TNF-α对血管内皮细胞ICAM-1诱导作用的研究

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对血管内皮细胞ICAM-1表达的诱导作用。方法:通过血管内皮细胞培养,采用免疫组织化学方法分别观察不同浓度(0～250U·ml-1)TNF-α24小时内及某一浓度(100U·ml-1)TNF-α在不同时程(0～72h)对内皮细胞ICAM-1表达的影响。结果:与对照组比较,TNF-α呈浓度与时间依赖性诱导内皮细胞ICAM-1的表达。结论:TNF-α是诱导血管内皮细胞表达ICAM-1的直接原因之一。     

缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注后ICAM-1表达的影响

目的 通过研究脑缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注后细胞间粘附分子-1(Intowellular adhesion molecule-1，ICAM-1)表达及多形核白细胞(Ploymorphonuclear leukocytes，PMNLs)浸润变化的影响．探讨预处理的延迟保护作用机制。方法采用四血管阻断法建立大鼠全脑-全脑缺血预处理模型。应用HE染色和免疫组化染色技术，观察脑缺血预处理后ICAM-1表达及多形核白细胞浸润的变化。结果(1)脑缺血再灌注后ICAM-1表达的阳性血管数量、PMNLs浸润数量均明显增加；(2)脑缺血预处理可明显减少缺血再灌注后ICAM-1的表达阳性血管数及PMNLs的浸润数量。结论一次性缺血预处理3min后48h可以少再次长时间缺血(30min)／再灌注(24h)的ICAM-1的表达和多形核白细胞浸润。ICAM-表达的下调和PMNLs浸润减少参与缺血预处理的保护作用。     

西维来司钠对大鼠脑缺血再灌注后梗死体积、TNF-α和ICAM-1表达的影响

目的 观察两维来司钠对大鼠脑缺血再灌注后脑梗死体积及缺血脑组织TNF-α、ICAM-1表达的影响.方法 雄性Wismr大鼠随机分为假手术组、盐水对照组及药物组(200mg/kg).线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型.采用Trc染色方法测定脑缺血2h冉灌注0h、1h、4h、6h、8h、10h给药后各组脑梗死体积;应用RT-PCR方法检测脑缺血2h再灌注22h后缺血脑组织TNF-α、ICAM-1 mRNA的相对含鼍.结果 与对照组比较,再灌流0、1、4、6h后药物组脑梗死体积明减减小(P＜0.05);再灌注8h、10h组脑梗死体积减小,但无统计学意义(P＞0.05).再灌流22h后,药物组缺血脑组织中TNF-α和ICAM-1 mRNA表达明显下降(P＜0.05).结论 西维来司钠可明显减少脑缺血再灌注后梗死体积,降低TNF-α与ICAM-1 mRNA表达,发挥脑保护作用.     

脑缺血预处理对缺血再灌注损伤的保护作用

目的　观察缺血预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法　采用四血管阻断法对实验鼠分组进行全脑缺血预处理及缺血后再灌注, 半定量法观察海马区神经元受损情况。结果　实验组四血管阻断３ 分钟（ 预处理） 后海马区神经元受损与对照组无显著差异;３ 天间隔６ 分钟全脑缺血再灌注组神经元受损较其他组明显减轻。结论　缺血预处理对脑缺血再灌注损伤保护作用与全脑缺血预处理时间, 后续全脑缺血再灌注损伤时间及两者间的时间间隔有关。     

脑缺血再灌注大鼠血浆及脑组织TNF-α动态变化的观察

目的：观察脑缺血再灌注大鼠血浆及胞组织内肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量的动态变化。方法：建立大鼠急性不完全性脑缺血再灌注模型．应用放免法（RIA）测定血浆及脑匀浆内TNF-α含量。结果：缺血0．5h,再灌注3h血浆及胞匀浆TNF-α开始明显升高,6h后TNF-α水平达到高峰,随后逐渐下降．但24h后血浆及脑匀浆TNF-α仍维持在较高水平。比较再灌注6h、12h、24h后脑匀浆与血浆TNF-α的水平,发现前者明显高于后者。结论：脑缺血再灌注过程中有TNF-α的升高,且脑组织内TNF-α含量明显高于血浆内水平。     

