SNHG1在胆管癌组织及细胞中的表达及意义

目的:探讨长链非编码RNA核仁小分子RNA宿主基因1(small nucleolar RNA host gene 1,SNHG1)在胆管癌组织和细胞中的表达及临床意义.方法:RT-PCR检测64例胆管癌组织及其配对的癌旁组织、胆管癌细胞(RBE和QBC939)和正常肝内胆管上皮细胞(HIBE)中SNHG1的相对表达水平...     

长链非编码RNA MAFG-AS1通过靶向miR-143-3p/AKT2轴促进胃癌的进展

目的:探讨长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNA) MAFG-AS1在胃癌(gastric cancer,GC)的发生和发展中的生物学功能及可能的作用机制.方法: 分别用GEPIA (Gene Expression Profiling Interactive Analysis)和Kap...     

环状RNA-ITGA1促进三阴性乳腺癌进展和转移

目的:探讨环状RNA(circular RNA,circRNA)-整合素α1(integrin alpha 1,ITGA1)(circ-ITGA1)对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞系进展转移功能的影响.方法:利用高通量测序技术筛选亲本MDA-MB-231细胞和高...     

内质网应激时重组腺病毒Ad-PERK siRNA对人软骨肉瘤SW1353细胞增殖和凋亡的影响

目的 :探讨靶向蛋白激酶样内质网激酶(protein kinase-like endoplasmic reticulum kinase,PERK]基因的小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)重组腺病毒在内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)时对人软骨肉瘤SW1353细胞增殖和凋亡的影响。方法:构建靶向PERK基因的si RNA重组腺病毒Ad-PERK si RNA,并将其感染SW1353细胞后,RT-PCR和蛋白质印迹法检测SW1353细胞中PERK m RNA和蛋白的表达。应用衣霉素(tunicamycin,TM)建立ERS模型;在ERS状态下,MTT法检测Ad-PERK si RNA感染后SW1353细胞的增殖情况,FCM法检测感染后SW1353细胞的细胞周期和细胞凋亡率,透射电子显微镜下观察感染后SW1353细胞超微结构的变化,蛋白质印迹法检测感染后SW1353细胞中cleaved caspase 3、caspase 12、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)和磷酸化c-Jun氨基端激酶(phospho-c-Jun-N-terminal kinase,p-JNK)蛋白的表达。结果 :成功构建获得重组腺病毒AdPERK si RNA。Ad-PERK si RNA感染后,SW1353细胞中PERK m RNA和蛋白的表达水平下调(P<0.05)。在ERS状态下,Ad-PERK si RNA可促进SW1353细胞的增殖(P<0.05),Ad-PERK si RNA感染组S期细胞所占比例高于感染空载体腺病毒Ad-RFP的阴性对照组和未感染的空白对照组(P<0.05),Ad-PERK si RNA感染组SW1353细胞的凋亡率低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05),透射电子显微镜下观察发现阴性对照组和空白对照组SW1353细胞存在明显的凋亡,Ad-PERK si RNA感染组SW1353细胞中cleaved caspase 3、caspase 12、CHOP和p-JNK蛋白的表达水平均明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论 :重组腺病毒Ad-PERK si RNA可以促进ERS状态下SW1353细胞的增殖,并抑制其凋亡。     

circ_0072088通过调控miR-545-3p/STAT3轴促进非小细胞肺癌细胞的恶性生物学行为

目的:探究环状RNA(circular RNA,circRNA)0072088在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞中的生物学功能及其作用机制.方法:在公共基因芯片数据库Gene Expression Omnibus(GEO)中下载GSE101684数据集,通过GEO2R...     

胃癌RN A结合蛋白相关预后模型的建立和验证

目的:探讨RNA结合蛋白构建的胃癌预后模型并验证其准确性.方法:从癌症基因组图谱(CancerGenome Atlas,TCGA)数据库中下载胃癌的RNA测序数据,并测定正常组织和肿瘤组织中不同表达的RNA结合蛋白(RNA binding protein,RBPs).并系统地研究及分析这些RBPs的表达和预后价值.结果...     

