不同密度低温缺氧复氧大鼠心脏成纤维细胞对心肌细胞损伤的影响

目的:评价不同密度低温缺氧复氧大鼠心脏成纤维细胞(RCF)对心肌细胞损伤和细胞间偶联的影响。方法:体外培养RCF,采用随机数字表方法分为3组( n＝12)：密度0.5×10 5个/ml组(T 0.5组)、密度为1.0×10 5个/ml组(T 1.0组)和密度为...     

不同密度大鼠成纤维细胞对心肌细胞Cx43及细胞活力的影响

目的:评价不同密度大鼠成纤维细胞对心肌细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)及细胞活力的影响。方法:将心肌细胞与成纤维细胞进行Transwell小室共培养,心肌细胞接种于Transwell小室下层,成纤维细胞分别接种于Transwell小室上层,采用随机数字表法分为3组( n＝12)：成纤维细胞密度0.5×10...     

病理性瘢痕成纤维细胞中Cx43及Cx43 mRNA的表达

目的 探讨连接蛋白43(Cx43)在病理性瘢痕中的调控作用.方法 选择瘢痕疙瘩20例、增生性瘢痕23例、普通瘢痕18例、正常皮肤12例四组标本,应用免疫组织化学与原位杂交技术,从蛋白及核酸水平检测Cx43及Cx43 mRNA在四组标本成纤维细胞中的表达.结果 Cx43及Cx43 mRNA在增生性瘢痕和搬痕疙瘩成纤维细胞中的表达明显少于普通瘢痕和正常皮肤(P＜0.05).结论 成纤维细胞Cx43表达下调可能造成病理性瘢痕组织的成纤维细胞间缝隙连接细胞间的通讯异常,从而导致病理性瘢痕的发生,且Cx43表达下调可能是由于Cx43基因转录受到抑制造成的.     

PEP-1-血红素加氧酶-1融合蛋白转导对大鼠H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的影响

目的 探讨PEP-1-血红素加氧酶(HO)-1融合蛋白转导对大鼠H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的影响.方法 构建含人HO-1基因的原核表达质粒pETl5b-PEP1-hHO-1,质粒转化后诱导目的 蛋白PEP-1-HO-1表达.用含15%胎牛血清高糖DMEM培养基培养H9c2心肌细胞,随机分为4组(n=4):正常对照组(C组)常规培养;缺氧复氧组(H/R组)细胞缺氧22 h,复氧8 h;低浓度融合蛋白组(L-HO组)缺氧前用终浓度为1.0 μmol/L PEP-1-HO-1融合蛋白孵育细胞;高浓度融合蛋白组(H-HO组)缺氧前即刻用终浓度为2.0 μmol/L PEP-1-HO-1融合蛋白孵育细胞.复氧结束后收集细胞及培养液上清,采用2,4-二硝基苯肼显色法检测培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性,硫代巴比妥酸比色法检测细胞MDA含量,黄嘌呤氧化酶法检测细胞SOD活性.结果 与C组比较,H/R组、L-HO组、H-HO组心肌细胞SOD活性降低,MDA含量升高,培养液LDH活性升高(P＜0.05);与H/R组比较,L-HO组和H-HO组心肌细胞SOD活性升高,MDA含量降低,培养液LDH活性降低(P＜0.05);与L-HO组比较,H-HO组心肌细胞SOD活性升高,MDA含量降低,培养液LDH活性降低(P＜0.05).结论 PEP-1-HO-1融合蛋白转导入大鼠H9c2心肌细胞可减轻细胞缺氧复氧损伤.     

