巯甲丙脯酸和倍他乐克对高血压大鼠左心室MHC基因表达的影响

目的和方法：采用核酸斑点杂交技术,测定双肾双夹（２Ｋ２Ｃ）肾性高血压大鼠早期左心室肌球蛋白重链（ＭＨＣ）基因表达的变化,及血管紧张素转换酶抑制剂巯甲丙脯酸和β－受体阻断剂倍他乐克和对该变化的影响。结果：２Ｋ２Ｃ组大鼠术后２４ｈ,左心室α－ＭＨＣｍＲＮＡ水平即有所降低,７２ｈ时明显降低,为对照组的０．４８倍;与此相反,２Ｋ２Ｃ组β－ＭＨＣｍＲＮＡ水平,在术后２４ｈ已略有升高,７２ｈ时明显增加,为对照     

肾性高血压大鼠左心室肌球蛋白重链同型基因的表达

目的和方法：用二肾一夹（２Ｋ１Ｃ）肾性高血压大鼠模型，利用分子生物学实验方法，探讨心肌肥厚发生和逆转以及肌球蛋白重链（ＭＨＣ）基因表达的改变。结果：（１）２Ｋ１Ｃ肾性高血压大鼠术后第２～１２周，动脉血压持续升高；左心室重量和体重比值明显升高；左心室α－ＭＨＣｍＲＮＡ表达明显减弱；β－ＭＨＣｍＲＮＡ表达明显增强。（２）在术后第４周给予巯甲丙脯酸和术后第８周切除肾动脉狭窄侧肾脏可使２Ｋ１Ｃ肾性高血压大鼠动脉血压下降；左心室肥厚发生逆转；抑制左心室α－ＭＨＣｍＲＮＡ表达减弱和β－ＭＨＣｍＲＮＡ表达增强。结论：在２Ｋ１Ｃ肾性高血压过程中，动脉血压升高是左心室肥厚、左心室肌球蛋白ＭＨＣ基因表型转换的重要因素；血管紧张素Ⅱ可能参与２Ｋ１Ｃ肾性高血压过程中的心肌肥厚和ＭＨＣ同型基因表型的转换     

肾性高血压血管重构中血红素加氧酶的作用

目的：研究血红素加氧酶（HO）在肾性高血压所致的血管重构中的作用。方法：采用两肾一夹（2K1C）肾性高血压大鼠模型，测定术后4周主动脉中膜的厚度、主动脉组织HO活性及HO-1蛋白表达水平。结果：① 2K1C肾性高血压大鼠术后2周开始出现高血压，在术后4周血压稳定升高；Hemin组术后4周未见血压升高。②术后4周2K1C组大鼠可见主动脉中膜的厚度较假手术组高27.5％（P<0.01）； Hemin组主动脉中膜的厚度较2K1C组低16.1％（P<0.01）。③术后4周2K1C组主动脉组织HO-1蛋白表达量明显高于假手术组（P<0.01）；HO酶活性高于假手术组（P<0.05）。结论：肾性高血压导致血管重构的过程中HO系统激活。诱导HO可以降低肾性高血压大鼠的血压，抑制主动脉中膜平滑肌层的增厚。     

一氧化氮对肾性高血压大鼠主动脉收缩功能的影响

目的:探讨二肾一夹（2K1C）肾性高血压大鼠主动脉收缩功能的改变及其与一氧化氮的关系。 方法:实验分为假手术组、2K1C组、卡托普利组、NAME组和精氨酸组等5组，利用术后4周的肾性高血压大鼠的胸主动脉进行离体血管环实验，并测定主动脉环一磷酸鸟苷（cGMP）的含量。 结果:2K1C肾性高血压大鼠离体主动脉环对苯肾上腺素、血管紧张素Ⅱ、ACh、KCl的收缩反应显著高于假手术组，主动脉cGMP含量明显少于假手术组。卡托普利可逆转2K1C大鼠的上述改变。L-精氨酸可使上述异常的主动脉收缩功能部分恢复，并增加主动脉cGMP含量。一氧化氮合酶抑制剂L-NAME使主动脉cGMP含量进一步减少，主动脉对缩血管物质的收缩反应无进一步增强。各组大鼠的胸主动脉用L-NAME抑制一氧化氮生成后，对硝普钠的最大舒张反应无明显差别。 结论:2K1C肾性高血压大鼠主动脉收缩功能的改变可能与NO合成、释放减少和缩血管物质产生增多有关。     

