同种脱钙骨脊柱融合实验研究

本文用21只兔研究同种脱钙骨的实验性脊柱融合，实验动物分三组：脱钙骨粉组；脱钙骨条组；脱钙骨粉加明胶赋形剂组。手术在胸_(10)～腰_3椎体侧后方施行，作者观察术后1、2、3、5个月的结果表明：X线片及组织学都证明三组均有诱导新生骨形成。     

雷奈酸锶对骨质疏松大鼠骨折愈合过程中BMP-2表达的影响

目的 探讨雷奈酸锶对骨质疏松大鼠股骨折愈合的治疗效果及其作用机制.方法 雌性3月龄SD大鼠36只,随机分为三组:正常骨折组(A),骨质疏松性骨折组(B)、雷奈酸锶干预组(C),每组各12只.B、C组接受双侧卵巢切除术,A组行假手术,术后8周,所有大鼠于行骨密度检测确认骨质疏松模型建立成功后,制作股骨中段骨折模型,克氏针固定,C组给予雷奈酸锶干预(1g/kg/day).骨折6周后取材,每组半数标本骨痴组织研磨提取RNA,Realtime PCR法检测BMP-2 mRNA的表达,另半数标本常规脱钙、石蜡包埋,HE染色观察骨折愈合情况,免疫组织化学染色观察BMP-2蛋白的表达.结果 HE染色结果:A组大鼠骨痂组织较成熟,部分标本可见板层骨形成,B组大鼠骨折愈合进程较正常延迟,软骨性骨痂成分居多,C组优于B组,但仍较A组延迟;Realtime PCR及免疫组化提示C组BMP-2表达显著高于A、B组;A、B组间BMP-2表达水平差异无统计学意义.结论 骨质疏松大鼠较正常大鼠骨折愈合进程延迟,雷奈酸锶可促进骨质疏松性大鼠骨折愈合,其机制可能与上调BMP-2的表达有关.     

5％硝酸、10％EDTA用于大鼠尾椎椎间盘组织脱钙处理的效果观察

目的 观察并比较大鼠尾椎椎间盘经5％硝酸或10％EDTA脱钙处理后的病理表现.方法 成年SD雄性大鼠10只,取鼠尾Co6/7-Co9/10椎间盘,Co6/7和Co8/9为硝酸组进行5％硝酸脱钙处理,Co7/8和Co9/10为EDTA组进行10％EDTA脱钙处理.记录脱钙时间,采用HE染色、番红O固绿染色进行组织形态学观察,采用免疫组化染色观察II型胶原蛋白表达.结果 硝酸组脱钙需(18.35±4.71)h,EDTA组需(22.75±6.64)h.硝酸组整体形态保持更好,但是免疫组化染色II型胶原蛋白表达明显减少.EDTA组组织形态保持尚可,纤维环组织变硬变脆,有组织松散紊乱表现,但是II型胶原蛋白表达明显.结论 大鼠尾椎椎间盘经5％硝酸、10％EDTA两种脱钙液处理后,在进行普通病理及结构观察时,5％硝酸具有脱钙时间短,组织形态更完整的优势,但需要进行免疫组化染色时,10％EDTA进行脱钙处理更有优势.可以根据不同的科研需求选择脱钙方法.     

同种脱钙骨粉和骨块移植的实验观察

为证实不同形式的脱钙骨基质(DBM)及未脱钙骨的成骨作用进行了本实验。我们采用家兔39只,分为四组:(1)脱钙骨粉组;(2)脱钙骨块组;(3)未脱钙组;(4)空白组。将兔尺骨干造成1cm缺损后植入上述不同DBM及未脱钙骨,定期行X线及组织学观察。实验结果显示两种形式的DBM,在第8—10周标本的骨愈合率为70—80％,二者无明显差别。但未脱钙骨组在第8—10周标本只有部份连接。空白组在第10周无骨连接。以上结果表明DBM的成骨效应较未脱钙骨为优。骨粉制备简单,使用保存方便,可塑性强,作为骨移植材料填充骨腔是可行的。     

