N-乙酰-L-半胱氨酸对急性SiO2染尘肺组织基质金属蛋白酶表达的影响

目的观察N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)对急性SiO2染尘肺组织基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响。方法清洁级Wistar大鼠随机分为3组,对照组经气管注入生理盐水,损伤组和干预组注入SiO2粉尘悬液,其中干预组在注入SiO2粉尘悬液前1 h用NAC预处理。3组大鼠分别在染尘后第1,3,7,14,28天取出肺组织,应用免疫组织化学和RT-PCR方法观察其MMP-2和MMP-9蛋白及其mRNA的动态变化。结果损伤组肺组织MMP-2和MMP-9表达均较对照组增高。MMP-2蛋白表达在各时间点分别是对照组的1.440,1.811,2.379,1.672和1.412倍,差异均有统计学意义(P<0.01);mRNA表达分别是对照组的2.061,2.261,2.931,2.000和1.615倍,差异均有统计学意义(P<0.05)。MMP-9蛋白在各时间点分别是对照组的1.450,1.661,2.186,1.563和1.526倍,差异均有统计学意义(P<0.01);mRNA表达在第1,3,7,14天高于对照组,分别是对照组的1.676,2.027,2.584和2.178倍,差异均有统计学意义(P<0.01)。干预组肺组织MMP-2蛋白及mRNA表达在各时间点均低于损伤组,高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。MMP-9蛋白表达在各时间点低于损伤组,高于对照组;mRNA表达在第1,3,7,14天低于损伤组,高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论应用NAC可以部分抑制急性矽尘染毒肺组织表达MMP-2和MMP-9。     

矽肺肺泡巨噬细胞对肺成纤维细胞基质金属蛋白酶及其组织抑制因子表达的影响

目的 探讨矽肺患者的肺泡巨噬细胞(AM)是否通过影响肺成纤维细胞(FB)基质金属蛋白酶(MMPs)/金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)系统参与矽肺纤维化的发生发展。方法 收集矽肺患者AM培养上清,与人胚肺FB共同孵育6、12、18、24、36、48 h,用免疫细胞化学的方法检测FB中MMP-1和TIMP-1的表达。结果 未经SiO2刺激的矽肺患者AM培养上清作用于FB 24 h,FB中MMP-1的表达较空白对照组减少(积分光密度值分别为0.103±0.014、0.133±0.023),TIMP-1的表达增多(积分光密度值分别为0.108±0.012、0.065±0.006);经SiO2刺激24 h的矽肺患者AM培养上清作用于FB后,FB中MMP-1的表达量进一步减少(积分光密度值分别为0.062±0.008、0.133±0.023),而TIMP-1的表达量进一步增加(积分光密度值分别为0.143±0.015、0.065±0.006)。结论 SiO2可能通过AM的介导影响了FB中MMP-1/TIMP-1系统的表达,参与了肺纤维化的形成。     

矽肺肺泡巨噬细胞对肺成纤维细胞基质金属蛋白酶及其抑制因子和胶原表达的影响

目的 探讨经SiO2刺激的肺泡巨噬细胞(AM)通过人胚肺成纤维细胞(HELF)对基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及其抑制因子(TIMP-1)和Ⅲ型胶原表达的影响.方法 收集矽肺患者AM,将其分为加入SiO2粉尘悬液的处理组和仅加入无血清培养液的对照组.培养18 h后吸出培养上清.将原代培养的HELF分为4组:(1)处理组:加入经SiO2刺激的AM上清;(2)对照组:加人未经SiO2刺激的AM上清;(3)10%血清组:仅加入含体积分数为10%胎牛血清的DMEM;(4)空白对照组:仅加入含体积分数为3%胎牛血清的DMEM.4组均分别于6、12、18、24、36、48 h取出细胞爬片,吸出上清,用免疫细胞化学方法 检测HELF中MMP-1和TIMP-1的表达,用Western blot法检测HELF条件培养上清中Ⅲ型胶原的表达.结果 处理组18、24、36、48 h MMP-1表达分别为0.0605±0.0201,0.0519±0.0117,0.0412±0.0105,0.0213±0.0106,较对照组和空白对照组明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).与对照组和空白对照组相比,处理组各时间点TIMP-1表达和Ⅲ型胶原含量明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),TIMP-1/MMP-1与Ⅲ型胶原呈正相关(r=0.88,P<0.01).结论 SiO2经AM的介导可促进FB表达TIMP-1和Ⅲ型胶原,抑制HELF表达TIMP-1,TIMP-1/MMP-1的失衡与Ⅲ型胶原的病理性累积有关.     

