糖尿病对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响

目的:探讨AGE-RAGE系统对糖尿病大鼠自体移植静脉内膜增生的作用。方法:雄性SD大鼠40只，随机分为糖尿病组及正常对照组。两组均建立自体静脉移植模型，制模后的7 d和14 d测定血清AGE含量，取自体静脉移植标本行组织形态学观察，半定量RT-PCR检测RAGE，NF-κB p65及VCAM-1mRNA的表达，Western蛋白印迹和免疫组化方法检测RAGE，NF-κB p65及VCAM-1蛋白表达,并用免疫组化方法检测PCNA的表达。结果:术后7 d及14 d，与对照组比较，糖尿病组自体移植静脉内膜增生明显为重，PCNA，RAGE，NF-κB p65及VCAM-1mRNA和蛋白表达均增强，血清AGE含量增加，差异均有统计学意义（均P<0.05）。 结论:AGE-RAGE系统激活NF-κB，增强黏附分子的表达，可能是糖尿病大鼠自体移植静脉内膜增生加重的原因。     

联合转染P21基因和c-Fos反义核酸对自体移植静脉内膜增生的影响

目的 探讨联合转染P^21基因和c—Fos反义核酸对自体移植静脉内膜增殖的影响。方法 选择20只新西兰家兔，随机等分为实验组和对照组，均行自体颈外静脉、颈总动脉移植手术，仅实验组移植静脉段行腺病毒介导的P^21基因溶液浸泡、吻合口周围行c—Fos反义核酸凝胶涂布；术后2周取出移植血管，分别行病理学、免疫组织化学检查。结果 实验组移植血管内膜厚度、管腔狭窄度、内膜平滑肌细胞数以及增殖细胞核抗原(PCNA)阳性表达细胞数均较对照组明显减少。结论 联合转染P^21基因反义c—Fos核酸可有效地抑制移植静脉内膜的增生，是一种比较有发展前途的防治移植静脉再狭窄的基因疗法。     

重组arresten蛋白对自体移植静脉内膜增生的抑制作用

目的 观察原核表达人arresten重组蛋白对自体移植静脉内膜增生的抑制作用.方法 用pRSET原核表达系统表达并纯化人arresten重组蛋白.将Wistar大鼠颈外静脉移植于腹主动脉,建立大鼠自体静脉移植模型,实验分3组:假手术组、移植对照组和移植实验组.自术后第3天起,皮下注射给予arresten重组蛋白(每日4 mg/kg体重)处理.4周后取移植静脉组织标本,进行病理组织学观察与免疫组织化学染色分析.结果 移植组移植静脉均呈现典型的内膜增生、肥厚,导致血管管腔狭窄;新生内膜主要有过度增殖的α-SMA染色阳性平滑肌细胞组成.移植实验组移植静脉内膜增生受到明显抑制,新生内膜面积(0.12±0.07)mm2及新生内膜/中膜面积比(0.373±0.085)均显著低于对照组[(0.38±0.11)mm2,1.621±0.086,P<0.01];并且实验组移植静脉新生内膜细胞PCNA标记指数显著低于对照组[(15.62±3.97)%比(56.36±3.49)%,P<0.01].结论 重组arresten蛋白通过抑制新生内膜平滑肌细胞的增殖能有效抑制自体移植静脉内膜增生的发生发展,在防治血管重建术后再狭窄方面显示出良好的应用前景.     

液压扩张对自体移植静脉内膜增生的作用

液压扩张对自体移植静脉内膜增生的作用△⒇钱济先黄耀添王军吕荣⒇自体静脉是中小动脉伤病和心脑血管病血流重建术的首选材料，往往作为其它移植材料的参照标准，尽管如此，自体静脉移植仍有一定的晚期栓塞率，１年１７％，３年３８％，５年５９％，呈逐年递增趋势〔１〕...     

