丹参酮ⅡA对谷氨酸联合淀粉样蛋白诱导细胞损伤的保护作用

目的 探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)对谷氨酸(Glu)联合β淀粉样蛋白25-35 (Aβ_(25-35))诱导PC12细胞、Meynert核(nbM)神经元损伤的保护作用.方法 培养PC12细胞,用MTT法观察TanⅡA三个不同浓度(2.5、5.0、10 μmol/L)对Glu联合Aβ_(25-35)损伤PC12细胞的保护作用;运用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)技术,检测急性分离nbM神经元在Glu联合Aβ诱导损伤时细胞内钙离子浓度([Ca~(2+)]_i)变化,及不同浓度TanⅡA对这种[Ca~(2+)]_i变化的影响.结果 MTT检测结果表明,TanⅡA 各组细胞活力、损伤程度与单纯Aβ+Glu损伤组相比有显著差异(P＜0.05),但无剂量依赖关系.Glu联合Aβ_(25-35)损伤组[Ca~(2+)]_i比对照组显著升高(P＜0.01);TanⅡA 各组[Ca~(2+)]_i均较单独Glu联合Aβ_(25-35)处理组有显著降低(P＜0.01).结论 TanⅡA通过提高细胞活力、维持细胞内钙离子浓度稳态以对抗Glu联合Aβ_(25-35)损伤作用.     

银杏叶提取物对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的研究银杏叶提取物（Extracts of ginkgo biloba leaves,EGB）对β淀粉样蛋白（Aβ25-35）诱导的PC12细胞损伤的保护作用.方法用Aβ25-35处理诱导体外培养的PC12细胞损伤,并用EGB进行保护,显微观察细胞形态的改变,LDHH法和MTT法检测细胞膜的损伤情况.结果EGB处理组细胞数比损伤组显著增多,受损变圆的细胞数较少,细胞形态明显改善,EGB处理组上清液LDH活性显著低于Aβ25-35处理组（P＜0.01）,MTT值显著高于Aβ25-35处理组（P＜0.01）.结论EGB对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤具有显著的保护作用.     

硫化氢对Aβ25-35致PC12细胞损伤的保护作用

目的 探讨H2S对Aβ25-35致PC12细胞损伤的保护作用.方法 应用NaHS作为H2S的供体,甲氮甲唑蓝法检测细胞成活率,Hoechst染色检测细胞凋亡,碘化丙啶染色流式细胞技术检测细胞凋亡率.结果 5～80 μmol/L的Aβ25-35呈浓度依赖性地引起PC12细胞的存活率显著降低(P＜0.01)、凋亡率明显升高(P＜0.01);100 μmol/L NaHS与20 μmol/L Aβ25-35共同作用于PC12细胞24 h后,NaHS浓度依赖性地阻断Aβ25-35引起的PC12细胞存活率降低,升高了的细胞凋亡率(P＜0.01).结论 H2S对Aβ25-35致PC12细胞损伤具有保护作用.     

丙戊酸钠对Aβ25～35诱导PC12细胞损伤的影响

目的探讨丙戊酸钠(VPA)对β淀粉样蛋白(Aβ25～35)诱导的PC12细胞损伤的影响。方法将PC12细胞随机分为正常组,Aβ25～35组(20μmol/L的Aβ25～35),VPA低、中、高剂量组(2.5、5.0,10.0μmol/L VPA+20μmol/L的Aβ25～35)。噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式双染检测细胞凋亡,比色法检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)3、Caspase9活性,Western印迹检测各组细胞中B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β(PI3K/AKT/GSK3β)信号通路激活情况。结果与正常组比较,Aβ25～35组细胞活力显著降低(P0.01),细胞凋亡率、Caspase3、Caspase9活性显著提高(P0.01),Bax、p-GSK3β表达量显著上调(P0.01),Bcl-2、PI3K、p-AKT表达量显著下调(P0.01)。与Aβ25～35组比较,VPA低、中、高剂量组细胞活力显著提高(P0.01),细胞凋亡率、Caspase3、Caspase9活性显著降低(P0.01),Bax表达量显著下调(P0.01),Bcl-2、p-AKT表达量显著上调(P0.01),VPA中、高剂量组细胞中p-GSK3β表达量显著下调(P0.01),PI3K表达量显著上调(P0.01)。结论 VPA可能通过抑制PI3K/AKT/GSK3β信号通路抵抗Aβ25～35诱导的PC12细胞凋亡。     

