HBV和AFB1引起树鼩肝癌形成过程中IGF-Ⅱ蛋白表达的动态观察

目的:观察不同病因如黄曲霉毒素B1(AFB1)和(或)人乙型肝炎病毒(HBV)诱发树鼩肝细胞癌(HCC)形成过程中,胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)的动态变化.方法:成年树鼩按不同处理分为A(HBV+AFB1)、B(HBV)、C(AFB1)、D(空白对照)4组.各组动物定期肝活检;存活动物于实验160周时处死.各次活检以及处死的动物肝组织均用免疫组化S-P法进行IGF-Ⅱ蛋白表达的检测,并辅以常规病理组织学及HBsAg等HBV感染标志的检查.结果:HCC的发生仅见于A、C组,分别为66.7%(14/21)和30.0%(3/10),该两组的IGF-Ⅱ阳性率曲线亦高于其余两组,其中C组的曲线虽曾在实验中期高于A组,但不稳定;A组则于实验期间一直较稳定地保持在较高水平.B组仅有大增生结节但无HCC发生,该组的IGF-Ⅱ阳性表达率曲线在3个实验组中最低,仅高于空白对照D组. 结论:IGF-Ⅱ在HCC的形成过程中呈较稳定、高水平的表达,但这种现象与HCC的诱发因素为化学致癌物还是病毒致癌因素无关.     

Survivin与p21waf-1在大鼠肝细胞癌变过程中的动态表达及其相关性的研究

目的:动态观察黄曲霉毒素B1(AFB1)在诱发大鼠肝细胞癌(HCC)过程中survivin 及p21waf-1表达的变化及它们在HCC发生发展中的关系.方法:用免疫组化及RT-PCR检测24只用AFB1诱发出的大鼠肝癌及癌旁肝组织、6只未诱发出肝癌的大鼠及11只对照大鼠不同时期肝活检组织中的survivin与p21waf-1基因和蛋白表达.结果:①HCC组织中survivin阳性率41.67%、癌旁肝组织54.17%;未发生肝癌及对照组大鼠活检肝组织,均未检出survivin蛋白(P<0.01);②HCC及癌旁肝组织中survivin mRNA的表达水平显著上调(P<0.01);③HCC及癌旁肝组织p21waf-1蛋白阳性率明显低于58周未出癌及对照组大鼠肝组织(P<0.01);④出癌大鼠p21waf-1 mRNA表达水平在HCC形成过程逐渐下调(P<0.01);⑤在HCC形成中,survivin与p21waf-1表达呈负相关.结论:在HCC形成的早期p21waf-1mRNA表达的下调逐渐失去抑制细胞增殖、促进细胞分化功能,使细胞增殖,而survivin mRNA表达上调,抑制细胞凋亡,两者在HCC形成过程中可能发挥协同作用.     

用原位杂交对HBV和AFB_1与树鼩肝癌发生关系的研究

用生物素标记的HBV DNA探针对经83～158周实验的55只树鼩肝组织的福尔马林固定、石蜡包埋的切片进行原位杂交研究。有45只树鼩接种过HHBV,在肝细胞检出HBV DNA的有30只,另15只肝内HBV DNA阴性。这55只树鼩,有41只摄入了AFB_1,其中肝HBV DNA阳性的A组22只有10只发生PLC;19只HBV DNA阴性的B组,只发现2例PLC。两组差别显著(P<0.05)。未接触过AFB_1的14只树鼩中,肝内HBVDNA阳性的8只(C组),有1例出现PLC;而HBV DNA阴性的6只(D组)无PLC发生。结果表明:HHBV和AFB_1在PLC发生中起协同作用,支持了HHBV感染与PLC存在病因学关系的观点。     

AFB1和HBV致肝细胞癌的分子机理

肝细胞癌（HCC）是世界上常见恶性肿瘤之一。黄曲霉素B；（AFBl）摄人和乙型肝炎病毒（HBV）感染为主要的致肝癌病因。从分子水平研究HCC发生的机理，自80年代以来已取得了相当大的进展“’。许多研究表明，细胞的DNA是化学致癌剂作用的主要靶分子，而这些靶分子又主要是原癌基因和抑癌基因。当原癌基因发生点突变、基因扩增、基因重排、信号传导系统改变、调控异常等变化，通过一系列分子生物学机制，最终导致所编码的蛋白发生质和量的改变；在多种癌基因作用下，细胞发生恶性转化，终致肿瘤形成并恶性进展”‘。HCC发生过程中涉及…     