转染单纯疱疹病毒胸苷激酶基因抑制移植静脉内膜增生

目的探讨腺病毒载体转染单纯疱疹病毒胸苷激酶（herpes simplex virus thymidine kinase，HSVtk）基因对移植静脉内膜增生的作用。方法用Wistar大鼠建立自体静脉移植模型。以载有HsVtk（4&#215;10^9 plaque forming units）基因的腺病毒孵育颈静脉，将静脉倒置移植于肾下腹主动脉。从移植术后第3d开始腹腔注射丙氧鸟苷[ganciclovir，GCV，60mg／（kg&#183;d），2次／d]共21d，取出移植静脉标本后用PCR法检测HSVtk基因的表达，用原位杂交法检测基因的转录；进行弹力纤维染色及增殖细胞核抗原（PCNA）免疫组化染色，观察内膜增生及平滑肌细胞增殖；用TUNEL法观察移植静脉平滑肌细胞凋亡情况。结果移植静脉内膜进行性增厚，新生内膜中有大量增殖状态的平滑肌细胞。移植后第3d，转染HSVtk基因的静脉经PCR扩增出590bp阳性条带，HSVtk基因开始表达mRNA。HSVtk／GCV对静脉内膜增生有明显抑制作用，而单独予以HSVtk对内膜增生无影响[（17．2&#177;3．2）μm vs（31.1&#177;2．5）μm，P〈0．05]。HSVtk／GCV使静脉中平滑肌细胞增殖指数下降为（9．1&#177;2．3）％，凋亡细胞指数升高到（28．7&#177;3．6）％，分别于空白对照组[（38．7&#177;5．6）％，（18．5&#177;2．6）％]相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论HSVtk／GCV系统通过抑制平滑肌细胞增殖及促进细胞凋亡抑制移植静脉内膜增生。     

低剂量β-射线预防自体移植静脉内膜增生和狭窄的实验研究

目的 观察不同剂量^32P照射对兔自体移植静脉（AVG）内膜增生和狭窄的预防作用。方法 用苏木素-伊红（HE）染色、增殖细胞核抗原（PCNA）1免疫组织化学染色和计算机图像分析等方法观察每平方厘米25.9、51.8、103.6和207.2MBq/cm^2^32P照射30min后AVG内膜面积、平滑肌细胞（SMC）增殖和管腔相对丢失率,并与卡托普利治疗效果比较。结果 207.2MBq/cm^2和103.6MBq/cm^2组无明显新生内膜形成,但血管结构,细胞大量坏死;51.8MBq/cm^2组少量新生内膜形成,血管结构完整,内膜面积、SMC增殖和管腔丢失明显低于对照组和卡托普利治疗组;25.9MBq/cm^2组各指标与对照组及卡托普利组差异无显著性。结论 低剂量^32P照射（51.8MBq/cm^2,30min)可有效抑制AVG内膜增生和狭窄,且作用优于卡托普利。     

低能量红激光局部照射对自体移植静脉内膜增生的影响

目的探讨低能量红激光局部照射对自体移植静脉内膜增生的影响.方法取80只大鼠,随机分为单纯自体静脉移植组(对照组,n=40)和低能量红激光局部照射组(激光组,n＝40).两组大鼠分别于术后第3 d、7 d、14 d及28 d取移植静脉段(每时相组各l0只)固定,行HE染色、弹力纤维染色及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色,应用光学显微镜和计算机图像分析系统分析测定其内膜厚度和管腔面积.结果术后第3 d,两组管腔横截面积及内膜平均厚度差异无显著性意义(P＞0.05);激光组术后第7 d、14 d、28 d内膜平均厚度低于对照组(P＜0.05),管腔横截面积明显大于对照组(P＜0.05);PCNA免疫组化染色结果显示,激光组移植静脉平滑肌细胞(VSMC)增殖受到明显抑制(P＜0.01).结论低能量红激光局部照射可以抑制自体移植静脉内膜及VSMC的增生,减少再狭窄的发生.     