JNK通路在氯通道阻断剂抑制Aβ25～35诱导细胞凋亡中的作用

目的探讨JNK通路在氯通道阻断剂4，4＇-diisothiocyano-2，2＇-disulfonic acid stilbene（DIDS）及Phloretin在β淀粉样蛋白活性片段（Aβ，Aβ25-35）诱导PC12细胞凋亡过程中作用。方法采用MTT比色法、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogen，LDH）活力检测、琼脂糖凝胶电泳法，比较正常对照组、Aβ25-35损伤组和Aβ25-35 ＋Phloretin组、Aβ25-35 ＋DIDS组的PC12细胞存活与凋亡；Western印迹法检测4组的JNK、P-JNK蛋白表达。结果10μmol／L Phloretin和50μmol／LDIDS均能抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡，提高细胞存活率，减少LDH释放，降低P-JNK蛋白的水平。结论JNK的磷酸化水平下调，参与了氯通道阻断剂抑制的Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡。     

褪黑素对Aβ25-35诱发PC12细胞损伤的保护作用

目的研究褪黑素（MT）对β淀粉样蛋白片段（AB25书）诱发PC12细胞损伤的神经保护作用。方法将培养的PC12细胞分为三组：正常对照组，Aβ损伤组和MT保护组。Aβ损伤组用Aβ25-35处理细胞，MT保护组在用AB25-35处理前2h加入褪黑素。使用细胞形态学方法、LDH法、MTT法及Western印迹法观察MT的神经保护作用。结果形态学观察发现MT保护组细胞数显著比Aβ损伤组多，受损变圆的细胞数较少。MT保护组LDH活性显著低于损伤组（P〈0．01）；OD值显著高于损伤组（P〈0．01）。Western印迹结果表明Aβ25-35损伤组中Bcl-2的表达比正常对照组低；MT保护组Bcl-2的表达比Aβ25-35损伤组升高。结论褪黑素对Aβ25-35诱发PC12细胞损伤有保护作用。     

高表达谷胱甘肽过氧化物酶1对阿尔茨海默病细胞模型的作用

目的 将谷胱甘肽过氧化物酶1 (GPX1)重组质粒转染肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞,使其在细胞内高表达,探讨GPX1清除自由基、抗氧化应激的细胞保护作用。 方法 将GPX1重组质粒、pLNCX空载体质粒转染PC12细胞,用新霉素(G418)筛选稳定表达GPX1的PC12细胞,以不同β-淀粉样蛋白(Aβ)25-35浓度诱导PC12细胞48 h,确定最佳Aβ25-35浓度,构建理想阿尔茨海默病(AD)细胞模型。以最佳Aβ25-35浓度分别诱导转染GPX1重组质粒组、转染pLNCX空载体质粒组和正常PC12细胞组48 h,比色法比较其吸光度(A)值。 结果 用G418筛选出了稳定高表达GPX1的细胞克隆。与无Aβ25-35的空白对照组比较,20 μmol/LAβ25-35可使PC12细胞的抑制率显著升高,达24.7％,差异有统计学意义(P＜0.01),确定Aβ25-35的最佳诱导浓度为20 μmol/L。最佳Aβ25-35诱导浓度诱导各细胞组48h后,与转染pLNCX空载体质粒细胞组和正常PC12细胞组比较,转染GPX1重组质粒细胞组A值明显升高,分别为[（0.53±0.02）与(0.44±0.02),（0.53±0.02）与(0.39±0.07),均P＜0.01]结论转染GPX1重组质粒可增强细胞清除自由基的能力,逆转Aβ25-35所致的细胞生存率降低。     

