铁蛋白时间分辨荧光免疫分析法的建立

用夹心法建立铁蛋白(FER)时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA),测定血清FER的含量。以FER单克隆抗体(McAb)806#包被板,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu^3 及标记FERMcAb 803#,发光增强系统为以β-二酮体为主的增强液。采用双对数函数数据处理程序,方法的批内和批间CV分别为2．2％和3．7％,平均回收率为118％,灵敏度为0．5μg／L,可测范围为0．5-1000μg／L。ED20、ED50和ED80分别为27．8μg／L、88．5μg／L和247μg／L。Eu^3 FER McAb于-30℃保存至少4个月,免疫反应性基本无损失,同批试剂连续分析4个月结果稳定。本法与PE公司的FER-TRFIA试剂盒所得样品的测定值的相关系数为0．98。本文建立的FER-TRFIA法,是一种适用于人群贫血普查和各种肝脏疾病及肿瘤的联合诊断的良好方法,分析范围、灵敏度和稳定性均较理想,值得推广应用。     

HBeAg时间分辨荧光免疫分析法的建立

采用平衡饱和法建立了乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)时间分辨荧光免疫分析法.以针对HBeAg的单克隆抗体G8包被板,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3+及标记C4单抗,发光增强系统为以β-二酮体为主的增强液.数据采用Log-Logit法函数和四参数Logitc函数数据处理程序处理.结果表明方法的批内和批间CV分别为2.39%和5.28%,平均回收率为97.62%,灵敏度为0.58NCU/mL,可测范围为12.01-529.84NCU/mL,ED20、ED50和ED80分别为6.36NCU/mL、26.85NCU/mL和136.7NCU/mL.本方法与HBsAg有13.1%的交叉反应.Eu3+标记抗体-30℃保存6个月免疫反应性基本无损失,同批试剂连续5个月应用分析结果稳定.HBeAg时间分辨荧光免疫分析的质量参数优于EIA和IRMA.     

胃蛋白酶原Ⅰ时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的　采用时间分辨荧光免疫分析技术建立高灵敏的胃蛋白酶原Ⅰ的快速全自动检测方法。方法　以PGⅠ单克隆抗体 80 0 3#包被板 ,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3 及标记PGⅠ单克隆抗体 80 16 # ,发光增强系统为以 β 二酮体为主的增强液。采用平衡饱和法建立PGⅠ时间分辨荧光免疫分析 ,数据采用Log Logit法函数和四参数Logitc函数数据处理程序处理。结果　方法的批内和批间CV分别为 1.9%和 4 .7% ,平均回收率为 10 2 .6 5 % ,灵敏度为 0 .0 5 μg L ,可测范围为 3.5～ 32 8μg L ,ED2 0 、ED50 和ED80 分别为 11.34μg L、38.73μg L和 132 .3μg L。Eu3 标记抗体 2 0℃保存 8个月免疫反应性基本无损失 ,同批试剂连续 8个月应用分析结果稳定 ,临床结果与免疫放射分析法的结果相符。结论　胃蛋白酶原Ⅰ时间分辨荧光免疫分析法是目前胃蛋白酶原Ⅰ检测中最灵敏的方法 ,该分析法稳定性好 ,具有很好的应用前景。     

时间分辨荧光免疫分析法测定人血清α-FP

本文报告应用时间分辨荧光免疫分析技术测定人血清α-FP浓度。研究结果表明,将BAS引入该技术,使方法学稳定性和灵敏度有明显提高。本法批内CV为3.8～5.2％。批间CV为4.80～12.3％,最小检出值<1ng/ml,平均回收率为102.8％。健康成人测定参考值为5.56±5.38ng/ml(±SD)。聚苯乙烯微量滴定孔条经戊二醛处理后可提高包被抗体含量。     

层粘连蛋白时间分辨免疫分析方法的建立

采用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立高灵敏的层粘连蛋白(LN)的快速的全自动检测方法.以羊抗鼠IgG抗体包被板,采用抗人LN单克隆抗体(McAb)、Eu3 标记人LN和以β-二酮体为主的增强液建立竞争LN-TRFIA,数据采用双对数函数处理程序处理.结果表明LN的标记率为11.5 Eu3 /LN,方法的批内和批间CV分别为3.9%和6.7%,平均回收率为91.2%,灵敏度为5μg/L,可测范围为5～1000μg/L,ED20、ED50和ED80分别为723.1μg/L、183.4μg/L和56.95μg/L.临床结果与RIA结果相符.本文建立的LN-TRFIA灵敏、稳定,可全自动操作,有很好的应用前景.     

