地昔帕明对胶质瘤C6细胞增殖抑制的神经酰胺通路

目的:研究神经酰胺通路在抗抑郁药地昔帕明抑制大鼠胶质瘤C6细胞增殖及诱导细胞凋亡中的作用。方法:MTT法测定C6细胞活力;AnnexinⅤ/PI双染色流式细胞术对细胞早期凋亡进行定量分析。结果:地昔帕明(5~20μmol·L-1)浓度依赖性抑制C6细胞的增殖且与C2-神经酰胺具协同作用;10μmol·L-1神经酰胺合成酶抑制剂烟曲霉毒素(FB1)预处理18h可显著对抗地昔帕明对C6细胞增殖的抑制作用。地昔帕明(20μmol·L-1)可诱导C6细胞发生早期凋亡(13.1%),而FB1(10μmol·L-1)预处理对凋亡发生率无明显影响。结论:地昔帕明可通过增加神经酰胺从头合成抑制胶质瘤细胞C6的增殖。     

槲皮素血浆代谢物抗大鼠C6脑胶质瘤细胞的作用

目的:考察槲皮素大鼠血浆中的代谢物对大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖与凋亡的作用。方法:将槲皮素血浆代谢产物槲皮素、槲皮苷和异鼠李素分别与C6胶质瘤细胞共培养24 h后,LDH活性法检测代谢产物对C6脑胶质瘤细胞的毒性作用,流式细胞仪检测C6胶质瘤细胞凋亡与线粒体膜电位变化。结果:槲皮素和异鼠李素对大鼠C6胶质瘤细胞有显著的细胞毒性作用,均能显著诱导C6胶质瘤凋亡(P<0.05),槲皮素显著降低线粒体膜电位(P<0.05)。结论:槲皮素血浆中的槲皮素甲基化代谢产物是主要的抗肿瘤活性成分,而槲皮素苷类代谢产物抗肿瘤活性较弱,为槲皮素及其靶向制剂进一步应用于脑胶质瘤的治疗提供参考依据。     

Tenuifoliside A基于ERK通路保护皮质酮损伤C6细胞作用研究

目的探讨远志寡糖酯成分Tenuifoliside A(TFSA)对皮质酮诱导大鼠神经胶质瘤细胞(C6)损伤的保护作用及其分子机制。方法建立以0.8 mmol.L-1的皮质酮作用于C6细胞48h的损伤模型;用皮质酮预处理C6细胞30 min后加入30、10和3μmol.L-1的TFSA,共同作用48 h,CCK试剂盒检测TFSA对皮质酮诱导C6细胞损伤的存活率;荧光显微镜观察C6细胞Hoechst 33258染核后凋亡形态变化;Western blot检测C6细胞内ERK及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达;Caspase检测试剂盒检测C6细胞内Caspase激酶活力的变化。结果与正常对照组比,0.8 mmol.L-1的皮质酮对C6细胞有明显的损伤作用,其细胞存活率降低至69.58%(与正常组相比,P<0.01);细胞核形态改变,出现凋亡小体;胞内ERK蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2表达量明显降低(与正常组相比,P<0.01),Caspase-3激酶的活力增加(P<0.01)。与模型组相比,各剂量组的TFSA均有不同程度对抗皮质酮损伤的作用,细胞存活率明显提高至84.48%(与模型组相比,P<0.01),同时细胞核形态有明显改善;细胞内的ERK蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2表达量明显增加(P<0.01);Caspase-3激酶活力明显降低。结论 TFSA对皮质酮诱导损伤的C6细胞具有保护作用,其机制可能与TFSA能激活C6细胞内ERK通路,提高抗凋亡蛋白Bcl-2表达,降低Caspase-3激酶活性有关。     

姜黄素抑制C6胶质瘤细胞增殖＼诱导其凋亡的分子机制

PTEN基因是近年来发现的、继P53之后又一重要的抑癌基因，其突变率在胶质细胞瘤中约占40％。姜黄素（Cureumin）是否可以通过诱导野生型PTEN基因的表达而抑制脑胶质瘤细胞增殖和／或促进其凋亡，目前国内外尚无报道。目的观察Cureumin是否上调胶质瘤细胞野生型PTEN基因的表达而抑制脑胶质瘤细胞增殖和／或促进其凋亡并探讨其分子机制。方法采用大鼠胶质瘤细胞株（C6细胞）：MTT观察Curcumin对C6细胞存活增殖的影响；通过荧光标记的BrdU抗体，品微镜下观察Curcumin对C6细胞分裂增殖的影响；碘化丙啶（propldium iodide，PI）经流式细胞仪测定Curcumin对C6细胞周期的阻滞；用荧光染料AnnexinV—PE和7-AAD借助于流式细胞仪观察Curcumin对C6细胞早期凋亡的影响；DCFDA荧光探针检测Curcumin诱导的细胞内活性氧的产生；     