石杉碱甲对阿尔茨海默病细胞模型的防护作用

目的探讨石杉碱甲对阿尔茨海默病(AD)细胞模型的保护作用。方法采用20μmol/LAβ25-35作用于PC12细胞48h,再应用不同浓度的石杉碱甲(0.1、1、10μmol/L)预孵育1h,然后加入20μmol/L的Aβ共孵育48h。测定细胞存活率,并计算凋亡细胞百分率。结果 20μmol/L的Aβ使PC12细胞存活率降至61.73%(P0.01),0.1μmol/L的石杉碱甲可提高细胞存活率至73.12%(P0.05),1、10μmol/L的石杉碱甲显著提高细胞存活率至87.01%、89.31%(P0.01)。正常PC12细胞凋亡率为2.3%,20μmol/LAβ作用PC12细胞后,细胞凋亡率达12.1%,1μmol/L的石杉碱甲使20μmol/LAβ诱导的PC12细胞凋亡率降至4.2%(P0.05)。结论石杉碱甲对阿尔茨海默病细胞模型具有明显的保护作用,其作用机制可能为抑制Aβ诱导的细胞凋亡。     

氯通道阻滞剂在β_(25-35)淀粉样多肽诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨氯通道阻滞剂(DIDS)对β25-35淀粉样多肽(Aβ25-35)诱导PC12细胞凋亡的影响。方法PC12细胞按实验不同分为对照组(DMEM培养液)、Aβ25-35组(Aβ25-35 40μmol/L)、DIDS组(Aβ25-35 40μmol/L+DIDS 50μmol/L)。MTT法测细胞存活率,Hoechst 33258荧光染色观察细胞核形态学改变,流式细胞技术测细胞凋亡率。结果Aβ25-35组与对照组和DIDS组比较,PC12细胞的存活率明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显增高(P<0.05),不同DIDS浓度依赖性升高PC12细胞存活率,DIDS 50μmol/L能显著下调Aβ25-35诱导的细胞凋亡(P<0.05)。结论DIDS对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤有保护作用。     

氯通道阻滞剂在β25-35淀粉样多肽诱导PCl2细胞凋亡的保护作用

目的 探讨氯通道阻滞剂(DIDS)对β25-35淀粉样多肽(Aβ25-35)诱导PCl2细胞凋亡的影响.方法 PCl2细胞按实验不同分为对照组(DMEM培养液)、Aβ25-35组(Ap25-35 40 μmol/L)、DIDS组(Aβ25-35 40,μmol/L+DIDS 50μmol/L).MTT法测细胞存活率,Hoeehst 33 258荧光染色观察细胞核形态学改变,流式细胞技术测细胞凋亡率.结果 Aβ25-35组与对照组和DIDS组比较,PCI2细胞的存活率明显降低(P＜0.05),细胞凋亡率明显增高(P＜0.05),不同DIDS浓度依赖性升高PC12细胞存活率,DIDS 50 μmol/L能显著丁调Aβ25-35诱导的细胞凋亡(P＜0.05).结论 DIDS时Aβ25-35诱导PC12细胞损伤有保护作用.     

早期下肢智能反馈康复训练系统对卒中偏瘫患者步行能力的影响

目的观察早期下肢智能反馈康复训练系统对卒中偏瘫患者步行能力的影响。方法纳入发病时间1个月的首次卒中后偏瘫患者40例,按入院编号的奇偶数分为试验组和对照组各20例。于病情稳定48 h后开始康复训练。对照组给予常规康复训练,试验组在此基础上采用下肢智能反馈康复训练系统进行步行能力训练。采用Fugl-Meyer运动功能量表(下肢部分,FMA-L)、Holden步行功能分级评估患者的下肢运动及步行能力;采用表面肌电评估胫前肌、腓肠肌的肌张力、肌力变化情况。结果治疗前,两组的FMA-L评分、Holden步行功能分级评定差异无统计学意义(P0.05)。治疗后4周,试验组和对照组的FMA-L评分均较治疗前改善(P0.01);两组治疗前后差值分别为(20.0±6.2)、(5.1±1.6)分,试验组的改善程度优于对照组(P0.01)。Holden步行功能分级仅试验组较治疗前改善(P0.01)。两组治疗前胫前肌和腓肠肌的肌力、肌张力差异无统计学意义(P0.05)。治疗后4周,两组均较治疗前好转(P0.01),其中试验组胫前肌肌力、肌张力治疗前后的差值分别为(20±7)、(12±4)μV,对照组分别为(12±4)、(9±3)μV;试验组腓肠肌肌力、肌张力治疗前后的差值分别为(25±8)、(19±6)μV,对照组分别为(10±3)、(11±2)μV。试验组与对照组比较,差异均有统计学意义(P0.01)。结论早期下肢智能反馈康复训练系统的治疗能显著改善卒中偏瘫患者的下肢步行能力。     