N-乙酰-L-半胱氨酸对氰化钠致大鼠线粒体损伤的酶系保护作用

[目的]研究N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对氰化钠(sodium cyanide,NaCN)所致大鼠大脑皮质线粒体损伤的保护作用.[方法]①取SD大鼠66只,按每组6只随机分成11组:第1组,生理盐水(Normal saline,NS)组,腹腔注射NS 10 ml/kg;第2～6组,系按染毒后5个不同时相节点先后处死的NaCN染毒组,均于左侧腹腔注射NS 10 ml/kg,20 min后于右侧腹腔注射NaCN 3.2 mg/kg(亚致死剂量)染毒;第7～11组,系5个也按与上述相同时相节点先后处死的NAC保护组,相同染毒,只是在染毒前20 min先于左侧腹腔注射NAC 250 mg/kg.分别于染毒后5、15、30、60、90 min 5个不同时相节点处死各组,并分离大脑皮质,用比色法测定皮质线粒体内过氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、钠钾腺苷三磷酸酶(Na -K -ATPase)、钙镁腺苷三磷酸酶(Ca2 -Mg2 -ATPase)5种酶活性.②再另制备16只大鼠的离体大脑皮质线粒体,分别悬浸于PBS缓冲液(PBS对照组)、0.1 mmol/LNAC(NAC对照组)、0.1 mmol/L NaCN(NaCN甲组)、1 mmol/L NaCN(NaCN乙组)、0.1 mmol/LNAC 0.1 mmol/L NaCN(NAC甲组)、0.1 mmol/L NAC 1 mmol/L NaCN(NAC乙组)6种液体15 min并离心后,按Veitch和Dunkley等方法分别测定其线粒体复合酶Ⅰ～Ⅳ的活性.[结果]①与NaCN染毒组比较,NAC保护组大鼠大脑皮质线粒体内GSH-Px,SOD,Na -K -ATPase、Ca2 -Mg2 -ATPase活性明显增高,XOD活性显著下降(P＜0.01).②NAC组无明显逆转NaCN对线粒体呼吸链复合酶Ⅳ活性的抑制,但可部分逆转呼吸链复合酶Ⅰ活性的剧增(P＜0.01)和复合酶Ⅱ活性的下降(P＜0.05).[结论]NAC可通过其抗氧化作用,促进氧化抗氧化平衡,保护线粒体功能,从而对抗氰化物中毒所致大脑皮质线粒体损伤,发挥其对氰化物中毒的保护作用.     

SiO_2刺激矽肺肺泡巨噬细胞上清介导的人胚肺成纤维细胞基质金属蛋白酶-2/9的表达

目的 探讨SiO_2体外刺激矽肺患者的肺泡巨噬细胞(AM)培养上清对人胚肺成纤维细胞(HELF)基质金属蛋白酶(MMP)-2/9的表达的影响.方法 将矽肺患者的AM在体外经SiO_2刺激24 h后收集其培养上清,与HELF共同孵育12、24、36、48、72 h,用免疫细胞化学方法检测各时间点HELF中MMP-2/9蛋白表达;明胶酶谱法检测各时间点HELF培养液的MMP-2/9活力的表达.结果 经SiO_2刺激后,实验组HELF在24、36、48、72 h MMP-2活力的表达增强,分别为1.572±0.104、1.786±0.125、1.987±0.130、2.147±0.156,与同期对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05).实验组HELF在24、36、48、72 hMMP-9活力的表达增强,与同期对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01).实验组HELF在24、36、48、72 h MMP-2蛋白的表达增强,分别为0.171±0.018、0.200±0.018、0.221±0.023、0.212±0.020,与同期对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);实验组HELF在24、36、48、72 h MMP-9蛋白的表达增强,与同期对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论 SiO_2可通过AM介导促进HELF中MMP-2和MMP-9蛋白及活力表达.     