镧系元素时间分辨荧光免疫分析

一、概述 应用镧系元素的时间分辨荧光(TRF)分析技术,已在免疫检测中显示出它的优越性。在医学各学科中;如内分泌激素的检查、肿瘤标志物的检测,以及体内各种内或外源     

时间分辨荧光免疫分析方法建立中有关问题的探讨

本文报告了时间分辨荧光免疫分析技术建立中有关问题的实验研究结果。包括对Eu~(3+)标记技术的改进,增强液的配制和检定,抗体包被固相材料的选择及操作中必须注意的防止稀土元素污染的措施。     

NSE时间分辨荧光免疫分析法的建立

采用夹心法建立神经元特异烯醇化酶（NSE）时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）来测定血清中NSE的含量。以NSE单克隆抗体E1包被板,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3＋及标记NSE单克隆抗体E7,发光增强系统为以β-二酮体为主的增强液。采用平衡饱和法建立NSE-TRFIA,数据采用双对数函数数据处理程序处理。本方法的连续批内和批间CV分别为2.4%和4.8%,平均回收率为102.6%,灵敏度为0.31ng/mL,可测范围为0.31～320ng/mL,ED20、ED50和ED80分别为20.72ng/mL、57.23ng/mL和157.25ng/mL。本方法与AFP、CEA均无交叉反应。Eu3＋标记抗体-20℃保存8个月免疫反应基本无损失,同批试剂连续8个月应用分析结果稳定。临床应用检测结果与E170所测值高度相关。实验结果表明,本文所建立的NSE-TRFIA的灵敏度、特异性、准确度等均符合临床应用要求。     

CEA时间分辨荧光免疫分析

以ＣＥＡ单克隆抗体Ｃ５０包被微孔板,异硫氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Ｅｕ＾３＋标记Ｃ１７单抗。采用平衡法建立ＣＥＡ时间分辨荧光免疫分析,数据采用Ｌｏｇ＝Ｌｏｇｉｔ函数数据自理程序处理。方法的批内和批间ＣＶ分别为２．９７％和１．６０％,平均回收率为１０１．９８％,灵敏度为０．２０μｇ／Ｌ,可测范围为２．３９～５０８．９μｇ／Ｌ,ＥＤ５０为６０．９１μｇ／Ｌ。本方法与ＡＦＰ和ＣＡ１２５和ＣＡ１５３无交     

弓形虫IgG时间分辨免疫荧光分析法的建立

建立了高灵敏弓形虫-IgG的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)检测方法.样品或参考标准加入到由弓形虫抗原包被的96孔微孔板上,用Eu3+标记羊抗人IgG,建立间接弓形虫-IgG TRFIA检测法.本法检测范围为0.7～200 U/mL, 灵敏度为0.7U/mL;方法的平均批内和批间CV分别为4.5%和5.6%;标准曲线可测范围为0.7～14U/mL. 本文建立的弓形虫-IgG的TRFIA法灵敏度高、稳定性好,具有良好的应用前景.     

促甲状腺激素生物素-链亲和素TRFIA定量检测法的建立

用Eu3＋标记链亲和素（SA）,分别用两株识别人促甲状腺素（human thyroid stimulating hormone,hTSH）的单克隆抗体包被96微孔板并生物素化,建立了高灵敏的hTSH生物素-链亲和素（BAS）时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）检测法。本法的灵敏度为0.02mIU/L;批内CV为2.7%~3.5%,批间CV为3.2%~3.8%;平均回收率为100.26%;与电化学发光免疫分析技术（ECLIA）比对,相关系数达0.9544,线性方程为Y=1.3133X-32.297;与ECLIA临床测定值也呈明显相关;正常值范围为0.33~3.09mIU/L。本文建立的hTSH-BAS-TRFIA具有灵敏度高,特异性强,稳定性好,测定范围宽,检测时间短和非放射性等优点,具有良好的应用价值。     

