蚤、蜱中巴尔通体的分离培养及检测鉴定

目的了解蚤、蜱在我国作为巴尔通体传播媒介的可能性，获得其自然状态下存在于吸血节肢动物中的证据。方法采集家猫、狗、牛及鼠类动物体表寄生蚤、蜱，采用含5％去纤维兔血脑心浸液（brain heart infusion，BHI）培养基置于35℃含5％ CO2培养箱中从蚤、蜱中分离巴尔通体，疑似菌落应用聚合酶链反应技术（Polymerase Chain Reaction，PCR）扩增巴尔通体特异基因片段，阳性产物测序并用同源性比较及系统发育分析等方法分析确定巴尔通体的亲缘关系。结果分别从猫栉首蚤、微小牛蜱中各分离出1株巴尔通体，用5对巴尔通体属特异性引物进行PCR反应，扩增产物均产生阳性目标带，证实为巴尔通体属微生物。序列同源性比较发现蚤、蜱分离株之间同源性较小，tRNA^Ile-tRNA^Ala地基因间隔区序列为58．2％、ftsZ基因序列为72．8％；这两株菌分别与云南鼠类宿主血液中分离的巴尔通体菌株RT222SM、RT221SM同源性最大，与其它已知巴尔通体同源性均较小。蚤培养物与RT222SM的tRNA^Ile-tRNA^Ala基因间隔区的同源性是77．9％、与ftsZ是96．2％；蜱培养物与RT221SM的tRNA^Ile-tRNA^Ala基因间隔区的同源性是99．4％，与云南鼠血中分离的Rf1561yn的gltA基因338bp核酸序列同源性为99．1％，基于gltA种系发育分析提示与Rfl561yn亲缘关系最近。结论从猫栉首蚤、微小牛蜱中分离培养出巴尔通体，为蚤、蜱作为巴尔通体传播媒介提供了线索，同时为在我国进一步开展媒介生物中巴尔通体感染情况调查提供了实验方法的参考依据。同源性搜索、比较及系统发育分析支持这2株巴尔通体与中国云南分离的巴尔通体基因型相似，而与国外的巴尔通体分离株亲缘关系较远。     

中国汉赛巴尔通体分离株的多位点序列分型分析

目的 了解中国汉赛巴尔通体的遗传背景和流行的常见亚型。方法 对分离到的汉赛巴尔通体应用多位点序列分型方法（Multilocus sequence typing, MLST）,分析它们的分子流行病学特征和系统发育情况。结果 80株汉赛巴尔通体一共分为3个序列型（sequence type, ST）,其中ST1占90% (72/80),ST9占8.75% (7/80),另一个序列型为仅包含一株细菌的ST30;所有3个序列型均属于克隆群1 （clonal complex 1）。结论 与国外汉赛巴尔通体多位点序列分型结果相比,中国的序列型相对集中,说明中国汉赛巴尔通体的变异度和多样性较低,提示其进化相对缓慢。     

长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库的构建及免疫学筛选

目的 构建长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库,筛选长角血蜱功能性抗原基因。 方法 在无RNA酶污染的条件下提取长角血蜱总RNA,进而纯化mRNA,以寡脱氧胸腺核苷酸［oligo（dT）］为引物合成双链cDNA,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将cDNA分子定向克隆至具有EcoRⅠ/HindⅢ黏性末端的λSCREEN载体。用噬菌体包装蛋白对以上连接产物进行体外包装以形成完整的噬菌体,转化大肠埃希菌（Escherichia coli）ER1647,从而构建长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库。使用兔抗长角血蜱全蜱血清对该文库进行免疫学筛选,经过2次筛选得到的阳性噬菌体转化E. coli BM25.8亚克隆为重组质粒,转化E. coli JM109,提取重组质粒进行PCR和测序分析。 结果 长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库的基础库容量为1.8×106 pfu,重组率为100%,扩增后的滴度为2.4×109 pfu/ml。筛选获得42个阳性克隆,序列分析表明有12个新cDNA序列,其编码蛋白与长角血蜱原肌凝蛋白、环状扇头蜱幼蜱未知蛋白、黑腹果蝇染色体2R、褐黄血蜱线粒体DNA、青海血蜱HqL09、Hq05和肌球蛋白轻链mRNA等具有同源性。 结论 构建了长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库,获得的阳性克隆为长角血蜱功能性抗原的研究奠定基础。     

