异丙酚对LPS诱导BV-2小胶质细胞IL-1β和TNF-α释放的影响及TLR4在其中的作用

目的 评价异丙酚对LPS诱导BV-2小胶质细胞IL-1β和TNF-α释放的影响及Toll样受体4(TLR4)在其中的作用.方法 将体外培养的BV-2小胶质细胞接种于96孔培养板中,采用随机数字表法,将其随机分为4(n=12):对照组、LPS组、异丙酚组和LPS+异丙酚组.LPS组加入LPS1μg/ml孵育24h;异丙酚组加入异丙酚30 μmol/L孵育24 h;LPS+异丙酚组同时加入LPS 1 μg/ml和异丙酚30 μmol/L孵育24h.于孵育6h时,采用ELISA法检测细胞上清液TNF-α浓度,以此反映TNF-α的释放量,采用RT-PCR法测定TLR4 mRNA表达;于孵育24h时,采用ELISA法检测细胞上清液IL-1β浓度,以此反映IL-1β的释放量,采用Western Blot法检测TLR4蛋白表达.结果 与C组比较,LPS组和LPS+异丙酚组IL-1β和TNF-α的释放量升高,TLR4 mRNA及其蛋白表达上调(P＜0.05);与LPS组比较,LPS+异丙酚组IL-1β和TNF-α的释放量降低,TLR4 mRNA及其蛋白表达下调(P＜0.05).结论 异丙酚可抑制LPS诱导BV-2小胶质细胞IL-1β和TNF-α的释放,其机制与抑制TLR4的表达有关.     

miR-124-3p在电刺激预处理减轻小胶质细胞氧糖剥夺-复糖复氧损伤中的作用：与小胶质细胞极化的关系

目的评价miR-124-3p在电刺激预处理减轻小胶质细胞氧糖剥夺-复糖复氧(OGD/R)损伤中的作用及其与小胶质细胞极化的关系。方法将生长良好的BV2小胶质细胞采用随机数字表法分为4组(n=30):对照组(C组)、OGD/R组、电刺激预处理组(E组)和miR-124-3p抑制剂组(I组)。C组在正常条件下培养, OGD/R组氧糖剥夺2 h后复糖复氧24 h, 制备OGD/R损伤模型;E组在氧糖剥夺前给予100 mV/mm的直流电刺激4 h, 余同OGD/R组;I组在氧糖剥夺前48 h转染micrOFF? mmu-miR-124-3p抑制剂, 余同E组。采用CCK-8法检测细胞存活率, ELISA法检测上清液TNF-α、IL-1β及IL-10浓度;分别采用免疫荧光法和Western blot法检测M1型小胶质细胞表面标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和M2型小胶质细胞表面标志物精氨酸酶1(Arg-1)的表达;采用q-PCR法检测iNOS和Arg-1的mRNA及miR-124-3p表达。结果与C组比较, 其余3组细胞存活率降低, 上清液TNF-α、IL-1β和IL-10浓度升高, 细胞i...     

藁本内酯抑制星形胶质细胞中NF-κB依赖的细胞因子的表达

目的观察藁本内酯(LIG)对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞中促炎性细胞因子表达的抑制作用。方法将原代培养成功的星形胶质细胞随机分成四组,对照组(C组)、LPS组、LIG组、BAY组。C组未加入任何药物刺激细胞;LPS组加入浓度为1μg/ml的LPS刺激细胞6h;LIG组用浓度为50μM的LIG预孵育细胞30min后,再加入LPS刺激6h;BAY组用浓度为20μM的核转录因子(NF)-κB抑制剂BAY11-7082预孵育细胞30min后,再加入LPS刺激6h。采用Real-time PCR方法检测促炎性细胞因子白细胞介素(IL)-1β、肿瘤细胞坏死因子(TNF)-α、IL-6 mRNA的表达;采用Western blot方法检测pNF-κB p65的表达。结果与LPS组比较,C、LIG和BAY组IL-1β、TNF-α、IL-6mRNA的表达明显减少(P0.05)。与LPS组比较,C、LIG组pNF-κB p65蛋白的表达明显降低(P0.05)。结论藁本内酯可通过抑制原代培养的星形胶质细胞中NF-κB的活化来抑制LPS诱导的促炎症相关的细胞因子的表达。     

