原花青素对β-淀粉样肽(25-35)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的 探讨原花青素(pmcyanidins，PC)对β-淀粉样肽(25-35)[βamyloid pepfide-(25-35)，Aβ25-35]诱导PC12细胞凋亡的保护作用。方法 采用MTT比色法分析细胞存活率，Hoechst 33258-PI荧光染色法检测凋亡，流式细胞仪检测分析细胞凋亡率变化情况。结果 不同剂量PC预处理PC12细胞1h可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的PC12细胞凋亡，提高细胞的存活率，减少Aβ25-35引起的核固缩、凝聚和碎裂，降低细胞凋亡率。结论 PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用。     

β-淀粉样肽(25-35)对PC12细胞Cyclin D1、CDK4、pRb、E2F1基因表达的影响

目的 观察β-淀粉样肽(25-35)[β-amyloid peptide (25-35),Aβ25-35]对体外血清饥饿培养PC12细胞的Cyclin D1、CDK4、pRb、E2F1基因表达的影响.方法 用终浓度为25 μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞,流式细胞仪检测分析细胞周期的改变,通过RT-PCR检测Cyclin D1、CDK4、E2F1基因mRNA表达变化,Western印迹检测Cyclin D1、CDK4、pRb蛋白表达的变化.结果 流式细胞仪分析表明血清饥饿培养24 h可使约90%PC12细胞停滞于G0/G1期,25 μmol/L Aβ25-35诱导组8、16、24 h与对照组比较,S期百分率明显增加(P＜0.01),16 h后细胞凋亡率明显增加(P＜0.01),可见明显的亚二倍体峰(Ap峰);Aβ25-35浓度诱导血清饥饿培养的PC12细胞0～20 h,Cyclin D1、CDK4、pRb 、E2F1 mRNA和蛋白表达增高.结论 Aβ25-35诱导同步化于G0/G1的PC12细胞重新进入细胞周期,并阻滞于S期,同时出现凋亡,可能与增加Cyclin D1、CDK4、pRb 、E2F1 mRNA和蛋白的表达有关.     

原花青素对Aβ25-35诱导PC12细胞周期紊乱的保护作用

目的 观察原花青素(PAC)对β-淀粉样肽(25-35) (Aβ25-35)诱导体外血清饥饿培养的PC12细胞周期紊乱与凋亡的保护作用,并探讨其可能的作用机制.方法 采用血清饥饿培养使PC12细胞同步于G0期,PAC预处理后加入Aβ25-35,通过流式细胞仪分析细胞周期与凋亡,RT-PCR和Western印迹从mRNA及蛋白水平检测p21、Cyclin D1、pRb和E2F1基因表达的变化.结果 与Aβ25-35诱导组比较,PAC保护组S期细胞百分率明显减少,凋亡率明显降低(P＜0.05);p21 mRNA和蛋白表达增加(P＜0.05),Cyclin D1、E2F1 mRNA和Cyclin D1、pRb蛋白表达降低(P＜0.05).结论 PAC对Aβ25-35诱导的PC12细胞周期紊乱与凋亡起保护作用,其机制可能与上调p21表达,下调Cyclin D1、pRb、E2F1表达有关.     

aFGF对Aβ25-5诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）对β淀粉样肽25-35（AB25-35）诱导凋亡PC12细胞凋亡的保护作用。方法采用MTT比色法分析细胞存括率，Hoechst 332582-PI荧光染色法检测细胞凋亡，RT-PCR方法检测PCI2细胞Bax和Bcl-2基因mRNA的表达，Western印迹检测PC12细胞Bax和Bcl-2蛋白表达。结果不同剂量（10、20、30mg／L）aFGF预处理PC12细胞1h可剂量依赖性对抗AB25-35引起的细胞凋亡，提高PC12细胞的存括率，减少Aβ25-35引起的PC12细胞核固缩、凝聚和碎裂，降低Bax基因mRNA表达及蛋白表达，增加bcl-2基因mRNA表达及蛋白表达。结论aFGF可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用，其机制可能与下调凋亡基因Bax和上调抗凋亡基因Bcl-2表达有关。     