黄曲霉毒素诱发大鼠肝细胞癌过程中P38 mRNA表达水平的动态变化

目的：了解P38 mRNA在黄曲霉毒素相关肝细胞癌发生发展过程中的变化情况。方法：取雄性4周龄SD大鼠77只为研究对象,随机分为实验组66只,对照组11只。实验组应用黄曲霉毒素B1诱发肝细胞癌,对照组按正常饲养方法饲养,两组大鼠分别于实验第12、20、36、46周进行肝组织活检,第58周时处死取肝。所有组织标本均进行常规病理组织学检测,并应用RT-PCR检测P38 mRNA的表达水平。结果：实验组存活至实验结束并发生肝细胞癌的大鼠共24只（出癌组）,6只无任何肿瘤发生（未出癌组）,对照组11例均未发生肿瘤。各组大鼠均可检出不同程度的P38 mRNA表达,其表达水平与黄曲霉毒素B1作用时间无明显关系,但肝癌组织较癌旁组织及其正常肝组织明显增强（P〈0.05）。结论：黄曲霉毒素B1诱发大鼠肝细胞癌组织P38 mRNA的表达水平明显上调,P38 MAPK通路在黄曲霉毒素B1相关肝细胞癌发生时可能处于异常激活状态。     

HBV和AFB1引起树Qu肝癌形成过程中IGF—Ⅱ蛋白表达的动态观察

目的 观察不同病因如黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１）和（或）人乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）诱发树Ｑｕ肝细胞癌（ＨＣＣ）过程中,胰岛素样生长因子Ⅱ（ＩＧＦ－Ⅱ）的动态变化。方法 成年树Ｑｕ按不同处理分为Ａ（ＨＢＶ＋ＡＦＢ１）、Ｂ（ＨＢＶ）、Ｃ（ＡＦＢ１）、Ｄ（空白对照）４组。各组动物定期肝活检;存活动物于实验１６０周时处死。各次活检以及处死的动物肝组织均用免疫组化Ｓ－Ｐ法进行ＩＧＦ－Ⅱ蛋白表达的检测,并辅以常规     

肝细胞异型增生的产生及其与肝细胞癌发生关系的实验研究

82只实验树鼩分为四组:A组26只,感染了HBV并同时给予AFB_1;B组34只,未感染HBV但给予AFB_1;C组13只,只感染了HBV;D组9只,既未感染HBV,又未接触AFB_1.实验158周.A组发生LCD16例(61.53%),其中9例发生HCC(56.25%).B组出现LCD18例(52.94%),其中3例发生HCC(16.66%).C组出现LCD 6例(46.15%);D组无LCD产生.82只树鼩有40只出现LCD,其中12只发生HCC(30%).而无LCD的42只,只有1例(C组)产生HCC(2.38%).LCD阳性组发生HCC的相对危险性为LCD阴性组的12.6倍.感染了HBV的树鼩,其LCD发生率显著高于未感染者(P<0.05);而在未感染HBV的动物中,摄入AFB_1的,其LCD发生率也同样比未摄入者高(P<0.05).表明HBV和AFB_1都能诱发LCD;LCD是HCC的癌前病变.     

黄曲霉素素B1诱发鲫鱼肝细胞癌的实验研究

本文报道用含５－３０ｐｐｂ黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１）饲料连续喂养鲫鱼（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ ａｕｒａｔｕｓ Ｌ）诱发鱼肝癌，２４周后处死，实验组１６尾鲫鱼中有５尾出现原发性肝细胞癌，肝癌诱发率为３１．２％。对照组鲫鱼均未见肝脏组织癌变。ＡＦＢ１诱发的鱼肝癌为灰白色肿块，癌细胞异型性明显，围绕血管排列成巢状或实质团块状。     

MicroRNA--429表达与肝细胞癌预后的关系研究

摘要：目的探讨MicroRNA--429（miR--429）在肝细胞癌（Hepatocellularcarcinoma,HCC）中的表达情况及其与HCC临床病理特征和预后的关系。方法收集来自黄曲霉毒素BI高暴露区TNM分期为l～Ⅱ期的HCC患者（138例）手术切除标本,通过TaqMan--PCR技术检测miR--429在癌组织、癌旁组织、肝癌细胞株SMMC--7721以及非肝癌细胞．株QsG-7701中的表达情况,通过风险比例回归模型及逻辑回归模型分析miR--429表达与HCC临床病理学特征以及预后的关系。结果与癌旁组织相比,miR--429在HCC癌组织中的表达水平上调,升高约4倍（P〈O．01）,细胞学实验有类似发现;miR-429表达水平与HCC肿瘤大小及AFBl-DNA加合物水平相关-风险值分别为3．13（1．47～6．67）和2．70（1．28～5．56）;高miR--429表达影响HCC5年期总体生存率及肿瘤无复发生存率（P〈O．01）,增加总体死亡风险及肿瘤复发风险分别为3．64倍和5．94倍。结论miR--429表达参与HCC肿瘤化过程,并影响HCC预后。     

