长链非编码RNA作为肾细胞癌预后生物标志物的研究新进展

长链非编码RNA（LncRNA）是一种长度大于200个核苷酸,缺乏蛋白质编码能力的RNA,不仅参与了细胞的增殖、分化和凋亡等多种生理过程,而且还参与了多种疾病的病理过程。近年来,越来越多的研究证明LncRNA的异常表达与肾细胞癌的增殖、侵袭、迁移以及总体生存期的差异等有关。有学者对其作用机制进行了阐述或者猜测,获得了前所未有的新发现,整体的作用机制也在进一步研究当中。随着基础和应用研究的开展以及科学技术的革新,LncRNA功能的潜在机制将逐步揭开,为肾癌早期诊断、预后判断和治疗靶点提供新的突破口。本文针对LncRNA作为肾细胞癌预后生物标志物的研究新进展作一综述。【关键词】长链非编码RNA;肾细胞癌;预后     

miR-34a通过靶基因Notch1调控子宫内膜癌细胞的增殖和凋亡

目的:探讨miR-34a通过靶基因Notch1调控子宫内膜癌细胞的增殖和凋亡。方法:通过荧光定量PCR检测miR-34a在子宫内膜癌和癌旁组织中的表达,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-34a的靶基因,子宫内膜癌Ishikawa细胞转染miR-34a mimics及对照miR-NC,并转染Notch表达载体,通过MTT和流式细胞术分别检测miR-34a和Notch1对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响,并通过Western blot检测miR-34a对Notch1蛋白表达的影响。结果:miR-34a在人子宫内膜癌组织中表达显著下调（P<0.05）,双荧光素酶报告基因实验证实miR-34a能与Notch1 3' UTR结合,miR-34a mimics能够显著抑制细胞活力（P<0.05）,促进细胞凋亡（P<0.05）,并且miR-34a mimics显著抑制Notch1蛋白表达（P<0.05）。结论:miR-34a能够通过调控靶基因Notch1的表达,抑制子宫内膜癌细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

过表达lncRNA LINC00886靶向调控miR-451a影响乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为

目的:探究过表达长链非编码RNA（lncRNA）LINC00886通过调控微小RNA-451a（miR-451a）对乳腺癌（BC）MDA-MB-231细胞生物学行为的影响。方法:荧光定量PCR（qRT-PCR）检测人乳腺上皮细胞系（MCF-12A）和4种BC细胞系（HCC1937、SUM159、SK-BR-3和MDA-MB-231）中lncRNA LINC00886、miR-451a表达。将MDA-MB-231细胞分为对照组、LINC00886-NC组、LINC00886组、LINC00886+miR-NC组、LINC00886+miR-451a组。qRT-PCR法检测MDA-MB-231细胞中lncRNA LINC00886、miR-451a表达水平;克隆形成实验和EdU染色检测MDA-MB-231细胞增殖能力;流式细胞术、Transwell小室实验、划痕愈合实验分别用来检测MDA-MB-231细胞凋亡、侵袭、迁移;蛋白印迹法检测MDA-MB-231细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Cleaved caspase-3）、基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测lncRNA LINC00886与miR-451a的靶向关系。结果:与人乳腺上皮细胞MCF-12A相比,BC细胞系中lncRNA LINC00886表达水平降低,miR-451a表达水平升高（P＜0.05）;过表达lncRNA LINC00886可升高MDA-MB-231细胞凋亡率、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达,降低miR-451a表达、集落形成数、EdU阳性细胞百分比、侵袭细胞数、迁移率以及PCNA、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达（P＜0.05）;上调miR-451a表达可减弱lncRNA LINC00886过表达对MDA-MB-231细胞的影响（P＜0.05）;lncRNA LINC00886可靶向调控miR-451a表达。结论:过表达lncRNA LINC00886可通过靶向抑制miR-451a表达促进MDA-MB-231细胞凋亡并抑制MDA-MB-231细胞增殖、侵袭和迁移。     