没食子儿茶素没食子酸酯对MPP~+诱导大鼠PC12细胞凋亡的拮抗作用

目的探讨没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对MPP+诱导大鼠PC12细胞凋亡的拮抗作用。方法培养PC12细胞给予MPP+(900μmol.L-1)诱导细胞凋亡,实验分为6组:空白对照组、MPP+组、维生素E(10μmol.L-1)组和EGCG高(100μmol.L-1)、中(50μmol.L-1)、低(10μmol.L-1)剂量组。药物处理0.5h后,加入MPP+损伤细胞,4h后取细胞测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,MTT法检测细胞活力,Hoechst33342荧光染色法和流式细胞术检测细胞凋亡,透射电镜观察凋亡细胞线粒体形态结构改变。结果MPP+处理后,细胞活力下降,LDH漏出量增加,细胞凋亡率增加,线粒体肿胀,出现空泡和嵴断裂等细胞凋亡征象。维生素E和不同剂量EGCG处理后,明显提高细胞活力,降低LDH漏出和细胞凋亡率,并减少MPP+引起的线粒体结构损伤。结论EGCG具有抑制MPP+诱导的大鼠PC12细胞凋亡作用,其作用与保护细胞线粒体结构的完整性有关。     

远志寡糖酯A对C6细胞MAPK/ERK信号通路的影响

目的探究远志寡糖酯A(tenuifoliside A)对大鼠胶质瘤细胞(C6细胞)的神经营养作用及可能机制。方法远志寡糖酯A 60,30,10,6,3和0.6μmol·L-1处理C6细胞24 h,MTT法检测检测细胞存活率;远志寡糖酯A 10μmol·L-1处理C6细胞0,5,10,15,30,45,60,120 min,Western blotting测定C6细胞中p-ERK,ERK,BDNF的表达水平;选取各有效剂量分别处理C6细胞24 h,蛋白免疫印记法测定C6细胞中BDNF的表达水平;用ERK1/2特异性拮抗剂U0126 10μmol·L-1预处理C6细胞30 min,再用远志寡糖酯A 10μmol·L-1处理15 min,Western blotting检测p-ERK,ERK,BDNF的表达水平。结果与正常组细胞相比,30,10,6和3μmol·L-1剂量能促进C6细胞增殖,60μmol·L-1剂量对C6细胞有抑制作用,远志寡糖酯A 0.6μmol·L-1剂量对细胞增殖作用不明显;远志寡糖酯A诱导C6细胞中ERK1/2磷酸化具有时效性,在5 min起效,15 min时ERK1/2磷酸化水平达到最高峰,1 h后回落;不同浓度的远志寡糖酯A促C6细胞内BD-NF表达呈剂量依赖性;和溶剂组相比,ERK1/2拮抗剂处理组的p-ERK,ERK,BDNF的表达水平显著降低。结论远志寡糖酯A对大鼠胶质瘤细胞有促增殖作用,其机制可能与激活MAPK/ERK通路,磷酸化ERK1/2,进而促进CREB磷酸化,最终促进BDNF表达有关。     

银纳米颗粒增强磁流体热疗对脑胶质瘤C6细胞的杀伤作用

目的研究20 nm银纳米颗粒(AgNPs)对脑胶质瘤C6细胞磁流体热疗的作用。方法脑胶质瘤C6细胞分为对照组、AgNPs组、磁流体热疗组和AgNPs结合磁流体热疗组。通过集落形成实验检测20 nm AgNPs对脑胶质瘤C6细胞热疗的效果;流式细胞术检测AgNPs对细胞周期和凋亡率的影响;HE染色检测AgNPs对荷瘤鼠磁流体热疗凋亡的影响。结果与对照组比较,20 nmAgNPs能够引起脑胶质瘤C6细胞G2/M期阻滞,并使细胞在接受磁流体热疗后凋亡率显著提高(P<0.05)。结论银纳米颗粒能提高脑胶质瘤C6细胞的热敏感性。     