SiO2对人肺泡巨噬细胞及肺成纤维细胞基质金属蛋白酶及其组织抑制因子表达的影响

[目的]探讨SiO2是否通过影响矽肺患者肺泡巨噬细胞(AM)和肺成纤维细胞(FB)基质金属蛋白酶(MMPs)/金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)系统参与矽肺纤维化的发生发展.[方法]收集矽肺患者的AM,在体外以SiO2(50 μg/ml)和不加血清的DMEM培养基培养2、6、12、18、24、36 h,用免疫细胞化学的方法检测AM中MMP-9和TIMP-1的表达.收集矽肺患者AM培养上清,与人胚肺FB共同孵育6、12、18、24、36、48 h,用免疫细胞化学的方法检测FB中MMP-1和TIMP-1的表达.[结果]经SiO2刺激的AM MMP-9表达明显上调,且随刺激时问不同表达量也不同,于18 h达高峰(平均光密度值为0.440±0.021),与同期对照纽AM(0.390±0.011)相比,差异有统计学意义(P<0.05);而TIMP-1的表达与对照组(平均光密度值分别为0.175±0.019、0.162±0.044)的差异无统计学意义(P>0.05).未经SiO2刺激的矽肺患者AM培养上清作用于FB 24 h,FB中MMP-1的表达较空白对照组减少(平均光密度值分别为0.103±0.014、0.133±0.023,P<0.01),TIMP-1的表达增多(平均光密度值分别为0.108±0.012、0.065±0.006,P<0.01);经SiO2刺激24 h的矽肺患者AM培养上清作用于FB后,FB中MMP-1的表达量进一步减少(平均光密度值分别为0.062±0.008、0.133±0.023,P<0.01),而TIMP-1的表达量进一步增加(平均光密度值分别为0.143±0.015、0.065±0.006,P<0.01).[结论]SiO2上调AM中MMP-9的表达,可能与肺脏损伤早期,降解基底膜,导致包括成纤维细胞在内的多种细胞迁移有关.通过肺泡巨噬细胞的介导,SiO2影响了FB中MMP/11MP系统的平衡,参与了矽肺纤维化的发生发展.     

TGF-β1对人胚肺成纤维细胞基质金属蛋白酶及其组织抑制因子表达的影响

目的探讨SiO2是否通过转化生长因子β(TGFβ-1)影响肺成纤维细胞(FB)中基质金属蛋白酶(MMPs)/金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)的表达而参与矽肺纤维化的发生发展。方法收集矽肺病人肺泡巨噬细胞(AM)培养上清,与人胚肺成纤维细胞(FB)共同孵育6 h和24 h,并用TGF-β1抗体进行干预,用免疫细胞化学的方法检测FB中MMP-1和TIMP-1的表达。结果经SiO2刺激的矽肺病人AM培养上清作用于FB,与对照组比较,可使FB中MMP-1的表达减少(吸光度A值0.062±0.008 vs 0.103±0.014,24 h),可使TIMP-1的表达增多(吸光度A值0.143±0.015 vs 0.108±0.012,24 h);加入TGF-β1抗体可逆转此作用。结论TGF-β1可影响AM介导的FB中MMP-1/TIMP-1系统的表达。     

SiO2对肺泡巨噬细胞基质金属蛋白酶-9/基质金属蛋白酶组织抑制因子-1和肺成纤维细胞Ⅲ型胶原表达的影响

[目的]探讨SiO2能否通过肺泡巨噬细胞(AM)表达基质金属蛋白酶(MMPs)/基质金属蛋白酶机制因子(TIMPs)系统参与胶原的病理性累积。[方法]收集矽肺患者AM,分别用加入SiO2粉尘的培养液和无血清培养液培养2、6、12、18、24h,取出细胞爬片并吸出培养上清。将HELF分为处理组、对照组和空白对照组,于6h、12h、18h、24h、36h、48h取出细胞爬片、吸出上清。检测AM中MMP-9、TIMP-1及HELF条件培养上清中CⅢ的表达。[结果]经SiO2刺激的AM表达MMP-9增高,各点与同期对照组相比,差异有统计学意义(P﹤0.05或P﹤0.01);12、18、24hTIMP-1的表达与同期对照组相比也明显增高,差异有统计学意义(P﹤0.05或P﹤0.01),但表达较MMP-9晚且少,将处理组的MMP-9与同期的TIMP-1相比,MMP-9表达显著多于TIMP-1,差异有统计学意义(P﹤0.001);AM条件培养上清作用于HELF后,可使HELF上清中CⅢ明显升高,与同期对照组相比,差异有统计学意义(P﹤0.05或P﹤0.01)。[结论]SiO2可促使AM高表达MMP-9和TIMP-1,并通过AM的介导诱导HELF高表达CⅢ,AM通过表达MMPs/TIMPs系统在胶原的病理性累积中起到了重要作用。     