右美托咪定通过c-Fos/NLRP 3/caspase-1级联抑制LP S诱发的小胶质细胞炎症反应

目的探讨右美托咪定通过c-Fos/NLRP3/caspase-1级联抑制脂多糖(LPS)诱发的小胶质细胞炎症反应。方法选取新生的SD大鼠,取其小胶质细胞进行原代培养及分离纯化。采用LPS诱导建立小胶质细胞炎症模型。采用MTT法选取右美托咪定抑制LPS诱导小胶质细胞炎症反应的最适宜浓度。将细胞分为三组:对照组、LPS组和右美托咪定治疗组(D组)。采用实时定量PCR法测定细胞中IL-1β和TNF-α的mRNA表达量;采用ELISA法检测细胞上清液中IL-1β和TNF-α的含量;采用Western blot法检测原癌基因c-Fos、NLRP3和caspase-1的蛋白含量。结果与对照组比较,LPS组小胶质细胞中炎性因子IL-1β和TNF-α的mRNA表达量均明显升高(P0.05);D组IL-1β和TNF-α的mRNA表达量明显低于LPS组(P0.05)。与对照组比较,LPS组中小胶质细胞中炎性因子IL-1β和TNF-α的含量均明显增加(P0.05);而D组IL-1β和TNF-α的含量明显低于LPS组(P0.05)。与对照组比较,LPS组小胶质细胞中c-Fos、NLRP3和caspase-1的蛋白含量均明显增加(P0.01);而D组c-Fos、NLRP3和caspase-1的蛋白含量明显低于LPS组(P0.05)。结论右美托咪定可抑制LPS诱发的小胶质细胞中炎性因子IL-1β和TNF-α的mRNA表达量及蛋白含量,推测其作用机制可能与抑制c-Fos/NLRP3/caspase-1级联反应有关。     

脂氧素A4对LPS诱导小胶质细胞活化的影响及SIRT1/NF-κB信号通路在其中的作用

目的评价脂氧素A4(LXA4)对脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞活化的影响及沉默信息调节因子1(SIRT1)/NF-κB信号通路在其中的作用。方法实验Ⅰ:取生长状态良好的小鼠BV2小胶质细胞, 采用随机数字表法分为4组(n=30):对照组(C组)、LXA4组、LPS组和LPS+LXA4组(LL1组)。实验Ⅱ:采用随机数字表法将小胶质细胞分为2组(n=30):LPS+LXA4组(LL2组)、LPS+LXA4+SIRT1抑制剂EX527组(LLE组)。C组正常培养;LXA4组和LPS组分别加入LXA4(终浓度100 nmol/L)、LPS(终浓度100 ng/ml)孵育24 h;LL1组和LL2组于LPS处理前1 h加入LXA4(终浓度100 nmol/L), 其余处理方法同LPS组;LLE组于LXA4处理前30 min加入EX527(终浓度为5 μmol/L), 其余处理方法同LL2组。采用qRT-PCR法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、CD32、精氨酸酶1(Arg-1)、CD206以及IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-10的mRNA表达, ELISA法检测上清液IL-1β、IL...     

右美托咪定预先给药对脂多糖诱导乳鼠原代小胶质细胞炎性介质释放的影响

目的 评价右美托咪定预先给药对脂多糖诱导乳鼠原代小胶质细胞炎性介质释放的影响.方法 培养乳鼠原代小胶质细胞,采用随机数字表法,将其分为3组:对照组(C组)、脂多糖组(L组)和右美托咪定预先给药组(D组),每组10孔.C组去血清细胞培养液培养,L组加入脂多糖(终浓度1 μg/ml),D组加入右美托咪定(终浓度1 ng/ml),1h后加入脂多糖(终浓度1μg/ml).作用24h后采用Griess法测定培养上清液一氧化氮(N0)浓度,采用酶联免疫吸附法测定培养上清液前列腺素E2(PGE2)、IL-1β和TNF-α浓度,采用RT-PCR法测定细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA的表达.结果 与C组比较,L组和D组细胞iNOS mRNA表达上调,上清液NO、PGE2、IL-1β和TNF-α浓度升高(P＜0.01);与L组比较,D组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 右美托咪定预先给药对脂多糖诱导乳鼠原代小胶质细胞炎性介质释放无明显影响.     