血管紧张素转换酶2在自发性高血压大鼠肾脏表达与血压的关系研究

目的： 研究血管紧张素转换酶2(ACE2)在20周龄自发性高血压大鼠(SHR)和Wistar Kyoto大鼠(WKY)肾脏组织的表达以及与血压的关系。 方法： 采用实时定量PCR方法检测肾脏组织中ACE2 mRNA的含量，应用放免法测定肾脏组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的浓度。 结果： 20周龄SHR的血压明显高于WKY（P<0.05）,SHR肾脏组织ACE2的表达显著低于WKY（P<0.01），而SHR肾脏组织AngⅡ的浓度显著高于WKY（P<0.05）。 结论： ACE2在肾素-血管紧张素系统(RAS)中可能通过改变SHR肾脏中AngⅡ水平调节血压。     

血管紧张素-(1-7)对肾性高血压大鼠肾组织纤维化的影响

目的 :观察血管紧张素 ( 1 7) [Ang ( 1 7) ]对实验性肾性高血压大鼠肾组织纤维化的影响。方法 :采用微渗泵植入技术 ,建立Ang ( 1 7)对二肾一夹 ( 2K1C)高血压大鼠干预模型 ,在光镜下观察肾脏纤维化 ,免疫组化法检测肾组织转化生长因子β1 (TGF β1 ) ,RT PCR检测肾组织内TGF β1 、TGF β1 受体ImRNA水平。结果 :Ang ( 1 7)能减轻2K1C高血压大鼠肾纤维化 ,减少 2K1C高血压大鼠肾组织TGF β1 的蛋白表达 ,降低肾组织内TGF β1 、TGF β1 受体ImRNA水平。结论 :Ang ( 1 7)对 2K1C高血压大鼠肾纤维化作用机制之一是通过减少肾组织内TGF β1 及其受体的表达而实现     

半边莲生物碱缓解肾性高血压大鼠的血管重塑

目的： 探讨半边莲生物碱对肾性高血压大鼠主动脉血管重塑的影响。方法: 制备两肾一夹（2K1C）肾性高血压大鼠模型，灌服半边莲生物碱或卡托普利8周，用放射免疫技术测定血浆肾素活性（plasma rennin activity, PRA）。用Weigert法染色并测量腹主动脉中膜厚度及中膜截面积等血管重塑形态学参数。分别用Masson 三色法和免疫组化方法测腹主动脉总胶原蛋白含量和Ⅰ型胶原蛋白含量。结果: 高血压大鼠与假手术组相比PRA明显升高(P<0.05),使用半边莲生物碱后PRA显著降低(P<0.05);卡托普利对PRA无明显影响。高血压大鼠中膜厚度、中膜厚度/ 血管内径、中膜面积和腹主动脉胶原含量与假手术组相比明显升高(P<0.05)；半边莲和卡托普利均可使高血压组大鼠上述指标显著降低(P<0.05)。 结论: 肾性高血压大鼠存在血管重塑现象,半边莲生物碱能抑制胶原的表达、降低肾素活性,对缓解血管重塑有一定作用。     

血管生成因子在糖尿病大鼠心肌组织的表达

 目的：检测糖尿病大鼠心肌组织中血管生成因子的表达。方法：选择雄性SD大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素制造1型糖尿病模型,糖尿病成功诱导后12周,运用MPA心功能分析系统评估心功能改变,Masson染色计算心肌胶原容积分数（collagen volume fraction,CVF）,CD31免疫组织化学法测定心肌毛细血管并计算心肌毛细血管/心肌细胞比值（capillary/myocyte,C/M）,Western blotting检测血管内皮生成因子（VEGF）、血管生成素1（angiopoietin-1,Ang-1）、血管生成素2（angiopoietin-2,Ang-2）和内皮抑素(endostatin) 在心肌组织中的表达。结果：与正常对照组比较,糖尿病大鼠左心室舒张末期压力(LVEDP)明显增高(P<001),而左心室压力上升最大速率(+dp／dtmax)和左心室压力下降最大速率(-dp／dtmax)均明显下降（P<0.05）;心肌C/M比值、 VEGF和Ang-1表达明显减少（P<0.05）;而心肌CVF含量和endostatin表达显著增高（P<0.05）,但Ang-2表达无明显差异。结论：VEGF和Ang-1在糖尿病大鼠心肌组织表达下调,endostatin表达显著上调,可能是糖尿病心肌病发生的重要机制。     