结肠腺癌预后相关竞争性内源性RN A网络的构建及免疫治疗反应分析

目的:利用生物信息学工具在结肠腺癌中(COAD)构建预后相关竞争内源性RNA(ceRNA)网络并进行综合分析.方法:从肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中下载COAD的RNA测序(RNA-seq)数据和miRNA测序(miRNA-seq)数据及相应的患者临床信息,筛选差异表达的mRNAs(DEmRNAs)、lncRNAs...     

人肺癌组织总RNA转染树突状细胞诱导特异性抗肿瘤免疫的研究

目的:探讨以人肺癌组织总RNA体外转染树突状细胞(dendritic cells,DCs)诱导细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymptocyte,CTL)发挥特异性抗肿瘤免疫的作用.方法:10例肿瘤组织经免疫组化测定为CEA、MUC1双阳性.一步法提取肿瘤组织总RNA和10例正常肺组织RNA.采集患者外周血单个核细胞体外诱导未成熟DCs,电穿孔法转染肿瘤和肺组织RNA,刺激DCs成熟后,部分行流式细胞仪检测,部分用于体外诱导CTL.以原代培养的肿瘤细胞和肺上皮细胞作为靶细胞,定量乳酸脱氢酶法测定杀伤率.结果:体外培养的DCs形态典型,高表达CD86、CD80、CD40、HLA-DR和CD83.转染肿瘤组织RNA DCs的CEA和MUC1表达量为(20.53±3.64)%和(65.39±9.33)%,明显高于转染肺组织RNA的DCs[(0.78±0.39)%和(18.32±4.24)%],P＜0.01.肿瘤组织RNA转染DCs诱导的CTL可产生针对肿瘤细胞的特异性杀伤;且用自身肿瘤组织RNA转染DCs诱导的CTL对自身肿瘤细胞杀伤活性最大.结论: 以人肺癌总RNA体外转染DCs诱导CTL可以产生特异性抗肿瘤免疫,此方法构建肺癌疫苗是可行的.     

Linc00355在结肠癌中表达上调并促进肿瘤细胞增殖和侵袭

目的:探讨长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNA) Linc00355在结肠癌组织中的表达水平,以及沉默Linc00355表达对结肠癌HCT116细胞增殖及迁移和侵袭能力的影响.方法:通过对肿瘤基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)和基因表达综合(Gen...     

缺氧诱导因子-1α与着丝粒蛋白W在人胶质瘤组织及细胞中表达的相关性

目的 :探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)与着丝粒蛋白W(centromere protein W,CENP-W)在人胶质瘤中表达的相关性。方法 :采用免疫组织化学法分别检测高级别胶质瘤、低级别胶质瘤及瘤旁正常脑组织中HIF-1α和CENP-W的表达水平,并统计学分析蛋白表达水平与胶质瘤临床病理特征的关系,以及两蛋白表达之间的相关性。用氯化钴抑制胶质瘤U251细胞中HIF-1α的分解,然后分别采用蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法检测CENP-W蛋白及m RNA表达的变化。应用特异性小干扰RNA(small interference RNA,si RNA)技术下调U251细胞的HIF-1α表达后,采用蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法检测CENP-W蛋白及m RNA表达的变化。应用特异性si RNA下调U251细胞中CENP-W表达后,采用蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法检测HIF-1α蛋白及m RNA表达的变化。结果:胶质瘤组织中HIF-1α和CENP-W的表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.05),并且与胶质瘤的病理级别明显相关(P<0.05);两蛋白表达水平之间也呈正相关性(r=0.709,P<0.05)。氯化钴作用U251细胞后,HIF-1a和CENP-W蛋白及m RNA的表达水平均明显升高(P<0.01)。si RNA干扰HIF-1α表达后,CENP-W蛋白及m RNA表达水平均明显降低(P<0.01);而si RNA干扰CENP-W表达后,HIF-1α蛋白及m RNA表达水平无明显变化(P>0.05)。结论:HIF-1α和CENP-W表达均与胶质瘤的病理级别呈正相关性。HIF-1α可以调节CENP-W的表达。     