二甲胺四环素对小胶质细胞激活状态影响的研究

目的探究二甲胺四环素对大鼠小胶质细胞M1、M2激活状态的研究。 方法取10只Wistar大鼠脑组织,选取其小胶质细胞,以LPS及IL-4产生M1激活组和M2激活组,确定Notch信号通路对小胶质细胞M1激活途径及M2激活途径的调控作用,通过不同浓度二甲胺四环素干预Notch信号通路,调控小胶质细胞的激活状态,观察细胞膜特异性抗原CD16/32及CD206蛋白表达和细胞培养上清中TNF-α、IL-12、IL-10水平。 结果成功诱导M1激活组和M2激活组,确定Notch信号通路对M1激活途径及M2激活途径起调控作用,二甲胺四环素在0 μg/ml、5 μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml浓度中,促使小胶质细胞TNF-α、IL-12分泌逐渐减少,IL-10分泌逐渐增多,CD16/32蛋白表达逐渐降低,CD206蛋白表达逐渐增加。 结论二甲胺四环素能够抑制小胶质细胞向M1型极化,且对M2型极化过程没有影响,可以改善脊髓损伤患者的预后。     

miRNA-146a在小鼠小胶质细胞炎症反应中的作用

目的评价microRNA(miR)-146a在小鼠小胶质细胞炎症反应中的作用。方法小鼠小胶质细胞BV2进行培养,选取对数生长期的细胞,采用随机数字表法分为5组(n=48):对照组(C组)、LPS组、LPS+miR-146a模拟物组(LPS-M组)、LPS+miR146-a抑制物组(LPS-I组)和LPS+阴性对照组(LPS-NC组)。LPS-M组、LPS-I组和LPS-NC组分别将miR-146-a模拟物RNA、miR-146a抑制物RNA和模拟物/抑制物的错义RNA转染至细胞。转染成功后,LPS组、LPS-M组、LPS-I组和LPS-NC组细胞分别加入终浓度为1 μg/ml的LPS,C组加入等容量培养基,孵育6 h。采用qRT-PCR法检测细胞miR-146a、白介素受体相关激酶1(IRAK1) mRNA和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6) mRNA的表达,采用Western blot法检测细胞IRAK1和TRAF6的表达。收集细胞上清液,采用ELISA法检测TNF-α、 IL-1β和IL-6的浓度。结果与C组比较,LPS组细胞miR-146a表达、IRAK1和TRAF6及其m...     

炎症介质对人腹膜间皮细胞透明质酸合成酶mRNA表达和透明质酸合成的影响

目的 了解炎症介质对人腹膜间皮细胞(HPMCs)透明质酸合成酶mRNA的调节作用及对透明质酸合成的影响。方法 分离培养的人腹膜间皮细胞随机分为4组:正常对照组、脂多糖组(LPs,10 ng/ml)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α,100 U/ml)组,白介素-1β(IL-1β,100 U/ml)组,给予上述刺激后继续培养24 h。人腹膜间皮细胞HAS-2及HAS-3 mRNA表达以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测;细胞衣样结构合成以微粒排除法检测;细胞培养上清液透明质酸(HA)的浓度以放射免疫分折法检测。结果 LPS组、TNF-α组HAS-2 mRNA表达分别较对照组增强1.2倍和1.3倍(P均<0.05);IL-1β组HAS-2 mRNA表达虽较对照组增强,但差异无显著性意义(P>0.05)。LPS组、1L～1β组、TNF-α组HAS-3 mRNA表达分别较对照组增强1.7倍、19倍、8.5倍(P均<0.05)。对照组、LPS组、IL-1β组、TNF-α组细胞胞衣样结构面积与细胞体面积的比值各组间差异无显著性意义(P>0.05);对照组、LPS组、IL-1β组、TNF-α组细胞培养上清液透明质酸(HA)的浓度均显著高于对照组(P均<0.05)。结论炎症因子可上调HPMCs透明质酸合成酶HAS-2 mRNA、HAS-3 mRNA的表达和促进透明质酸的合成。由于其主要增强HAS-3 mRNA的表达,提示炎症状态时有大量小相对分子质量透明质酸合成。     