地塞米松抑制肾素-血管紧张素系统减轻大鼠急性肺损伤

目的：观察肾素-血管紧张素系统（RAS）在大鼠急性肺损伤中的作用及地塞米松（DEX）的影响。方法: 在大鼠失血性休克的基础上,腹腔注射内毒素（二次打击）造成急性肺损伤模型,直接插管法检测大鼠平均动脉血压（MAP）;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)观察各组大鼠肺脏组织中血管紧张素转换酶（ACE）、血管紧张素原（AGT）、血管紧张素II 1型受体（AT1）和血管紧张素II 2型受体（AT2）mRNA的表达及测定大鼠血清血管紧张素I (AngⅠ)、血管紧张素II（AngⅡ）的变化。结果: 二次打击组（HL）大鼠平均动脉血压恢复很慢,而地塞米松治疗组（HLD）平均动脉血压恢复的速度较HL明显增快,且平均动脉血压水平的升高具有明显差异。与对照组（C）相比,HL组ACE、AGT mRNA表达水平明显增高,而HLD组明显低于HL组。AT1、AT2 mRNA各组表达水平则无明显差异。与C组相比,HL组AngⅡ的含量明显升高,HLD组大鼠血清AngⅡ的含量比HL组均明显减低,Ang I含量的变化不明显。结论: 失血性休克后LPS诱发的急性肺损伤可能与激活肺脏的肾素－血管紧张素系统有关,抑制肺脏的肾素－血管紧张素系统的激活是DEX轻这种急性肺损伤的机制之一。     

Mas基因沉默对血管紧张素-(1-7)拮抗血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠肾间质成纤维细胞活化的影响

 目的： 探讨Mas基因沉默后对血管紧张素-(1-7) ［Ang-(1-7)］拮抗血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠肾间质成纤维细胞活化的影响。方法：（1）有效Mas siRNA的筛选：设计合成3对不同序列针对Mas基因的siRNA,瞬时转染大鼠肾间质成纤维细胞（NRK-49F）,实验分5组：Mas siRNA序列1、Mas siRNA序列2、Mas siRNA序列3、阴性siRNA序列及正常对照组。转染后48 h,分别用半定量RT-PCR及Western blotting检测Mas mRNA和蛋白的表达水平。（2）研究有效Mas siRNA对Ang-(1-7)拮抗AngⅡ的影响：实验分6组：正常对照组、AngⅡ组、Ang-(1-7)组、AngⅡ+Ang-(1-7)组、阴性siRNA对照组和Mas siRNA转染组。分别培养72 h后,细胞免疫化学法检测细胞活化标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,ELISA法检测上清液中细胞外基质成分Ⅰ型胶原（ColⅠ）的含量。结果：（1）与组相比,Mas siRNA各组Mas基因的表达均下降,其中以Mas siRNA序列2最明显（P<0.05）。 （2）有效Mas siRNA转染组在加AngⅡ+Ang-(1-7)干预72 h后,较非转染组和阴性siRNA转染组α-SMA及ColⅠ表达均增加,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：Mas siRNA能有效抑制Mas的表达,使Ang-(1-7)拮抗AngⅡ诱导的大鼠肾间质成纤维细胞活化作用明显减弱。     