赭曲霉毒素A时间分辨荧光免疫分析法的建立及其考核

采用稀土离子标记技术,应用多克隆抗体建立高灵敏的赭曲霉毒素A(OTA)时间分辨荧光免疫分析法(OTA-TRFIA).以OTA-KLH为免疫原制备抗OTA抗体;OTA与BSA的联结物(OTA-BSA)为固相抗原,与游离OTA共同竞争有限的兔抗OTA抗体;用Eu3 标记的羊抗兔抗体.该方法的灵敏度为0.02μg/L,测量范围为0.02μg/L～400μg/L,批内和批间CV分别为2.6%和5.2%,平均回收率为95.8%,与赭曲霉毒素B对OTA的检测有5.6%交叉反应,而黄曲霉毒素B1及BSA则没有交叉反应.不同时间进行的OTA-TRFIA的ED80、ED50、ED20效应点值分别为0.2μg/L、1.0μg/L和5.3μg/L.研究表明,OTA-TRFIA是目前OTA检测中最灵敏的方法之一,该分析方法稳定性好、可测范围宽,具有很好的应用前景.     

CA19-9时间分辨荧光免疫分析方法的建立及应用

以CA19－9单抗192＃包被板条,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu^3 及标记241＃单抗,发光增强系统为以β-二酮体为主的增强液,采用平衡饱和法建立了CA19－9时间分辨荧光免疫分析。采用Log-Logit函数和四参数Logistic函数两种程序处理数据。结果表明方法的批内和批间CV分别显3．26％和5．74％,平均回收率为99．61％,灵敏度为1．66U/mL,可测范围为18．69－967U／mL,ED20、ED50t ED80分别为40．55U／mL、114．2U/mL和396．9U/mL。本方法与CEA有6％交叉反应,与CA125、CA153和AFP均无交叉反应,Eu^3 标记抗体于－30℃,保存六个月免疫反应性基本无损失,连续5个月应用同批试剂,分析结果稳定。78份血清样品的检测结果与化学发光吻合,本文提示,采用CA19－9时间分辨荧光免疫分析,可以高效灵敏地检测出血清中的CA19－9的含量,值得临床推广。     

时间分辨荧光免疫法测定血清AFP的方法学评价

对时间分辨荧光免疫法(TRFIA)测定血清AFP的方法学予以评价.评价TRFIA法测定AFP的线性范围、灵敏度、精密度、回收率及与ELISA法和RIA法的相关性.结果显示:AFP线性范围1～1000U/mL,检测下限≤0.1 U/mL,批内及批间变异系数分别为2.3%、5.3%,回收率97.85%,与ELISA法及RIA法高度相关,r值分别为0.982与0.991.正常血清AFP参考值0.8～10.5 U/mL.结论:TRFIA测定AFP线性范围宽,稳定性好,灵敏度与准确度高,无放射性污染,是当前免疫分析中有发展前途的一项超微量检测技术.     

时间分辨荧光免疫法人巨细胞病毒IgG抗体定量测定试剂盒的研制

目的建立人巨细胞病毒IgG（HCMV IgG）抗体时间分辨荧光免疫法（TrFIA）并研制其试剂盒。方法采用HCMV pp150＋pp52＋pp65抗原作为包被抗原,铕标记羊抗人IgG作为示踪物,配制以β-萘甲酰三氟丙酮为主的增强液,应用间接TrFIA法测定HCMV IgG抗体,将自制试剂盒与同类试剂盒进行方法学比对试验,比对定量结果的等效性采用线性回归分析。结果自制HCMV IgG抗体试剂盒的最低检测限、重复性、阴性参考品符合率、阳性参考品符合率均能达到国家检定标准;检测标化的企业校准品,其实测值与理论值相对偏差均在±20.0%以内;在2.0 RU/mL~256.0 RU/mL范围内,线性相关系数不低于0.9900;于37℃恒温箱放置6天后,检测性能无明显改变;临床研究评价一致程度百分比达99.4%,1020例临床样本定量结果的线性回归方程为Y=0.9594X＋0.3252,r=0.9918。结论自制试剂盒测定HCMV IgG抗体灵敏度高、特异性强、精密度好、准确度高、线性范围宽;与同类检测结果相关性好,能满足临床需要。