、PD-L1在大肠癌组织中的表达及意义

目的 探讨结肠癌组织中凋亡抑制基因Bcl-2蛋白、免疫共刺激分子PD-L1蛋白的表达及其与肿瘤转移的关系.方法 应用免疫组化技术检测57例新鲜大肠癌组织及其癌旁正常组织中Bcl-2、PD-L1的表达,分析Bcl-2、PD-L1表达与大肠癌患者临床病理特征的关系.结果 大肠癌组织中Bcl-2蛋白阳性表达率为75.43％,而癌旁正常组织中阳性表达率为52.63％,两者差异具有统计学意义(P＜0.05);大肠癌组织中有PD-L1蛋白的原位表达,阳性表达率为45.61％,而癌旁正常组织PD-L1蛋白阳性表达率为15.79％,两者差异具有统计学意义(P＜0.01);Bcl-2的表达率和表达强度与病理学分化程度有关,高-中分化大肠癌患者癌组织中Bcl-2的表达率和表达强度高于低分化者,差异有统计学意义(P＜0.05); PD-L1蛋白的阳性表达率与大肠癌的淋巴结转移有关(P＜0.05),而与浸润深度无关.在高中分化组、Dukes分期A+B组、无淋巴结转移组中Bcl-2的阳性表达率高于PD-L1(P＜0.05),而在低分化组、Dukes分期C+D组、有淋巴结转移组中二者表达率无明显差异(P＞0.05).结论 Bcl-2可能与结肠癌的病理学分化程度有关,PD-L1可能与结肠癌的转移发展有关;共检测Bcl-2和PD-L1可能预测大肠癌的病理分化程度、Dukes分期及有无淋巴结转移.     

TS 蛋白表达在培美曲塞治疗晚期肺腺癌患者疗效的意义

目的：探讨胸苷酸合成酶（ TS）表达水平在培美曲塞治疗晚期肺腺癌患者疗效的意义。方法：回顾性分析30例接受培美曲塞联合顺铂化疗的ⅢB/Ⅳ期肺腺癌患者,运用免疫组织化学方法检测患者癌组织中 TS 蛋白表达,并随访1年,对化疗疗效进行分析。结果：30例患者中,TS 阳性表达率为23.33％,TS 表达与患者的性别、年龄及临床分期无关（P﹥0.05）。TS 表达阴性患者客观缓解率（RR）为43.48％,而 TS 表达阳性患者 RR 为14.29％,差异无统计学意义（P=0.215﹥0.05）;TS 蛋白表达阴性患者疾病控制率（DCR）为91.30％,TS 蛋白表达阳性患者 DCR 为42.86％,差异有统计学意义（P =0.016﹤0.05）。Kaplan-Meier 生存曲线显示：TS 蛋白阴性表达者1年 DFS 高于阳性表达者,差异有统计学意义（P =0.047﹤0.05）。结论：TS 可作为预测肺腺癌患者对培美曲塞的敏感性的指标,TS 表达阴性肺腺癌患者可以从含培美曲塞的化疗方案中获益。     

上皮性卵巢癌ERCC1表达与顺铂化疗耐药的关系

目的 探讨切除修复交叉互补基因(ERCC1)在原发性上皮性卵巢癌顺铂化疗耐药中的意义.方法 用组织芯片仪制备组织芯片并结合免疫组织化学技术,检测56例上皮性卵巢癌病人癌组织中ERCC1蛋白的表达情况,并以38例正常卵巢组织作为对照,分析其与顺铂化疗耐药的关系,同时分析ERCC1在原发性上皮性卵巢癌中的表达与临床手术-病理分期(FIGO,2000)、病理学类型、分化程度、发病年龄、发生部位以及疾病发生的相关性.结果 38例正常卵巢组织中ERCC1阳性表达者17例(44.74%),56例上皮性卵巢癌组织ERCC1阳性表达者31例(55.36%),二者比较差异无显著性(χ2=1.022,P＞0.05).上皮性卵巢癌中ERCC1的表达与临床手术-病理分期、病理学类型、分化程度、发病年龄、发生部位及发病率均无明显的相关性(P>0.05).上皮性卵巢癌顺铂化疗耐药组ERCC1的阳性表达率为76.67%,明显高于敏感组的30.77%,差异有显著性(χ2=11.87,P<0.05).结论 上皮性卵巢癌ERCC1表达与顺铂化疗耐药相关.     

