GDNF cDNA在神经及非神经细胞系中的表达

研究重组ＧＤＮＦｃＤＮＡ在神经及非神经细胞系中的表达。方法；重组克隆，基因转染及ＲＴ－ＰＣＲ。结果；ＣＶ１及ＳＨ－ＳＹ－５Ｙ细胞中无ＧＤＮＦ内源性表达，转基因后出现ＧＤＮＦ表达条带。ＮＧ１０８－１５细胞有ＧＤＮＦ的内源性表达，转基因后表达条带增强。结论：重组ＧＤＮＦＣＤＮＡ在神经及非神经细胞系中均有较强表达，提示以此制备的工程细胞在Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ‘ｓ病基因治疗中可能具有重要作用。     

大鼠GDNF真核表达载体的构建及其真在核细胞中的表达

目的：构建ｐｃＤＮＡ３／ＧＤＮＦ真核表达质粒并了解其在真核细胞内的表达．方法：将ＧＤＮＦ逆转录聚合酶链式反应产物克隆至ｐｃＤＮＡ３真核表达载体上,经酶切鉴定及测序分析并以脂质体介导法转染真核细胞,了解其在细胞内的表达及其表达蛋白的生物学活性．结果：酶切鉴定及测序分析表明重组ｐｃＤＮＡ３／ＧＤＮＦ表达质粒克隆成功,转染实验表明重组质粒能在真核动物细胞中表达出具有活性的ＧＤＮＦ蛋白．结论：以脂质体介导     

人GDNF基因的克隆

目的：克隆可表达人胶质细胞源性神经营养因子的基因。方法：从脑胶质细胞瘤患者术后的脑瘤组织中提取总ＲＮＡ，以ＲＴＰＣＲ方法扩增出了一段约５５８ｂｐ的ｃＤＮＡ片段，将这一片段克隆于ｐＵＣ１８载体中，进行全序列分析。结果：证实该研究所克隆的ｃＤＮＡ是编码正确的人ＧＤＮＦ基因。与发表于ＧｅｎｅＢａｎｋ上的序列相比，发现该研究克隆的基因有一段７８ｂｐ的核苷酸序列缺失，但不影响密码子的阅读框。结论：克隆到了编码正确的人ＧＤＮＦ的ｃＤＮＡ全序列，对帕金森病基因治疗的基础研究及临床应用具有重要意义。     

人脑源性神经营养因子cDNA克隆及在酵母中的表达

目的：克隆和表达人脑源性神经营养因子（ｈＢＤＮＦ）。方法和结果：从原代培养人雪旺细胞中提取总ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ法获取了编码带前导肽的和成熟的ｈＢＤＮＦ２个ｃＤＮＡ片段，经ＤＮＡ测序表明其顺序与文献报道一致。将这２个ｃＤＮＡ片段分别插入到大肠－酵母穿梭质粒ｐＶＴ１０２Ｕ／α上。用酵母整体细胞法将重组质粒转化酵母宿主细胞，经筛选后，获得分泌性表达。表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定，大小都在１５０     

汉族人胶质细胞源性神经营养因子前体cDNA的核苷酸序列分析及其功能研究

目的：对汉族人胶质细胞源性神经营养因子（ＧＤＮＦ）前体ｃＤＮＡ进行核苷酸旬分析及功能研究。方法：通过ＲＴ－ＰＣＲ法扩增汉族人ＧＤＮＦ前体ｃＤＮＡ,利用昆虫杜状病毒表达系统（ＢＥＳ）表达此前体ｃＤＮＡ,原代培养中脑多巴胺能神经元对表达产物进行活性测定。结果：汉族人ＧＤＮＦ前体ｃＤＮＡ为截短的５５５ｂｐ的转录体,其在昆虫细胞中的分泌表达产物能促进多巴胺能神经元的存活和分化。结论：汉族人ＧＤＮＦ前体ｃ尤     

pcDNA3.1(+)GDNF真核表达载体的构建及其在真核细胞中的表达

目的　构建ｐｃＤＮＡ3.1(+)胶质细胞源性神经营养因子 (ＧＤＮＦ)真核表达质粒并了解其在真核细胞内的表达。方法　将ＧＤＮＦ逆转录聚合酶链式反应 (ＲＴ ＰＣＲ)产物克隆至ｐｃＤＮＡ3.1(+)真核表达载体上 ,经酶切鉴定及测序分析并以ＦｕＧｅｎｅ 6介导法转染真核细胞 ,了解其在细胞内的表达及其表达蛋白的生物学活性。结果　ＲＴ ＰＣＲ产物为 6 40ｂｐ特异片段 ,ｐｃＤＮＡ3.1(+)ＧＤ ＮＦ重组体经酶切后分别出现 6 40ｂｐ和 30 0ｂｐ片段 ,测序分析与文献报道结果完全一致 ,表明重组ｐｃＤＮＡ3 .1(+)ＧＤＮＦ表达质粒克隆成功。可见…     

转化生长因子β1在cos—7细胞中的短暂表达

本文将人转化生长因子β１（ｈＴＧＦβ１）全长ｃＤＮＡ克隆至真核表达载体ｐＭＡＭｎｅｏ的ＮｈｅＩ位点，利用ＤＥＡＥ－Ｄｅｘｔｒａｎ法将ｈＴＧＦβ１载体导入ｃｏｓ－７细胞中。实验结果表明：所构建的表达载体在ｃｏｓ－７细胞内有转录水平的表达，这为我们进一步研究ｈＴＧＦβ１在其它细胞内的表达与调控之间的关系奠定了基础。     