激素敏感型原发性肾病综合征患者外周血T淋巴细胞亚群及调节性T淋巴细胞的变化及意义

目的通过测定激素敏感型原发性肾病综合征（SSNS）患者外周血T细胞亚群（CD3＋CD4＋、CD3＋CD8＋、CD4/CD8）及调节性T淋巴细胞（Treg,CD4＋CD25＋highCD127low）,探讨其在病情不同阶段的动态变化趋势及临床意义。方法选取在该科初治的原发性肾病综合征（PNS）患者,经标准剂量激素治疗（1mg·kg-1·d-1）8周后,根据病情缓解与否筛选出SSNS组患者35例,正常对照组30例。患者分别于治疗前（W0）、治疗4周（W4）、治疗8周（W8）常规进行实验室检查[包括尿蛋白定量、血白蛋白（Alb）、血肌酐（Scr）、胆固醇（Cho）、甘油三酯（TG）等],采用流式细胞术检测T淋巴细胞亚群及Treg。结果 （1）实验室指标比较：SSNS组患者W4、W8分别与W0比较,尿蛋白、Cho、TG及Scr均显著下降（P〈0.05）,Alb显著升高（P〈0.05）。W8与W4比较,Alb升高（P〈0.05）,其余指标两组间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。（2）SSNS组与正常对照组比较：SSNS组患者W0与正常对照组比较,CD4%、CD4/CD8有升高趋势,而Treg及Treg/CD4轻微下降,但差异均无统计学意义（P〉0.05）。W4与正常对照组比较,CD4%、CD4/CD8比值升高（P〈0.05）,Treg/CD4比值降低（P〈0.05）。W8与正常对照组比较,CD4%、CD8%、CD4/CD8比值、Treg、Treg/CD4比值的差异均无统计学意义（P〉0.05）。（3）SSNS组治疗期间动态变化：SSNS组W8与W4比较,CD4%下降,CD8%升高,CD4/CD8比值下降,Treg及Treg/CD4均明显升高（P〈0.05）,以上指标与正常对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 SSNS患者存在T淋巴细胞数量异常,T淋巴细胞亚群及Treg/CD4比值失调,且此异常的免疫状态当糖皮质激素治疗4周时仍然持续存在,治疗8周达临床完全缓解后得以改善。Treg可能在SSNS患者的病情缓解中发挥作用。     

二氮嗪对氧糖剥夺PC12细胞的作用

目的 探讨线粒体ATP敏感钾通道（K＋-ATP）开放剂-二氮嗪对氧糖剥夺PC12细胞的保护作用及其机制.方法 体外培养PC12细胞,分为正常对照绀、氧糖剥夺组、二氮嗪预处理组（氧糖剥夺前20 min给予二氮嗪200 μmol/L）.以改良噻唑蓝法测定细胞活性,采用Heochst33342/PI双染法测定细胞凋亡率,Fluo-3/AM（钙离子荧光探针）榆测PC12细胞内钙离子的浓度.结果 ①与正常对照组比较,氧糖剥夺后细胞活力明显降低（P〈0.01）;在氧糖剥夺前给予200 μmol/L的二氮嗪可使细胞活力明显升高（P〈0.01）.②正常对照组细胞凋亡率为（7.5 ±2.1）%,氧糖剥夺组为（42.0±2.6）%,二氮嗪预处理组为（21.3±3.2）%.与正常对照组比较,氧糖剥夺纽和二氮嗪预处理组差异均有统计学意义（P〈0.01）,二氮嗪预处理组与氧糖剥夺组比较,差异亦有统计学意义（P〈0.01）.③正常对照组、氧糖剥夺组、二氮嗪预处理组细胞内游离钙离子平均荧光值分别为（120.6±1.6）%,（280.8 ±2.5）%,（167.0±3.9）%.与正常对照组比较,氧糖剥夺组和二氮嗪预处理组差异均有统计学意义（P〈0.01）,二氮嗪预处理组与氧糖剥夺组比较,差异亦有统计学意义（P〈0.01）.结论 线粒体K＋-ATP 开放剂--二氮嗪可增强氧糖剥夺细胞的活力,减少细胞的凋亡率,其机制可能与降低细胞内钙超载有关.     