氧化应激反应导致大鼠自体移植静脉内膜增生的作用

目的探讨氧化应激反应在自体移植静脉术后内膜增生中的作用。方法将雌性Sprague-Dawley（SD）大鼠70只按随机分组方法分为两组：实验组（60只）,分为移植术后1d、1周、2周、4周、6周和2个月6个时间点,每个时间点10只,建立大鼠自体移植静脉模型,以上6个时间切取移植静脉;对照组（10只）,直接切取同样长度的颈外静脉。应用计算机图象分析仪计算新生内膜面积/中膜面积（neointima to tunica media area,I/M）;应用免疫组织化学方法检测核转录因子-κB（nuclear factor-kappa B,NF-κB）和铜锌超氧化物歧化酶（copper zinc superoxidedismutase,CuZnSOD）;用比色法检测大鼠血清中丙二醛（malondialdehyde,MDA）的含量。结果对照组大鼠NF-κB、CuZnSOD有少量表达。实验组大鼠移植术后NF-κB的表达随着时间的增加逐渐增加,移植术后2周达到高峰,维持1个月左右后逐渐下降,2个月时接近基础水平;CuZnSOD表达逐渐升高,移植术后1周左右达到高峰,持续2～3周逐渐下降至正常水平。对照组血清中MDA含量为4.966±1.346nmol/ml,实验组移植术后大鼠血清中MDA的含量急剧升高,移植术后1d达到高峰（21.161±2.174nmol/ml）,然后逐渐下降,2个月时接近正常水平（6.208±2.908nmol/ml）,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;对照组I/M为0.2096±0.0253,实验组移植术后1周I/M为0.6806±0.0737,4周达高峰（1.4527±0.0824）,6周为1.0353±0.0656,2个月时为0.9583±0.0516,两组差异有统计学意义（P〈0.05）。结论自体静脉移植后内皮细胞损伤导致氧化应激反应,通过激活NF-κB放大炎症反应,在引发移植静脉再狭窄过程中起重要作用     

bcl-2基因短发夹RNA对自体移植静脉内膜增生的影响

目的探讨针对bcl-2基因短发夹RNA对兔自体移植静脉内膜增生的影响。方法18只新西兰白兔,取颈外静脉,用含pshRNA-bcl-2质粒(基因组)或pH1质粒(空载体组)的阳离子脂质体溶液浸泡,空白对照组无特殊处理,间置于同侧颈总动脉。术后4周采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测bcl-2基因的表达,病理形态学观察血管新内膜增生改变。结果基因组移植静脉内膜的bcl-2的mRNA和蛋白均明显受到抑制。组织学检查显示,基因组新内膜厚度为(85．78±5．47)μm,空载体组为(175．2±10．90)μm,差异有统计学意义(P＜0．01)。结论bcl-2基因的短发夹RNA可能通过降低血管bcl-2蛋白的表达抑制移植静脉内膜增生。     

一氧化氮对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响

自体静脉移植术后由于其内膜增生(ＩＨ) ,其远期通畅率仅为 30 %～ 5 0 %。因此 ,如何抑制ＩＨ成为提高疗效的关键。我们建立大鼠自体静脉移植模型 ,通过大鼠口服一氧化氮 (ＮＯ)前体Ｌ 精氨酸 (Ｌ Ａｒｇ)来观察其对ＩＨ的影响。一、材料与方法1.动物及分组 :Ｗｉｓｔａｒ大鼠 30只 ,雄性 ,体重 2 0 0～ 2 5 0ｇ ,随机分为 ,Ａ :实验组 (Ｌ Ａｒｇ)组 ;Ｂ :Ｌ Ａｒｇ ＮＧ 硝基 Ｌ 精氨酸甲脂 (Ｌ ＮＡＭＥ)组 ;Ｃ :对照组。各10只。2 .给药方法 :参照Ｄｅｎｎｉｓ等[1] 方法 ,Ａ、Ｂ组术前 3ｄ开始用Ｌ Ａｒｇ灌胃 (Ｇｉｂ ｃｏ公司 ,1.…     

RNA干扰沉默蛋白激酶B基因表达对移植静脉内膜增生的影响

摘要：目的:观察纳米粒子包载的靶向蛋白激酶B(PKB)基因的shRNA表达载体局部转染对大鼠移植静脉内膜增生的影响。方法:应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)和聚乙烯醇(PVA)包载PKB的RNA干扰基因载体，制备纳米级粒子混合物。建立自体颈静脉-颈总动脉移植模型共72只，随机分成转基因组、空载体组和对照组。分别于术后3，7，14，28 d取材；常规HE及Verhoeff 染色,用Northern blot和Western blot检测PKB基因的mRNA及蛋白的变化，HE和Verhoeff 染色观察内膜厚度，TUNEL法观察血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的动态变化。结果:转基因组内膜中PKB基因的mRNA及蛋白产物表达较其他两组明显减少(P＜0.05)；术后7，14，28 d转基因组静脉内膜增生厚度较其他组明显减少(P＜0.01)；转基因组细胞凋亡率较其他组明显增高(P＜0.05)。结论:纳米粒子可以作为转基因载体；沉默PKB基因表达能有效地抑制自体移植静脉内膜的增生，促进VSMC的凋亡。     