雌激素减轻Aβ25-35所致PC12细胞毒活性的机制探讨

目的 观察1713-雌激素对Aβ25-35所致PC12细胞毒活性影响的可能机制。方法 用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术，观察雌激素对Ap25-35损伤的PC12细胞的Bcl-2 mRNA及Bax mRNA表达的影响。结果 用Aβ25琊处理PC12细胞24h，与对照组相比，Bcl-2 mRNA的表达水平降低，Bax mRNA的表达水平升高；而Aβ25-35加17β-雌激素引起Bcl-2 mRNA的表达水平较单纯Aβ处理组增高，Bax mRNA的表达水平较单纯Aβ处理组降低。结论 17β-雌激素在Aβ25-35所致PCl2细胞毒性的神经保护作用中，其机制是通过上调Bcl-2基因的表达与下调Bax基因的表达来实现的。     

核转录因子-κB对β-淀粉样肽25-35诱导下PC12细胞周期的影响

目的 探讨核转录因子κB(NF-κB)在β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)肽段诱导的PC12细胞周期异常中的机制.方法 应用流式细胞仪检测技术及Western印迹方法,在Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中检测NF-κB的活性和细胞周期相关蛋白周期蛋白A(cyclin A)、周期蛋白D1(cyclin D1)、周期蛋白E(cyclin E)、周期蛋白依赖性激酶2(CKD2)、周期蛋白依赖性激酶4(CKD4)、周期蛋白依赖性激酶6(CKD6)表达量的变化.分别将PC12同步化于G0期和S期,再检测Aβ25-35诱导对上述指标的影响.抑制NF-κB活性后,进一步检测上述细胞周期相关蛋白在Aβ25-35诱导下的变化.结果 Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中NF-κB活性增加(P＜0.05),同时细胞周期相关蛋白量升高;细胞同步化于G0期,Aβ25-35处理PC12细胞,细胞凋亡率下降,NF-κB活性的增加和细胞周期相关蛋白量升高均受抑制;而同步化于S期,则细胞凋亡率、NF-κB活性的增加和细胞周期相关蛋白量升高均无显著性变化;Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中,抑制NF-κB活性则会引起细胞周期相关蛋白表达受抑制.结论 NF-κB主导了Aβ25-35诱导PC12细胞周期的异常变化,异常发生在G0期到G1期的过渡以及G1期到S期过渡,而不是S期到G2期以及G2期到M期的过渡.     

琐琐葡萄多糖对β淀粉样蛋白诱导PC12细胞凋亡的影响

目的探讨琐琐葡萄多糖(VTP)对β淀粉样蛋白(Aβ25~35)诱导PC12细胞凋亡的影响及作用机制。方法 Aβ25~35诱导PC12细胞建立阿尔茨海默病(AD)细胞模型,VTP(20、40、80 mg/L)作用于细胞模型,CCK-8法检测各组细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,Real-time PCR检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达。结果 VTP可提高PC12细胞活性,降低细胞凋亡率,增强Bcl-2 mRNA表达,抑制Bax mRNA表达。结论VTP对Aβ25~35诱导的PC12细胞凋亡具有明显的保护作用,其机制可能是通过增强Bcl-2 mRNA表达、降低Bax mRNA表达,抑制细胞凋亡。     

原花青素对β-淀粉样肽（25—35）诱导PC12细胞bax和bcl-2基因表达的影响

目的探讨原花青素（Procyanidins，PC）对β-淀粉样肽（25-35）（hi325弗）诱导凋亡PCI2细胞bax和bcl-2基因表达的影响。方法采用MTT比色法分析细胞存活率，Hoechst33258-PI荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变，RT—PCR检测bax和bcl-2基因mRNA表达，Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达。结果不同剂量PC预处理PC12细胞1h，可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的细胞凋亡，增加细胞存活率，减少Aβ25-35引起的细胞核固缩、核碎裂，降低baxmRNA及Bax蛋白表达，增加bcl-2mRNA及Bcl-2蛋白表达。结论PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35诱导的PCI2细胞凋亡，其机制可能与下调凋亡基因bax和上调抗凋亡基因bcl-2表达有关。     