lncRNA HOTTIP通过miR⁃637/KLK4轴促进肺癌SPC⁃A⁃1细胞的恶性 生物学行为

目的：探讨 lncRNA HOTTIP 对肺癌细胞增殖、凋亡及 EMT 的影响及其作用机制。方法：利用 qPCR 检测 lncRNAHOTTIP、miR-637和KLK4在肺癌SPC-A-1、正常肺上皮BEAS-2B细胞中的表达量;siRNA干扰SPC-A-1细胞中lncRNA HOTTIP的表达后,分别通过CCK-8、Transwell、流式细胞术和WB法检测SPC-A-1细胞增殖、侵袭、凋亡和EMT能力的变化。miRanda软件和双荧光素酶报告基因实验分析 lncRNA HOTTIP 和 miR-637 之间的靶向关系,RNA pull-down 实验检测 lncRNA HOTTIP 和miR-637的吸附作用,检测lncRNA HOTTIP通过miR-637对SPC-A-1细胞增殖、侵袭、凋亡和EMT的调控。利用TargetScan软件分析 miR-637 与 KLK4 的相关性,双荧光素酶报告基因实验检测 miR-637 与 KLK4 mRNA 之间的相互作用;检测 miR-637 通过KLK4 mRNA对SPC-A-1细胞增殖、侵袭、凋亡和EMT的调控。下调lncRNA HOTTIP和miR-637表达后,利用qPCR和WB检测KLK4 mRNA 和蛋白表达水平的变化。结果：与 BEAS-2B 细胞比,在 SPC-A-1 细胞中 lncRNA HOTTIP 呈高表达（P<0.01）,miR-637呈低表达（P<0.01）,KLK4呈高表达（P<0.01）。下调lncRNA HOTTIP后,SPC-A-1细胞增殖、侵袭与EMT能力显著减弱,细胞凋亡率显著上升（P<0.01）;lncRNA HOTTIP与miR-637具有靶向关系;下调miR-637表达后,SPC-A-1细胞增殖、侵袭与EMT能力显著上升,细胞凋亡率显著降低（P<0.01）。miR-637与 KLK4 3''UTR特异性结合。miR-637通过 KLK4显著促进了 SPC-A-1细胞增殖、侵袭与 EMT,细胞凋亡率显著上升（P<0.01）。下调 lncRNA HOTTIP 使 KLK4 表达显著降低,而下调 miR-637 可促进KLK4表达（P<0.05）。结论：上调lncRNA HOTTIP可通过miR-637/KLK4轴促进肺癌SPC-A-1细胞的增殖、侵袭与EMT而抑制癌细胞凋亡。     