bFGF对脑缺血再灌注大鼠ICAM-1表达及脑组织含水量的影响

目的探讨bFGF对局灶性缺血再灌注大鼠脑组织含水量及脑组织ICAM-1水平的影响。方法SD大鼠48只,随机分为假手术组（n=16）、缺血再灌注组（n=16）和bFGF组（n=16）。应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大脑中动脉阻塞1h再灌注损伤24h,bFGF组伤后即刻一次性经腹腔注射bFGF（10g／kg）,假手术组和损伤组以相同方法给予0．9％的生理盐水。采用干湿法检测各组大鼠脑组织含水量,采用伊文思蓝（evansblue,EB）法检测脑毛细血管通透性,采用免疫组化法检测大鼠脑组织ICAM-1水平。结果与假手术组比较,缺血再灌注组脑含水量、脑皮质EB含量及ICAM-1表达显著增加（P〈0．05）,与缺血再灌注组比较,bFGF组脑含水量、脑皮质EB含量及ICAM-1表达较模型组显著性降低（P〈0．05）。结论ICMA-1表达增加是脑缺血再灌注后脑水肿形成和缺血性损伤的重要原因之一,减少ICAM-1表达和脑组织含水量推测是bFGF脑保护作用机制之一。     

环磷酰胺对大鼠脑缺血再灌注后脑组织中ICAM-1、白细胞影响的研究

目的观察环磷酰胺对大鼠脑缺血再灌注后脑组织中ICAM-1表达、白细胞浸润的影响。方法36只雄性SD大鼠分为假手术组和脑缺血再灌注组。脑缺血再灌注组中包括环磷酰胺治疗组和生理盐水对照组,每组按脑缺血2h后再灌注2h、4h、6h、24h又分为4个亚组。脑缺血再灌注组于脑缺血2h再灌注后2h、4h、6h、24h处死动物,用免疫组织化学法观察再灌注后不同时间点脑组织中ICAM-1的表达,HE染色法观察白细胞的浸润程度。结果(1)脑缺血再灌注后,脑缺血坏死区周边ICAM-1的表达及白细胞的浸润增多,并于24h达高峰;环磷酰胺组在相同再灌注时间点的ICAM-1表达及白细胞的浸润均明显低于对照组。(2)ICAM-1的表达与白细胞的浸润呈现正相关性。结论脑缺血再灌注后,ICAM-1的表达上调,介导了白细胞和内皮细胞的粘附,参与了脑缺血再灌注损伤的过程。环磷酰胺治疗组ICAM-1的表达、白细胞的浸润均少于对照组,说明环磷酰胺有抑制粘附分子表达上调、抑制白细胞浸润的作用,因而具有神经保护的作用,为该治疗应用于临床提供了理论基础。     

缺血预处理对沙土鼠脑缺血再灌注后线粒体功能的影响

目的 观察缺血预处理对沙土鼠脑缺血及再灌注后脑组织线粒体功能的影响。方法 用沙土鼠双侧颈总动脉结扎制成全脑缺血模型（缺血２０分钟,再灌注３０分钟）。动物随机分为预缺血组、模型组和假手术组。预缺血组给予两次（各２分钟）缺血预处理（间隔４８小时）。用氧电极法测定呼吸功能和呼吸链的氧化酶（ＮＡＤＨ氧化酶、琥珀酸氧化酶、细胞色素Ｃ氧化酶）活性。结果 缺血模型组动物的呼吸控制率、磷氧比及氧化磷酸化效率均较假     

阿司匹林预处理对脑缺血再灌注损伤后大鼠脑组织TNF-α和IL-6水平的影响

目的探讨阿司匹林(ASA)预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用机制。方法将健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注模型组(模型组)及ASA预处理大、中、小剂量组。模型组及ASA预处理组以线栓法建立大鼠右侧大脑中动脉缺血再灌注模型,ASA预处理大、中、小剂量组分别于造模前按体质量150mg/(kg.d)、50mg/(kg.d)和10mg/(kg.d)予ASA水溶片混悬液灌胃,连续5d;其他两组予等体积生理盐水连续灌胃。每组12只进入实验。采用Longa评分法进行神经功能评分,TTC染色测量脑梗死体积,放射免疫法检测脑组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平。结果模型组与ASA预处理组均可见大脑中动脉供血区梗死灶,ASA预处理大、中、小剂量组梗死灶〔(97.247±2.146)%、(94.141±0.996)%,93.507±2.262)%〕均较模型组〔(99.483±1.303)%〕缩小(P<0.05);ASA预处理中、小剂量组脑组织神经功能评分(分别为1.67±0.651、1.50±0.674)较模型组(2.33±0.492)降低(P<0.05、P<0.01);ASA预处理中、小剂量组脑组织TNF-α水平〔分别为(4.378±0.205)ng/mL、(4.318±0.146)ng/mL〕较模型组〔(4.843±0.419)ng/mL〕降低(P<0.01),IL-6水平〔分别为(364.56±12.37)ng/mL、(372.67±24.48)ng/mL〕较模型组〔(340.32±10.65)ng/mL〕升高(P<0.05);与ASA预处理中、小剂量组比较,ASA预处理大剂量组TNF-α水平〔(4.695±0.225)ng/mL〕增高(P<0.05),IL-6水平〔(345.74±12.42)ng/mL〕降低(P<0.05)。ASA预处理大剂量组神经功能评分、脑组织TNF-α、IL-6水平与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ASA预处理可通过抑制脑缺血再灌注损伤过程中的炎性反应而发挥神经保护作用,其机制可能与抑制TNF-α和升高IL-6水平有关。     