褪黑素对Aβ25-35诱发PC12细胞损伤的保护作用

目的研究褪黑素（MT）对β淀粉样蛋白片段（AB25书）诱发PC12细胞损伤的神经保护作用。方法将培养的PC12细胞分为三组：正常对照组，Aβ损伤组和MT保护组。Aβ损伤组用Aβ25-35处理细胞，MT保护组在用AB25-35处理前2h加入褪黑素。使用细胞形态学方法、LDH法、MTT法及Western印迹法观察MT的神经保护作用。结果形态学观察发现MT保护组细胞数显著比Aβ损伤组多，受损变圆的细胞数较少。MT保护组LDH活性显著低于损伤组（P〈0．01）；OD值显著高于损伤组（P〈0．01）。Western印迹结果表明Aβ25-35损伤组中Bcl-2的表达比正常对照组低；MT保护组Bcl-2的表达比Aβ25-35损伤组升高。结论褪黑素对Aβ25-35诱发PC12细胞损伤有保护作用。     

Carnosine对Aβ25-35诱发PC12细胞损伤的神经保护作用

目的　研究 Carnosine对 β淀粉样蛋白片段 (Aβ2 5- 3 5)诱发 PC1 2细胞损伤的神经保护作用。方法　将培养的 PC1 2细胞分为三组 :正常对照组、损伤组和保护组。损伤组用 Aβ2 5- 3 5处理细胞 ,保护组在用 Aβ2 5- 3 5处理前 30 min加入 Carnosine。使用细胞形态学方法、LDH法、MTT法观察 Carnosine的神经保护作用。结果　通过形态学方法 ,保护组细胞数显著比损伤组多 ,受损变圆的细胞数较少。保护组 LDH活性显著少于损伤组(P<0 .0 1 ) ;MTT显著高于损伤组 (P<0 .0 1 )。结论　 Carnosine对 Aβ2 5- 3 5诱发 PC1 2细胞损伤有显著的保护作用。     

铝对大鼠海马细胞内钙水平和钙通道蛋白基因表达的影响

目的 观察铝对大鼠海马细胞内游离钙([Ca2+]i)水平和钙通道蛋白表达的影响.方法 以64只健康Wistar大鼠为研究对象,按体质量将大鼠分为16组,经口灌胃给予氯化铝(AlCl3),按AlCl3剂量(mg/kg)分为O(对照)、37.3、74.7、248.7组;染铝时间为45、75、120 d,其中120 d的大鼠再正常饲养30 d;分别在实验45、75、120、150 d处死大鼠,取脑分离海马.应用荧光分光光度计测定海马[Ca2+]i,应用RT-PCR方法检测海马中Ryanodine受体2(RyR2)和L-型钙通道α1C亚基(L-Ca2+α1C)mRNA表达情况.结果 AlCl3剂量和实验时间均可增加大鼠海马[Ca2+],(F值分别为23.136、19.089,P<0.01),二者具有交互作用(F=2.270,P<0.05);实验120、150 d时,大鼠海马[Ca2+]i,37.3、74.7、248.7 mg/kg组[(299.3±48.7)、(342.7±35.3),(391.2±47.9)、(408.1±42.8),(397.9±55.8)、(405.2±22.7)nmol/L]均较对照组[(195.1±29.9)、(209.1±30.6)nmol/L]明显升高(P<0.01).AlCl3可使大鼠海马RyR2、L-Ca2+α1C mRNA表达增加(F值分别为23.301、60.812,P<0.01).实验时间对大鼠海马中RyR2 mRNA表达无影响(F=1.361,P>0.05),但可下调L-Ca2+α1CmRNA的表达(F=6.088,P<0.01);AlCl3剂量和实验时间对L-Ca2+α1C mRNA表达有交互作用(F=5.876,P<0.01).实验75、120、150 d时,大鼠海马L-Ca2+α1C mRNA表达水平74.7、248.7 mg/kg组(1.03±0.16、1.18±0.18、0.92±0.11,1.89±0.26、1.25±0.10、1.07±0.14)均较同时间对照组(0.63±0.09、0.78±0.16、0.69±0.11)明显增加(P<0.05或<0.01).实验45、75、120、150 d时,大鼠海马RyR2 mRNA表达水平,74.7、248.7ms/kg组(0.49±0.06、0.51±0.07、0.57±0.11、0.47±0.11,0.47±0.03、0.52±0.09、0.70±0.10、0.78±0.09)均较同时间对照组组(0.24±0.07、0.32±0.04、0.30±0.06、0.27±0.06)明显升高(P<0.05或<0.01).结论 铝可以通过上调RyR2 mRNA和L-Ca2+α1C mRNA的表达而增加海马[Ca2+]i,发挥不可恢复性的神经毒性作用.     