神经酰胺诱导鼻咽癌细胞凋亡

目的　了解第二信使神经酰胺信号转导对鼻咽癌细胞生长的影响。方法　采用MTT法检测神经酰胺对鼻咽癌细胞株 (CNE 2 )增殖的抑制作用。光镜观察、荧光染色、流式细胞术检测细胞凋亡改变。Westernblot法检测p2 1WAF1的表达。结果　神经酰胺在 6 2 5、12 5、2 5、5 0 μm浓度下 ,对CNE 2细胞生长有明显的抑制作用 ,流式细胞仪检测发现亚G1峰出现 ,荧光染色可见核荧光强度增加、核片段化和凋亡小体。p2 1WAF1蛋白表达明显上调。结论　神经酰胺能诱导鼻咽癌细胞株CNE 2凋亡 ,且上调 p2 1WAF1蛋白表达。p2 1WAF1可能是神经酰胺诱导鼻咽癌细胞凋亡中起作用的因素之一。     

多硫代二酮哌嗪类化合物C87体外对肿瘤细胞生长的抑制作用及对活性氧产生的影响

目的研究多硫代二酮哌嗪类化合物C87对肿瘤细胞生长的影响及其可能机制。方法用磺酰罗丹明B法观察C87 0.05~1μmol·L-1与A549,HCT116,He La和SMMC7721作用24,48和72 h对肿瘤细胞存活率的影响,并计算50%生长抑制浓度(GI50);用流式细胞术检测C87 0.1~2.5μmol·L-1作用HCT116和He La细胞6 h,C87 2.5μmol·L-1作用0~6 h活性氧(ROS)的生成量;用流式细胞术检测C872.5μmol·L-1伴随给予抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)作用HCT116和He La细胞6 h ROS的生成量;用SRB法观察C87 0.05~1μmol·L-1伴随给予NAC作用24和48 h对HCT116细胞存活率的影响。结果C87 0.05~1μmol·L-1作用24,48和72 h,可明显抑制A549,HCT116,He La和SMMC7721细胞存活(P<0.05),且具有浓度依赖性(72 h,r2=0.946,0.989,0.973和0.984,P<0.05);C87 1μmol·L-1与上述4种肿瘤细胞作用24,48和72 h能时间依赖性地抑制细胞存活(r2=0.983,0.956,0.951和0.873,P<0.05)。C87 0.25~2.5μmol·L-1与He La细胞和HCT116细胞作用6 h,可诱发细胞内ROS产生,且呈浓度依赖性(r2=0.760,P=0.045;r2=0.987,P=0.001);C87 2.5μmol·L-1作用0.5~6 h,诱导ROS的产生呈时间依赖性(r2=0.886,P=0.017;r2=0.994,P=0.000)。给予抗氧化剂NAC后能明显抑制C87引起的He La细胞和HCT116细胞ROS生成(P<0.05),NAC 5和10 mmol·L-1可明显逆转C87引起的HCT116细胞死亡,GI50值明显增大,作用24 h时GI50为1.446和1.134μmol·L-1(C87处理组为0.513μmol·L-1);处理48 h时GI50为0.882和1.166μmol·L-1(C87处理组为0.333μmol·L-1)。结论化合物C87对A549,HCT116,He La和SMMC7721肿瘤细胞的生长具有抑制作用,其机制可能与其诱导细胞内氧化应激有关。     

斑蝥酸钠维生素B6注射液体外诱导胶质母细胞瘤U87凋亡作用

目的体外实验观察斑蝥酸钠维生素B6注射液(SCV)对人脑胶质瘤细胞系U87的作用。方法铺板细胞随机分为4组,对照组、SCV组、替莫唑胺(TMZ)组、SCV与替莫唑胺双药联合用药组,然后3个用药组内分别设置5个不同浓度,其中SCV组(2,4,8,16,32μmol·m L-1),替莫唑胺组(100,200,300,400,500μmol·m L-1),双药联合用药组(SCV 4μmol·m L-1配伍替莫唑胺100,200,300,400,500μmol·m L-1),CCK-8检测药物作用12,24,36,48 h后4组U87细胞增值情况;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期变化;荧光显微镜下检测细胞形态学变化。结果 SCV及替莫唑胺均抑制U87细胞增殖,并呈时间浓度依赖性。SCV可将细胞周期阻滞于G2/M期(P<0.05),诱导U87细胞凋亡。经SCV作用后的U87细胞出现凋亡形态。结论 SCV可于体外抑制U87细胞生长增殖并诱导其凋亡。     