lncRNAXIST/miR-34a-5p/SIRT6 分子轴调控口腔鳞癌细胞的增殖及转移

[摘要] 目的：探究lncRNA XIST/miR-34a-5p/SIRT6 分子轴调控口腔鳞癌细胞增殖和转移及其分子机制。方法：收集2013年3 月至2018 年3 月在青岛市口腔医院就诊的OSCC患者47 例癌组织和癌旁组织标本,采用qPCR检测OSCC患者组织及细胞系中lncRNA XIST、miR-34a-5p、SIRT6 mRNA 的表达,WB检测OSCC 患者组织及细胞系中SIRT6、Ki67、pcDNA、cleaved-caspase3、cleaved-caspase8、E-cadherin、Vimentin 蛋白的表达,采用CCK-8 实验检测敲降lncRNA XIST对Cal-27 及Tca-8113 细胞增殖的影响,Transwell 小室法检测Cal-27 及Tca-8113 细胞迁移及侵袭;流式细胞术检测Cal-27 及Tca-8113 细胞凋亡情况,双荧光素酶报告基因检测lncRNA XIST与miR-34a-5p、miR-34a-5p 与SIRT6 靶向结合关系。结果：lncRNA XIST和SIRT6 在OSCC患者癌组织及细胞系中高表达（均P<0.05）,miR-34a-5p 则呈低表达（P<0.01）;敲降lncRNA XIST抑制OSCC细胞的增殖、迁移及侵袭并促进细胞凋亡（均P<0.01）,同时转染miR-34a-5p 抑制剂或pcDNA-SIRT6 载体作用则相反;敲降lncRNA XIST 促进OSCC细胞中增殖及转移相关蛋白表达（均P<0.01）,同时转染miR-34a-5p 抑制剂或pcDNA-SIRT6 载体作用则相反;lncRNA XIST 与miR-34a 靶向结合,miR-34a 与SIRT6 靶向结合;lncRNA XIST 通过靶向miR-34a-5p 上调SIRT6 表达（P<0.01）。结论：lncRNA XIST/miR-34a-5p/SIRT6 分子轴能够调控OSCC细胞增殖及转移,为OSCC治疗提供潜在靶点。     

MiR-4313靶向TBX15抑制肾透明细胞癌增殖的分子机制

目的 探讨miR-4313对肾透明细胞癌(ccRCC)增殖能力的影响及其分子机制.方法 采用中国科学院细胞库的人肾癌细胞株786-O和OS-RC-2为主要研究对象,并分为阴性对照组、miR-4313模拟物组和miR-324-3p模拟物组.四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞周期时相的变化...     

肾细胞癌中长链非编码RNA功能的研究进展

肾细胞癌（renal cell carcinoma,RCC）是常见的泌尿外科恶性肿瘤,其发生与发展受到多种复杂因素的调控。长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）是一类特殊的RNA,其参与了包括RCC在内的多种恶性肿瘤发生的调控。同时,随着分子生物学技术的发展,对RCC中异常表达的lncRNA的检测不仅有助于从基因调控层面阐述RCC的相关致病机制,也可通过检测lncRNA的表达来改进对RCC的诊断及预后。基于RCC中特异lncRNA靶点的治疗方法也处于研究之中,未来有可能为RCC的临床治疗提供全新的思路及方法。因此,本文重点对lncRNA参与调控RCC的机制、lncRNA用于RCC的诊断预后及基于lncRNA靶点的治疗研究进展进行简要综述。     

lncRNA UCA1在肾透明细胞癌中的表达与临床特征及预后的关系

目的:研究长链非编码RNA（lncRNA）尿路上皮癌胚抗原1（UCA1）在肾透明细胞癌（KIRC）患者癌组织及癌旁正常组织中的表达水平,探讨其与患者临床特征及预后的关系。方法:选取2009年2月至2013年2月在本院诊治并保存完整的KIRC患者癌组织标本56例为KIRC组,同时另取患者配对癌旁正常肾组织（距肿瘤边缘＞5 cm）作为对照组,通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测lncRNA UCA1表达水平,分析lncRNA UCA1表达水平与患者临床特征及预后生存的关系。结果:KIRC患者肾癌组织中lncRNA UCA1表达水平显著高于对照组（P＜0.05）。lncRNA UCA1表达水平与TNM分期、Robson分期和组织分化程度有关（P＜0.05）。lncRNA UCA1高表达组的5年生存率显著低于lncRNA UCA1低表达组（P＜0.05）。lncRNA UCA1高表达是影响KIRC患者不良预后发生的独立危险因素（P＜0.05）。结论:lncRNA UCA1在KIRC患者肾癌组织中高表达,与TNM分期、Robson分期和组织分化程度有关,是影响KIRC患者不良预后发生的独立危险因素。     