骨及钙化组织脱钙法的比较

目的：探讨骨及钙化组织的脱钙方法。方法采用三种不同方法处理相同的骨及钙化组织,甲组先将骨及钙化组织切成薄片,用甲酸氯化铝脱钙固定液彻底脱钙,流水冲洗,碳酸铝饱和溶液中和酸;乙组先用甲酸氯化铝脱钙固定液处理大块骨及钙化组织至彻底脱钙,再将骨及钙化组织切成薄片,碳酸铝饱和溶液中和酸;丙组按传统方法脱钙。三组组织脱钙后均常规制作HE切片,并行CD68和TTF-1免疫组化检测,比较三种方法的脱钙时间、HE染色和免疫组化检测结果。结果甲组脱钙时间短、切片完整、组织结构清晰、染色对比鲜明、长期保存不易褪色、免疫组化阳性信号正常,各项结果均优于乙组和丙组。结论甲酸氯化铝脱钙固定液处理骨及钙化组织,脱钙时间短,切片质量、染色质量、免疫组化质量好,切片长期保存不易褪色,值得推广。     

跑步运动对去睾大鼠负重骨和非负重骨骨量及骨结构的影响

目的探讨不同强度的跑步运动对去睾大鼠的腰椎骨和胫骨骨量及骨显微结构的影响。方法 12周龄SD雄性大鼠40只,随机分为假手术组、去睾模型组、去睾后低强度运动组、去睾后中强度运动组、去睾后高强度运动组。给予相应措施12周后,处死取腰椎和胫骨,做不脱钙骨切片,并测定骨量、骨结构、骨代谢参数。各组参数作方差分析的显著性检验。结果 （1）去睾模型组各参数与假手术组比较,骨量降低、骨显微结构破坏、成骨减弱、破骨活跃（均P〈0.05）;（2）去睾后低、中强度运动组各参数与去睾模型组比较,骨量增高,骨显微结构改善,成骨活跃,破骨减弱（均P〈0.05）;（3）去睾后高强度运动组各参数与去睾模型组比较,骨量和骨结构均无明显改善（P〉0.05）,但成骨和破骨均活跃,骨转换加快（P〈0.05）;（4）去睾后低、中强度运动组骨量增加率胫骨高于腰椎（P〈0.01）。结论 （1）雄性大鼠去睾后能引起骨量丢失及骨结构破坏;（2）低、中强度的跑步运动对去睾大鼠不仅能增加骨量还能改善骨显微结构;高强度的跑步运动对去睾大鼠骨量丢失和骨显微结构破坏的改善有负面影响;（3）低、中强度的跑步运动对负重骨骨量丢失的改善优于非负重骨。     

微波加热后脱钙骨基质诱导成骨中Ⅰ、Ⅱ型胶原mRNA及碱性磷酸酶的表达

目的对微波加热后脱钙骨基质异位诱导成骨中I、II型胶原mRNA及碱性磷酸酶(ALP)的表达进行研究,探讨微波加热对脱钙骨基质诱导成骨的影响。方法将36只Wister大鼠随机分为3组,每组12只。A组为阳性对照组,不加热;B组为实验组,60℃微波加热15min;C组为阴性对照组,100℃水浴加热30min。A、B、C三组均取大鼠左胫骨约0.5cm作为实验材料,将B、C二组骨块分别加热,然后A、B、C三组骨块均制成脱钙骨基质后自体植入大鼠的腹内斜肌,分别于术后6d,12d取材,用原位杂交法对新生骨组织中的I、II型胶原mRNA进行检测,定量分析ALP的活性,观察微波加热脱钙骨基质诱导成骨中I、II型胶原mRNA及ALP的表达。结果(1)术后6d,A、B组随着成软骨细胞、软骨细胞的出现,II型胶原mRNA表达阳性,而C组II型胶原mRNA表达阴性。(2)术后12d,随着成骨细胞出现及骨组织的形成,A、B组I型胶原mRNA出现高表达现象,ALP较术后6d明显增高(P<0.05)。而C组未发现软骨细胞及成骨细胞,仅形成纤维结缔组织。结论B组I、II型胶原mRNA及ALP在成软骨细胞、软骨细胞及成骨细胞内表达,与A组相似,而C组I、II型胶原mRNA及ALP在上述细胞内无表达,表明微波加热后仍可保存骨的诱导性。     