甲状腺素对Ang Ⅱ所致心肌细胞肌球蛋白重链基因表达改变的影响及其机制

目的:观察甲状腺素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)所致心肌细胞中DNA和蛋白质合成速率及肌球蛋白重链(MHC)基因表达改变的影响,并探讨其可能机制。方法:以AngⅡ及三碘甲状腺素原氨酸(triiodothyronine,T₃)分别或同时作用于培养的细胞。通过测定[³H]-TdR和[³H]-Leu掺入来了解细胞中DNA及蛋白质的合速成率;用RT-PCR的方法检测细胞中α和β-MHCmRNA的表达;PepTag非放射性的PKC活性检测试剂盒对细胞中PKC活性进行检测。结果:AngⅡ处理使心肌细胞中[³H]-Leu掺入增加,[³H]-TdR的掺入率保持不变;α-MHCmRNA的表达显著低于正常,而β-MHCmRNA的含量明显高于正常;同时细胞中PKC活性亦显著高于正常。当T3与AngⅡ组共同作用于培养的心肌细胞时,与AngⅡ组相比,[³H]-Leu的掺入增加并没有发生改变,但是,心肌细胞中α-MHCmRNA的表达明显增高,而β-MHCmRNA的含量却显著降低;同时细胞中PKC的活性也显著降低。结论:T3能抑制AngⅡ所致的心肌细胞中肌球蛋白基因的转换,其机制可能与T₃对细胞中PKC活性的影响有关。     

有氧运动抑制心梗后心力衰竭大鼠左室重塑及交感神经重塑

目的:探讨长期有氧运动对心梗后心力衰竭(心衰)大鼠模型左心室及交感神经重塑(结构重塑与功能重塑)的影响,为心衰的机制研究及康复治疗提供科学依据和有效方法。方法:健康雄性Wistar大鼠通过结扎冠状动脉前降支建立心梗后心衰模型,术后4周随机分为假手术安静组(S组)、心衰安静组(H组)和心衰运动组(HE组)。HE组进行10周跑台训练,S组和H组保持安静状态。超声心动术检测心脏结构与功能,即左室舒张期内径(LVIDd)、左室收缩期内径(LVIDs)、左室舒张期前壁厚度(LVAWDd)、左室收缩期前壁厚度(LVAWDs)、左室舒张期后壁厚度(LVPWDd)、左室收缩期后壁厚度(LVPWDs)、缩短分数(FS)和左室射血分数(LVEF);Masson染色进行心脏组织病理学观察并获得心肌胶原容积分数(CVF);高压液相色谱法检测心肌和血浆去甲肾上腺素(NE)水平;经皮下引导电极连续采集心电信号,对自主神经功能参数——心率变异性(HRV)进行频域分析,包括总功率谱(TP)、归一化低频功率谱(LFn)、归一化高频功率谱(HFn)和LF/HF比值;实时荧光定量PCR检测心肌I型胶原(Col-I)、III型胶原(Col-III)、心房钠尿因子(ANF)、α-肌球蛋白重链(α-MHC)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)和肌质网Ca2+-ATP酶(SERCA2a)mRNA表达,Western blotting法检测心肌神经生长因子(NGF)及其受体(Trk A)和酪氨酸羟化酶(TH)蛋白表达。结果:(1)与S组比较,H组体重(BW)、LVIDd、FS、LVEF、TP、HFn、α-MHC和SERCA2a的mRNA,NGF、Trk A和TH的蛋白表达降低(P0.05);左室重量(LVW)、左室质量指数(LVMI)、LVAWDd、LVAWDs、LVPWDd、LVPWDs、CVF、血浆和心肌NE含量、LFn、LF/HF、ANF、β-MHC、Col-I和Col-III的mRNA表达升高(P0.05)。(2)与H组比较,HE组LVW、LVMI、LVIDd、FS、LVEF、TP、HFn、α-MHC和SERCA2a的mRNA,NGF、Trk A和TH的蛋白表达升高(P0.05);CVF、血浆和心肌NE含量、LFn、LF/HF、ANF、β-MHC、Col-I和Col-III的mRNA表达降低(P0.05)。结论:长期有氧运动可抑制心梗后心衰大鼠左室重塑与交感神经重塑,心功能和自主调节改善。     