miR-1269a调控HOXD10基因抑制胆管癌细胞侵袭的作用及其机制

目的 探讨miR-1269a对HOXD10基因的调控作用及对胆管癌细胞侵袭能力的影响。方法 预测并筛选出调控HOXD10基因的miR-1269a作为研究对象;转染miR-1269a模拟物（mimic）及抑制剂（inhibitor）至胆管癌细胞系后检测 HOXD10mRNA及蛋白的表达变化,并观察miR-1269a对胆管癌细胞侵袭能力的影响。双荧光素酶报告基因实验验证miR-1269a与HOXD10之间的靶向作用关系。结果 miR-1269a在胆管癌组织中表达显著高于癌旁组织（P=0.0023）;miR-1269a模拟物可显著降低胆管癌细胞中HOXD10 mRNA（Mz-CHA-1: P=0.0025; RBE: P=0.0038）及蛋白表达水平,且细胞的侵袭能力较对照组显著增强（Mz-CHA-1: P=0.004; RBE: P=0.004）。miR-1269a抑制剂转染则出现相反的结果（QBC939: P=0.16; HCCC9810: P=0.13）。miR-1269a明显抑制野生型HOXD10-3’UTR 的荧光素酶活性,而对突变型质粒转染细胞的荧光素酶活性无影响。结论 miR-1269a靶向负性调控HOXD10基因,在胆管癌细胞侵袭过程中发挥重要作用。     

lncRNASNHG15靶向miR-153对乳腺癌细胞线粒体途径凋亡的影响

目的：探讨lncRNASNHG15靶向miR-153对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其凋亡机制。方法: 用实时荧光定量 PCR（qPCR）检测乳腺癌细胞系MDA-MB-231、BT-549 和 MCF-7中SNHG15表达水平。将MDA-MB-231 细胞分为对照（Ctrl） 组、si-NC组、si-SNHG15组、si-SNHG15+anti-NC组及si-SNHG15+anti-miR-153组, 用MTT法及流式细胞术分别检测细胞的增殖 活力和凋亡率。用双荧光素酶报告基因实验验证SNHG15和miR-153的靶向关系。用线粒体膜电位荧光探针（JC-1）染色法检测 细胞线粒体膜电位, 用Western blotting检测线粒体途径凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase3、cleaved caspase3（c-caspase3）和Cyt-C 的表达水平。结果:SNHG15在3种乳腺癌细胞中的表达水平均明显高于人正常乳腺上皮细胞MCF10A（均P<0.01）。SNHG15与 miR-153存在靶向关系。沉默SNHG15后,与对照组比较,si-SNHG15组MDA-MB-231细胞增殖活力明显降低、凋亡率升高、线 粒体膜电位降低（均P<0.01）;细胞中Bcl-2和caspase3表达降低,Bax、c-caspase3和Cyt-C表达升高（均P<0.01）。si-SNHG15与 anti-miR-153共同转染 MDA-MB-231 细胞后,可减弱 si-SNHG15 对细胞增殖、凋亡、线粒体膜电位及 Bcl-2、Bax、caspase3、 c-caspase3和Cyt-C表达的影响（均P<0.01）。结论: lncRNASNHG15可靶向调控miR-153诱导MDA-MB-231细胞凋亡,其机制 可能与调控细胞线粒体途径凋亡有关。     