长角血蜱两性生殖株和孤雌生殖株幼蜱发育零点及有效积温的研究

目的研究长角血蜱两性生殖株和孤雌生殖株幼蜱在不同温度下的发育零点和有效积温。方法将长角血蜱两性生殖株和孤雌生殖株饱血幼蜱置于不同温度的环境中,观察发育历期和积温,采用拟合模型方程求出两性株和孤雌株幼蜱发育的零点温度,计算幼蜱发育的有效积温。结果长角血蜱两性株和孤雌株的发育零点分别为14.89℃和14.95℃,平均积温分别为(265.08±99.37)日度和(306.90±176.24)日度,有效积温分别为(101.44±147.66)日度和(116.51±116.79)日度。结论长角血蜱饱血幼蜱的发育历期随温度升高而缩短,两性株比孤雌株发育快,研究结果可以作为长角血蜱生物学的基础理论参数之一。     

长角血蜱、嗜群血蜱经期传播莱姆病螺旋体Borrelia garinii的实验研究

目的　探讨长角血蜱、嗜群血蜱经期传播莱病螺旋体的可能性。方法　通过皮下注射KM鼠建立实验感染动物模型 ,以此阳性感染鼠感染试蜱非感染种群 ,观察试蜱的感染能力以及以莱姆病螺旋体的保持能力。结果　通过剌叮阳性KM鼠 ,长角血蜱、嗜群血蜱幼蜱饱血后分别获得 6 1 3%、75 0 %的阳性感染 ,但所感染的螺旋体在感染后 2d即死亡消解 ,不能重新获得分离 ,PCR扩增阳性也只能持续到饱血后 8d ,幼蜱蜕化为若蜱后 ,所有检测结果均为阴性 ;这两种蜱的若蜱也都可通过吸血获得 70 0 %的检测阳性率 ,感染后长角血蜱、嗜群血蜱可分别在在饱血后 5、10d内保持螺旋体的活性 ,PCR检测阳性率可延迟至饱血后 15d。此后直至蜕化成为成蜱 ,所有血、蜱检测结果均呈阴性 ;长角血蜱、嗜群血蜱的不同种群在感染和保持螺旋体能力上表现一致。结论　长角血蜱、嗜群血蜱的幼蜱和若蜱虽可以感染莱姆病螺旋体但不能经期传播到下一发育阶段 ,不具备经期传播能力 ,作为莱姆病主要媒介的可能性不大。     

草原革蜱中肠抗原诱导宿主产生的抗长角血蜱的交叉免疫

用同种抗原诱导动物宿主产生的免疫反应防治同一种蜱已有研究，媒介硬蜱间的交叉免疫抵抗报道不多，研究内容仅限于对吸血量的影响，为了探讨异种媒介硬蜱间的交叉免疫现象，作者等进行了草原革蜱(D．Nuttalli)中肠抗原诱导的免疫反应对长角血蜱(H．longicornis)的交叉免疫抵抗研究。     

巴尔通体在云南省的调查研究

巴尔通体(Bartonella)是一新发现的古老病原体,但直到20世纪90年代才对其致病作用开始认识.巴尔通体的研究在国际虽属一新兴学科,但当代高新科学技术的发展使得对其研究进展很快.     