益母草碱对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌纤维化和miR-1表达的影响

目的:探讨益母草碱对异丙肾上腺素(ISO)诱导大鼠心肌纤维化和微小RNA-1(miR-1)表达的影响。方法:取10只SD大鼠作正常对照组;取另80只SD大鼠作为实验鼠,连续2周腹腔注射ISO诱导心肌纤维化动物模型。造模成功后将实验鼠随机分为5组:模型组,益母草碱低(7.5 mg·kg~(-1)·d~(-1))、中(15 mg·kg~(-1)·d~(-1))和高(30 mg·kg~(-1)·d~(-1))剂量组,p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂(0.3 mg·kg~(-1)·d~(-1))组。连续给予相应药物腹腔注射2周后,以透射电镜观察左心室肌组织超微结构;Masson染色观察心肌纤维化程度;免疫组织化学法观察I型胶原和III型胶原的表达;酶联免疫吸附法检测左心室肌组织内皮素1(ET-1)和血管紧张素II(Ang II)含量;real-time PCR法检测左心室肌miR-1和ET-1 mRNA的表达水平;Western blot法检测p38 MAPK、β-肌球蛋白重链(β-MHC)及α-肌球蛋白重链(α-MHC)蛋白表达水平。结果:与模型组比较,高剂量益母草碱能明显改善左心室肌超微结构,降低心肌胶原容积分数(CVF)及I型胶原和III型胶原蛋白表达(P0.05),减少左心室肌ET-1和Ang II含量(P0.05),上调miR-1和α-MHC的蛋白表达水平(P0.05),下调ET-1 mRNA及p38MAPK和β-MHC蛋白表达水平(P0.05)。结论:益母草碱可抑制ISO诱导的大鼠心肌纤维化,其机制可能与影响miR-1的表达,抑制ET-1/p38 MAPK信号通路有关。     

神经调节蛋白1β与卡托普利对慢性心衰大鼠心肌纤维化及转化生长因子β1的影响

目的:探讨神经调节蛋白1β(neuregulin-1β,NRG-1β)与卡托普利联合应用对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化及转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达的影响。方法:将青年雄性SpragueDawley大鼠随机分为假手术组、心衰组、NRG组、卡托普利组和联合用药组,采用腹主动脉-下腔静脉穿刺造瘘法制备心衰模型。通过超声心动图评价大鼠心功能;Masson染色检测心肌纤维化程度,并计算胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF);放射免疫法检测血浆中血管紧张素II(Ang II)的浓度;Western blot检测各组大鼠左心室心肌组织中TGF-β1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平;透射电镜观察左室心肌的超微结构。结果:与心衰组比较,NRG组、卡托普利组及联合用药组左心室舒张末直径和心肌纤维化程度明显降低,射血分数明显升高(P0.05);TGF-β1和α-SMA蛋白表达明显降低(P0.05);电镜下显示,NRG组、卡托普利组及联合用药组心肌纤维化程度较心衰组明显减轻,而与NRG组和卡托普利组相比,联合用药组效果更加显著(P0.05)。结论:神经调节蛋白1β与卡托普利单用及联合应用均可有效改善心功能、抑制心肌纤维化,且联合用药的疗效优于单独用药。     

孕期饮酒介导的组蛋白低甲基化对子代心脏发育基因过表达的影响

目的:探讨组蛋白甲基化修饰失衡在孕期酒精暴露致子代心脏发育相关基因表达异常中的作用及其机制。方法:选取健康昆明小鼠,于孕期0.5 d开始给予56%乙醇(5 mL/kg)灌胃,同时给予G9a-组蛋白甲基转移酶(histone methyltransferase, HMT)抑制剂BRD4770(1 mg/kg)灌胃,于胚胎14.5 d、胚胎16.5 d和新生0.5 d收集子代小鼠心脏。RT-qPCR检测心脏发育相关基因Gata4、Cx43和β-MHC的mRNA表达水平,比色法检测HMT活性,Western blot检测小鼠心肌组织组蛋白H3K9me3、G9a-HMT、Cx43及β-MHC的表达水平。结果:比色法结果表明,孕期酒精暴露的子代小鼠心肌组织中HMT活性与生理盐水对照组相比显著降低(P0.05);Western blot结果表明酒精组小鼠心肌组织中G9a-HMT及组蛋白H3K9me3表达水平与生理盐水对照组相比显著降低(P0.05);RT-qPCR结果显示Gata4、Cx43和β-MHC的mRNA表达水平在酒精组显著升高(P0.05),且Western blot结果也表明酒精组Cx43和β-MHC蛋白水平显著高于生理盐水对照组(P0.05)。同时,G9a-HMT特异性抑制剂BRD4770能够进一步降低小鼠心肌组织中组蛋白H3K9me3甲基化水平(P0.05),且Gata4 mRNA表达水平及Cx43和β-MHC的转录和翻译水平在抑制剂干预组较酒精组显著升高(P0.05)。结论:G9a-HMT介导的组蛋白甲基化修饰失衡可能参与了孕期酒精暴露所致的子代心脏发育相关基因表达异常。     