ICAM-1和VCAM-1的表达与脑缺血再灌注损伤

本综述了近几年ICAM-1和VCAM-1的表达及其机制在脑缺血再灌注损伤方面的研究，认为ICAM-1和VCAM-1是与脑缺血再灌注损伤关系密切的细胞粘附分子，脑缺血再灌注损伤可导致ICAM-1及VCAM-1不同程度地表达增加，是主要通过NF-kB途径实现。有关其凋控机制及其抗体的临床应用有待进一步研究。     

Apelin-13对鼠脑缺血-再灌注后的作用及机制

目的探讨apelin对鼠脑缺血-再灌注后的保护作用及机制。方法改良线栓法制备CD-1小鼠脑缺血-再灌注模型。实验1:实验动物随机分为假手术(Sham)组、溶剂对照(Vehicle)组、缺血-再灌注(I/R)组、apelin-13小剂量(APLN-L)组、apelin-13中剂量(APLN-M)组及apelin-13大剂量(APLN-H)组;实验2:实验动物随机分为Sham组、Vehicle组、APLN-M组、APLN-M+PD98059(APLN+PD)组、PD98059+I/R(PD)组。再灌注后23h时,实验1检测各组神经功能评分、脑梗死体积、脑水肿、细胞凋亡及细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)的表达;实验2检测各组ERK1/2、Bax、Bcl-2、caspase-3的表达及cleaved caspase-3的活性。结果实验1:1APLN-H组神经功能评分明显低于Vehicle组(P<0.05);2梗死体积APLN-L、-M、-H组较Vehicle组减小;3脑组织含水量APLN-H、-M组明显低于Vehicle组(P<0.05);4TUNEL阳性细胞数APLN-H、-M组明显低于Vehicle组(P<0.05);5APLN-L、-M、-H组Bax、caspase-3、cleaved caspase-3表达明显低于Vehicle组(P<0.05);Bcl-2表达明显高于Vehicle组(P<0.05);6APLN-H、-M、-L组cleaved caspase-3活性明显低于Vehicle组(P<0.05);7 APLN-L、-M、-H组p-ERK1/2蛋白表达明显高于Vehicle组(P<0.05)。实验2:1APLN+PD组Bax、caspase-3、cleaved caspase-3表达明显高于APLN-M组,Bcl-2表达明显低于APLN-M组(P<0.05);2APLN+PD组cleaved caspase-3活性明显高于APLN-M组(P<0.05)。结论 Apelin-13对脑缺血-再灌注具有神经保护作用;ERK1/2信号通路参与了apelin-13的抗凋亡作用机制。     

TNF-α对血管内皮细胞VCAM-1诱导作用的研究

目的：探讨肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）对血管内皮细胞ＶＣＡＭ－１表达的诱导作用。方法：通过血管内皮细胞培养,采用免疫组织化学方法分别观察不同浓度ＴＮＦ－α（０．２５０Ｕ．ｍＬ＾－１）２４小时内以及相同浓度（１００Ｕｍｌ＾－１）ＴＮＦ－μ０－α０－７２ｈ对内皮细胞ＶＣＡＭ－１表达的影响。结果：与对照组比较,ＴＮＦ－α对内皮细胞ＶＣＡＭ－１的诱导作用具有明显浓度与时间依赖性。结论：ＴＮＦ－α可诱导血     