湖北省长角血蜱携带嗜吞噬细胞无形体的调查

目的调查湖北省长角血蜱是否携带嗜吞噬细胞无形体。方法运用聚合酶链反应方法对湖北随州地区采集的蜱标本进行嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因片段进行扩增和序列分析,将扩增序列与GenBank注册的基因序列进行比较。结果共检测游离蜱72只,蜱种鉴定均为长角血蜱,嗜吞噬细胞无形体最小感染率为4.22%;所检出的嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因与我国已在GenBank注册的24个相对应序列同源性100%。结论湖北省长角血蜱携带嗜吞噬细胞无形体。     

小五台山地区长角血蜱若虫日间寻求节律

目的 旨在了解长角血蜱若虫日间寻求活动节律及其变化原因,为研究者规划合理采样时间,从而准确评估蜱传疾病风险提供理论依据。方法 在河北省小五台山地区选取半封闭山路设置3处样带,于长角血蜱种群数量高峰期内,连续5 d从6∶00-19∶00,每隔1 h采用拖旗法对处于寻求状态若虫进行有放回抽样调查,同时记录气温,相对温度和露点温度。结果 不同样带间蜱采样数量差异显著(F=66.50,P<0.01),离居住地越近蜱数量越多;各样带间长角血蜱若虫均表现出相同寻求活动节律,受气温和露点温度影响,6∶00-8∶00若虫数量下降,8∶00-12∶00有一起伏,随后逐渐上升至16∶00趋于稳定并于19∶00达到最大,16∶00-19∶00为日间长角血蜱若虫采集数量最高时段,占总采集数量的48.4%。结论 宿主活动强度对蜱数量分布有较大影响;蜱寻求节律与空气中水汽含量有关,清晨水汽含量过大植被凝集露水,中午水汽含量过小,空气干燥,都可降低蜱寻求活动,导致不同时间下采样可造成蜱种群密度估计和蜱传疾病风险评估误差,16∶00-19∶00环境条件适宜,蜱寻求活动强烈,是最接近蜱种群密度的采样时间,建议在制定林间蜱种群密度调查方案时,应统一采样时间以便数据具有可比性。     

北京市鼠形动物感染巴尔通体的调查

目的 调查北京市鼠形动物巴尔通体感染状况和遗传特征。方法 采用夹夜法在北京市16个区捕获鼠形动物,使用PCR方法检测巴尔通体gltA基因,测序后进行系统发育树分析。结果 共采集7属9种鼠形动物样本448份,检测到巴尔通体阳性样本46份,总阳性率为10.3%,且阳性率在鼠种间、地区间和生境间的差异均具有统计学意义(X²_鼠种=114.980,X²_地区=22.133,X²_生境=96.466,P均<0.001)。系统发育树分析显示,40份样本序列位于进化树上的8个不同分支,提示北京市鼠形动物巴尔通体感染存在遗传多样性。结论 巴尔通体在北京市鼠形动物中广泛存在,并具有遗传多样性,本地人群存在一定的感染风险。     

Protective immunity and mast cell and eosinophil responses in mice infested with larval Haemaphysalis longicornis ticks

WBB6F1 -+- /+ mice were infested with larval Haemaphysalis longicornis ticks twice at an interval of 14 days: apparent resistance against ticks was expressed in the second infestation. The first infestation induced degranula-tion of a small number of mast cells at the feeding sites within 6 days, and resulted in two-fold increases of mast cell numbers on day 14 with a significant elevation of total immunoglobulin E (IgE) levels in sera and high proportion of IgE-bound mast cells. The second infestation resulted in the intensive degranulation of the increased mast cells at the feeding sites. Eosinophils infiltrated into the feeding sites of ticks: the second infestation led to a greater maximal level of the infiltrating eosinophils. These data suggest that the resistance against larval H. longicornis ticks in mice may be expressed as a result of immediate hypersensitivity and many eosinophils infiltrating from the blood to the feeding sites might contribute to the tick rejection.     

