共刺激分子B7-1介导Th1/Th2免疫应答对日本血吸虫虫卵肉芽肿病变的影响

目的观察B7-1激发型mAb的体内注射对日本血吸虫感染小鼠Th1/Th2免疫偏移的影响及对虫卵肉芽肿病变的调节作用,探讨干预共刺激信号调控Th1/Th2免疫偏移控制血吸虫虫卵肉芽肿病变的新途径。方法小鼠感染日本血吸虫尾蚴后4w给予腹腔内注射B7-1激发型mAb,于6、8wk摘眼球取血收集血清,用ELISA双抗体夹心法测定血清中抗体IgGI、gG1I、gG2a的水平;同时取脾淋巴细胞培养72h,同法测定培养上清中细胞因子IFN-γ和IL-4的表达水平;并且检测感染小鼠虫卵肉芽肿体积。结果B7-1激发型mAb能显著下调感染小鼠血清IgG水平,并能显著上调IFN-γ的表达水平,下调IL-4的表达水平,同时能使虫卵肉芽肿体积显著减小。反映Th1/Th2免疫偏移的IgG1/IgG2a有下降趋势。结论B7-1激发型mAb能调节Th1/Th2免疫应答,诱导免疫反应向Th1方向偏移,从而为控制日本血吸虫虫卵肉芽肿病变的免疫治疗新途径提供了实验依据。     

ICOSL敲基因小鼠日本血吸虫病模型的免疫应答及其免疫病理

目的 观察ICOSL敲基因（ICOSL knockout,ICOSL-KO）小鼠感染日本血吸虫后的免疫应答及其免疫病理反应。方法 建立ICOSL-KO小鼠及野生型C57BL/6J小鼠日本血吸虫病模型,收集感染前（0周）和感染后（4~20周）的小鼠脾淋巴细胞用SEA进行诱导培养72小时后,采用ELISA双抗夹心法检测培养上清中Th1（IFN-γ、IL-12）及Th2（IL-4、IL-10、IL-13）细胞因子表达水平。应用ELISA法检测同期血清中SEA特异性抗体IgG、及其亚类IgG1、IgG2a的表达水平。应用HE染色法观察小鼠肝脏虫卵肉芽肿病变。 结果 ICOSL-KO小鼠Th1细胞因子IFN-γ、IL-12表达明显高于野生型小鼠,而其Th2型细胞因子（IL-4、IL-10、IL-13）表达水平却显著低于野生型小鼠。ICOSL-KO小鼠血清SEA特异性抗体IgG及其亚类IgG1、IgG2a的水平显著低于野生型C57BL/6J小鼠的水平,其Th2分化指数与IgG1/IgG2a的比值亦低于野生型小鼠的水平,特别是在感染7、12、16周后具有显著性差异。且ICOSL-KO小鼠的肝脏虫卵肉芽肿病变显著小于野生型小鼠。结论 感染日本血吸虫的ICOSL-KO小鼠Th2免疫应答显著下调并导致肝虫卵肉芽肿病变减弱,表明ICOS–ICOSL 信号通路在血吸虫病免疫病理中具有重要作用。     

日本血吸虫感染可诱导共刺激分子（ICOS）转基因小鼠的免疫应答及其病理反应

目的 观察ICOS转基因小鼠感染日本血吸虫后的免疫应答及其免疫病理反应。 方法 收集ICOS转基因小鼠及对照组野生型小鼠分别感染30条日本血吸虫尾蚴后4～8周的血清及脾淋巴细胞培养上清，用ELISA双抗体夹心法检测血清抗体IgG、IgG1、IgG2a的水平和培养上清中的Th1细胞因子γ干扰素（IFN-γ），Th2细胞因子白细胞介素-4（IL-4）水平。取小鼠感染后6、8周肝脏，常规石蜡连续切片，HE染色，在光镜观察单个虫卵肉芽肿病变。 结果 转基因小鼠IFN-γ的表达水平无显著变化，而6、8周时转基因小鼠的IL?鄄4水平呈显著上调表达，分别为（20.8±1.6）pg/ml和（25.3±3.4）pg/ml（P<0.01）。转基因小鼠血清IgG、IgG1表达水平也均高于对照组。在转基因小鼠，反映Th1/Th2免疫平衡的Th2分化指数和IgG1/IgG2a比值也明显呈Th2优势应答，分别为2.20±0.68和5.59±0.31。感染6、8周转基因小鼠肝虫卵肉芽肿反应比对照组更为显著。转基因小鼠肝虫卵肉芽肿体积显著大于同期对照组的肉芽肿，增大率分别为24.48%和26.37%（P<0.01）。 结论 ICOS转基因小鼠感染日本血吸虫后表现出Th2优势应答的免疫学特征，表明ICOS在血吸虫病免疫病理中具有重要作用。     