晚期胃癌ERCC1蛋白表达与奥沙利铂疗效

目的 探讨晚期胃癌组织中核苷酸切除修复交叉互补基因1(excision repair cross-complementation group 1,ERCC1)蛋白表达水平与奥沙利铂化疗疗效的关系.方法 收集青海省藏医院2010年3月～2011年5月经病理组织学诊断的ⅢC-Ⅳ期晚期胃癌患者60例,采用免疫组化SP法检测胃癌组织中ERCC1蛋白表达水平,根据ERCC1蛋白的表达分为ERCC1阴性组及阳性组,观察以奥沙利铂为主化疗有效率及肿瘤进展时间(TTP),分析ERCC1蛋白表达水平与化疗有效率及中位TTP的关系.结果 60例晚期胃癌患者中ERCC1蛋白表达阳性率为31.67％(19/60).ERCC1阳性表达组奥沙利铂化疗有效率为26.32％,ERCC1阴性表达组奥沙利铂化疗有效率为63.41％,两组差异有统计学意义(P=0.013).ERCC1阳性表达组和阴性表达组的中位TTP分别为5个月、8个月,两组差异无显著性(P =0.052).结论 晚期胃癌组织中ERCC1蛋白表达水平与奥沙利铂化疗疗效相关.ERCC1蛋白阴性表达者奥沙利铂化疗有效率高于ERCC1阳性表达者,提示ERCC1蛋白高表达者不能从奥沙利铂治疗中获益,ERCC1蛋白高表达可能与奥沙利铂耐药有关.     

ERCC1、nm23-H1在大肠癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨ERCC1和nm23-H1在大肠癌中的表达及其与临床病理的关系.方法 采用免疫组织化学法对50例大肠癌组织和40例同期正常大肠切缘黏膜组织(正常组织)ERCC1和nm23-H1蛋白表达水平进行检测,并观察它们与临床病理特征的关系.结果 ERCC1在大肠癌组织中阳性率表达高于正常组织(72.0% vs 27.5...     

大肠癌及正常肠黏膜组织中金属硫蛋白阳性表达的临床意义

目的:检测金属硫蛋白(MT)在大肠癌及正常肠黏膜组织中的表达,探讨MT在大肠癌组织中表达的临床意义。方法:对12例大肠癌新鲜标本采用RT-PCR方法检测MT在大肠癌及正常肠黏膜中的表达。对53例存档大肠癌石蜡组织标本采用免疫组化SABC法染色,结果按不同大肠癌肿块大小、组织分级、浸润深度及临床分期进行比较。所有病例随访6-48个月,分析MT表达与大肠癌患者生存、复发和远处转移的关系。结果:MT在大肠癌和正常肠黏膜组织中均有表达。MT阳性表达与大肠癌肿瘤大小、组织分级、浸润深度均无显著相关(P>0.05)。阳性表达者3年总生存率较阴性表达者低(62.5%比87.3%),但无统计学差异(P>0.05)。将37例完成术后辅助化疗者分为阳性表达与阴性表达两组比较,两组无病生存率(52.9%比64.7%)和无远处转移生存率(86.9%比91.3%)有显著性差异(均为P<0.05)。结论:大肠癌MT阳性表达与不良预后相关,可能与术后辅助化疗相对不敏感有关。     

乳腺癌耐药蛋白ERCC1和P-gp表达水平与新辅助化疗敏感性关系研究

目的:研究耐药蛋白ERCC1和P-gp在乳腺癌中表达与临床病理特征的联系;分析ERCC1和P-gp的不同表型与新辅助化疗敏感性的相关性;探讨依据ERCC1和P-gp的不同表型制定乳腺癌化疗方案的可行性。方法:用免疫组化回顾性检测56例乳腺癌新辅助化疗前穿刺活检留取的石蜡标本中ERCC1和P-gp的表达情况,分析两者与乳腺癌临床病理特征的关系,乳腺癌不同受体分型与化疗敏感性的关系;以及ERCC1和P-gp不同表型间新辅助化疗敏感性的差异。结果:ERCC1阳性表达率为35.7%(20/56),P-gp阳性表达率为44.6%(25/56),两者表达无明显相关性(χ~2=2.969,P=0.085)。ERCC1表达水平与肿瘤大小和TNM分期呈负相关,而P-gp则表达水平升高肿瘤分级越高。乳腺癌Luminal型、三阴性和Her-2阳性三者间比较,分别是Her-2阳性组CR率(47.1%)和三阴性pCR率(25.0%)最高,但Her-2阳性与三阴性的CR和p CR率均无统计学差异。耐药蛋白ERCC1和P-gp均为阴性者有效率(CR+PR,87.0%)最高,ERCC1阴性者有效率(72.2%)较ERCC1阳性者有效率(45.0%)高;P-gp阴性者有效率(80.6%)较P-gp阳性者有效率(40.0%)高。结论:ERCC1和P-gp是两个相对独立的耐药蛋白,两者表达阴性时乳腺癌新辅助化疗有效率更高。通过检测肿瘤组织中ERCC1和P-gp的表达情况,联合ER、PR和Her-2等分子指标,可以预测化疗敏感性和规避潜在的耐药,个体化的制定化疗方案。     

HEREDITARY PROTEIN S DEFICIENCY——SURVEY OF A CHINESE FAMILY

A 76-year-old woman was diagnosed as having left lilac deep vein thrombosis due to a hereditary deficiency of protein S, seventeen members of her family were studied with the measurements of total protein S (TPS), free protein S (FPS), protein C (PC) and anti-thrombin-Ⅲ(AT-Ⅲ). The results showed that the level of FPS of thepatient was only 7%, while that of TPS 137.1%. Her secondson had a low FPS level (13.4%) too, and his TPS level was 48.1%. PC and AT-Ⅲwere all normal It was thus the first case of hereditary PS dificiency reported in China.     