交感神经递质NE对内毒素诱导大鼠kupffer细胞TNF-α/IL-1β表达的影响

目的探讨交感神经递质去甲肾上腺素对体外培养大鼠kupffer细胞TNF-α、IL-1β炎症相关细胞因子表达的影响。方法分离大鼠kupffer细胞体外分三组培养,经体外培养48h后,给予外源性内毒素（LPS10μg／m1）刺激,同时给予不同浓度的去甲。肾上腺素（0．1μmol／L～10μmol／L）分别作用12h,运用定量逆转录多聚酶链反应检测各处理组TNF-α和IL-1β mRNA的表达,ELISA检测细胞培养上清TNF-α IL-1β蛋白的表达。结果同时给予LPS（10μg/ml）刺激和去甲肾上腺素（1μmol／L及10μmol／L）作用后,kupffer细胞培养上清TNF-α和IL-1β蛋白较LPS组显著增高（P〈0．05）;TNF-α mRNA表达分别较LPS组增加50．9％（P〈0．05）和59．1％（P〈0．05）;IL-1β mRNA较LPS组表达增加53．7％（P〈0．05）和57．8％（P〈0．05）。结论应激浓度的去甲肾上腺素能增加内毒素诱导大鼠kupffer细胞TNF-α、IL-1β表达,具有促炎效应。     

米诺环素调控小胶质细胞激活对PC12细胞生长的影响

目的探讨米诺环素抑制小胶质细胞激活对PC12生长和凋亡的影响。方法 BV2细胞分为对照组、LPS组、LPS加米诺环素组;以LPS刺激激活小胶质细胞系BV2细胞,用米诺环素干预BV2细胞的激活;将各组BV2细胞与PC12细胞进行共培养24h;酶联免疫吸附法检测共培养体系细胞上清液TNF-α、IL-1β的含量,MTT法检测PC12细胞生存率。结果 BV2细胞与PC12细胞共培养24h后,LPS组上清液炎症因子TNF-α、IL-1β表达明显升高,PC12细胞存活率下降,米诺环素能抑制以上趋势。结论 MG激活对PC12细胞存在明显损伤效应,米诺环素可保护MG介导的PC12细胞损伤,可能与通过下调炎症表达有关。     

神经细胞炎症模型的构建：小胶质细胞-神经元共培养系统

目的通过建立小胶质细胞-神经元共培养系统, 制备体外神经细胞炎症模型。方法选用小鼠BV-2小胶质细胞、NSC34运动神经元、HT-22海马神经元。实验Ⅰ采用不同浓度LPS(10、100、500和1 000 ng/ml)刺激BV-2小胶质细胞, 提取小胶质细胞培养上清液即条件培养基, 分别培养两种神经元, 采用CCK-8法选取导致神经元活力明显下降50%的LPS浓度用于Transwell共培养系统的建立。实验Ⅱ将小胶质细胞接种于Transwell上室, 神经元种于下室。采用随机数字表法分为2组(n=12):对照组和LPS组, 小胶质细胞分别用细胞培养基、LPS培养或孵育6 h, 随后更换新鲜培养基继续培养12 h, 合并上、下室细胞继续培养。BV-2-NSC34 Transwell共培养系统共培养12 h, BV-2-HT-22 Transwell共培养系统共培养24 h。采用ELISA法检测神经元培养液IL-1β、IL-18浓度, 采用流式细胞术检测神经元凋亡率, 采用qRT-PCR检测神经元Bcl-2、Bax的mRNA表达, 采用Western blot法检测神经元cleaved c...     

p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路在严重烧伤大鼠枯否细胞肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β产生中的作用

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路在严重烧伤大鼠枯否细胞(KCs)促炎性细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)产生中的作用。方法 健康成年的雄性SD大鼠32只,随机分为：假烫组;假烫 SB203580组;烧伤对照组;烧伤 SB203580组,每组8只。假烫或烧伤24h后分离出肝脏KCs,培养18h后加入50ng／ml的LPS进行刺激,18h后取上清液,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定TNF-α和IL-1β的含量,并收集KCs,实时逆转录聚合酶链反应检测KCs内TNF-α和IL-1β mRNA表达的改变,蛋白印迹(Western blot)法检测KCs中p38MAPK和JNK活性的变化。结果 烧伤大鼠分离出的KCs培养上清液中TNF-α和IL-1β含量、KCs中TNF-α和IL-1β mRNA的表达均较假烫组的明显增强,同时KCs中p38 MAPK活性和JNK活性升高,SB203580能显著抑制大鼠KCs上清液中TNF-α和IL-1β含量、KCs中TNF-α和IL-1β mRNA的表达和p38MAPK活性的升高,对JNK活性无影响。结论p38MAPK信号转导通路介导了严重烧伤大鼠KCs促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的产生。     