Failure to detect Bartonella henselae infection in synovial fluid from sufferers of chronic arthritis

Bartonella henselae causes granulomatous and indolent infection in the immune competent human, and angioproliferation in the context of persistent infection and impaired immunity. This bacterium is found in up to 40% of household cats, from which humans acquire it by either a cat scratch or a bite (hence the name, cat-scratch disease). Approximately 5% of Australian and US blood donors have serological evidence of past infection, but most associated illnesses are mild or subclinical. A number of lines of evidence prompted us to consider a relationship between rheumatoid arthritis (RA) and Bartonella infection. These include epidemiological associations with household pet exposure; apparent responsiveness of some RA cases to tetracycline therapy; the granulomatous and angioproliferative nature of Bartonella lesions; the insidiousness and high seroprevalence of this infection in the community; and even reported Bartonella infection mimicking juvenile RA. In a small group of patients with chronic arthritides, we found no direct evidence of humoral antibodies to, nor of persistent infection with, Bartonella henselae in synovial fluid. While larger and more invasive studies are likely to provide more confident exclusions of this hypothesis, this suggests that persistent Bartonella infection is unlikely to play a major role in RA. Received: 19 March 2000 / Accepted: 16 June 2000     

不同气候模式下我国长角血蜱潜在适生区预测

［摘要］　目的　分析环境和气候因子对我国长角血蜱适生区分布的影响,并预测不同气候模式下长角血蜱的潜在分布区。方法　从文献中获取我国长角血蜱分布点信息,结合环境和气候因子数据,运用MaxEnt最大熵模型,分析年均温、昼夜温差日均值、等温性、温度季节性变化标准差、最暖月最高温、最冷月最低温、年均温变化范围、最湿季度平均温度、最干季度平均温度、最暖季度平均温度、最冷季度平均温度、年均降水量、最湿月降水量、最干月降水量、降水量变异系数、最湿季度降水量、最干季度降水量、最暖季度降水量、最冷季度降水量等19个气候因子及海拔、坡度、坡向、植被覆盖率等4个环境因子对长角血蜱潜在分布的影响,并预测当前和未来不同气候模式下（RCP 2.6和RCP 8.5）长角血蜱潜在地理分布区。结果　在影响我国长角血蜱地理分布的环境和气候因子中,贡献率均超过10%的因子主要包括最干月降水量（26.0%）、年均温（11.2%）、年均降水量（10.0%）和海拔（24.2%）。当前气候模式下,我国长角血蜱高、中、低适生区面积分别为123.19万、169.62万、185.44万km2。在RCP 2.6气候模式下,2050和2070年我国长角血蜱分布区面积分别增加33.61万km2和36.73万km2;在RCP 8.5气候模式下,2050年和2070年我国长角血蜱分布区面积分别增加38.10万km2 和35.80万km2。结论　降水、温度和海拔等气候和环境因子对我国长角血蜱分布区影响较大;在未来不同气候模式下,我国长角血蜱适生区面积均可能增加。     

育青粉对高脂血症患者血清LPO浓度及红细胞内SOD活性的影响

本文对35名中老年高脂血症患者食用降脂食品育青粉前、后血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、过氧化脂质(LPO)浓度及红细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性进行了测定。结果表明食用育青粉可明显降低血清TC、TG及LPO浓度,提高SOD活性。根据衰老的自由基学说和上述实验结果,我们推论,育青粉对机体物质代谢起某种调节作用。     

病毒性肝炎患者血浆LPO,VitE及红细胞SOD水平与肝功能的关系

检测45例病毒性肝炎患者血浆LPO,VitE及红细胞SOD水平,发现急性肝炎组、慢活肝组、重症肝炎组及肝硬化组血浆LPO值分别为5.52±2.6、9.67±5.11、18.22±6.81和7.51±5.051mmol/L.均明显高于正常对照组2.77±0.67(P<0.05),重症肝炎组升高最明显。血浆VitE值分别为9.22±3.83、7.81±2.67、6.56±2.64和6.99±2.67μmol/L,均明显低于正常对照组13.95±4.80(P<0.001),重症肝炎组下降最明显。4种肝病红细胞SOD水平与正常对照组比较无明显改变(P>0.05)。LPO增多、VitE减少与肝功能损伤程度一致。     