lncRNA HOTAIR通过miR-519d-3p/CCND1 分子轴促进乳腺癌SKBR3细胞的恶性生物学行为

目的：探究lncRNA HOTAIR/miR-519d-3p/CCND1 分子轴对乳腺癌细胞增殖和转移的影响及其可能机制。方法：收集2017 年3 月至2019 年2 月南昌市第三医院乳腺外科手术切除的乳腺癌患者的乳腺癌组织及配对癌旁组织各50 例,qPCR检测癌及癌旁组织中HOTAIR 的表达水平,乳腺正常上皮细胞及乳腺癌细胞系中HOTAIR 和miR-519d-3p 的表达水平。将乳腺癌SKBR3 细胞分为NC 组、si-HOTAIR 组、miR-519d-3p mimics 组,miR-519d-3p mimics+pcHOTAIR 组、miR-519d-3p mimics+pcCCND1 组和si-HOTAIR+pcCCND1 组,CCK-8 法检测各组SKBR3 细胞增殖能力、Transwell 检测细胞侵袭和迁移能力、Western blotting 检测SKBR3 细胞中E-cadherin、N-cadherin、Vimentin 以及CCND1 表达水平。双荧光素酶报告基因检测HOTAIR 和miR-519d-3p 以及miR-519d-3p 和CCND1 的靶向关系。结果：HOTAIR在癌组织以及乳腺癌细胞系中呈高表达,且在SKBR3 细胞系中表达最高。敲降HOTAIR可显著抑制SKBR3 细胞增殖、侵袭和迁移,并显著增加E-cadherin 的表达水平、降低N-cadherin 和Vimentin的表达水平（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因检测显示,HOTAIR 靶向下调miR-519d-3p 的表达,miR-519d-3p 靶向下调CCND1 的表达。敲降HOTAIR可增强miR-519d-3p 对CCND1 的下调作用,抑制SKBR3 细胞EMT、增殖、侵袭和迁移能力（均P<0.05）。结论：敲降HOTAIR可抑制SKBR3 细胞增殖和转移,其机制是通过调控miR-519d-3p/CCND1 分子轴实现的。     

MiR-203 is downregulated in laryngeal squamous cell carcinoma and can suppress proliferation and induce apoptosis of tumours

MicroRNAs (miRNAs) have been recognised to regulate cancer development and progression in carcinogenesis as either oncogenes or tumour suppressor genes. However, whether miR-203 plays a crucial role in human laryngeal squamous cell carcinoma (LSCC) remains largely unclear. In the study, we have found that miR-203 expression was significantly lower in LSCC tissues than that in corresponding adjacent non-neoplastic tissues and was negatively correlated with ASAP1 expression level. Lower expression of miR-203 was significantly related to poor differentiation, advanced clinical stages, T3–4 tumour grade, lymph node metastasis and decreased 5-year overall survival. Transfection with miR-203 inhibited proliferation, reduced invasion, induced apoptosis and caused G1 phase cell cycle arrest of Hep-2 cells in vitro, suggesting that miR-203 functioned as a tumour suppressor. We have also tested that over-expression of miR-203 may both suppress the growth of xenograft tumours in mice and downregulate the expressions of ASAP1 in vivo. Furthermore, miR-203 may regulate the expressions of mesenchymal transition (EMT) marker of E-cadherin and cancer stem cells (CSCs) marker of CD44. These findings suggest that miR-203 plays a role as a tumour suppressor in LSCC, likely by regulating ASAP1, probably in relation to EMT and CSCs and may serve as a potential target for therapeutic intervention.     

miR-3195对人喉癌Hep-2细胞增殖的抑制作用及其机制

目的：探讨miR-3195对喉癌Hep2细胞增殖的影响及其分子机制。方法：选取2008年1月至2012年8月期间在南华大学教学医院郴州市第一人民医院耳鼻喉科收治的29例喉癌患者的喉癌组织及其相应的癌旁组织标本,采用qPCR检测miR-3195在喉癌和癌旁组织中的表达;构建miR-3195在喉癌Hep-2细胞中稳定高表达的细胞株,采用MTT法观察miR-3195稳定高表达组和对照组的增殖情况;建立裸鼠移植瘤模型,观察miR-3195稳定高表达的人喉癌细胞株Hep-2在裸鼠体内增殖的情况。利用生物信息学预测 miR-3195 的靶基因,构建 TBX1 3''UTR 的荧光素酶载体,双荧光素酶检测系统检测其荧光素酶活性;Western blotting检测稳定高表达miR-3195组和对照组细胞株的TBX1蛋白表达水平。结果：miR-3195在喉癌组织中的表达明显低于癌旁组织（P<0.01）;miR-3195上调可抑制Hep-2细胞的增殖（P<0.01）,且可明显抑制裸鼠移植瘤瘤体的生长（P<0.05）;双荧光素酶报告基因检测结果表明miR-3195可能与TBX1靶向结合（P<0.05）,同时Western blotting法验证了miR-3195能够抑制TBX1蛋白的表达（P<0.05）。结论：miR-3195对Hep2细胞有明显的增殖抑制作用,其分子机制可能与负性调控TBX1的表达有关。     