右美托咪啶对脂多糖诱导大鼠外周血单核细胞Toll样受体4mRNA表达的影响

目的 探讨右美托咪啶对脂多糖(LPS)诱导大鼠外周血单核细胞Toll样受体4(TLR4)mRNA表达的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠40只,取外周血分离培养单核细胞,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=8),A组:阴性对照;B组:单核细胞中加入LPS(终浓度为1μg/ml);C组:单核细胞中加入LPS(终浓度为1μg/ml)+右美托咪啶(终浓度为0.5 ng/ml);D组:单核细胞中加入LPS(终浓度为1μg/ml)+右美托咪啶(终浓度为5.0 ng/ml);E组:单核细胞中加入LPS(终浓度为1μg/ml)+右美托咪啶(终浓度为50.0 ng/ml).孵育24 h后,收集上清液,采用ELISA法测定TNF-α、IL-1β和IL-6的浓度,采用RT-PCR法测定TLR4 mRNA的表达.结果 与A组比较,B组TNF-α、IL-1p、IL-6的浓度升高,TLR4 mRNA表达上调(P＜0.01);与B组比较,C组、D组和E组TNF-α、IL-1β、IL-6的浓度降低,TLR4 mRNA表达下调(P＜0.05或0.01);与C组比较,D组和E组TNF-α、IL-1β、IL-6的浓度降低(P＜0.01),TLR4 mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05);D组和E组各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 右美托咪啶可通过下调TLR4 mRNA表达,抑制TLR4的合成,从而抑制LPS诱导大鼠外周血单核细胞TNF-α、IL-1β和IL-6的生成与释放.

Abstract：

Objective To investigate the effects of different concentrations of dexmedetomidine on the expression of Toll-like receptor 4 (TLR4) mRNA in rat peripheral blood monocytes exposed to lipopolysaccharide ( LPS ). Methods Peripheral blood monocytes isolated from male Wistar rats were seeded in 24-well plate in RPMI 1640 liquid culture medium in CO2 incubator at 37 ℃ and 5% CO2 for 2 h, and were randomly divided into 5 groups ( n = 8 each): group A negative control; group B was exposed to LPS 1 μg/ml and C, D and E groups were exposed to LPS 1 μg/ml + dexmetomidine 0.5, 5.0 and 50.0 ng/ml respectively. The monocytes were then incubated for 24 h. The concentrations of TNF-α, IL-1β and IL-6 in the supernatant of the cultured monocytes were detected by ELISA. The expression of TLR4 mRNA in the monocytes was detected by RT-PCR.Results Exposure to LPS significantly increased the expression of TLR4 mRNA and the concentrations of TNF-α, IL-1β and IL -6 in group B as compared with group A ( P ＜ 0.01 ). Dexmedetomidine attenuated the LPS-induced increase in the expression of TLR 4 mRNA and the concentrations of TNF-α, IL-1β and IL-6 in a dose-dependent manner ( P ＜0.05or 0.01 ). Conclusion Dexmedetomidine can inhibit the synthesis of TLR4 and inhibit the secretion and dilivery of TNF-α, IL-1β and IL-6 by down-regulating the gene expression of TLR4 in rat peripheral blood monocytes exposed to LPS.     