多囊卵巢综合征患者卵泡液白细胞介素-1β水平与体外受精-胚胎移植结局关系的研究

目的探讨体外受精-胚胎移植（IVF-ET）中GnRH拮抗剂治疗多囊卵巢综合征（PCOS）对患者卵泡液中白细胞介素-1β（IL-1β）的影响及与助孕结局的关系。方法选择2011-08～2012-09在该院生殖医疗中心行IVF-ET的PCOS不孕患者76例,随机分为A组（GnRH拮抗剂组）28例（研究组）,B组（GnRH激动剂长方案组）48例（对照组）,比较分析两组患者的卵泡液中IL-1β水平及其与助孕结局的关系。结果两组卵泡液中IL-1β浓度比较差异无统计学意义（P〉0.05）;子宫内膜厚度、获卵数、成熟卵率、受精率、卵裂率、优胚率、种植率、临床妊娠率方面,两组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;A组的Gn总用量、Gn用药天数明显比B组少（P〈0.01）;A组绒毛膜促性腺激素（HCG）日E2水平低于B组（P〈0.05）;两组的卵巢过度刺激综合征（OHSS）发生率差异无统计学意义（P〉0.05）;A组的周期取消率明显低于B组（P〈0.01）。结论 IVFET中GnRH拮抗剂治疗PCOS不会改变卵泡液中的IL-1β水平,不影响卵泡的发育、卵母细胞的成熟、受精、卵裂能力及胚胎的着床,故GnRH拮抗剂方案是安全有效的。     

广州管圆线虫线粒体基因组比较分析

目的 目的 比较我国大陆地区广州管圆线虫线粒体基因组的多态性。 方法 方法 在种群遗传学研究基础上, 选取7条雌虫进行线粒体基因组的测定。根据广州管圆线虫线粒体基因组已知序列 （GQ398121） 设计12对引物, 进行PCR扩增, 并对目的片段进行测序和拼接。利用多种生物学软件对测定的线粒体基因组进行基因定位、 结构图绘制、 核苷酸及变异位点分析、 进化关系分析。结果 结果 获得5个不同遗传类型的线粒体基因组。这些基因组的大小相似、 结构相同, 即 13 491～13 502对碱基, 含12个蛋白编码基因, 2个核糖体基因, 22个tRNA基因, 2个较大的非编码区。上述基因紧密地排列在同一条DNA链上, 并具有相同的转录方向。通过对这些基因组的比对发现, 变异位点745个, 占整个基因组的5.5%。其中, 缺失/插入突变59个, 碱基颠换105个, 碱基转换581个。这些突变位点均匀地分布在整个线粒体基因组中。结论 结论本研究提供了丰富的广州管圆线虫线粒体基因的突变位点, 为构建种内鉴别诊断技术提供了基础。     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞Toll样受体4的表达及其与TGF-β的关系