黄曲霉毒素B1与乙肝病毒协同诱发树鼩肝癌形成过程中的差异表达蛋白

目的 比较黄曲霉毒素B1(AFB1)与乙肝病毒(HBV)协同诱发树鼩肝细胞癌生长不同阶段的蛋白质表达谱的改变,筛查在AFB1与HBV共同诱发的肝癌发生发展中起重要作用的关键蛋白质分子.方法 用双向凝胶电泳(2-DE)及基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱法(MALDI-TOF-MS/MS)对同一动物自身的癌发生前的肝组织(C45w)、癌发生后的肝癌组织(Cca)及未经AFB1处理的对照组动物肝组织(E45w、E105w)进行了相互比较.结果 C45w组、Cca组、E45w、E105w组分别平均检测到(1 233±30)个蛋白点(n=3),(1257±35)个蛋白点(n=3),(1 249±51)个蛋白点(n=3)和(1 208±36)个蛋白点(n=3).以各组中2-DE效果好、点数多的一块胶作为参考胶,分别进行两组间的匹配分析(E45w vs C45w、C45w vs Cca、E45w vs E105w),筛选出两组之间差异大于或等于2倍的蛋白点65个.应用质谱鉴定出细胞色素C氧化酶等25种胶内差异蛋白质.结论 在AFB1与HBV共同诱发的树鼩肝癌发生发展不同阶段有明显的差异性蛋白表达谱,为进一步对人肝癌蛋白质组的研究提供了线索.     

树鼠句血清ALT改变与感染乙肝病毒量的关系

为研究树血清ＡＬＴ改变与感染乙肝病毒量的关系，将５０只树随机分成５组。将美国ＮＩＨ提供的ＨＢＶ含量为１０８ＣＩＤ／ｍｌ的标准感染血清稀释成１０－６～１０－１０共５个稀释度，分别接种于各组动物。实验观察１６周。５种稀释度的感染血清引起５组树血清ＡＬＴ升高的潜伏期和持续时间依次为：１５ｄ和２５ｄ、１３ｄ和２６ｄ、１５ｄ和２１ｄ、２３ｄ和９ｄ、２８ｄ和８ｄ。其感染率依次为８０．０％、８８．９％、６６．７％、５５．６％及４２．９％。表明树肝细胞受损程度与攻击的ＨＢＶ量有密切关系，对人ＨＢＶ易感，是验证治疗乙肝药物效果的较好的动物模型。     

人乙型肝炎病毒在树鼩中传代感染的研究

用人乙型肝炎病毒(HHBV·)感染树鼩(Tree shrews)后,取其HBsAg及(或)HBeAg阳性的树齣血清传代感染另一批树鼩;18只树鼩分四批感染至第四代,经检测发现17只树鼩血清或肝细胞中HBV标志物阳性(94.4%);血清转氨酶(SGPT)升高,肝组织有不同程度的炎症变化。此结果表明HHBV能够在树鼩间连续传代复制,为人乙型肝炎病毒感染树鼩动物模型的建立提供又一佐证。     

树鼩部分信号转导通路的相关cDNA芯片的建立

目的：建立树鼩部分信号转导通路的相关cDNA芯片,从而进一步探讨肝细胞癌（HCC）发生的分子机制。方法：在基因库中找出人的信号转导通路相关基因mRNA序列,选取其中与大、小鼠高度同源的片段,设计出相关的引物序列,然后用树鼩正常肝组织的cDNA为模板经PCR扩增出树鼩相应基因的cDNA片段,将这些cDNA片段作为树鼩的特异性探针,进而建立起树鼩部分信号转导通路的相关cDNA芯片。结果：得到涉及信号转导通路相关基因的探针共有152个基因。结论：利用该芯片研究树鼩HCC发生过程中信号转导通路中的作用将有重要的实用价值,从而完善树鼩肝癌动物模型的研究。     