绿色荧光蛋白-小鼠纤维介素蛋白融合基因表达载体的构建和表达

目的：构建绿色荧光蛋白(GFP)和小鼠纤维介素蛋白(mfgl2)的融合蛋白表达载体，在仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达，为mfgl2的RNA干扰体外研究提供简便的判断手段。方法：用PCR从mfgl2cDNA文库中扩增出mfgl2cDNA片段，插入到GFP表达载体pEGFP—N2中GFP基因序列的上游，构建成GFP—mfgl2融合基因表达载体pEGFP—mfgl2，将该载体转染到CHO细胞后24—48h，通过荧光显微镜观察并摄片。结果：扩增出长约1．3kb的基因片段，经双酶切鉴定和测序鉴定无误；重组载体转染CHO细胞后，在荧光显微镜下可观察到GFP的表达。结论：成功构建了pEGFP．mfgl2融合基因表达载体；重组载体可在CHO细胞中表达出GFP—mfgl2融合蛋白，为下一步进行mfgl2RNA干扰研究提供了简便的判断手段。     

鼠尾胶原蛋白提取、分离、纯化方法的建立及鉴定

目的建立一种高效提取、分离、纯化鼠尾胶原蛋白的方法。方法通过对鼠尾进行剥离获得鼠尾腱,用Tris-HCl缓冲液、胃蛋白酶处理获得鼠尾胶原蛋白原液、反复使用氯化钠溶液进行分级盐析、醋酸溶液复溶进行鼠尾胶原蛋白的纯化。超纯水透析除去无机盐类获得纯化的鼠尾胶原蛋白。通过SDS-PAGE蛋白质电泳、氨基酸含量分析等技术手段鉴定。结果本研究建立的方法可以获得高纯度的鼠尾胶原蛋白,纯度达到电泳纯。与国外进口的商业化鼠尾胶原蛋白产品相比无差异。研究了提取、分离、纯化参数对得率、纯度的影响,建立了最优的鼠尾胶原蛋白提取条件,胃蛋白酶用量:1∶500,酶解时间:72 h,盐析浓度:2 mol/L,提取所用酸溶液:0.05mol/L醋酸溶液。结论为鼠尾胶原蛋白的扩大化生产提供了合适的工艺参数,为大量获得鼠尾胶原蛋白并进行更深层次的功效方面研究提供了理论支持和实践基础。     

Akt的PH结构域与其调节区的结合

目的 从人T细胞中克隆Akt的PH结构域及其调节区基因并进行6-his和GST融合表达，研究二者的体外结合情况，为进一步研究Akt的调节区在其分子激活中的作用打下基础。方法 以RT-PCR的方法从人T细胞中扩增目的基因片段，测序证明序列正确，再将正确的目的基因片段定向克隆到表达载体pRSET-A和pGEX-4T-1中，以IPTG诱导，获得Akt的PH结构域及其调节区与6-his和GST的融合表达。表达的PH结构域融合蛋白经谷胱甘肽耦联的琼脂糖珠纯化，以pull-down法检测该PH结构域与6-his调节区的结合。结果 Akt的PH结构域和调节区基因序列完全正确。得到与GST和6-his的融合表达，表达产物有较高可溶性。结论 SDS-PAGE检测到PH结构域可在体外与调节区特异地结合。     

Survivin、Her-2、P16和PTEN在膀胱癌中的表达及意义

目的研究Survivin、Her2、P16和PTEN蛋白在膀胱癌中的表达及其生物学意义。方法采用免疫组织化学SP法检测43例膀胱移行细胞癌和10例正常膀胱组织中以上4种蛋白的表达。结果4种蛋白在膀胱癌中的表达与在正常膀胱黏膜比较差异均有显著性意义(均为P<0.01)。不同临床分期间Her2和PTEN表达的差异具有显著性意义(P<0.05);不同病理分级间Survivin、Her2和PTEN表达的差异具有显著性意义(P<0.05或P<0.01)。Her2和Survivin蛋白表达间存在正相关(r=0.821,P<0.05)。结论Her2和Survivin的高表达是膀胱癌预后不良的指征;P16可作为早期诊断的标记物;PTEN则可作为膀胱癌预后不良的独立性指标。     