乳腺术后骨转方对大鼠乳腺癌骨癌痛模型镇痛作用研究

目的:建立大鼠Walker-256乳腺癌细胞骨癌痛模型,探讨乳腺术后骨转方对骨癌痛的镇痛作用。方法:SD大鼠54只,按体重随机分成6组,每组9只,于大鼠左后肢注射Walker-256细胞建立骨癌痛模型,观察各组大鼠造模前后体重、造模后热痛敏阈值的变化、胫骨CT影像、胫骨HE病理染色及破骨计数情况。结果:1造模后第7天乳腺术后骨转方高剂量+唑来膦酸组体重高于模型组(P0.05);造模后第14天,乳腺术后骨转方高剂量+唑来膦酸组和乳腺术后骨转方低剂量组体重高于模型组(P0.01)。2乳腺术后骨转方各剂量组在造模后第21天的热痛敏阈值高于模型组(P0.05),至造模后28 d,乳腺术后骨转方高剂量+唑来膦酸组热痛敏阈值仍高于Model组(P0.05)。3造模后第28天,乳腺术后骨转方各剂量组可以减轻模型大鼠的骨质破坏以及肿瘤浸润,各组破骨细胞计数低于模型组(P0.01)。结论:乳腺术后骨转方可以显著提高模型大鼠的热痛敏阈值,减轻热痛敏反应,表现出明显的镇痛作用。其次,本方在一定程度上能够抑制骨癌痛模型大鼠体重的下降、减轻骨质的破坏。乳腺术后骨转方联合唑来膦酸等够早期干预模型大鼠体重下降的情况,并可以延长减轻热痛敏反应的作用时间。     

骨泥的制备及其诱导成骨实验研究

目的研制一种可随意塑型、填充不规则骨缺损的骨植入材料并观察其成骨效果。方法以羧甲基纤维素钠(CMCNa)为粘合剂复合脱矿骨粉制备骨泥,并将骨泥植入大鼠股肌袋内,通过大体观察,X线片,碱性磷酸酶(ALP)测定,组织学观察及成骨面积测定,研究该植入物在肌袋内的成骨效果。结果CMCNa植入体内4周完全被降解吸收,无毒性反应。与骨粉粘合性好,可随意塑型,对骨缺损填充完全。动物实验大体观察,伤口无红肿及脓性渗出,愈合良好,无死亡。X线片显示骨泥不离散。全脱矿骨泥植入体内后2周,ALP均值高于表面脱矿骨泥组。表明全脱矿骨泥植入后可形成软骨和骨组织,成骨良好。结论CMCNa复合全脱矿骨粉制备的骨泥具有诱导成骨活性,可随意塑型,使用方便,可为临床提供一种填充不规则骨缺损的骨植入材料。     