纳米粒子介导反义mTOR基因转染抑制移植静脉内膜增生

目的:观察以纳米粒子为载体的外源性反义雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响。方法:应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)和聚乙烯醇(PVA)包载mTOR基因，制备纳米级粒子混合物。建立自体静脉移植模型72只，随机分成转基因组(转染以纳米粒子为载体的反义mTOR基因)，空载体组(单纯转染纳米粒子包载的空载体)和对照组(不予特殊处理)。分别于术后3，7，14，28d取材。检测mTOR基因的mRNA及蛋白产物表达，以及血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的动态变化。 结果:转基因组内膜中mTOR基因的mRNA及蛋白产物表达较其他两组明显减少(P<0.05)；转基因组内膜增生厚度于7，14，28d较其他组明显减少(P<0.01)；转基因组凋亡细胞较其他组明显增高(P<0.05)。结论:纳米粒子可以作为转基因载体。反义mTOR基因的表达能有效抑制自体移植静脉内膜的增生及促进VSMC凋亡。     

缺血预处理对大鼠胰腺移植的保护作用

目的　探讨缺血预处理对大鼠胰腺移植的远期保护作用。方法　糖尿病大鼠随机分为缺血再灌注组(I/R组, n= 3 0 )和缺血预处理组(IPC组, n= 3 0 ),两组移植前2d,再灌注后3d和7d随机各杀死6只大鼠,取血查血糖及淀粉酶,同时取胰腺组织行HE染色; 6只大鼠用于观测各种代谢指标。其余6只大鼠用来观察大鼠存活率。结果　IPC组1个月存活率高于I/R组( 5 /6∶3 /6, P< 0. 0 1 );再灌注后IPC组各时间点血糖(P< 0. 0 1 )、血淀粉酶(P< 0. 0 1 )、进食量(P< 0. 0 5 )、排尿量(P< 0. 0 1 )和饮水量(P< 0. 0 5 )均低于I/R组;I/R组移植胰的损伤程度大于IPC组。结论　缺血预处理可增加大鼠胰腺移植的存活率,降低血淀粉酶活性,减轻胰腺的再灌注损伤程度,对大鼠胰腺移植具有保护作用。     

部分门静脉动脉化对大鼠肝脏血管铸型变化的影响

目的：探讨用部分门静脉动脉化重建肝血流后对肝脏微血管和组织学的影响。方法：建立大鼠部分门静脉动脉化重建肝脏血流的实验模型，观察该模型大鼠肝脏微血管和组织学的变化。结果：行门静脉动脉化手术后1个月动物肝脏组织未见明显异常。血管铸型标本显示肝窦略变粗，较正常充盈，肝窦无明显变形，仍呈放射状分布于中央静脉的周围。墨汁灌注标本显示肝窦内墨汁灌注规整，略显增宽，颜色均匀并加深。结论：部分门静脉动脉化后在近期内不影响肝脏的微血管及组织学结构。     

转染survivin反义寡脱氧核苷酸对移植血管内膜增生的影响

目的研究survivin基因的反义寡脱氧核苷酸（ASODN）对移植血管内膜增生的影响。方法Wistar大鼠60只，建立自体静脉移植模型，术后随机分为5组：对照组，survivin ASODN 50μg组，200μg组，正义对照组，lipoectin＋pluronic组。分别施加不同的处理因素，在移植后1，2周取材。用组织形态学方法比较内膜增生程度；用半定量RT-PCR检测survivin基因的mRNA表达；Western blot检测survivin基因的蛋白产物表达；免疫组化方法检测survivin及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，TUNEL法检测血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡。结果静脉移植1～2周内膜增生明显，局部转染50μg survivin ASODN后明显抑制内膜增生（P〈0．05），200μg组受抑制程度较50μg组更为显著（P〈0．05）。静脉移植后，对照组survivin的mRNA及蛋白产物表达显著增加，而survivin ASODN组却显著减少（P〈0．05），VSMC中PCNA表达也同时减少，而TUNEL阳性细胞明显增加。结论survivin ASODNs可显著抑制移植静脉的内膜增生；其作用可能是通过抑制survivin的基因及蛋白产物表达，促进VSMC凋亡而实现的。     