亲和层析纯化重组中性粒细胞激活蛋白

目的:直链淀粉树脂亲和层析法分离纯化重组麦芽糖结合蛋白-中性粒细胞激活蛋白(recombinantmaltose-binding protein-neutrophil-activating protein,rMBP-NAP)。用于支气管哮喘模型小鼠进行免疫调节实验。方法:IPTG诱导基因工程菌E.coli TB1(pMAL-c2X-nap)表达rMBP-NAP,离心收获细胞,过柱缓冲液重悬菌体并超声破碎,再次离心取上清和沉淀,SDS-PAGE分析rMBP-NAP可溶性;直链淀粉树脂亲和层析法分离纯化rMBP-NAP;SDS-PAGE凝胶扫描分析纯化后rMBP-NAP纯度;蛋白定量试剂盒测定rMBP-NAP浓度。结果:IPTG诱导工程菌表达的rMBP-NAP主要以可溶性形式存在于超声上清中,相对分子质量约为57 kD,与预期结果一致;亲和层析法纯化rMBP-NAP纯度可达96.5%,浓度可达0.625 g/L。结论:用直链淀粉树脂亲和层析法,可纯化得到高纯度、高浓度的融合蛋白rMBP-NAP。     

骨肉瘤p16与Rb蛋白的表达及其相关性的研究

目的 检测ｐ１６和Ｒｂ蛋白在骨肉瘤中的存在情况，以探讨骨肉瘤中ｐ１６和Ｒｂ蛋白的表达及其相关性。方法 采用免疫组化ＡＢＣ法对３２例骨肉瘤手术标本使用抗ｐ１６和Ｒｂ蛋白抗体进行检测。结果 ｐ１６和Ｒｂ蛋白阳性表达分别为３７．５％（１２／３２）和５６．３％（１８／３２）；在１２例Ｒｂ蛋白阳性或强阳性表达的骨肉瘤中，ｐ１６蛋白表达缺失或弱阳性表达８例（６７％）；相反，在１０例Ｒｂ蛋白阴性或弱阳性表达中，     

肺癌组织中Fhit蛋白和PCNA蛋白表达及意义

目的　探讨肺癌组织中Fhit蛋白和PCNA蛋白表达及其与临床病理因素的关系。方法　应用免疫组织化学S P法检测 6 2例肺癌组织中Fhit蛋白和PCNA蛋白表达。结果　肺癌组织中Fhit蛋白和PCNA蛋白表达阳性率分别为 5 3.2 %和6 4 .5 % ,PCNA蛋白表达阳性肺癌Fhit蛋白阳性率明显低于PCNA蛋白表达阴性肺癌 (P <0 .0 1)。Fhit蛋白和PCNA蛋白在肺癌中表达与肺癌的分化程度、淋巴结转移、3年生存期均密切相关 ,PCNA蛋白与肺癌病理类型亦有关。结论　Fhit蛋白和PC NA蛋白异常表达与肺癌发生、发展密切相关 ,二者相互抑制 ,呈明显负相关     

非小细胞肺癌患者肺耐药蛋白和多药耐药相关蛋白的表达及其临床意义

目的 检测肺耐药蛋白和多药耐药相关蛋白在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达情况.并探讨其临床意义.方法 采用免疫组化方法对术前未经化疗、术后病理诊断明确的92例肺癌组织标本并以20常肺组织作为对照进行了多药耐药相关蛋白（MRP）、肺耐药蛋白（LRP）表达的检测.并对病理类型、分化程度、临床分期、预后等进行统计学分析.结果 （1）92例肺癌组织中MRP、LRP及其两者共表达的阳性率分别为53%、52%和45%,均显著高于正常肺组织中的表达水平（P〈0.05）.（2）MRP、LRP蛋白表达在不同病理类型、不同分化程度之间具有统计学差异（P〈0.05）,而在不同年龄、性别、临床分期、淋巴结转移情况等均无明显差异.另外,MRP、LRP蛋白的表达与患者预后密切相关,且随着耐药蛋白表达种类的增加,生存曲线水平下降.结论 NSCLC中MRP、LRP的表达可能在肺癌的原发性多药耐药中起不同程度的作用,检测NSCLC中MRP、LRP在判断患者预后.指导肿瘤化疗方面具有重要的临床意义.     

树舌多糖对HepA小鼠瘤细胞蛋白质表达影响的研究

目的探讨树舌多糖抗肿瘤的作用机制,寻找特异蛋白。方法将各组小鼠的眼血清蛋白、匀浆蛋白、膜糖蛋白分别做PAGE电泳,分析其蛋白组分的变化。结果树舌多糖作用后血清蛋白、匀浆蛋白、膜糖蛋白的蛋白组分都有变化。