糖尿病树鼩与人类糖尿病骨骼肌微血管超微病变的比较

目的：比较树鼩糖尿病模型与人类糖尿病骨骼肌微血管超微病变的异同点。方法：将高糖高脂喂养诱导树嗣糖尿病成模7周后的骨骼肌标本，以及伴糖尿病肾病和(或)糖尿病视网膜病变的糖尿病患者骨骼肌标本，经常规电镜制样处理后，分别对骨骼肌微血管超微病变进行观察。结果：树鼩骨骼肌微血管超微结构与人类基本相似，但前者微血管三层结构明显较人类薄。糖尿病树鼩骨骼肌微血管病变主要表现为内皮层向管腔突起，使管腔狭窄，但基底膜改变不明显；人类糖尿病骨骼肌微血管超微病变表现为内皮明显肿胀增厚，管腔狭窄明显，可有内皮破损现象，管壁可见血浆蛋白样物质附着，最突出的改变为基底膜的广泛性增厚。结论：实验性糖尿病树鼩在高血糖状态的早期阶段，骨骼肌微血管超微病变主要发生在内皮层，微血管基底膜无明显改变；而糖尿病患者骨骼肌微血管超微改变与树鼩最大的不同点在于，其微血管基底膜改变非常显著，呈广泛性增厚，这可能与其病程较长有关。     

慢性粒细胞白血病病人Mcl-1和Bcr/Abl基因表达

目的 探讨慢性粒细胞白血病(CML)病人Mcl-1基因和Bcr/Ab1融合基因的表达水平及临床意义.方法 应用实时荧光定量PCR技术检测了41例CML病人(包括慢性期15例、加速期6例、急变期6例、伊马替尼治疗后遗传学完全缓解8例及非伊马替尼治疗的未缓解的CML病人6例)骨髓标本Mcl-1基因、Ber/Abl融合基因的表达水平,以10例正常人作为对照.结果 CML各组Mcl-1和Ber/Abl mRNA的表达水平差异均有显著性(X<'2>=19.12～36.08,P<0.05).伊马替尼治疗组与正常对照组Mcl-1 mRNA的表达明显低于其他各组(Z=2.547～3.254,P<0.05);加速期、急变期及非伊马替尼治疗组之间Mcl-1 mRNA的表达水平差异无显著性(Z=0.481～1.922,P>0.05),但均明显高于慢性期(Z=2.650～3.465,P<0.05).Bcr/AblmRNA在慢性期、加速期、急变期及非伊马替尼治疗组之间表达差异无显著性(Z=0.480～1.196,P>0.05).CML病人Mcl-1与Ber/AblmRNA的表达水平呈正相关(r=0.68,P<0.05).结论 Mcl-1和Ber/Abl与CML的病情密切相关,参与CML的发生和发展,是判断病情进展及预后的分子标记物.     

HBs和HBx基因在HCC家庭聚集性中的作用研究

目的 :探讨 HBs(S基因 )和 HBx基因 (X基因 )在原发性肝细胞癌 (HCC)家庭聚集性中的作用 ,为制定 HCC预防对策提供科学依据。方法 :应用配对原则在肝癌高发区选择肝癌高发家庭成员的同时 ,选择相同生活环境、生活习惯、生活条件和生活水平、同民族、同性别 ,年龄± 5岁的非癌家庭成员作为研究对象。采用 PCR技术和探针杂交法及免疫荧光显影技术对研究对象外周血清中 S和 X基因进行检测 ,应用配对χ2 检验进行统计分析。结果 :S基因在 HCC高发家庭成员组中的阳性率显著高于非癌家庭成员组 ;两组的男、女性及男女合并后的阳性率及分别为 6 0 .5 % (4 6 / 76 )、5 2 .9% (1 8/ 34)、5 8.2 % (6 4 / 1 1 0 )和1 5 .8% (1 2 / 76 )、2 9.4 % (1 0 / 34)、2 0 .0 % (2 2 / 1 1 0 ) (P <0 .0 0 5、 P <0 .0 5、 P <0 .0 5 )。 X基因在 HCC高发家庭成员组中的阳性率亦显著高于非癌家庭成员组 ,两组的男、女性及男女合并后的阳性率分别为 2 6 .3% (2 0 / 76 )、1 4 .7% (5 / 34)、2 2 .7% (2 5 /1 1 0 )和 2 .6 % (2 / 76 )、8.8% (3/ 34)、4 .5 % (5 / 1 1 0 ) (P <0 .0 0 5、 P >0 .0 5、 P <0 .0 0 5 )。结论 :HBV的 S基因和 X基因与 HCC的家庭聚集性存在密切关系。 S基因的检出率比 X基因检出率高 ,可作为 HB