沉默INHBA-AS1靶向miR-335-3p抑制外阴鳞状细胞癌细胞增殖、迁移

目的:探讨沉默长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）INHBA反义RNA1（INHBA antisense RNA1,INHBA-AS1）对外阴鳞状细胞癌细胞SW954生物学行为的影响及机制。方法:37例外阴鳞状细胞癌组织中INHBA-AS1、miR-335-3p表达运用qRT-PCR检测,高迁移率族蛋白2（high mobility group AT-hook 2,HMGA2）蛋白的表达运用Western blotting检测。实验分为con组、si-NC组、si-INHBA-AS1组、miR-NC组、miR-335-3p mimic组、si-INHBA-AS1+miR-335-3p inhibitor组。应用CCK-8实验检测SW954细胞增殖抑制率,克隆形成实验检测SW954细胞克隆形成,Transwell实验和划痕实验检测SW954细胞迁移,流式细胞术检测SW954细胞凋亡。双荧光素酶报告实验鉴定INHBA-AS1与miR-335-3p、miR-335-3p与HMGA2的靶向关系。结果:外阴鳞状细胞癌组织中INHBA-AS1、HMGA2蛋白的表达水平远高于癌旁组织,miR-335-3p的表达水平低于癌旁组织（P＜0.05）。转染si-INHBA-AS1沉默INHBA-AS1或转染miR-335-3p mimic过表达miR-335-3p后,miR-335-3p表达水平、SW954细胞抑制率及凋亡率升高,HMGA2蛋白的表达水平、SW954细胞克隆形成数、迁移细胞数及划痕愈合率降低（P＜0.05）。INHBA-AS1靶向miR-335-3p,miR-335-3p靶向HMGA2。沉默INHBA-AS1处理的SW954细胞增殖、迁移、凋亡的影响被抑制miR-335-3p所逆转。结论:沉默外阴鳞状细胞癌细胞SW954中的INHBA-AS1通过miR-335-3p靶向HMGA2,抑制SW954细胞增殖、迁移,并诱导其凋亡。     

miR-497 and miR-34a retard lung cancer growth by co-inhibiting cyclin E1 (CCNE1)

Cyclin E1, encoded by the CCNE1 gene, promotes G1/S transition, chromosome instability, and oncogenesis. Here, we show that miR-497 and miR-34a target the 3′-UTR of CCNE1. miR-497 and miR-34a are downregulated in cancer cells and their ectopic expression inhibited cell proliferation and colony formation in vitro, and inhibited tumor growth in a xenograft model. The effect of simultaneous overexpression of miR-497 and miR-34a on the inhibition of cell proliferation, colony formation, and tumor growth, and the downregulation of cyclin E1 was stronger than the effect of each miRNA alone. The synergistic actions of miR-497 and miR-34a partly correlated with cyclin E1 levels. When cells stably expressing CCNE1 were transfected with the Hi-miR-497/34a plasmid, there was no effect on colony formation, compared with that of cells transfected with either Hi-miR497 or Hi-miR34a. These results indicate cyclin E1 is downregulated by both miR-497 and miR-34a, which synergistically retard the growth of human lung cancer cells.     

人miR-34a真核表达载体的构建及其表达

目的:构建人miR-34a的真核表达载体,并使其在骨肉瘤SOSP-9607细胞中表达.方法:从人骨肉瘤SOSP-9607细胞基因组DNA中用PCR法扩增出miR-34a的前体序列,并引入酶切位点和保护碱基,双酶切后定向插入真核表达载体pcD-NA3.1(+)中,构建miR-34a真核表达载体pcD-NA-miR34a,然后进行菌落PCR、酶切和测序鉴定.同时用构建好的载体pcDNA-miR34a转染骨肉瘤细胞SOSP-9607细胞,筛选miR-34a稳定表达细胞系,用Northern blot及real time RT-RCR法鉴定pcD-NA-miR34a可于真核细胞中过表达miR-34a的生物学特性.结果:成功构建了人miR-34a真核表达载体pcDNA-miR34a.pcDNA-miR34a可于骨肉瘤SOSp-9607细胞中上调miR-34a的表达,获得了miR-34a高表达骨肉瘤细胞系.结论:miR-34a的真核表达载体可在骨肉瘤细胞SOSP-9607细胞中有效表达,为进一步研究miR-34a在骨肉瘤中的功能及基因调控机制奠定了实验基础.     

miR-34a inhibits migration and invasion by down-regulation of c-Met expression in human hepatocellular carcinoma cells