长链非编码RNA HOTAIR抑制膀胱尿路上皮癌对阿霉素的敏感性

目的:研究长链非编码RNA HOTAIR在膀胱尿路上皮癌中的表达,明确其对膀胱尿路上皮癌对阿霉素敏感性的调控作用.方法:HOTAIR基因在膀胱尿路上皮癌及癌旁组织中的表达由实时定量PCR法检测.将HOTAIR基因的表达载体和沉默载体分别转染膀胱尿路上皮癌J82细胞,实时定量PCR验证转染效果.应用MTT法检测HOTAIR基因表达改变对于J82细胞的增殖能力及对阿霉素敏感性的调控作用.结果:HO-TAIR基因在膀胱尿路上皮癌表达显著上调.HOTAIR基因的表达载体和沉默载体能够显著上调或沉默HO-TAIR基因的表达.HOTAIR高表达能够促进J82细胞增殖,抑制J82细胞对阿霉素的敏感性;而HOTAIR表达沉默的J82细胞增殖能力下调明显,对阿霉素的敏感性明显增加.结论:长链非编码RNA HOTAIR在膀胱尿路上皮癌中高表达,HOTAIR能够作为癌基因促进膀胱尿路上皮癌的细胞增殖能力并抑制膀胱尿路上皮癌对阿霉素敏感性.     

lncRNA XIST通过调控miR-337-3p/HOXC8 轴促进胃癌的发展进程

[摘要] 目的：探讨lncRNA XIST（XIST）通过调控miR-337-3p/HOXC8 分子轴介导胃癌发展进程的分子机制。方法：选取2013 年3 月至2018 年1 月河北省唐山市开滦总医院普通外科手术切除的58 例胃癌组织和对应的癌旁组织标本,以及人胃癌细胞系AGS、MGC803、HGC27 和人胃黏膜细胞GES-1,用qPCR检测胃癌组织和细胞系中XIST 和miR-337-3p 的表达水平。将XIST敲降载体、miR-337-3p mimics/inhibitor 和HOXC8 过表达载体转染进AGS细胞,用CCK-8、Transwell 实验检测AGS细胞的增殖及侵袭能力,用WB检测HOXC8 及上皮钙黏蛋白（E-cadherin）、神经钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（vimentin）的表达水平。用双荧光素酶报告基因验证XIST、miR-337-3p 和HOXC8 的靶向关系。结果：XIST在胃癌组织和细胞系中高表达（均P<0.01）。敲降XIST 显著抑制AGS细胞的增殖、侵袭和EMT（P<0.05 或P<0.01）。XIST 靶向作用miR-337-3p 并下调其表达,HOXC8 是miR-337-3p 的靶基因。敲降XIST 通过靶向上调miR-337-3p 对HOXC8 表达的抑制作用,从而抑制AGS细胞增殖、侵袭和EMT（P<0.05 或P<0.01）。结论：敲降XIST 可抑制AGS 细胞增殖、侵袭和EMT,其作用机制是通过靶向miR-337-3p 并下调HOXC8的表达。     

缺氧对喉癌Hep-2细胞HIF-1α、GLUT-1、MMP-2表达的影响

目的 探讨缺氧对喉癌Hep-2细胞增殖、迁移和侵袭以及缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、葡萄糖转运蛋白-1（GLUT-1）和基质金属蛋白酶-2（MMP-2）表达的影响。方法 MTT法检测缺氧不同时间点细胞增殖状况;Transwell和划痕实验分别检测缺氧对喉癌Hep-2细胞侵袭和迁移能力的影响;Western blot和实时定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测缺氧后不同时间点HIF-1α、GLUT-1、MMP-2蛋白及mRNA表达的情况。结果 在缺氧条件下（1％O2、5％CO2和94％N2）,Hep-2细胞的存活率随缺氧时间的延长逐渐升高,迁移和侵袭能力增强;随缺氧时间延长,Hep-2细胞HIF-1α蛋白表达水平明显增加,mRNA水平变化不明显;随缺氧时间延长,GLUT-1、MMP-2的mRNA水平和蛋白水平均明显增加。 结论 缺氧环境下,喉癌肿瘤细胞通过上调HIF-1α、GLUT-1、MMP-2的表达,强化其增殖、侵袭、转移的能力,促进喉癌的发展。     