猪苓多糖对胃肠上皮化生细胞模型的影响

目的:探讨猪苓多糖对鹅去氧胆酸(CDCA)诱导GES-1 细胞株的肠上皮化生相关分子标志物的影响.方法:CCK8法检测不同浓度CDCA、猪苓多糖对GES-1 细胞增殖能力的影响;RT-qPCR、Western blot法检测肠上皮化生相关分子标志物表达水平.结果:CDCA诱导后,GES-1细胞的尾型同源盒2(CDX2)...     

Further characterization of substratum influence on PC12 cell shape and dopamine processing

We recently demonstrated that PC12 cells cultured on extracellular matrix (ECM) exhibit a flattened morphology, release more dopamine and contain less intracellular dopamine than cells which have a rounded shape on plastic culture ware. To further explore the role of PC12 cell shape in dopamine processing, we characterized the interaction of ECM and various agents on cell shape and dopamine release and content. In addition, the constituents of the ECM and the corneal endothelial cells which produce the ECM were presented in soluble form to PC12 cells on plastic. The soluble polysaccharides heparin, dextran and dextran sulfate, caused a dose-related increase in rounded (refractile) cells on ECM, a dose-related decrease in dopamine release and an increase in dopamine content relative to flattened cells on ECM. Chondroitin sulfate and hyaluronic acid did not prevent cell spreading on ECM nor affect dopamine processing. These experiments demonstrate that certain polysaccharides block cell spreading on ECM and that round cells on ECM secrete and store dopamine in a fashion similar to round cells on plastic. Colchicine, cytochalasin B and cycloheximide appear to affect dopamine synthesis and thus could not distinguish the role of cell shape in transmitter release. Treatment of PC12 cells on plastic with collagens I, II, III, IV, fibronectin, fibroblastic growth factor (FGF), or solubilized ECM had little effect on dopamine release or content. Endothelial cell conditioned medium and endothelial cell lysate increased dopamine release, but also increased dopamine content which differs from the effect of ECM. In summary, these experiments suggest that extracellular matrix alters cell shape and that the physical arrangement of these cells can determine dopamine secretion and storage.     