二氮嗪预先给药对大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧复氧时细胞凋亡的影响

目的 探讨二氮嗪预先给药对大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧复氧时细胞凋亡的影响.方法培养SD大鼠心肌微血管内皮细胞,以1×106个/ml的密度接种于96孔培养板(100 μl/孔)或培养皿(2 ml/皿),采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=12),正常对照组(C组)不作任何处理,缺氧复氧组(H/R组)、二氮嗪预先给药组(DZ组)和二氮嗪预先给药+5-羟葵酸组(DZ+5-HD组)均进行缺氧2 h复氧2 h,DZ组和DZ+5-HD组在缺氧前2 h分别加入100 μmol/L二氮嗪和100 μmol/L二氮嗪+100 μmol/L线粒体ATP敏感性钾通道阻断剂5-羟葵酸.于复氧2 h时测定细胞活力和凋亡率.结果 与C组比较,H/R组细胞活力降低,细胞凋亡率升高(P＜0.01);与H/R组比较,DZ组细胞活力升高,细胞凋亡率降低(P＜0.05或0.01);5-羟葵酸可抑制二氮嗪预先给药导致的上述改变(P＜0.05或0.01).结论 二氮嗪预先给药可抑制大鼠心肌微血管内皮细胞凋亡,从而减轻缺氧复氧损伤,其机制与激活线粒体ATP敏感性钾通道有关.

Abstract：

Objective To investigate the effects of diazoxide pretreatment on apoptosis in rat myocardial microvascular endothelial cells exposed to hypoxia-reoxygenation (H/R) . Methods The SD rat myocardial microvascular endothelial cells were cultured. The cells were seeded in 96-well plates (100 μl/hole) or in 6 cm diameter dishes (2 ml/dish) with the density of 1×106/ml and randomly divided into 4 groups ( n = 12 each) : normal con trol group (group C), H/R group, diazoxide pretreatment group (group DZ) and diazoxide pretreatment + 5-hydroxydecanoate (5-HD, a mitochondrial ATP-sensitive potassium channel blocker) group (group DZ + 5-HD) .The cells were exposed to 2 h hypoxia followed by 2 h reoxygenation. Diazoxide 100 μmol/L and diazoxide 100 μmol/L + 5-HD 100 μmol/L were added to the culture medium 2 h before hypoxia in groups DZ and DZ + 5-HD respectively. The cell viability and apoptotic rate were detected at the end of reoxygenation. Results Compared with group C, the cell viability was significantly decreased, while the apoptotic rate increased in group H/R ( P ＜ 0.01) . Compared with group H/R, the cell viability was significantly increased, while the apoptotic rate decreased in group DZ (P ＜ 0.05 or 0.01) . 5-HD could inhibit diazoxide pretreatment-induced changes mentioned above ( P ＜ 0.05 or 0.01). Conclusion Diazoxide pretreatment can reduce H/R injury through inhibiting apoptosis in rat myocardial microvascular endothelial cells, and the mechanism is related to the activation of mitochondrial ATP-sensitive potassium channels.     

成纤维细胞生长因子2对凋亡成纤维细胞中S100蛋白表达的影响

目的观察热损伤后成纤维细胞凋亡模型中,外用成纤维细胞生长因子2(FGF2)对凋亡细胞S100蛋白表达的影响。方法用含体积分数5％小牛血清的DMEM溶液培养已大致融合的成纤维细胞24 h,置入45℃恒温水浴锅中孵育10 min,建立热损伤细胞模型(热损伤组,3瓶),在上述基础上立即加入FGF2(FGF2组,10μg/L,3瓶)。两组细胞继续常规培养30 min后作免疫荧光双标记,利用激光扫描共聚焦显微镜观察细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)和增殖细胞核抗原(PCNA)以及S100蛋白、磷酸酪氨酸蛋白(P-tyr)、src基因产物蛋白同源的酪氨酸激酶催化功能区-2(SH2-P)表达的变化。结果热损伤组细胞可以同时表达caspase-3蛋白和PCNA两种抗体, 其灰度值分别为140±31、52±8;FGF2组细胞亦见上述两种抗体表达,灰度值分别为75±28、131± 17,PCNA表达量与热损伤组比较,差异有统计学意义(P<0．05)。同时,热损伤组成纤维细胞S100、 P-tyr蛋白、SH2-P蛋白表达阳性,FGF2组细胞S100蛋白和SH2-P的表达明显较弱(P<0．05)、P-tyr 的表达略有减弱。结论离体情况下,热损伤可诱导成纤维细胞凋亡信号的表达;S100蛋白在 FGF2对热损伤导致的凋亡成纤维细胞的增殖和抗凋亡作用中扮演重要角色。     