NAC对矽尘染毒大鼠肺泡巨噬细胞MMP-2、MMP-9表达影响的体外研究

目的探讨N-乙酰-L半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)对矽尘染毒大鼠肺泡巨噬细胞MMP-2、MMP-9表达的影响。方法对Wistar大鼠行支气管肺泡原位灌洗术,获取肺泡巨噬细胞,将其分为对照组、损伤组和干预组。各组均用DMEM培养基培养,损伤组在培养基中加入SiO2粉尘悬液,干预组用NAC预处理1 h后再加入SiO2粉尘悬液。各组肺泡巨噬细胞分别孵育1、2、4、8 h,用免疫细胞化学和RT-PCR方法结合图像分析观察其MMP-2、MMP-9蛋白及其mRNA的动态变化。结果损伤组肺泡巨噬细胞MMP-9蛋白表达在各时间点较对照组明显增强(P<0.01),分别是对照组的1.669,2.340,3.538和2.006倍;基因表达较对照组明显增强(P<0.01),分别是对照组的1.636,2.250,2.576和1.538倍。MMP-2表达无明显变化。干预组肺泡巨噬细胞MMP-9蛋白和基因表达在各时间点较损伤组明显减弱(P<0.05),但仍高于对照组(P<0.05)。结论应用NAC可降低矽尘染毒大鼠肺泡巨噬细胞MMP-9的表达。     

核转录因子AP-1顺式诱骗元件抑制博莱霉素引起的肺成纤维细胞基质金属蛋白酶-2/金属蛋白酶组织抑制剂-1失衡

目的寻找防治肺纤维化的新途径。方法体外培养肺成纤维细胞(PFB),转入核转录因子AP1顺式诱骗元件(AP1Decoy)后再加入博莱霉素(BLM)进行刺激,采用酶谱图法测定细胞培养上清液中基质金属蛋白酶2(MMP2)活力,ELISA法测定金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)蛋白量,RTPCR法检测MMP2和TIMP1的mRNA水平。结果BLM作用12h,PFB分泌的MMP2活力(平均吸光度值,0.77±0.08)比对照组(0.65±0.07)明显增强,差异有统计学意义(P<0.05);但转入野生型AP1Decoy后,MMP2的酶活力增强被抑制(为0.68±0.05),与对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。BLM作用12h或24h,均使PFB分泌的TIMP1蛋白量[(39.3±4.3)、(46.3±4.8)ngml]及TIMP1mRNA的表达量(与βactin的条带积分吸光度比值,0.94±0.13、1.08±0.06)比对照组[(28.9±2.7)、(31.6±2.4)ngml和0.76±0.07、0.75±0.08]增高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);转入野生型AP1Decoy后,TIMP1蛋白及mRNA的表达量与对照组接近;转入突变型AP1Decoy组,其MMP2的酶活力、TIMP1蛋白及mRNA的表达量均与单纯BLM刺激组接近。结论AP1Decoy对BLM引起的肺成纤维细胞MMP2酶活力升高及TIMP1的表达增强有抑制作用。     

二氧化硅影响人肺成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的实验研究

目的 探讨二氧化硅（SiO2）体内体外影响人肺成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达情况.方法 体内实验以SiO2灌注的大鼠矽肺模型为研究对象,实验组32例（7、14、21和28d各8例）,对照组32例.免疫组化法检测肌成纤维细胞标志物α-SMA的表达;体内实验以人肺成纤维细胞（HLF-02）为研究对象,分别用SiO2刺激的体外小鼠腹腔巨噬细胞系（RAW264.7细胞）上清液、SiO2未刺激的RAW264.7细胞上清液、SiO2悬液以及转化生长因子β1（TGF-β1）作用24 h,免疫印迹法检测α-SMA的表达变化情况.结果 （1）染尘28 d大鼠肺组织有表达α-SMA阳性的肌成纤维细胞出现.（2）RAW264.7细胞上清液（SiO2）可诱导HLF-02细胞α-SMA的表达,而TGF-β1可明显上调α-SMA表达.（3）单纯SiO2悬液对HLF-02细胞α-SMA的表达没有影响.结论 肌成纤维细胞与矽肺纤维化进展有关;体外条件下肌成纤维细胞的出现不是SiO2直接作用的结果,而与SiO2活化巨噬细胞分泌的介质TGF-β1有关.     