IL-12对伯氏疟原虫红内期感染小鼠Th1/Th2细胞因子表达水平的影响

目的观察白细胞介素12 (IL-12) 对伯氏疟原虫(P.b)红内期感染小鼠Th1/Th2细胞因子表达水平的影响,探讨IL-12介导Th1/Th2免疫偏移在抗P.b红内期感染中的免疫调节作用.方法 BALB/c小鼠接种5×105个感染P.b的红细胞,同时分别给予0.03 μg/d或0.15 μg/d IL-12处理,用ELISA方法检测P.b感染小鼠血清或脾淋巴细胞体外培养上清中细胞因子IFN-γ、IL-4表达水平的动态变化.结果 0.03 μg/d IL-12处理组小鼠接种感染后第7天取脾淋巴细胞体外经PHA或可溶性抗原sAg刺激培养产生的IFN-γ水平较感染对照组显著升高,IL-4水平显著下降,而0.15 μg/d IL-12处理组脾淋巴细胞产生的IFN-γ及IL-4水平均较感染对照组显著下降.在感染后第3天,0.03 μg/d或0.15 μg/d IL-12处理组小鼠血清中IFN-γ均已出现,第5天达高峰,但感染后第7天 0.15 μg/d IL-12处理组血清中IFN-γ迅速下降,甚至低于感染对照组及0.03 μg/d IL-12处理组,感染对照组直到感染后第7天血清中方可检测到IFN-γ水平.结论适当低剂量IL-12诱导CD4 Th1免疫应答,产生细胞因子IFN-γ,以诱导抗P.b红内期感染的免疫保护作用;而较大剂量IL-12抑制机体抗感染免疫,甚至可致免疫病理损害.     

钥孔戚血蓝蛋白诱导Balb/c小鼠脾细胞Th1/Th2失衡的研究

目的 探讨钥孔戚血蓝蛋白(KLH)诱导Balb/c小鼠脾细胞Th1/Th2失衡的特点,为药物干预Th1/Th2失衡奠定基础.方法 以KLM 完全弗氏佐剂(CFA)免疫Balb/C小鼠并分离其脾细胞,ELISA法检测脾细胞上清中Th1型细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-12p40和Th2型细胞因子IL-4、IL-5,以及血清Thl型抗体IgG2a和Th2型抗体IgG1水平.结果 ①免疫小鼠出现脾肿大、脾细胞计数升高.②免疫小鼠脾细胞IL-2于24h明显升高,48h达高峰;IL-4、IFN-γ和IL-5于24h轻度升高,96h达高峰;各时间点IL-12p40均较低.③不同剂量基础或强化免疫均可致细胞因子升高,IL4/IFN-γ升高.④免疫小鼠血清IgG1、IgG2a升高,以IgG1明显.结论 KLH CFA可诱导Balb/c小鼠脾细胞发生Th2型优势反应.     

广州管圆线虫感染小鼠脾脏T淋巴细胞亚群和细胞因子的变化

摘 要：目的 观察小鼠感染广州管圆线虫后脾脏T淋巴细胞亚群及其细胞因子分泌水平的变化。方法 用从褐云玛瑙螺体内检获的广州管圆线虫第3期幼虫感染BALB/c小鼠, 感染后第19d及第25d分批处死小鼠, 分离脾细胞,使用细胞内细胞因子荧光染色方法, 用流式细胞仪检测脾脏淋巴细胞中的T细胞亚群的含量,用双抗夹心ELISA法检测脾细胞培养上清细胞因子的浓度。结果 与对照组比较,感染小鼠脾脏CD4+、CD4+IL-4+T淋巴细胞比例显著上升,而CD4+ IL-17 +、CD4+IFN-γ+T淋巴细胞比例显著下降;脾细胞培养上清细胞因子IL-4水平明显升高,而IL-17水平明显下降。同时,感染程度和感染时间等因素也可造成脾脏T淋巴细胞亚群及其细胞因子分泌水平的变化。结论 小鼠感染广州管圆线虫后,表现以脾脏CD4+T淋巴细胞大量增殖和Th2型淋巴细胞极化为特点。     