异丙酚对LPS诱导中性粒细胞Toll样受体2和Toll样受体4表达的影响

目的 探讨异丙酚对内毒素(LPS)诱导中性粒细胞Toll样受体2(TLR2)和TLR4表达的影响.方法 健康志愿者6名,年龄20～35岁,各采集外周静脉血样50 ml,加入20 U/ml肝素抗凝,分离提纯中性粒细胞,制备细胞悬液,然后随机分为6组,每组6皿:对照组(C组)不给予任何药物,置于37℃、5%CO_2培养箱中培养12 h;异丙酚脂质溶剂intralipid组(I组)、异丙酚组(P组)和LPS组(L组):分别加入intralipid(终浓度为5 μg/ml)、异丙酚(终浓度为5 μg/ml)或LPS(终浓度为1μg/ml),置于37℃、5%CO_2培养箱中孵育12 h;intralipid+LPS组(IL组)和异丙酚+LPS组(PL组)先分别加入intralipid(终浓度为5 μg/ml)或异丙酚(终浓度为5 μg/ml)后,置于37℃、5%CO_2培养箱中孵育20 min,然后加入LPS(终浓度为1μg/ml),置于37℃、5%CO_2培养箱孵育12 h.采用流式细胞仪测定中性粒细胞膜TLR2和TLR4的表达;采用荧光定量PGR检测中性粒细胞膜TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达;采用ELISA法测定培养上清液TNF-α和IL-8的浓度.结果 与C组比较,I组和P组TLB2和TLR4的表达、1NF-α和IL-8L-8的浓度差异无统计学意义(P>0.05),L组和IL组TLR2和TLR4的表达上调,L组TNF-α和IL-8L-8的浓度升高,IL组IL-8浓度升高(P<0.05);与L组比较,IL组TLR2和TLR4的表达、TNF-α和IL-8L-8的浓度差异无统计学意义(P>0.05),PL组TLR2和TLR4的表达下调,TNF-α和IL-8L-8的浓度降低(P<0.05).各组TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 异丙酚可下调LPS诱导的中性粒细胞TLR2和TLR4的表达,从而抑制炎性反应.     

1，25（OH）2D3对脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞维生素D受体及肿瘤坏死因子α、转化生长因子β1表达的影响

目的 研究脂多糖（LPS）对大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）维生素D受体(VDR)及肿瘤坏死因子α（TNF-α）、转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响,从而为1,25（OH）2D3在腹膜透析相关腹膜炎中的应用提供理论依据。 方法 胰蛋白酶消化法原代培养腹膜间皮细胞、传代、经鉴定后分组：(1)正常对照组;(2)脂多糖组：不同浓度的脂多糖（1、10、100 mg/L）分别作用6 h;10 mg/L脂多糖分别作用2、6、12 h;(3)1,25（OH）2D3作用组：10 mg/L脂多糖预孵育2 h后,加1,25（OH）2D3(10－8 mol/L、10－7 mol/L、10－6 mol/L)再作用6 h。RT-PCR法检测VDR mRNA的表达;Western印迹法检测VDR蛋白表达;ELISA法检测上清液TNF-α、TGF-β1的表达。 结果 与对照组相比,LPS组RPMC VDR mRNA和蛋白表达均显著下调（均P < 0.05）。与LPS组相比,1,25（OH）2D3组VDR mRNA和蛋白表达均显著上调（均P < 0.01）。LPS组上清液中TNF-α、TGF-β1浓度均显著高于对照组（均P < 0.01）;1,25（OH）2D3组上清液中TNF-α、TGF-β1浓度均显著低于LPS组（均P < 0.01）。 结论 LPS能下调RPMC VDR mRNA和蛋白的表达,上调TNF-α、TGF-β1表达。1,25（OH）2D3可逆转LPS的作用,上调RPMC VDR mRNA和蛋白的表达,并下调TNF-α、TGF-β1表达。VDR对腹膜透析相关腹膜炎具有一定的保护作用,并具有抑制腹膜纤维化的作用。     

转化生长因子β1对脂多糖刺激大鼠腹膜间皮细胞上调表达促炎症因子的影响

目的 观察转化生长因子β1（TGF-β1）对脂多糖(LPS)刺激大鼠腹膜间皮细胞上调表达促炎症因子的影响，并探讨其可能的机制。 方法 把原代培养的第2代大鼠腹膜间皮细胞（RPMCs）分成对照组、LPS刺激组（1 mg/L）、TGF-β1刺激组（5 μg/L）及LPS+TGF-β1刺激组。RT-PCR和ELISA方法检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6） mRNA及蛋白的表达。蛋白印迹方法检测磷酸化核因子（p-NF）-κB/NF-κB值的变化。 结果 (1)LPS可刺激RPMCs上调TNF-α和IL-6表达。LPS刺激24 h后，p-NF-κB/NF-κB值升高。(2)TGF-β1可拮抗LPS刺激大鼠腹膜间皮细胞上调TNF-α和IL-6表达，同时，也降低p-NF-κB/NF-κB值。 结论 在体外培养的大鼠腹膜间皮细胞，TGF-β1可拮抗LPS的致炎作用，其作用机制可能是通过抑制NF-κB的活化而介导。     