Several studies have shown that miR-34a represses the expression of many genes and induces G1 arrest, apoptosis, and senescence. In the present study, we identified the role of miR-34a in the regulation of tumor cell scattering, migration, and invasion. Down-regulation of miR-34a expression was highly significant in 19 of 25 (76%) human hepatocellular carcinoma (HCC) tissues compared with adjacent normal tissues and associated with the metastasis and invasion of tumors. Furthermore, resected normal/tumor tissues of 25 HCC patients demonstrated an inverse correlation between miR-34a and c-Met-protein. In HepG2 cells, ectopic expression of miR-34a potently inhibited tumor cell migration and invasion in a c-Met-dependent manner. miR-34a directly targeted c-Met and reduced both mRNA and protein levels of c-Met; thus, decreased c-Met-induced phosphorylation of extracellular signal-regulated kinases 1 and 2 (ERK1/2). Taken together, these results provide evidence to show the suppression role of miR-34a in tumor migration and invasion through modulation of the c-Met signaling pathway.     

The influence of miR-34a expression on stemness and cytotoxic susceptibility of breast cancer stem cells

In this study, we investigate the effect of miR-34a expression and biological characteristics of breast cancer stem cells (BCSCs). The mammospheres were formed from murine breast cancer cell line 4T1 and regarded as murine BCSCs. Identification of stemness molecules and cloning experiments validate the biological characteristics of BCSCs we have established. We showed that miR-34a, as a tumor suppressor, could separately reduce the stemness of BCSCs and activate the cytotoxic susceptibility of BCSCs to natural killer (NK) cells in vitro via down regulating the expression of Notch1 signaling molecules. Moreover, miR-34a could completely restrain established mice breast tumor xenografts in vivo in the NOD/SCID mice that have functional NK cells at a normal level, whereas it was less effective in NOD/SCID/ CD122/IL-2Rβ mice that do not have functional NK cells. We conclude that miR-34a is a crucial, dual tumor suppressor and BCSCs-targeting immunotherapeutic agent and has shown efficacy in the treatment of murine breast cancer. The results also suggest that impaired NK cells could contribute to the resistance to therapies.     

miR-27a下调肾癌细胞FOXO1表达并促进其细胞增殖

目的 探讨microRNA-27a(miR-27a)在肾癌细胞中的作用及调控机制.方法 应用miR-27a反义寡核苷酸(ASO)在体外转染786-O和Caki-1细胞;qRT-PCR法检测miR-27a及FOXO1 mRNA的表达情况,Western blot检测FOXO1蛋白的表达水平;CCK8检测miR-27a ASO对细胞增殖的影响.结果 786-O和Caki-1细胞中miR-27a表达高于HK2正常肾小管上皮细胞(P<0.05);利用miR-27a ASO抑制786-O和Caki-1细胞miR-27a表达后,发现两个细胞株FOXO1 mRNA和蛋白表达的升高及增殖能力的降低(P<0.05).结论 miR-27a 可能通过调控FOXO1表达在肾癌中起致癌作用.miR-27a ASO可抑制肾癌细胞的增殖,因此miR-27a有可能作为肾癌基因治疗的候选靶点.     

miR-27a下调肾癌细胞FOXO1表达并促进其细胞增殖

目的：探讨microRNA-27a（miR-27a）在肾癌细胞中的作用及调控机制。方法：应用miR-27a反义寡核苷酸（ASO）在体外转染786-O和Caki-1细胞;qRT-PCR法检测miR-27a及FOXO1 mRNA的表达情况,Western blot检测FOXO1蛋白的表达水平;CCK8检测miR-27a ASO对细胞增殖的影响。结果：786-O和Caki-1细胞中miR-27a表达高于HK2正常肾小管上皮细胞（P〈0.05）;利用miR-27a ASO抑制786-O和Caki-1细胞miR-27a表达后,发现两个细胞株FOXO1 mRNA和蛋白表达的升高及增殖能力的降低（P〈0.05）。结论：miR-27a可能通过调控FOXO1表达在肾癌中起致癌作用。miR-27a ASO可抑制肾癌细胞的增殖,因此miR-27a有可能作为肾癌基因治疗的候选靶点。