心脏收缩调节刺激对心肌细胞钙动力学的影响

目的通过计算机理论模拟心肌细胞电生理模型,在心肌动作电位(AP)绝对不应期内施加非兴奋性电刺激,观察胞内自由钙离子浓度变化及心脏收缩调节。方法在人心室细胞电生理模型的基础上,根据近年相关实验成果,通过改造以模拟衰竭心肌细胞的电生理特性。结果改造后模型的AP和胞内钙浓度变化,和临床发现非常相似。心脏收缩调节刺激大大增强了钠-钙交换器活性,在AP间期更多的钙离子经过此交换器进入胞内,逐拍提高了肌浆网内的钙浓度峰值,因而下一搏中有更多的钙离子释放到胞浆中,从而逐渐提高了细胞内的自由钙浓度,最后收敛于一个稳定值,AP的延长和胞内钙活动密切相关。结论适宜的AP绝对不应期刺激能提高肌浆网内钙的集聚,增强心肌收缩。     

慢性心房颤动对心房肌细胞内游离钙浓度的影响

目的探讨慢性心房颤动(Af)对心房肌细胞内游离Ca2+的影响。方法用激光共聚焦显微镜技术,以Fluo4/AM作为钙指示剂,对急性分离的慢性风湿性心脏病伴慢性Af、窦性心律患者的心房肌细胞内游离Ca2+浓度进行测定,观察慢性风湿性心脏病伴慢性Af患者心房肌细胞是否存在钙超载。结果慢性风湿性心脏病伴慢性Af患者心房肌细胞内游离Ca2+浓度显著高于窦性心律患者[(276.38±38.12)∶(122.28±45.63)nmol/L,P<0.05]。结论慢性Af患者心房肌细胞内存在钙超载。     

朊蛋白106-126肽段对PC12细胞毒性作用的形态学观察

目的研究朊蛋白106-126肽段在细胞水平上的毒性作用。方法PC12细胞常规培养后加入神经生长因子(NGF)诱导成神经元样细胞,再加入朊蛋白106-126肽段,MTT法检测细胞存活率,观察细胞生长和形态变化。结果细胞接触肽段后存活率下降。光镜下可见细胞贴壁不良,胞体缩小,细胞突起断裂缩短;荧光染色可见到突起缩短、胞核固缩并染成橘红色的凋亡细胞;电镜下可见胞质中出现空泡样结构,细胞染色质浓集于核膜内侧并裂解成碎块状,可见凋亡小体。结论利用106-126肽段感染分化的PC12细胞可能是在细胞水平上研究朊蛋白毒性作用的理想模型。     

Effects of thrombin on intracellular calcium and pH in human and murine platelets

The aim of this study was to compare the effect of thrombin (Thr) on cytosolic calcium [Ca 2 ] + i and intracellular pH [pH]i in human and murine platelets. Rich-platelet suspensions from both species were loaded with Fura-2 (2 w M) or BCECF (0.75 w M) by incubation with their respective acetoxymethyl esters to measure cytosolic calcium [Ca 2+ ] i or intracellular pH [pH]i, respectively. Suspensions were challenged with increasing concentrations of Thr, from 0.1 to 10 IU/ml. Basal [Ca 2+ ] i in human platelets was 98 - 6 and 99.1 - 9 nM in rat platelets ( n =20). Thr increased \[Ca2+] i , EC 50 was 1.1 - 0.04 in human and 0.97 - 0.06 IU/ml in rat platelets ( n =7). Extracellular Mg 2+ (4 or 8 mM) abolished Thr response on [Ca 2+ ] i . [pH]i in human was 7.09 - 0.08 and 7.11 - 0.04 in rat platelets. Thr induced alkalinization of platelets in both species. Our results indicate that the potency of Thr to change [Ca 2+ ] i and [pH]i was similar in both species, allowing for comparisons between human and murine platelets and to extrapolate results from an animal model to human pathology.     