葛根素注射液对糖尿病KKAy小鼠肾小管上皮细胞的影响

 目的：观察葛根素治疗糖尿病小鼠肾间质纤维化（renal interstitial fibrosis,RIF）过程中肾小管上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白表达的变化,为临床药物治疗糖尿病RIF提供实验依据。方法：将16只2型糖尿病模型KKAy小鼠随机分为模型组（n=8）和葛根素注射液治疗组（n=8）。8只C57BL/6J小鼠作为正常组。用药组小鼠14周龄开始以腹腔注射的方式给药,观测小鼠日常状态及血糖变化,于24周龄处死小鼠,取肾脏分别观察肾组织病理形态学变化,免疫组织化学法检测小鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin, α-SMA)、转化生长因子β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）和转化生长因子β I型受体（TGF-β-RI）蛋白的表达。结果：形态学观察可见模型组发生明显的纤维化改变,而经葛根素注射液治疗后,小鼠肾间质基质轻度增多,病变较轻微。治疗组KKAy小鼠肾组织中较模型组小鼠肾组织中α-SMA、TGF-β1和TGF-β-RI蛋白的表达减少。结论：葛根素注射液可在一定程度上减少α-SMA的表达,抑制KKAy小鼠肾脏组织中TGF-β1和TGF-β-RI蛋白表达,阻断并逆转EMT的过程,延缓肾间质纤维化的发生和发展。     

CXCR4在溃疡性结肠炎小鼠蛋白C系统变化中的作用

目的:蛋白C系统(PCS)是血管内皮功能重要的介导者,而微血管内皮细胞是参与溃疡性结肠炎(UC)最重要的非免疫细胞,本研究旨在探讨趋化因子受体CXCR4在UC病理过程中PCS变化的作用。方法:动物实验分为对照组和UC模型组,进行大体积分、组织病理学积分及溃疡指数评估;测定各组结肠组织和血浆中髓过氧化物酶(MPO)、环氧合酶-2(COX-2)、基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的mRNA水平及活性;检测各组结肠CXCR4、β-arrestin、p-JNK、内皮细胞蛋白C受体(EPCR)和血栓调节蛋白(TM)的水平及分布;观察蛋白C(PC)和蛋白S(PS)的活性。分离、培养、鉴定结肠微血管内皮细胞,分为对照组、SDF-1α组、CXCR4沉默组和CXCR4过表达组,观察各组细胞EPCR、TM、β-arrestin和p-JNK的蛋白水平,以及PC、PS和激活的蛋白C(APC)活性。结果:与对照组比,模型组小鼠大体积分、组织病理学积分及溃疡指数升高(P0.05)。结肠组织和血浆MPO、COX-2、SDF-1α和MCP-1 mRNA水平和活性显著升高(P0.01)。结肠组织CXCR4、β-arrestin和p-JNK的蛋白水平上调,EPCR表达下调,血浆PC和PS活性明显降低(P0.05或P0.01)。CXCR4过表达进一步加重SDF-1α对结肠黏膜微血管内皮细胞PCS的抑制,同时进一步升高β-arrestin和p-JNK的蛋白水平(P0.05)。结论:UC时PCS被抑制,CXCR4参与其中,其可能的机制是CXCR4在UC病理过程中介导趋化因子通过β-arrestin-JNK信号通路进一步影响血管内皮细胞功能,从而抑制PCS。     