瑞芬太尼对肠缺血再灌注大鼠肠上皮细胞凋亡时MAPK信号通路的影响

目的:评价瑞芬太尼对肠缺血再灌注大鼠肠上皮细胞凋亡时丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。方法:清洁级健康成年雄性SD大鼠36只,体重200～250 g,2月龄,采用随机数字表法分为3组( n＝12)：假手术组(Sham组)、肠缺血再灌注组(I/R组)和瑞芬太尼组(R组)。采用夹闭大鼠肠系膜上动脉1...     

低温缺氧-复氧处理的心肌成纤维细胞源性外泌体对大鼠低温心脏缺血再灌注时心室肌电传导的影响

目的评价低温缺氧-复氧处理的心肌成纤维细胞源性外泌体对大鼠低温心脏缺血再灌注时心室肌电传导的影响。方法 SPF级SD乳鼠, 1～2日龄, 雌雄不拘, 差速贴壁法提取原代心肌成纤维细胞。传代至2～4代, 待细胞密度达60%～70%, 将其转移至4 ℃、95%N2+5%CO2条件下培养1 h, 继续于37 ℃、95%空气+5%CO2条件下培养24～48 h, 随后提取外泌体。SPF级雄性SD大鼠24只, 2～3月龄, 体质量280～360 g, 根据随机数字表法分为3组(n=8):对照组(C组)、低温缺血再灌注组(IR组)和外泌体+低温缺血再灌注组(Exo-IR组)。于平衡灌注前48 h时, Exo-IR组尾静脉无菌注射低温缺氧-复氧处理的心肌成纤维细胞源性外泌体1.5 ml (200 μg), C组和IR组尾静脉注射PBS各1.5 ml。C组平衡灌注110 min;IR组和Exo-IR组平衡灌注20 min, 停灌60 min后再灌注30 min。分别于平衡灌注20 min、再灌注15和30 min时应用微电极阵列标测技术获取左心室心肌传导速度(CV)、传导绝对不均一性(P5-95)和不...     

吗啡预处理对慢性心力衰竭大鼠心肌缺血再灌注损伤及心肌磷酸化细胞外信号调节激酶1/2表达的影响

目的 探讨吗啡预处理对慢性心力衰竭大鼠心肌缺血再灌注损伤及心肌磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)表达的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠48只,体重220～250 g,采用随机数字表法,将其随机分为6组(n=8):正常对照组(C组)、假手术组(S组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)和吗啡低、中、高剂量预处理组(MP1-3组).C组尾静脉注射生理盐水5 ml/kg,其余各组给予阿霉素2.0 mg/kg,每周1次,共6次,建立慢性心力衰竭模型.于末次给药后14 d,采用彩色超声仪测量左心室舒张末期内径(LVEDD)和左心室收缩末期内径(LVESD),计算左心室射血分数(LVEF)和左心室短轴缩短率(LVFS),并取颈动脉血样,测定血浆脑利钠肽(BNP)浓度.于末次给药后16 d,采用阻断冠状动脉左前降支30 min,再灌注120 min制备心肌缺血再灌注模型.S组仅穿线不结扎;MP1 -3组分别静脉输注吗啡0.015、0.030、0.050 mg/kg,输注5min,停止5min,重复3次,I/R组给予等容量生理盐水.除C组外,其余各组于再灌注120 min时处死大鼠,取心脏,测定缺血危险区(AAR)和梗死区(IS)的体积,计算IS/AAR比值,并采用Western blot法检测心肌p-ERK1/2表达.结果 与C组比较,其余各组LVESD升高,LVEF和LVFS降低,血浆BNP浓度升高(P＜0.01);S组未检测到心肌梗死;与S组比较,I/R组和MP1组心肌p-ERK1/2表达下调(P＜0.05),MP2组及MP3组差异无统计学意义(P＞0.05);与I/R组比较,MP2组和MP3组IS体积和IS/AAR比值降低,心肌p-ERK1/2表达上调(P＜0.05),MP1组差异无统计学意义(P＞0.05);MP1组～MP3组IS体积和IS/AAR比值逐渐降低,心肌p-ERK1/2表达逐渐上调(P＜0.05).结论 吗啡预处理可减轻慢性心力衰竭大鼠心肌缺血再灌注损伤,且呈剂量依赖性,其机制与上调心肌p-ERK1/2表达有关.     