冷缺血与热缺血对大鼠肝细胞凋亡的影响

目的:观察冷保存与热缺血对大鼠肝细胞凋亡的影响。方法:用流式细胞检测技术，分组检测冷保存时和热缺血时的肝细胞凋亡率与增殖率。结果:冷保存时各组之间的肝细胞凋亡率与增殖率差异无显著性（P>0.05）；随着热缺血时间的延长，细胞凋亡率明显加重（P＜0.05），但细胞增殖率的改变不明显（P>0.05）。结论:大鼠肝脏冷保存/再灌注时肝细胞凋亡可能在有氧再灌注后加重；大鼠肝脏热缺血/再灌注时肝细胞凋亡可能在缺血时和再灌注后均可加重。     

内源性内皮素转化酶在自体移植静脉术后的动态变化

目的:探讨ET-1及内源性ECE对自体静脉移植术后内膜增生的作用。方法:通过建立自体静脉移植模型，采用RT-PCR和免疫组织化学方法，从mRNA水平和蛋白质水平分析ECE和ET-1在移植静脉的表达及影响。结果:移植术后6 h，吻合口处中膜即出现PCNA阳性平滑肌细胞，并随着时间推移逐渐增高，在1~2周左右达到高峰。2周后，中膜PCNA阳性SMC开始逐渐减少，于术后8周趋于平稳。随着移植术后时间的推移，ET-1的表达与ECE的表达逐渐增高，手术后1~2周达到高峰，2周后表达逐渐下降，于8周左右趋于平衡，ET-1与ECE密切相关(r=0.975)。结论:静脉内膜增生病理过程的发生时间和变化规律与ET-1和ECE表达的动态变化过程吻合，提示ECE参与移植静脉内膜的增殖过程。     

氨基胍对大鼠胰腺移植保护作用的实验研究

目的:探讨诱导型一氧化氮合酶抑制剂氨基胍对大鼠移植胰腺的保护作用。方法:糖尿病大鼠模型30只随机分成3组：（1）空白对照组（n=6），仅开腹手术，不作移植;（2）移植对照组（n=6），仅作胰腺移植;（3）氨基胍处理组（n=18），移植胰腺恢复血运前经阴茎背静脉注入盐酸氨基胍（AG）溶液，剂量分别为60，80，100 mg/kg。再灌注4h后检测血清一氧化氮（NO）水平，血糖以及淀粉酶活性，定量分析胰腺组织中的结构型一氧化氮合酶（cNOS）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活性，并对胰腺进行组织形态学和组织化学检查。结果:与移植对照组比较，氨基胍处理组血NO水平及淀粉酶活性明显降低，胰腺病理损害较轻，其中以AG 80 mg/kg亚组效果更显著（P＜0.01），且该亚组血糖及iNOS活性与表达也明显低于移植对照组（P＜0.01）。结论:诱导型一氧化氮合酶选择性抑制剂氨基胍在大鼠胰腺移植中起到保护作用。其作用机制可能与抑制NO的过量产生，减轻其作为自由基的细胞毒性有关。     

氯化钆对急性坏死性胰腺炎肺泡巨噬细胞分泌炎症介质的影响

目的 ：探讨氯化钆（Gdcl3）对急性坏死性胰腺炎（ANP）肺泡巨噬细胞 (AM)分泌炎症介质的影响。方法 ：90只成年SD大鼠随机分为正常对照组（C组）、ANP组、Gdcl3处理正常对照组（C+Gdcl3组）、ANP Gdcl3预处理组、ANP Gdcl3治疗组。每组18只。各组大鼠均经支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞，行支气管肺泡灌洗液（BALF）中蛋白含量、肺组织髓过氧化物酶（MPO）水平、AM分泌肿瘤坏死因子α（TNF-a）和一氧化氮（NO）水平分析;行血气分析，检测肺湿/干重比值，并行肺组织病理学检查。结果 ：C+Gdcl3组各指标与正常对照组相比差异无显著性（ P >0.05）。ANP Gdcl3预处理组和ANP Gdcl3治疗组除动脉血氧分压外各项指标显著高于正常对照组，差异有显著性（ P <0.05），但与ANP组相比有降低，差异有显著性（ P <0.05）。结论 ：氯化钆可抑制ANP大鼠AM分泌炎症介质，并减轻ANP所致的肺损伤。