AT_1R-CaN信号通路在乳鼠肥大心室肌细胞Nav1.5蛋白表达调控中的作用

目的:探讨血管紧张素Ⅱ1型受体(AT_1R)调神经磷酸酶(CaN)信号通路在乳鼠肥大心室肌细胞Nav1.5 mRNA和蛋白表达调控中的作用。方法:分离1日龄SD乳大鼠心室获心室肌细胞,分为对照(control)组、苯肾上腺素(PE)组、氯沙坦(Los)+PE组和环孢素A(CsA)+PE组;重组腺病毒shRNA干扰载体介导CaN A亚基β亚型(CnAβ)基因沉默分为腺病毒空载体(Ad-Null)组、Ad-Null+PE组、重组腺病毒CnAβshRNA1(AdCnAβshRNA1)组和Ad-CnAβshRNA1+PE组。实时荧光定量逆转录PCR检测脑钠尿肽(BNP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)和Nav1.5的mRNA表达。Western blot法检测全细胞提取蛋白CnAβ和Nav1.5的表达。结果:PE干预24 h明显增加心室肌细胞蛋白/DNA比值、细胞BNP和β-MHC的mRNA表达以及细胞面积;上调CnAβ蛋白表达,下调Nav1.5蛋白表达。CsA和Los干预明显抑制PE干预的上述效应。PE下调Nav1.5的mRNA表达,但Los和CsA不能抑制此种效应。Ad-CnAβshRNA1沉默乳鼠心室肌细胞CnAβ基因抑制了PE对BNP mRNA的上调作用,抑制了PE对Nav1.5蛋白表达的下调作用。结论:AT_1R-CaN信号通路参与调控培养的乳鼠肥大心室肌细胞Nav1.5蛋白表达的调控。     

高糖激活Ca~(2+)-CaN-NFAT3信号通路致H9c2细胞肥大

目的:利用细胞实验探讨不同高糖浓度培养H9c2细胞是否引起心肌细胞肥大,探讨Ca2+-Ca NNFAT3信号通路是否参与高糖引起H9c2心肌细胞肥厚过程。方法:体外培养H9c2大鼠心肌细胞48 h,分为5mmol/L糖对照组、25mmol/L糖培养组、50 mmol/L糖培养组、25mmol/L糖培养加L型钙通道阻滞剂苯磺酸氨氯地平[商品名络活喜(Norvasc)]组和50 mmol/L糖培养加Norvasc组5组。观察H9c2细胞形态并测量细胞表面积大小;荧光分光光度法检测心肌细胞内钙离子浓度[Ca2+]i;ELISA测细胞内Ca N浓度;real-time PCR法及Western blot检测Ca NAβ、NFAT3和β-MHC的mRNA及蛋白表达。结果:细胞大小、单细胞平均[Ca2+]i测定荧光值及细胞内Ca N浓度在随糖浓度升高呈阶梯上升,50 mmol/L时达到最高点。加入Norvasc后细胞大小较相同条件不加Norvasc者降低。Ca NAβ、NFAT3和β-MHC的mRNA及蛋白表达随糖浓度升高逐步升高,50 mmol/L时达最高。加入Norvasc后Ca NAβ、NFAT3和β-MHC的mRNA及蛋白表达均较未加Narvasc组明显降低。结论:高糖通过激活Ca2+-Ca N-NFAT3信号通路引起H9c2心肌细胞肥大。     

不同雌激素对大鼠海马和脑皮质区域雌激素受体α和β表达的差异性调节研究

目的:探讨不同种类雌激素药物对雌性去势大鼠海马和脑皮质区域雌激素受体(estrogenreceptor,ER)的调节差异。方法:雌性去势大鼠分别给予倍美力或补加乐持续灌胃3个生理周期,采用半定量RT-PCR法检测雌激素受体ERα、ERβ的mRNA表达,免疫组化法检测ERα、ERβ蛋白的分布及表达。结果:倍美力组海马和脑皮质ERαmRNA表达均显著低于去势对照组,ERα蛋白在海马中相对表达量也低于对照组,但在脑皮质中表达无改变;该组上述两个区域中ERβmRNA以及脑皮质ERβ蛋白的表达无显著改变,仅海马ERβ蛋白表达升高。补加乐组脑皮质和海马ERβmRNA和蛋白表达均显著高于去势对照组,海马ERαmRNA表达也高于对照组,但脑皮质ERαmRNA及脑皮质和海马ERα蛋白的表达水平均无显著改变。结论:两种不同种类雌激素药物对雌性去势大鼠认知区域中ERα、ERβ表达的调节水平存在显著差异,这可能是选用不同的雌激素药物进行激素替代治疗产生的保护认知疗效存在差别的机制之一。