萝卜硫素改善LPS诱导肾小管上皮细胞损伤的作用机制研究

目的:探讨萝卜硫素对脓毒症肾损伤的影响和可能机制。方法:体外培养肾小管上皮细胞HK-2，用不同剂量(5、10、20μmol/L)萝卜硫素孵育24 h后，再用LPS干预8 h。酶联免疫吸附法检测IL-6、IL-1β和TNF-α表达，流式细胞术检测凋亡，蛋白质印迹法检测cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表达，qRT-PCR检测miR-22-3p表达。转染miR-22-3p模拟物或抑制剂至HK-2细胞后，用LPS干预8 h或用20μmol/L萝卜硫素孵育24 h后再用LPS干预8 h，上述相同方法检测IL-6、IL-1β和TNF-α表达、细胞凋亡及cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表达。结果:与LPS组比较，萝卜硫素降低LPS诱导的HK-2细胞中IL-6、IL-1β和TNF-α水平、细胞凋亡率及cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表达，增加miR-22-3p表达。上调miR-22-3p降低LPS诱导的HK-2细胞IL-6、IL-1β和TNF-α水平、细胞凋亡率及cleaved-caspa...     

异丙酚对脂多糖诱导大鼠腹腔巨噬细胞Toll样受体-4 mRNA表达的影响

目的 观察异丙酚对脂多糖（LPS）诱导大鼠腹腔巨噬细胞Toll样受体-4（TLR-4）mRNA表达的影响，探讨异丙酚抑制LPS诱导白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF—α）产生的机制。方法 雄性Wistar大鼠32只，处死后分离腹腔巨噬细胞，随机分为4组（n=8）：A组（阴性对照组）；B组LPS（终浓度为1μg／ml）／加入巨噬细胞中；C组LPS（终浓度为1μg／ml）＋异丙酚（终浓度为1μg／ml）加入巨噬细胞中；D组LPS（终浓度为1μg／ml）＋异丙酚（终浓度为5μg／ml）加入巨噬细胞中。细胞培养12h后。用ELISA方法检测培养上清液中IL-6、TNF-α的浓度，用RT-PCR方法检测TLR-4mRNA的表达水平。结果 与A组相比，B组IL-6、TNF-α和TLR-4m RNA水平均增加，C组IL-6、TLR-4m RNA水平升高（P〈0．01）；与B组相比，C组、D组IL-6、TNF-α和TLR-4m RNA水平降低（P〈0．05或〈0．01）。结论 异丙酚通过下调TLR-4m RNA的表达水平，从而一定程度上抑制了LPS诱导大鼠腹腔巨噬细胞，TNF-α和IL-6的产生。     

终末糖基化产物对神经小胶质细胞IL-1β、IL-6表达的影响

目的：研究终末糖基化产物（AGEs）对神经小胶质细胞白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）表达的影响。方法：以不同浓度、不同时间AGEs刺激体外培养的小鼠小胶质瘤细胞（BV-2细胞）,观察细胞形态的变化,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞内IL-1β、IL-6mRNA水平,应用酶联免疫吸附法（ELISA）测定细胞培养上清液中IL-1β、IL-6的蛋白含量。结果：与空白组和AGEs对照物组比较,AGEs组细胞活化呈阿米巴样,胞核大而圆,核仁明显,胞浆内颗粒物增多,以300mg/L作用18h组效果最显著。与空白组和AGEs对照物组比较,作用时间相同时,AGEs浓度为50mg/L时即可见细胞的IL-1β、IL-6mRNA水平明显增加（P〈0.05或P〈0.01）,浓度为150mg/L时,细胞培养上清液中IL-1β、IL-6的蛋白含量明显增加（P〈0.05）;作用浓度相同时,2h即可见细胞的IL-1βmRNA水平明显增加（P〈0.05）,6h见细胞的IL-6mRNA水平和细胞培养上清液中IL-1β、IL-6的蛋白含量明显增加（P〈0.05或P〈0.01）,其中以300mg/L作用18h组效果最显著（P〈0.05）。结论：AGEs刺激可使小胶质细胞内IL-1β、IL-6高表达。