心肌梗死后家兔浦肯野细胞钙调控的改变

目的：观察心肌梗死（myocardial infarction，MI）后浦肯野细胞钙瞬变、钙火花和钙波的改变。方法：MI组（n=8）结扎左冠状动脉造成MI模型，2d后分离单个浦肯野细胞，保存在模拟缺血缓冲液中；对照组（n=2）不结扎冠状动脉直接分离单个浦肯野细胞。两组浦肯野细胞均用Fluo-4染色，激光扫描共聚焦显微镜下观察基础状态、1500ms和3000ms场刺激时钙荧光。结果：两组细胞在各种条件下，钙荧光强度变化曲线上升支速度快。快频率场刺激时，对照组曲线下降支速度快，最低荧光强度较慢频率场刺激时高，最高荧光强度与慢频率无明显差异。慢频率场刺激时，对照组曲线下降支在下降高度的前90％速度快，持续时间短，但后10％下降速度明显变缓。快频率场刺激时，Ⅶ组最低荧光强度明显升高，最高荧光强度无明显变化，曲线波动幅度明显变小，上升和下降速度均明显变慢，且下降支比上升支略缓。慢频率场刺激时，MI组浦肯野细胞最低和最高荧光强度与对照组相比无明显改变，曲线下降支中段周期性出现顿挫，顿挫使荧光强度下降延缓。基础状态下，MI组浦肯野细胞可见到自发的钙火花现象。基础状态下和慢频率场刺激时，Ⅷ组浦肯野细胞可见到钙波。结论：能量缺乏和pH值降低引起的肌浆网钙泵功能和多种蛋白质结合钙离子能力下降，以及快频率刺激时肌浆网钙储备显著减少是导致MI后浦肯野细胞钙调控异常的重要原因。     

1-磷酸鞘氨醇对心肌细胞内游离钙离子浓度的影响

目的研究1-磷酸鞘氨醇（sphingosine-1-phosphate,SIP）对体外培养的乳鼠心肌细胞内游离钙离子浓度的作用。方法应用钙离子荧光指示剂Fluo-3AM负载原代培养的大鼠心肌细胞,通过激光共聚焦扫描显微镜上机检测,记录其荧光强度变化。结果@SIP能降低[Ca2＋]i平均荧光强度值,对照组由（743．15±34．78）nmol／L降至（446．89±55．36）nmol／L（P〈O．01,n=7）;而S1P（1．1μmol／L）＋苏拉明（Suramin）（200μmol／L）组[ca2＋]i平均荧光强度值由（778．39±42．15）nmol／L降至（759．41±38．17）nmol／L,差异无统计学意义（P〉O．05,n=7）。结论S1P可降低乳鼠心肌细胞内游离钙离子浓度,这种作用可能通过其特异性的G蛋白耦联S1P受体介导产生。     

Effects of metabolic blockade on intracellular calcium concentration in isolated ferret ventricular muscle

Tension and intracellular free calcium concentration [( Ca2+]i) were measured in isolated ferret papillary muscles. When both anaerobic glycolysis and oxidative phosphorylation were prevented (metabolic blockade), there was a rapid decline of both developed tension and systolic [Ca2+]i signals. Subsequently, resting tension increased, and after a further delay, resting [Ca2+]i also rose. When oxidative metabolism was restarted after a period of metabolic blockade that was sufficient to elevate both resting tension and [Ca2+]i, a variable recovery of mechanical function occurred. In preparations that showed recovery, resting tension declined toward control level, and there was considerable recovery of developed tension. [Ca2+]i initially fell, but it then rose to a level similar to that at the end of the preceding period of metabolic blockade and exhibited large variations in amplitude with frequency components in the range 0.2-1 Hz. This elevated [Ca2+]i gradually declined. Arrhythmias were often present during this recovery period and appeared to be triggered by the spontaneous increases in [Ca2+]i. In preparations that failed to recover, resting tension remained elevated or increased, and developed tension showed little recovery. Such preparations showed larger rises in [Ca2+]i both during and after metabolic blockade, and [Ca2+]i continued to rise when oxidative metabolism was restarted. In experiments in which Na-Ca exchange was inhibited (by replacement of sodium by lithium or by the application of nickel), the rise of [Ca2+]i when oxidative metabolism was restarted was reduced, but recovery of mechanical function was improved. The correlation between elevated [Ca2+]i on reactivation of oxidative metabolism and failure of recovery of mechanical function suggests that elevated [Ca2+]i has a direct role in preventing the recovery of mechanical function.