大鼠早期骨关节炎软骨下骨结构与骨改建相关基因表达研究

目的：考察创伤性关节炎早期软骨下骨的微结构变化和基因表达变化,探索软骨下骨的骨重建特点及其在关节软骨退变中的作用。方法选择13只SD大鼠,利用内侧半月板撕裂（MMT）模型模拟创伤性骨关节炎,右侧膝关节行MMT手术,左侧行假手术,术后3周处死大鼠并取膝关节组织标本4％ PFA固定。取10只SD大鼠的造模侧及对照侧胫骨关节,利用micro‐CT 扫描并重建分析软骨下骨的微结构变化。标本脱钙后石蜡包埋切片,番红O固绿染色,普通光学显微镜观察摄片。另取3只SD大鼠,提取软骨下骨的组织RNA ,RT‐PCR检测两组之间骨形成标志基因（ALP、RUNX2、OCN ）与骨吸收相关基因（TRAP、CTSK、MMP9）mRNA水平的表达变化。结果 MMT术后3周,胫骨关节micro‐CT扫描显示模型组软骨下骨的小梁骨结构紊乱,软骨下骨小梁骨的骨体积分数（BV／TV）、骨小梁连接密度（Conn ．D）、骨小梁厚度（Tb ．Th）降低（P＜0．05）,骨小梁间隔（Tb ． Sp）增大（P＜0．05）。组织病理结果显示,模型组关节软骨未发生明显结构变化、软骨下骨骨小梁结构稀疏。与对照组比较,模型组骨形成标记基因mRNA表达水平降低（P＜0．05）,骨吸收相关基因mRNA表达水平升高（P＜0．05）。结论大鼠膝关节内侧MMT诱导的创伤性骨关节模型早期,软骨下骨体积分数降低、骨小梁厚度变薄,成骨细胞的标志基因表达下降,破骨细胞的功能基因表达增加。     

3种脱钙液对牙体牙周联合切片H-E染色效果的对比

目的对不同脱钙液在牙体牙周联合组织HE染色切片的效果进行比较，并初步探讨了乙二胺四乙酸二钠（EDTA）-微波技术在牙体牙周联合组织切片脱钙过程中的应用。方法取成年健康Beagle犬下颌骨牙体牙周联合组织做为标本，采用10％硝酸溶液、Krinstensen’S液、EDTA-微波辐射3种不同的脱钙方法进行脱钙，在完成组织脱钙后进行H—E染色，并在显微镜下观察组织结构及染色效果。结果EDTA-微波辐射完成组织脱钙约需53h，H—E染色效果良好，牙髓细胞、成牙本质细胞、牙周膜细胞和牙本质小管组织结构清晰；Krinstens—en’s液完成组织脱钙约需1500h，H—E染色效果较好，组织结构较清晰；10％硝酸溶液完成组织脱钙约需360h，H—E染色对比度差，组织结构模糊不清。结论应用EDTA-微波辐射技术能在相对较短的时间内完成牙体牙周联合组织的脱钙，并在H—E染色切片中较好地保存了牙体牙周组织的结构。     

溶菌酶与EDTA二钠的协同抑菌作用

目的：研究溶菌酶与乙二胺四乙酸二钠（ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt,EDTA二钠）对粪肠球菌和牙髓卟啉单胞菌的协同抑菌作用。方法：分别培养粪肠球菌和牙髓卟啉单胞菌,并调整菌液浓度至108菌落形成单位（colony-forming unit,CFU）/mL;配制终浓度为0.3、0.5、1、2、5、10、50、100、150和300 g/L的单纯溶菌酶抑菌液,以及添加浓度为0.5、1.0、2.0 g/L的EDTA二钠的混合抑菌液。将菌液与抑菌液作用15 min,加入水溶性四唑盐（water-soluble tetrazolium,WST）工作液染色,酶标仪测定光密度值,计算细菌活性。结果：单纯溶菌酶抑菌液（浓度0.5~150 g/L）对两种细菌的抑菌作用随溶菌酶浓度的升高而增强,且对粪肠球菌的抑菌作用更显著。EDTA二钠与溶菌酶有协同抑菌作用,与溶菌酶浓度相关。溶菌酶浓度为0.5~50 g/L时,EDTA二钠协同溶菌酶作用于粪肠球菌（P<0.05）,可使其抑菌作用提高约1.2~3.7倍;溶菌酶浓度为0.5~10 g/L时, EDTA二钠协同溶菌酶作用于牙髓卟啉单胞菌（P<0.05）,可使其抑菌作用提高约1.3~3.5倍;当溶菌酶浓度大于100 g/L时,加入EDTA二钠对细菌均没有明显的协同抑菌作用（P>0.05）。结论：对于粪肠球菌及牙髓卟啉单胞菌,在溶菌酶较低浓度时,EDTA二钠有协同抑菌作用;在溶菌酶较高浓度时,EDTA二钠无协同抑菌作用。     