血红素加氧酶-1对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的影响

目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的影响.方法 新生SD大鼠8只,日龄1～3 d,原代培养心肌细胞,随机分为4组:正常对照组(C组)常规培养8 h;缺氧复氧组(HR组)采用缺氧2 h,复氧6 h的方法制备心肌细胞缺氧复氧模型;血晶素组(Hemin组)缺氧前24 h及缺氧即刻,培养基中加入Hemin,终浓度为20 μmol/L;血晶素+锌原卟啉组(Hemin+ZnPP组)缺氧前24 h及缺氧即刻培养基中同时加入Hemin及ZnPP,终浓度均为20 μmol/L.各组细胞均接种于35 mm培养皿(2 ml/皿)或50 ml培养瓶(3 ml/瓶),每组45皿和3瓶.于复氧结束后采用蛋白印迹法测定心肌细胞HO-1表达,台盼蓝染色法测定心肌细胞存活率,应用全自动生化分析仪测定细胞培养液乳酸脱氧酶(LDH)活性,超声破碎细胞离心后取上清,采用硫代巴比妥酸法测定细胞MDA水平,黄嘌呤氧化酶法测定细胞SOD活性.结果 与C组比较,其余3组培养液LDH活性、心肌细胞MDA水平及HO-1表达升高,心肌细胞存活率及SOD活性降低(P＜0.05).与HR组比较,Hemin组培养液LDH活性、心肌细胞MDA水平降低,HO-1表达、心肌细胞存活率及SOD活性升高(P＜0.05),Hemin+ZnPP组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).HR组和Hemin+ZnPP组细胞缺氧复氧损伤明显,Hemin组细胞缺氧复氧损伤减轻.结论 HO-1可减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤.     

二氮嗪预先给药对大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧复氧时PI3K mRNA和Akt mRNA表达的影响

目的 评价二氮嗪预先给药对大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧复氧时磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K) mRNA和蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt) mRNA表达的影响.方法 培养SD大鼠心肌微血管内皮细胞,以1×106个/ml密度接种于96孔培养板(100μl/孔)或培养皿(2 ml/皿),采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=25).正常对照组(C组)不作任何处理;缺氧复氧组(H/R组)、二氮嗪预先给药组(DZ组)、二氮嗪预先给药+线粒体ATP敏感性钾通道阻断剂5-羟葵酸组(DZ+ 5-HD组)均进行缺氧2h,复氧2h.DZ组和DZ+ 5-HD组在缺氧前2h分别加入100 μmol/L二氮嗪、100μnol/L二氮嗪+ 100 μmol/L 5-羟葵酸.于复氧2h时测定细胞活力、细胞凋亡率、PI3K mRNA和Akt mRNA表达.结果 与C组比较,H/R组细胞活力降低,细胞凋亡率升高,PI3K mRNA和Akt mRNA表达上调(P＜0.05或0.01);与H/R组比较,DZ组细胞活力升高,细胞凋亡率降低,PI3K mRNA和Akt mRNA表达上调(P ＜0.05或0.01);5-羟葵酸可逆转二氮嗪预先给药导致的上述改变(P＜0.05或0.01).结论 二氮嗪预先给药减轻大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧复氧损伤的机制与激活线粒体ATP敏感性钾通道,促进PI3K和Akt基因的转录有关.     