Recent developments in C5/C5a inhibitors

Complement factor 5a (C5a) is formed upon complement system activation in response to infection, injury or disease. Whilst C5a is a potent mediator of immune and inflammatory processes, excessive production or inadequate regulation of C5a has been implicated in the pathogenesis of numerous immuno-inflammatory diseases, predominantly through experimental studies utilising animal models of disease. Both acute and chronic conditions may benefit from C5a inhibition, including rheumatoid arthritis, inflammatory bowel disease, asthma, psoriasis, haemorrhagic shock and neurodegenerative conditions. The potentially broad clinical application for treatments that inhibit the activity of C5a at C5a receptors and the large global market for anti-inflammatory therapeutics have made C5a and the C5a receptor attractive targets for academic and commercial drug development programmes. In the past 5 years, interest in C5a as a drug target has grown substantially, and this activity has resulted in a collection of patents and scientific papers reporting novel C5a and C5a receptor inhibitors and antagonists, and generated a secondary stream of patent applications broadly claiming the use of C5/C5a inhibitors as a method of treating various immune and inflammatory conditions. This paper will review the physiology and pathophysiology of C5a and discuss the development of C5a and C5a receptor inhibitors in light of the recent scientific and patent literature.     

头孢菌素C生产工艺改进的研究Ⅰ.头孢菌素C新菌种C82—123发酵工艺研究

对Cephalosporium acremonium C82-123发酵过程中的温度,通气,pH调节,碳、氮源等组份的用量,氨水等的补料以及蛋氨酸的诱导作用进行了研究。采用改进后的发酵工艺,使该菌种在7 L 玻璃发酵罐中的发酵效价提高三倍以上。     

补体C5a、C5a受体及其拮抗剂的研究进展

C5a是最重要的补体活化产物之一,它与相应的C5a受体结合被激活后,参与了多种疾病的病理过程,如急性肺损伤、脓毒血症、类风湿性关节炎、肾小球肾炎等疾病。如何阻断C5a信号的下传,从而减轻炎症反应一直是免疫学研究的热点问题。目前C5a和C5a受体的拮抗剂主要分为抗C5a抗体、小分子拮抗剂、C5a反义肽、C5a突变体和细菌来源的趋化抑制蛋白等。本文着重介绍C5a和C5a受体的结构与功能,以及相关拮抗剂的研究进展。     

发病时LDL-C/HDL-C数值对脑梗死预后的影响

目的:旨在探讨发病时LDL-C/HDL-C数值对脑梗死预后的影响,从而为脑梗死判定预后提供临床指导。方法:⑴82例脑梗死患者入院时均由我院神经专科医师应用mRS及NIHSS量表进行评分,建立卒中登记。入院后第2天检查血脂分析LDL-C/HDL-C数值将其余指标分别分成增高组及正常组,如LDL-C/HDL-C>3为增高组(L1),≤3为正常组(L0)。并且进行mRS、NIHSS评分,分析各个组之间与评分的相关性,对入选人1月及3月后再次进行mRS、NIHSS评分。结果:急性脑梗死入院时,L1组占69.5%,LDL-C/HDL-C比值与mRS及NIHSS评分正相关,且发病1月及3月后两组mRS、NIHSS评分仍有显著性差异(P<0.01)。结论:LDL-C/HDL-C比值越大,发病时病情越严重,预后越差。     

丝裂霉素C及其磁性纳米球在小鼠体内相关药动学参数的比较

目的　比较丝裂霉素C磁性纳米球胶体溶液与丝裂霉素C在小鼠体内的血药浓度及相关药动学参数。方法　采用HPLC法 ,测定小鼠经尾静脉注射丝裂霉素C或丝裂霉素C磁性纳米球胶体溶液 (1mg·kg-1·d-1)后 ,在小鼠体内的血药浓度 ,从而得出药—时曲线及相关药动学参数。将血药浓度经SPSS10 .0统计软件进行配对t检验。结果　在小鼠体内 ,丝裂霉素C磁性纳米球胶体溶液的血药浓度明显高于丝裂霉素C ;胶体溶液药—时曲线下面积AUC较丝裂霉素C大 ,表观分布容积Vc较丝裂霉素C小 ,清除率Cl较丝裂霉素C慢 ;胶体溶液和丝裂霉素C在小鼠体内的血药浓度具有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论　丝裂霉素C制成磁性纳米球胶体溶液 ,在外加磁场的作用下可延长在血浆中的停留时间 ,降低血管外分布量 ,减慢清除。可望提高药效 ,减少不良反应。     