锌和硒拮抗二氧化硅致人胚肺成纤维细胞羟脯氨酸合成的实验研究

目的:观察葡萄糖酸锌(ZnG)和亚硒酸钠(Na2SeO3)对人胚肺成纤维细胞羟脯氨酸(Hyp)合成水平的单独以及联合拮抗作用.方法:用RAW264.7细胞和人胚肺成纤维细胞分别于37℃、5%CO2培养箱进行培养,RAW264.7细胞在细胞生长对数期时加入二氧化硅(SiO2),同时加入不同浓度ZnG、Na2SeO3的溶液,24 h后取RAW264.7细胞培养液与人胚肺成纤维细胞共同培养,作用48 h后测人胚肺成纤维细胞培养液中Hyp含量.结果:ZnG、Na2SeO3单独与联合作用均可以显著降低人胚肺成纤维细胞Hyp合成水平(P＜0.05),其中以ZnG 2.25 mg/L和Na2SeO3 2.0 μmol/L浓度的单独与联合作用效果最明显.结论:一定剂量的ZnG、Na2SeO3对SiO2致人胚肺成纤维细胞Hyp合成水平具有单独以及联合拮抗作用.     

N-乙酰半胱氨酸对矽尘诱导肺泡巨噬细胞自噬影响

目的 探讨抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383在染尘不同时间的自噬活动影响。方法 常规培养NR8383细胞,染尘3、6、12、20、24 h,并给予NAC,分别收集细胞上清液,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-βⅠ（TGF-βⅠ）表达水平,自噬水平检测采用蛋白免疫印迹法和细胞免疫荧光法。结果 体外巨噬细胞染尘模型最佳时间为20 h;NAC+矽尘组NR8383细胞TNF-α表达[（116.82±8.98）pg/mL]低于矽尘组[（1823.58±764.85）pg/mL]（P<0.05）;NAC+矽尘组NR8383细胞TGF-βⅠ表达[（8.27±3.62）pg/mL]与矽尘组[（14.28±5.71）pg/mL]比较差异无统计学意义（P>0.05）;NAC+矽尘组与矽尘组NR8383细胞LC3蛋白表达[分别为（3.52±0.57）、（3.84±0.53）pg/mL]高于对照组[（2.24±0.56）pg/mL];免疫荧光结果显示,矽尘组NR8383细胞在20 h荧光信号强于对照组;NAC+矽尘组NR8383细胞荧光强度与矽尘组无明显差异。结论 矽尘刺激使NR8383细胞自噬表达增强;NAC可降低细胞上清液中TNF-α分泌水平,NAC可能参与染尘肺泡巨噬细胞的炎症反应过程。     

二氧化硅致癌作用研究进展

石英粉尘是一种危害较为严重的粉尘,可导致肺组织损伤和纤维化。石英近年被IARC宣布由动物致癌物升级为人类致癌物,同时指出尚需人类DNA水平的直接证据。本文将从动物实验、人群流行病学调查及可能的致癌机制几个方面对石英致癌作用的研究进展作一综述。     

二氧化硅刺激肺成纤维细胞间隙连接功能下调的研究

目的　探索矽肺发病过程中二氧化硅(SiO     

基质金属蛋白酶在子宫内膜异位症患者中的表达水平及在盆腔粘连中的作用

目的分析基质金属蛋白酶(MMPs)在子宫内膜异位症患者中的表达水平及在盆腔粘连中的作用。方法选取2017年1月-2018年12月在温州市人民医院进行腹腔镜手术的60例子宫内膜异位症患者为观察组,选取同期进行腹腔镜手术的30例非子宫内膜异位症患者为对照组。观察组根据术中盆腔粘连程度分为1组(无或仅有轻度盆腔粘连,子宫内膜异位症Ⅰ~Ⅱ期,24例)和2组(中重度盆腔粘连,子宫内膜异位症Ⅲ~Ⅳ期,36例)。采集3组腹腔液和血清,采用ELISA法检测腹腔液及血清基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)、基质金属蛋白酶-3 (MMP-3)、基质金属蛋白酶-7 (MMP-7),血清雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)、孕酮(P)、卵泡刺激素(FSH),白细胞介素-6 (IL-6)、白细胞介素-8 (IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C-反应蛋白(CRP)水平。结果 1组腹腔液MMP-2、MMP-3、MMP-7水平显著高于对照组,差异有统计学意义(均P<0. 05),2组腹腔液MMP-2、MMP-3、MMP-7水平显著高于1组(均P<0. 05)。1组血清FSH、LH水平显著高于对照组(均P<0. 05),2组血清FSH、LH水平显著高于1组(均P <0. 05)。1组血清E2、P水平显著低于对照组(均P<0. 05),2组血清E2、P水平显著低于1组(均P<0. 05)。1组血清IL-6、IL-8、TNF-α水平显著高于对照组(均P<0. 05),2组血清IL-6、IL-8、TNF-α水平显著高于1组(均P<0. 05)。结论子宫内膜异位症患者腹腔液中MMPs水平升高,可能与盆腔粘连的发生及严重程度相关。