lncRNA SBF2-AS1 通过调控miR-140-5p/VEGFA 分子轴促进宫颈癌HeLa细胞上皮间质转化

目的：探讨lncRNA SBF2-AS1 通过调控miR-140-5p/血管内皮生长因子A（VEGFA）分子轴对宫颈癌HeLa 细胞上皮间质转化（EMT）的影响。方法：细胞培养和转染后分为NC、miR-140-5p mimic、miR-140-5p mimic+pcDNA-VEGFA、si-lncRNASBF2-AS1+pcDNA-VEGFA及si-lncRNA SBF2-AS1+miR-140-5p mimic组5 组。采用qPCR检测lncRNA SBF2-AS1 在宫颈癌组织及细胞系中的表达水平,双荧光素酶报告基因验让lncRNA SBF2-AS1、miR-140-5p 与VEGFA的靶向关系,WB检测HeLa细胞中VEGFA及EMT标志物N-cadherin、Vimentin 和E-cadherin 的表达水平,Transwell 实验检测HeLa细胞侵袭和迁移能力。结果：lncRNASBF2-AS1 在宫颈癌组织及细胞系中高表达（P<0.05 或P<0.01）,lncRNA SBF2-AS1 靶向结合miR-140-5p,且VEGFA 是miR-140-5p 的靶基因（P<0.05）。敲降lncRNA SBF2-AS1 抑制HeLa细胞侵袭、迁移及EMT。进一步实验证实,lncRNA SBF2-AS1通过miR-140-5p 上调VEGFA的表达水平,从而促进HeLa 细胞侵袭、迁移及EMT（P<0.05 或P<0.01）。结论：lncRNA SBF2-AS1通过miR-140-5p/VEGFA分子轴促进HeLa细胞EMT。     

miR-126在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的:检测miR-126在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达,分析其表达与患者临床病理特征及预后的关系,探讨其过表达对Tca8113细胞恶性生物学行为的影响.方法:选取2016年6月至2018年6月在郑州大学第一附属医院手术治疗的62例OSCC患者的癌及癌旁组织...     

miR-7抑制喉鳞癌Hep-2细胞增殖及迁移的研究

目的 探讨上调microRNA-7（miR-7）表达对喉鳞癌Hep-2细胞增殖与迁移的作用及可能机制。方法 通过脂质体转染miR-7模拟物（miR-7 mimics）及随机序列（miR-Scramble）,将喉鳞癌Hep-2细胞分成miR-7组、Scramble组和空白对照（Mock）组,实时定量PCR（qPCR）检测转染48 h后各组细胞中miR-7表达,CCK-8法检测转染48 h后的各组细胞的增殖抑制情况,Transwell试验观察转染24 h后细胞迁移能力,qPCR及Western blotting检测PI3K（p110）、AKT及pAKT 的mRNA和蛋白表达情况。结果 miR-7组Hep-2细胞转染miR-7 mimics后miR-7表达水平明显上调,与其余两组比较差异有统计学意义（P＜0.01）;与Scramble组和Mock组相比, miR-7组Hep-2细胞的增殖抑制率升高,迁移能力降低,且PI3K、AKT及pAKT 的mRNA和蛋白水平均降低（P＜0.05）。结论 上调喉鳞癌Hep-2细胞中miR-7表达能够抑制肿瘤细胞的增殖与迁移,其机制可能与抑制PI3K／Akt信号通路有关。