滇钩藤化学成份研究

目的　研究滇钩藤(Uncaria yunnanensis Hsia.C.C)根的化学成分。方法　运用各种色谱技术进行分离,用IR,MS,¹HNMR,¹³CNMR,2DNMR等光谱技术鉴定化合物。结果　得到7个化合物,分别鉴定为:3β,6β,19α-三羟基乌苏酸(I),23,-去甲基24烯-3β,6β,19α-乌苏酸(II),6β,19α-二羟基-乌苏酸-3-酮(III),齐墩果酸(IV),5,7,3′,4′-四羟基-黄烷-3-醇(V),β-育亨宾(VI)和滇钩藤碱I(VII)。结论　VII为新化合物,其余化合物均为首次从该植物中分得。     

HPLC法测定Vc银翘片中维生素C和对乙酰氨基酚的含量

目的：建立高效液相色谱法同法测定Vc银翘片中维生素C和对乙酰氨基酚的含量。方法：采用C18拄，以乙腈-0．05mol／LKH2PO4溶液-三乙胺-H2PO4（10：90：0．02：0．03）为流动相，检测波长249nm。结果：维生素C的浓度在10～160μg／ml范围内线性关系良好，r=0．9999，对乙酰氨基酚的浓度在20～320μg／ml范围内线性关系良好，r=0.9997。平均回收率：维生素C 98．6％，RSD=1．2％（n=5）；对乙酰氨基酚99．7％，RSD％=0．8％（n=5）。结论：本方法测定Vc银翘片中维生素C和对乙酰氨基酚的含量准确，方便快捷，且分离效果好。     

Role of Complements C3 and C5 in the Phagocytosis of Liposomes by Human Neutrophils

During the course of a previous investigation, we noticed that the uptake of liposomes by human polymorphonuclear neutrophils (PMNs) was significantly lower in the presence of heat-inactivated serum compared to that in intact whole serum (Scieszka et al., Pharm. Res. 5:352, 1988). This observation suggested the participation of heat-labile complement components in the phagocytic process. In this report we conclude that complement C3bi is the component responsible for opsonization of the liposome surface. Phagocytosis was not supported by C3-deficient serum, and phagocytosis in whole serum was blocked by the antibody to the receptor for C3bi (CR3) but not by the antibody to the receptor for C3b (CR1). We also found that with C5-deflcient serum the level of uptake was minimal but slightly higher than without any serum. When exogenous C5a was added along with C5-deficient serum, uptake levels similar in magnitude to those observed with intact serum were obtained. We conclude that C5a enhances phagocytosis of opsonized liposomes by activating the phagocytic capacity of CR3 on the PMN.     

Arecoline inhibits and destabilizes agrin-induced acetylcholine receptor cluster formation in C2C12 myotubes

Areca nut (Areca catechu) is chewed as a medical and psychoactive food by roughly 10% of the world population. Areca nut chewing may lead to low birth weight, premature delivery and impaired muscle development. Our previous study showed that arecoline, a major alkaloid in the areca nut, inhibited the myogenic differentiation of C2C12 myoblastic cells. The clustering of acetylcholine receptors (AChRs) in the postsynaptic membrane at the neuromuscular junction (NMJ) by agrin, a signaling protein released by motor neurons, is critical for the development of functional muscles. Here, we further investigate whether arecoline affects the AChR clustering using cultured C2C12 myotubes. Rhodamine-conjugated α-bungarotoxin was used to detect the presence of AChR clusters. Our results showed that arecoline inhibited the formation of agrin-induced AChR clusters and destabilized agrin-induced or spontaneous AChR cluster formation. In addition, arecoline inhibited the expression of myogenin in C2C12 myotubes. These results shed light on the important role of arecoline on the detrimental effect of areca nut to muscle development.     

细胞色素C的制备工艺改进

采用胶体磨和碟片式离心机,对细胞色素C制备工艺进行了改进。解决了生产过程中的一些问题,工时缩短,收率提高。