目的了解慢性乙型肝炎、肝硬化患者外周血单个核细胞（PBMC）中Toll样受体4（TLR4）的表达变化及其意义。方法采用实时荧光定量RT-PCR方法分别检测28例慢性乙型肝炎、25例肝硬化及10例健康对照者PBMC中TLR4mRNA的表达;ELISA法检测上述患者血清转化生长因子p（TGF-β）;放射免疫法检测血清透明质酸（HA）、层粘蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原蛋白（PCIH）及Ⅳ型胶原（CIV）的水平。结果各实验组TLR4mRNA的表达均明显高于健康对照组（P〈0．01）,且与患者血清TGF-β表达水平呈显著正相关（r值=0．875,P〈0．01）,与HA、LN、PCIn、CIV表达水平之间呈正相关（r值分别为0．647、0．525、0．556、0．682）。结论慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞TLR4的表达增高可能与肝纤维化的形成密切相关。     

mTORC1信号通路在花生四烯酸代谢产物致乳腺癌过程中的作用

目的：探讨花生四烯酸（ AA）代谢产物5-羟二十烷四烯酸（ HETE）、12-HETE促进乳腺癌发生过程中雷帕霉素靶蛋白1（ mTOR）信号通路的作用。方法将体外培养乳腺癌MCF-7细胞随机分为4组,对照组加入0．1％DMSO,HETE组加入5-HETE及12-HETE 15μmol/L,Rap组加入mTORC1抑制剂雷帕霉素（ Rap）100μmol/L,HETE＋Rap组加入Rap 100μmol/L及5-HETE＋12-HETE 15μmol/L。 CCK-8法检测各组细胞增殖率,免疫印迹法检测各组细胞mTORC1信号通路下游蛋白P-S6活性,细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力。结果细胞增殖率HETE组高于对照组,HETE＋Rap组低于HETE组（P均＜0．05）。 P-S6蛋白灰度值HETE组高于对照组,HETE＋Rap组低于HETE组（ P均＜0．01）。 MCF-7细胞迁移距离 HETE 组大于对照组（P＜0．01）。 HETE＋Rap组小于HETE组（P＜0．05）。结论 mTORC1信号通路参与了 AA代谢产物乳腺癌发生的过程。     

腹水超滤浓缩回输腹腔治疗肝硬化顽固性腹水疗效评价

目的 评估腹水超滤浓缩回输腹腔术治疗肝炎肝硬化顽固性腹水患者临床疗效。方法75例肝硬化顽固性腹水患者分为治疗组（50例）和对照组（25例）,两组患者均采用保肝、利尿、对症、支持等常规治疗,疗程4周。对照组在常规治疗基础上,采用多次治疗性腹穿放液治疗;治疗组在常规治疗基础上,采用腹水超滤浓缩回输腹腔治疗,观察并比较两组治疗后体重、腹围、24h尿量和尿钠排出量、肝功能、肾功能、血电解质及不良反应。结果治疗4周后治疗组腹围、体重、24h尿量优于对照组（P〈0．01）;血清白蛋白、肾小球滤过率及24h尿钠量高于对照组（P〈0．01）,肌酐、胱抑素c水平低于对照组（P〈0．05。P〈0．01）;治疗组显效率（48．0％）和总有效率（80．0％）明显好于对照组（24．0％和52．0％）（P〈0．05）：两组均未出现严重不良反应。结论腹水超滤浓缩回输腹腔术治疗肝硬化顽固性腹水患者临床疗效优于多次治疗性腹穿放液。     

HELLP综合征的临床特点与结局分析

目的探讨子痫合并溶血、肝酶升高、血小板计数减少（HELLP综合征）患者的临床特点及结局。方法子痫患者59例,依据有无合并HELLP综合征分为HELLP综合征组12例和无HELLP综合征组47例。分析两组患者的临床信息、生化指标、孕妇病死率。结果两组孕妇的年龄、发病孕周、规律产检,差异无统计学意义（P〉0.05）。而HELLP组孕妇抽搐后收缩压较无HELLP组显著升高,差异有统计学意义（P〈0.05）。HELLP组孕妇LDH、AST及Cr水平明显高于无HELLP组;而血小板明显低于无HELLP组,差异有统计学意义（均P〈0.05）。HELLP组病死率（25%）显著高于无HELLP组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论子痫合并HELLP综合征在临床中并非少见,严重威胁母婴安全。早明确诊断、适时终止妊娠及综合性治疗,可以降低母婴病死率。