香菇多糖抗小鼠急性弓形虫感染免疫机制的初步探讨北大核心CSCD

目的从香菇多糖对弓形虫感染小鼠Th1/Th2免疫应答建立的影响及二者平衡维持的角度探讨香菇多糖抗小鼠急性弓形虫感染的免疫机制。方法 RH株弓形虫速殖子腹腔感染小鼠前及感染后进行香菇多糖处理,观察各组小鼠的存活率,同时用ELISA法动态检测小鼠脾细胞培养液中Th1/Th2免疫反应关键细胞因子IFN-γ/IL-4水平及血清中IgG2a/IgG1抗体的含量。结果与对照组相比香菇多糖可以明显提高两处理组小鼠的存活率,香菇多糖处理组(LTN组)第10d全部死亡,而香菇多糖预处理组(pre-6dLTN组)第13d存活率仍达18.4%;pre-6dLTN组及LTN组在感染后第3d建立Th1型免疫应答,IFN-γ含量分别为186.28pg/ml及117.07pg/ml,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);IgG2a含量为0.332(A490)及0.320(A490),与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),且于第7d达峰值。同时Th2型免疫应答开始建立,IL-4含量分别为121.28pg/ml及94.47pg/ml,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);IgG1含量分别为0.382(A490)及0.354(A490),与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),随后维持较高水平。结论香菇多糖能辅助小鼠建立Th1/Th2免疫应答,且能适时转化并维持二者平衡,避免因任何一种免疫反应过度表达而导致的免疫病理反应,从而增强小鼠抵抗弓形虫感染的能力。     

广州管圆线虫成虫可溶性抗原诱导小鼠保护性免疫的研究

目的 探讨广州管圆线虫成虫可溶性抗原诱导小鼠的保护性免疫,为广州管圆线虫病的免疫预防研究提供科学依据。方法 以广州管圆线虫成虫可溶性抗原隔周腹腔注射免疫小鼠1次,共3次,末次免疫1w后,用300条广州管圆线虫第三期幼虫感染每鼠,攻击感染4w后解剖每鼠检获虫体,计算减虫率,并观察、测量检获虫体形态、大小。此外,还检测了小鼠体内血清特异性抗体IgG和血液嗜酸性粒细胞含量。结果 免疫组小鼠与对照组比较,有极显著的减虫效果（P＜0．01）,800μg、400μg和200μg免疫原组小鼠的减虫率分别是44．0％、42．6％和18．7％。免疫组小鼠体内检获的虫体比对照组要少。免疫组小鼠血清抗体水平及血液嗜酸性粒细胞绝对值均高于对照组（P＜0．01）。结论 广州管圆线虫成虫可溶性抗原可诱导小鼠产生保护性免疫。     

细粒棘球蚴感染对小鼠炎症性肠病的保护机制研究

目的 观察细粒棘球蚴感染对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠炎症性肠病(IBD)症状的保护作用及可能机制。方法 建立继发性细粒棘球蚴感染小鼠模型,再给予DSS诱导IBD症状,解剖后ELISA法检测小鼠血清中囊液抗原水平,并观察腹腔内的包囊;根据每日体重监测、解剖后结肠长度测量及结肠组织病理学评分指标评估细粒棘球蚴感染对炎症性肠病的保护作用;采用流式细胞术CBA法检测模型鼠血清中Thl/Th2/Thl7水平,评价细胞因子对炎症性肠病的保护作用。结果 小鼠感染细粒棘球蚴后血清HCF抗体阳性率与成囊率均为100%。细粒棘球蚴感染减轻了DSS引起的小鼠体重下降程度;结肠变短程度减小,HE染色检查小鼠结肠组织炎性症状显著改善。CBA检测显示细粒棘球蚴感染小鼠血清IL-4、IL-10、IL-17A、IL-6、IFNγ含量均较正常小鼠显著增加,表现为Th2为主的免疫反应;细粒棘球蚴感染合并IBD模型组小鼠Th2/Th1型细胞因子比率同IBD组相比显著升高。结论 细粒棘球蚴感染IBD模型小鼠血清IL-4、IL-10水平升高,Th2高水平状态削弱了DSS引发的Th1反应,表明细粒棘球蚴感染可改善IBD小鼠...     