经鼻给予抗ICAM-1抗体对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨经鼻腔给予抗细胞间黏附分子-1(ICAM-1)单克隆抗体(单抗)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法 将30只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组及脑缺血再灌注+经鼻给予高、中、低剂量抗ICAM-1单抗干预组.采用插线法制作局灶脑缺血再灌注模型.各干预组于缺血1 h经鼻给予抗ICAM-1单抗,再灌24 h后取脑行冠状切片.采用TTC、HE及免疫组化染色法测定脑梗死体积及免疫组化阳性区占总面积比.结果 缺血再灌注组脑标本均可见缺血侧的脑膜充血,脑组织肿胀;单纯脑缺血再灌注组及低、中、高抗ICAM-1单抗干预组脑梗死体积(以像素值表示)分别为57 042±12 483、32 871±4 325、25 932±3 103和15 325±3 356,免疫组化阳性区面积占总面积比分别为(6.64±0.476)%、(5.15±0.987)%、(4.36±0.682)%和(3.42±0.537)%,各组间差异均有统计学意义.结论 (1)脑缺血再灌注可使脑组织ICAM-1表达显著增高;(2)经鼻腔给予抗ICAM-1单抗可有效降低脑组织ICAM-1的表达,缩小脑梗死体积;(3)经鼻腔给予抗ICAM-1单抗的剂量同脑梗死体积呈负相关;(4)脑缺血再灌注时ICAM-1免疫组化阳性区面积比与脑梗死体积呈正相关.     

丹红注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠ICAM-1表达的影响

目的 探讨丹红注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠ICAM-1表达和白细胞浸润的影响.方法 SD大鼠24只,随机分为假手术组(n=8)、缺血再灌注组(n=8)和bFGF组(n=8).应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大脑中动脉阻塞1 h再灌注损伤24 h,术前治疗组丹红注射液预处理3 d,假手术组及缺血再灌注组用生理盐水预处理,采用免疫组织化学法染色和组织HE染色检测缺血区脑微血管内皮ICAM-1的表达及白细胞计数.结果 缺血再灌注组与假手术组相比ICAM-1表达明显升高,白细胞浸润明显(P<0.05).丹红治疗组ICAM-1表达较缺血再灌注组明显减少,白细胞浸润程度减轻(P<0.05).结论 丹红注射液预处理可降低局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠ICAM-1表达,减轻白细胞浸润,提示抑制粒细胞黏附作用是其脑保护作用机制之一.     

2-CAdo对脑缺血再灌注后血清及皮质TNF-α含量的影响

目的:研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后非选择性腺苷受体激动剂2-CAdo(2-Chloroadenosine)对血清及皮质肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响,从而进一步探讨腺苷受体激动剂的神经保护作用。方法 采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,于缺血后即刻经静脉注射2-CAdo,应用放射免疫法测定缺血1h再灌注6h后血清及皮质TNF-α的含量。结果 2-CAdo能显著降低脑缺血再灌注后血清及皮质TNF-α的含量。结论 2-CAdo可通过降低脑缺血再灌注后增高的TNF-α水平,达到神经保护作用。     

脑缺血预处理对沙鼠脑缺血再灌注损伤 p38MAPK活化的作用

目的 探讨脑缺血预处理对脑缺血后p38MAPK信号的影响.方法 蒙古沙鼠分成对照组、脑缺血再灌注组、脑缺血预处理组和抑制剂SB203580组.制备脑缺血及脑缺血预处理动物模型.免疫组织化学法和蛋白质印迹法检测海马区磷酸化p38MAPK的表达,TUNEL 法检测神经细胞凋亡,TTC染色测定脑梗死体积.结果 与对照组比较,脑缺血再灌注组磷酸化p38MAPK表达增高,凋亡神经细胞数量增加(P<0.05),磷酸化p38MAPK阳性细胞与TUNEL阳性细胞为同一神经元.与脑缺血再灌注组比较,脑缺血预处理组凋亡神经细胞下降、磷酸化p38MAPK表达较少、梗死面积缩小(P<0.05);抑制剂SB203580组磷酸化p38MAPK表达水平与脑缺血预处理组相似,但两组神经细胞凋亡数量及脑梗死体积比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 缺血预处理对脑缺血性损伤具有保护作用,其机制并非完全依赖p38MAPK信号活化.