不同脱钙条件对骨组织免疫组织化学染色抗原性的影响

目的:探讨不同脱钙条件对骨组织免疫组织化学染色抗原活性的影响。方法:用8%硝酸分别在冰箱(4℃)、室温(2 0℃)、温箱(37℃)、温箱(6 0℃)、超声波、微波、光波、光波/微波组合Ⅰ组、光波/微波组合Ⅱ组条件下脱钙,应用LSAB免疫组织化学染色技术检测ANP、5 HT、S 1 0 0、NF、GFAP、CD3 1 、CD3 4 和Vimentin的表达,并对其染色结果进行图像分析和统计学处理。结果:8%硝酸脱钙从4℃、2 0℃、37℃到6 0℃随着脱钙液温度的温度升高,脱钙时间逐渐缩短,光波、微波和超声波中脱钙所用的时间比2 0℃、37℃、6 0℃明显缩短,比光波/微波组合Ⅰ、Ⅱ中所用的时间长。光波/微波组合Ⅰ组、Ⅱ组脱钙的免疫组化染色结果均明显比2 0℃、37℃、6 0℃、微波组、光波组和超声波组的好(P <0 .0 1 ) ,而光波/微波组合Ⅰ组和Ⅱ组之间,微波组、光波组和超声波组之间的免疫组化染色结果均无明显差异(P >0 .0 5 )。结论:光波/微波组合Ⅱ 8%硝酸脱钙所用时间最短,免疫组化染色效果最好。     

高效液相色谱法测定盐酸纳美芬注射液中的依地酸二钠含量

目的 建立盐酸纳美芬注射液中依地酸二钠的含量测定方法.方法 采用高效液相色谱法测定.色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶柱;流动相:0.3%四丁基氢氧化铵溶液(盐酸调节pH至4.0)-水-乙腈(20:45:35,V/V/V);流速:1.0 ml/min;检测波长:254 nm;柱温:30℃;进样体积:20μl.结果 依地酸二钠的定量限为0.199μg/ml,最低检测限为0.060μg/ml,在2.4593~7.3780μg/ml浓度范围内线性良好,线性方程为Y=10.125X-0.216,相关系数r=1.000,各浓度平均回收率在98%~102%之间,RSD%为0.58%.结论 该检测方法专属性良好、简便,快速,灵敏,精密度高,重现性好.     

不同吸收促进剂对孟鲁司特钠家兔直肠吸收的促进作用

目的 研究孟鲁司特钠经家兔直肠吸收的程度及不同吸收促进剂对其吸收的影响.方法 建立孟鲁司特钠在家兔体内血药浓度的HPLC测定法,测定孟鲁司特钠经家兔直肠给药及在不同吸收促进剂(吐温-80、癸酸钠、胆酸钠、月桂氮卓酮、月桂酸钠、L-精氨酸、EDTA-2Na及盐酸氯丙嗪)作用下的血药浓度,并以静脉给药为对照,对孟鲁司特钠的直肠吸收情况及吸收促进剂作用进行评价.结果 孟鲁司特钠本身经直肠吸收极少,所用促进剂对其在肠道的吸收均有影响,并与其使用浓度有关,促进作用为10％吐温-80＞1％癸酸钠＞0.2％胆酸钠＞4％月桂氮卓酮＞3％月桂酸钠＞1.5％L-精氨酸(P＜0.05),2％盐酸氯丙嗪与1％ EDTA-2Na效果相近,促进作用均较低.结论 直肠不是孟鲁司特钠的良好吸收部位,利用吸收促进剂可促进其在直肠的吸收,10％吐温-80促吸收效果最好.     