Coinfection with four genera of bacteria (Borrelia, Bartonella, Anaplasma, and Ehrlichia) in Haemaphysalis longicornis and Ixodes sinensis ticks from China

We studied coinfection with four genera of bacteria--Borrelia, Bartonella, Anaplasma, and Ehrlichia--in ticks collected between December 2005 and November 2006 from Zhejiang Province and Liaoning Province. Four hundred fifty Haemaphysalis longicornis and 86 Ixodes sinensis ticks were collected and divided into 236 groups. Polymerase chain reaction (PCR) or nested PCR was used to detect the bacteria. The amplicons were sequenced and compared to published sequences. Phylogenic analysis was performed with MEGA3.1 and the data were analyzed using SPSS 11.0. Borrelia, Bartonella, Anaplasma, and Ehrlichia positive rates were 30.1% (71/236), 28.8% (68/236), 1.3% (3/236), and 0.8% (2/236), respectively. One tick was coinfected with all four bacteria (Borrelia, Bartonella, Anaplasma, and Ehrlichia) and another group was coinfected with three bacteria, Borrelia, Bartonella, and Ehrlichia. Statistical analysis showed most coinfections were significant, indicating that once a tick was infected with one bacteria, there was a greater chance to be infected with another bacteria.     

高血压病患者血管内皮依赖性舒张功能与血清一氧化氮和超氧化物歧化酶的关系

为探讨高血压病患者血管内皮依赖性舒张功能和血清一氧化氮和超氧化物歧化酶的变化及其相互关系 ,采用高分辨率超声技术 ,对 2 8例高血压病患者和 2 8例正常对照者的血管内皮依赖性和非依赖性舒张功能进行检测 ,同时测定血清一氧化氮和超氧化物歧化酶水平。结果发现高血压病患者反应性充血肱动脉内径舒张率显著低于对照组 (6 .33%± 2 .5 9%比 13.14 %± 4 .2 4 % ,P <0 .0 0 1) ,而含服硝酸甘油后肱动脉内径舒张率在两组间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。与正常对照组相比 ,高血压病组血清一氧化氮和超氧化物歧化酶水平明显下降 (5 3.5 5± 2 3.5μmol/L比 83.2 6± 2 3.2 5 μmol/L ,86 .5 7± 2 6 .6 6kNU/L比 117.1± 33.6 4kNU/L ,P <0 .0 0 1)。单因素相关分析显示血管内皮依赖性舒张功能与年龄、收缩压、舒张压呈负相关 ,相关系数r分别为$C 0 .36 6 (P <0 .0 1)、$C0 .6 5 (P <0 .0 0 1)、$C 0 .6 72 (P <0 .0 0 1) ,与血清NO和SOD呈正相关 ,相关系数r分别为 0 .838(P <0 .0 0 1)、0 .6 83(P <0 .0 0 1) ,而多元逐步回归分析仅显示血管内皮依赖性舒张功能与舒张压呈负相关 ,与血清一氧化氮和超氧化物歧化酶呈正相关。提示高血压病患者存在血管内皮依赖性舒张功能障碍 ,并与血管内皮合成释放一氧化氮     

刺玫果对果蝇寿命及大鼠LPO和SOD的影响

本文观察了刺玫果对果蝇寿命、大鼠血清脂质过氧化物(LPO)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。结果表明,刺玫果能显著延长果蝇的平均寿命和最高寿命,降低大鼠血清LPO含量;但对血SOD活性无明显作用。初步提示刺玫果有一定的抗衰老作用。