Abstract：

Objective To study the effect of ischemic preconditioning on p38MAPK pathway after ischemia - reperfusion injury in gerbils. Method Gerbils were divided randomly into control group, ischemia - reperfusion group ( I/R ) , ischemia preconditioning group ( IP ) and inhibitor SB203580 group. Transient ischemia - reperfusion model and ischemia preconditioning model were performed. The expression levels of p38MAPK phosphorylation were detected by immunohistochemistry and Western blot, the neurons apoptosis were detected by TUNEL method and the infarction volume assessments were performed by TTC staining. Results Compared with control group, there were higher expression levels of p38MAPK phosphorylation,more apoptotic neurons in I/R group. The p38MAPK phosphorylation \positive cells and TUNEL positive cells were located in the same neurons. Compared with I/R group, there were lower expression levels of p38MAPK phosphorylation,fewer apoptotic neurons and smaller infarction volumes in IP group( P <0.05). The levels of p38MAPK phosphorylation in SB203580 group were similar as those in IP group( P > 0. 05 ) . However, the number of apoptotic neurons and infarction volumes were obviously changed ( P <0.05). Conclusions IP has protective effect from I/R damage in gerbils, which might be not only involved p38MAPK pathway.     

促红细胞生成素预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的探讨促红细胞生成素(EPO)在脑缺血再灌注(I/R)损伤中的保护作用及可能机制。方法 45只健康成年沙土鼠分为5组:正常对照组(A组);I/R损伤对照组(B组):腹腔注射等量无菌生理盐水;EPO预处理48h、24h、12h组(C、D、E组)。除正常对照组5只外,其余各组均有10只。建模后,记录各组大鼠脑神经细胞凋亡情况,用比色法测定脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量,用放射免疫法测定血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)的含量。比较EPO预处理的最佳给药时间窗。结果 I/R损伤对照组及EPO预处理各组SOD含量低于正常对照组(P均0.05),而MDA、TNF-α、IL-1β含量却高于正常对照组(P均0.05);EPO预处理各组MDA、TNF-α、IL-1β含量均明显低于I/R损伤对照组(P均0.05),而SOD含量明显高于I/R损伤对照组(P均0.05);EPO预处理24h组细胞凋亡数、TNF-α、IL-1β的含量低于预处理12h、48h组(P均0.05),SOD含量高于预处理12h、48h组(P均0.05)。结论促红细胞生成素预处理对脑缺血再灌注损伤具有保护作用,可能与其清除自由基、抗炎症免疫反应及神经营养作用有关。EPO预处理24h最佳给药时间窗。     

栀子苷预处理对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障的保护作用

目的观察栀子苷预处理对脑缺血再灌注血脑屏障(blood brain barrier,BBB)损伤的保护作用。方法采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)损伤模型,设假手术组、模型组以及栀子苷预处理组。通过紫外分光光度计检测脑组织伊文思兰(Evans blue,EB)含量,观察大鼠BBB通透性改变。用免疫组化染色法观察缺血侧额叶皮质区胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、基质金属蛋白酶-9(matrix metallopeptidase-9,MMP-9)及基质金属蛋白酶-2(matrix metallopeptidase-2,MMP-2)的阳性表达。用Western blot法检测水通道蛋白-4(Aquaporin-4,AQP4)的表达。结果 (1)再灌24 h后,大鼠脑组织EB含量明显增加,栀子苷预处理组较之于模型组EB含量降低(P<0.05);(2)模型组GFAP、MMP-9及MMP-2阳性表达与假手术组相比显著增加(P<0.01),而栀子苷预处理明显降低GFAP和MMP-9及MMP-2的表达(P<0.01;P<0.05);(3)缺血再灌注损伤后AQP4的表达显著提高,栀子苷预处理下调AQP4的表达(P<0.05)。结论栀子苷预处理对大鼠脑缺血再灌注引起的BBB损伤具有保护作用。     

丁咯地尔对大鼠急性脑缺血再灌注损伤IL-1β、TNF-α表达的影响

脑梗死是严重危害人类健康的疾病之一,具有高发病率、高致残率的特点.脑缺血后尽早恢复血供是治疗脑梗死的关键措施.近年来研究发现脑缺血后再灌注损伤是影响原缺血病变脑组织功能恢复的重要原因,而炎症因子引起的炎症反应在脑缺血再灌注损伤中起重要作用.丁咯地尔作为一种血管活性药物,在临床上用来治疗缺血性脑血管病,其疗效已得到肯定,但其对炎性因子作用的报道不多.本文通过对大鼠脑缺血再灌注损伤后即刻应用丁咯地尔,检测脑缺血再灌注后不同时限脑组织匀浆内TNF-α、L-1β的表达,来探讨丁咯地尔的脑保护作用.