宁夏枸杞谷胱甘肽过氧化物酶的测定

目的研究宁夏枸杞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的测定方法,以寻求测定枸杞中GSH-Px的最佳条件。方法以0.2mol·L-1的磷酸缓冲液作为提取介质,1.67%的偏磷酸作为沉淀液,用分光光度计分别在410nm、412nm、414nm、416nm、418nm、420nm、422nm波长下比色测定宁夏枸杞中GSH-Px活性。结果宁夏枸杞中GSH-Px在含1mmol·L-1乙二胺四乙酸(EDTA)和1%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的0.2mol·L-1磷酸缓冲液(pH6.24)作为提取介质,反应2min、412nm波长条件下比色测定,活性最高。结论本方法可以准确地测定枸杞中GSH-Px的活性,且重复性好。     

不同抗凝管对同型半胱氨酸测定结果的影响

目的研究不同抗凝管采血对血浆总同型半胱氨酸（tHcy）的影响．方法选取6名健康者,卒腹采集静脉全血样本,分别用EDTA-2K管,枸橼酸钠管和肝素锂管采血,不同条件下保存,用HPLC法定量测定tHcy的浓度,用SPSS软件分析处理数据．结果3种抗凝管采血后,即刻分离血浆后4℃放置2h、4h、7h以及-20℃放置1d、3d、5d,不同抗凝管血浆tHcy浓度差异无统计学意义;此外,3种抗凝管采血后,全血4℃放置2h、4h、7h后分离血浆测定血浆tHcy浓度,不同抗凝管差异无统计学意义．结论EDTA-2K管,枸橼酸钠管和肝素锂管采血对测定的血浆tHcy浓度没有明显差异．     

锌、硼、钡和锰在牙釉质脱矿过程中的作用

目的 :检测锌、硼、钡、锰 4种微量元素对牙釉质脱矿的影响 ,探讨其与龋病的相关性。方法 :选择离体牛牙 ,实验组分别用氟、锌、硼、钡、锰处理 ,对照组用双蒸水处理 ,所有标本浸泡于酸蚀凝胶中形成人工釉质龋。测量不同浸泡时间酸蚀凝胶中钙的含量。结果 :所有样本 48h以前釉质脱钙量随时间的变化差异有显著性。含氟、锌、硼、钡的实验组与对照组比较 ,抑制釉质脱矿能力差异有显著性 ,氟抑制釉质脱钙能力最强 ,硼稍弱 ,锌次于硼 ,钡最弱。结论 :锌、硼、钡能有效抑制早期龋釉质脱矿 ,具有抗龋作用 ;锰与龋病无关     

RP-HPLC法测定诺氟沙星葡萄糖注射液中乙二胺四乙酸二钠的含量

  目的  建立诺氟沙星葡萄糖注射液中乙二胺四乙酸二钠的含量测定方法。  方法  选择色谱柱为（SHISEIDO C18-MGⅡ 5 μm 4.6×250 mm），流动相为乙腈:0.05 mol/L醋酸铵:水，流动相比例为70∶15∶15，流速为1.0 mL/min，进样体积为20 μL，柱温为35 ℃，检测波长为254 nm，采用三氯化铁和乙二胺四乙酸二钠反应形成螯合物后对其进行测定。  结果  乙二胺四乙酸二钠峰与其他色谱峰分离度良好；乙二胺四乙酸二钠在2.0326～200.3260 μg/mL浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系（R2 = 0.9997），平均回收率为98.11%（n = 9）。  结论  该方法快速、简便、专属性强、精密度高、重复性好，结果准确可靠，适用于诺氟沙星葡萄糖注射液中乙二胺四乙酸二钠的含量测定。