香菇多糖抗小鼠急性弓形虫感染免疫机制的初步探讨

目的从香菇多糖对弓形虫感染小鼠Th1／Th2免疫应答建立的影响及二者平衡维持的角度探讨香菇多糖抗小鼠急性弓形虫感染的免疫机制。方法RH株弓形虫速殖子腹腔感染小鼠前及感染后进行香菇多糖处理,观察各组小鼠的存活率,同时用ELISA法动态检测小鼠脾细胞培养液中Th1／Th2免疫反应关键细胞因子IFN—γ／IL-4水平及血清中IgG2a／IgG1抗体的含量。结果与对照组相比香菇多糖可以明显提高两处理组小鼠的存活率,香菇多糖处理组（LTN组）第10d全部死亡,而香菇多糖预处理组（pre-6dLTN组）第13d存活率仍达18．4％;pe-6dLTN组及LTN组在感染后第3d建立Th1型免疫应答,IFN-7含量分别为186．28pg／ml及117．07pg／mi,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）;IgG2a含量为0．332（A-490）及0．320（A-490）,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）,且于第7d达峰值。同时Th2型免疫应答开始建立,IL-4含量分别为121．28pg／ml及94．47pg／ml,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）;IgG1含量分别为0．382（A-490）及0．354（A-490）,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）,随后维持较高水平。结论香菇多糖能辅助小鼠建立Th1／Th2免疫应答,且能适时转化并维持二者平衡,避免因任何一种免疫反应过度表达而导致的免疫病理反应,从而增强小鼠抵抗弓形虫感染的能力。     

旋毛虫感染小鼠IgG、IL-2和T淋巴细胞亚群动态变化的观察

目的　了解小鼠感染旋毛虫后 Ig G抗体水平、IL - 2分泌量和 T淋巴细胞亚群的动态变化。方法　分别于旋毛虫感染后第 7、14、2 1、2 8和 35天 ,采用 EL ISA方法检测血清特异性 Ig G抗体水平和 IL- 2含量 ,采用流式细胞仪检测 CD4+、CD8+T细胞百分率。结果　 Ig G抗体水平在感染后逐渐上升 ,感杂后 35天达最高值 ;T淋巴细胞的变化表现为 CD4+T细胞减少、CD8+T细胞增多 ,CD4+/ CD8+细胞比值下降 ,以感染后第 14天最为显著 ,直到感染后第 35天仍未见恢复。IL - 2分泌量以感染后第 7天达高峰 ,然后迅速下降 ,到感染后第 35天低于正常组。讨论　旋毛虫感染的急性期 ,小鼠出现免疫抑制现象。抗旋毛虫感染的保护性免疫是由细胞免疫与体液免疫协同完成的。     

广州管圆线虫感染大理州福寿螺模型的构建及探讨

目的 构建广州管圆线虫人工感染大理州福寿螺实验动物模型,观察并探讨感染后福寿螺的生长变化和感染效果,为本地区深入研究广州管圆线虫病提供充足的试验材料.方法 用福寿螺体内的广州管圆线虫(第三期幼虫)感染昆明小鼠,6周后用含有广州管圆线虫一期幼虫的新鲜鼠粪感染大理本地繁殖的福寿螺,将福寿螺随机分为A、B、C、D组,每组40...     

Monoclonal antibody 12D5 inhibits eosinophil infiltration in the brain of Angiostrongylus cantonensis-infected BALB/c mice

Each of BALB/c mice was infected with 50 Angiostrongylus cantonensis larvae. One group of mice received an intraperitoneal injection of 50 μg 12D5 monoclonal antibody (mAb) against a 98 kDa antigen of adult worms at 10 days post-infection (dpi), with a booster injection of 25 μg at 12 dpi. Five mice from each group were sacrificed at 14 dpi for pathological examination and RNA extraction. The infiltration of eosinophils and severity of eosinophilic meningitis were reduced in 12D5 mAb-treated mice compared with the infected mice without 12D5 treatment. The levels of eotaxin mRNA expression in spleen significantly increased and the expression of the Th2-type cytokine IL-5 significantly decreased. However, the expression of IL-4 was not changed. 12D5 mAb can observably enhance the survival rate of infected mice and reduce symptoms of angiostrongyliasis. A. cantonensis infection is a major cause of eosinophilic meningoencephalitis. The results of this study could be helpful for the development of treatment of human angiostrongylosis.     

日本血吸虫感染小鼠CD_4~+ T淋巴细胞协同刺激分子表达谱及其在介导Th1/Th2极化中的作用

目的观察日本血吸虫感染小鼠不同病期体内及体外培养后脾CD4+T淋巴细胞表面的协同刺激分子表达谱,探讨协同刺激分子介导Th1/Th2极化的作用。方法收集血吸虫感染后4w、7w、12w、16w和20w小鼠及正常小鼠脾CD4+T淋巴细胞,以及上述不同病期经SEA诱导72h后脾淋巴细胞培养上清,用流式细胞术检测细胞表面协同刺激分子CD80、CD86、ICOS、CD40、OX40、4-1BB及PD1表达水平,用ELISA法检测培养上清中的Th1细胞因子IFN-γ,Th2细胞因子IL-4、IL-5、IL-10、IL-13。结果血吸虫感染后小鼠脾CD4+T淋巴细胞表面CD86、ICOS、CD40和OX40的表达均随感染时间延长而上调,其中ICOS和CD86表达上调最为显著;经SEA诱导培养72h后CD86、ICOS亦显著上调表达;培养上清检测发现IFN-γ在4w时呈高表达,7w开始随感染时间延长呈下调表达;IL-4、IL-5、IL-10和IL-13的表达水平则从7w开始明显升高,IL-5的峰值出现在12w,其余均16w达高峰,致20w仍维持在较高水平。结论日本血吸虫感染小鼠CD4+T淋巴细胞协同刺激分子表达水平与Th1/Th2免疫偏移密切相关,其中ICOS、CD86在介导Th2极化中可能具有重要作用。     