人GDNF基因的克隆

克隆可表达人胶质细胞源性神经营养因子的基因。方法；从脑胶质细胞瘤患术后的脑瘤组织中提取总ＲＮＡ，以ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增出了一般约５５８ｂｐ的ｃＤＮＡ片段，将这一片段克隆于ｐＵＣ１８载体中，进行全序列分析。结果：证实该研究所克隆的ｃＤＮＡ是编码正确的ＧＤＮＦ基因。     

人脑胶质细胞来源神经营养因子基因的克隆及测序

为研究人脑胶质细胞来源的神经营养因子（ｇｌｉａｌｃｅｌｌｌｉｎｅ ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ, ＧＤＮＦ） 在神经系统疾病中的作用,根据ＧＤＮＦ 的ｃＤＮＡ 序列设计并合成引物,以流产胎儿脑组织为来源,分别提取ＲＮＡ 和基因组ＤＮＡ 作模板,经ＲＴ ＰＣＲ 和ＰＣＲ 技术扩增人ＧＤＮＦ 基因片段,采用ＤＮＡ 重组技术将其克隆于ｐＧＥＭ Ｔ Ｅａｓｙ 载体中并测序。结果：ＲＮＡ 和基因组ＤＮＡ 体外扩增得到的片段均是４１０ ｂｐ ,两者无差异。ＰＧＥＭ ＧＤＮＦ 经酶切鉴定正确,测序结果与Ｇｅｎｅｂａｎｋ 比较基本相同。由于ＲＮＡ 和基因组ＤＮＡ 扩增得到的片段大小相同,证实该基因片段内无内含子插入,该片段可用于真核及原核表达。     

人β-NGF基因的体外扩增、克隆及其序列的分析

目的　对人β－ ＮＧＦ基因进行体外扩增和克隆及其序列分析,为其在真核细胞中的表达及其临床应用打下基础。方法　本实验设计并合成一对特异性引物,采用聚合酶链反应分别从人脑ｃＤＮＡ 和人睾丸ｃＤＮＡ 以及人脑基因组ＤＮＡ中扩增出β－ 神经生长因子（β－ ＮＧＦ）基因,并和Ｔ４ 载体相连接,经筛选得到人β－ ＮＧＦ克隆,并用Ｓａｎｇｅｒ 双脱氧末端终止法进行序列分析。结果　凝胶电泳显示在预期的位置出现阳性条带。结论　阳性克隆经序列分析证明克隆基因序列正确     

抗精子抗体和抗子宫内膜抗体与不孕及流产的关系

目的　探讨抗精子抗体（ＡｓＡｂ）与抗子宫内膜抗体（ＥＭＡｂ）在不孕、流产中的作用及二者关系,进一步 揭示不孕、流产的病因。方法　采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）同时检测３４５例不孕、流产妇女血清中的ＡｓＡｂ与 ＥＭＡｂ,按ＡｓＡｂ检测结果分阳性组和阴性组,比较两组ＥＭＡｂ阳性率的差异。结果　原发不孕及自然流产妇女中, ＡｓＡｂ（－）组ＥＭＡｂ阳性率高达１６．６７％和１９．５１％,而ＡｓＡｂ（＋）组ＥＭＡｂ阳性率高达４３．６４％和４２．８６％,显著高于 ＡｓＡｂ（－）组（Ｐ＜０．０１,Ｐ＜０．０５）。继发不孕妇女中ＡｓＡｂ（－）组ＥＭＡｂ阳性率为１８．１８％,ＡｓＡｂ（＋）组ＥＭＡｂ阳性率 为３２．２％,二者无显著性差异（０．０１＞Ｐ＞０．０５）。结论原发不孕及自然流产妇女中因个体免疫反应差异使某些 人易对体内、外物质发生免疫反应而产生抗体,从而导致不孕或流产。     

亚硝基脲类和亚硝基硫脲类的理化性质及致突变能力

本题选择N,N′-二甲基亚硝基脲(DMNU),N,N′-二乙基亚硝基脲(DENU),及其类似物N,N′-二甲基亚硝基硫脲(DMNTU)、N,N′-二乙基亚硝基硫脲(DENTU)为代表,测定了这些化合物的水解反应速度、脂溶性(HPLC的logk′值)、水解产物和致突变能力。证明了硫脲的脂溶性大于脲的脂溶性。DMNTU对TA100菌株的致突变能力最强,其它较弱。     

水疗联合抚触对新生儿的生长发育、黄疸及睡眠的影响

目的探讨新生儿游泳联合抚触对新生儿的生长发育、黄疸及睡眠的影响。方法将经阴道顺产分娩的正常新生儿100例随机分为两组，观察组（水疗联合抚触组）50例，对照组（单纯沫浴组）50例。①测定两组10日、28日的体重、身长、上臂围；②观察记录胎便转黄时间，测定皿清胆红素；③记录24h睡眠时间。结果两组新生儿10日、28日体重、身长、上臂同增长有显著差异（P〈0．05），两组新生儿5日时，胎便转黄时间及黄疸指数比较均有显著性差异（P〈0．01），两组睡眠时间比较有统计学意义（P〈0．05），两组并发症比较无统计学意义（P〉0．05）。结论新生儿水疗联合抚触可促进新生儿的生长发育，能加速胎粪的早排出，减轻生理性黄疸程度，有效地降低新生儿高胆红素血症的发病率，提高睡眠质量。     

气血与足月妊娠分娩关系的探讨

论述足月妊娠分娩的发动和维持依靠气的推动、温煦、气化、固摄功能和血的营养、濡润功能。顺利分娩既要气血充足，还要气顺血和。临床研究结果表明调补气血，是促进产程，预防难产的重要手段。实验研究结果阐明调补气血中药加强产力、促进产程主要是从改善产妇全身情况，提高机体抗应激、抗疲劳、耐缺氧能力，即所谓使产妇气血充足调和，充分发挥气血在分娩过程中的生理作用。