Immunoglobulin and cytokine profile in murine secondary hydatidosis

We have investigated specific immune responses in BALB/c mice with experimentally induced secondary hydatidosis. Following intraperitoneal inoculation of brood capsules containing Echinococcus granulosus-protoscoleces, the course of the infection was followed for 513 days. The sera of the mice were screened for the presence of a number of cytokines, and for specific antibodies. During the first 129 days of infection, high levels of cytokines TNFα, IL-α, IFNγ, IL-6, andIL-10 and specific IgGl andIgG3 isotypes were detected, as compared to uninfected controls. The levels oflgM and IgG2a were slightly increased following infection, and remained elevated throughout the period of observation. The levels of IL-lα and specific immunoglobulin of all isotypes except IgM and IgG2α, were significantly decreased 103 days post infection fp.i.), whereas TNFα was sharply decreased 129 days p.i. During the period of 129 to 209 days of infection there was an increase in secreted IL-10, and a slow decrease in the levels of IL-6 andlFN-γ. Levels of IgM, IgG, IgGl, and IgG2a plateaud during this period, whereas IgG3 and TNFα showed a peak at day 190 p.i. These data suggest the induction of Th2 antibody-mediated immunity with a parallel expansion of Thl-mediated inflammatory responses as important mechanism of host defence against the metacestode.     

Ablation of eosinophils with anti-IL-5 antibody enhances the survival of intracranial worms of Angiostrongylus cantonensis in the mouse

Effects of depressed eosinophilia on the development of Angiostrongylus cantonensis in the mouse were studied using monoclonal rat anti-mouse-interleukin-5 antibody (anti-IL-5). The administration of anti-IL-5 strongly depressed peripheral, cerebrospinal fluid (CSF) and medullary eosinophilic responses in mice infected with A. cantonensis, when compared with groups treated with phosphate-buffered saline solution (PBS) alone or isotype-matched rat IgG. There was no significant difference in A. cantonensis antigen specific IgG and IgE antibody responses between rat IgG treated and anti-IL-5 treated mice. Intracranial worm recovery in anti-IL-5 treated mice was consistently high throughout the course of the study and some worms migrated from the brain to the lungs. By contrast, almost all the intracranial worms in the mouse groups treated with PBS alone or rat IgG died before day 32. These data clearly indicate that IL-5 is essential for eosinophil responses in A. cantonensis infected mice and also that eosinophils serve as a potential effector cell in the killing of the intracranial worms in mice.     

Comparative studies on immune responses to infection in susceptible B10.BR mice infected with different strains of the murine nematode parasite Trichuris muris

A comparison of immune responses to infection between groups of B10.BR mice infected with different strains of T. muris , S strain (isolated in Sobreda, Portugal), E strain (isolated in Edinburgh), and E-J strain (originally E strain, which has been maintained in our laboratory, Japan), was performed. In mice infected with E and E-J strains, most of the worms were expelled by day 32 after infection, though the expulsion was faster in E-J strain-infected mice. In contrast, no expulsion was observed in S strain-infected mice by day 32 and egg production occurred on day 32. IL-4 production occurred in concanavalin A (Con-A)-stimulated mesenteric lymph node cells (MLNC) from B10.BR mice infected with E and E-J strains, whereas no IL-4 production was observed in S strain-infected mice. IL-4 production did not occur in normal mice. In comparison with normal mice, high levels of IFN-γ production by Con A-stimulated MLNC were detected in mice infected with every strain of  T. muris . IFN-γ production in S strain-infected mice was greater, occurred earlier and was more persistent than in mice infected with E and E-J strains. IgG1 and IgG2a antibodies to T. muris excretory/secretory antigens were observed in B10.BR mice infected with every strain of T. muris . Antibody production showed similar kinetics. These differences in the expulsion kinetics and IL-4 production in B10.BR mice infected with S, E, and E-J strains suggest the involvement of IL-4 in protection against T. muris infection, and confirm the previous conclusion by Else et al . (1994).