血管紧张素Ⅱ对增生性瘢痕成纤维细胞细胞外信号调节激酶活性的影响

目的：本研究硼察血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）对增生性瘢痕成纤维细胞细胞外信号调节激酶（extracellular　signal-regulated kinase，ERK）活性的影响，旨在探讨其影响增生性瘢痕成纤维细胞生物学行为的信号机制。方法：取自愿捐献的增生性瘢痕组织标本，采用胶原酶法行成纤维细胞培养。用免疫荧光组织化学法检测细胞AT1和AT2受体的表达。取第3～4代细胞，并按实验设计，分别加入10^-2mol／L Ang Ⅱ，10^-7mol／L Ang Ⅱ＋10μmol／L Valsartan，10^-7mol／L Ang Ⅱ＋10μmol／L PD123319，10μmol／L Valsartan，10μmol／LPD123319共5组：对照组仅加入等量DMEM。以Western Blot法检测培养的细胞细胞外信号调节激酶（extracellular Signal-regulated kinases，ERK）活性变化，观察在阻断AT1或AT2受体情况下AngⅡ对培养的瘢痕成纤维细胞ERK磷酸化的影响。结果：免疫荧光组织化学染色结果显示培养的增生性瘢痕成纤维细胞同表达AT1和AT2受体。AngⅡ可增加培养的增生性瘢痕成纤维细胞ERK磷酸化。在一定剂量范围内，AngⅡ浓度增加，细胞ERK磷酸化程度增加。与对照组比较10^-7mol／L Ang Ⅱ显著增加瘢痕成纤维细胞ERK磷酸化，且差异有统计学意义（P〈0．05）。10μmol/L AT2受体拮抗剂PD1233191可显著增强AngⅡ诱导的细胞ERK磷酸化（P〈0．05）：10μmol／L的AT1受体拮抗剂Valsattan可显著抑制AngⅡ诱导的细胞ERK磷酸化；Valsattan或PD1233191单独刺激细胞并未明显影响ERK磷酸化（P〉0．05）。应用抗ERK抗体显示各组ERK含量一致。结论：AngⅡ通过其受体AT1和AT2可调控增生性瘢痕成纤维细胞ERK磷酸化，AngⅡ对增生性瘢痕成纤维细胞ERK活性的影响可能是AngⅡ调控增生性瘢痕成纤维细胞生物学行为可能的信号机制之一。     

甘氨酸对大鼠缺血缺氧心肌细胞凋亡的影响

目的 明确甘氨酸对缺血缺氧致心肌细胞凋亡过程的影响.方法 建立SD乳鼠心肌细胞缺血缺氧模型,分为单纯缺血缺氧组和甘氨酸处理组(培养液中加入终浓度5 mmoL/L甘氨酸,其余处理同单纯缺血缺氧组).以SD乳鼠正常心肌细胞作为对照组.3组细胞培养6 h后,检测凋亡情况、线粒体跨膜电位及分布情况、线粒体通透性转换孔(mPTP)开放情况及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性变化.结果 (1)细胞凋亡程度:对照组和甘氨酸处理组荧光强度均明显低于单纯缺血缺氧组(P<0.01).(2)线粒体跨膜电位:对照组心肌细胞荧光强度为73±4,单纯缺血缺氧组荧光强度(32±7)明显较弱(P＜0.01),甘氨酸处理组荧光强度(52±4)强于单纯缺血缺氧组(P＜0.01).(3)mPTP开放情况:对照组心肌细胞线粒体荧光强度(90±7)较强,甘氨酸处理组荧光强度(62±8)明显强于单纯缺血缺氧组(27±4,P＜0.01).(4)caspase-3活性:对照组和甘氨酸处理组均显著低于单纯缺血缺氧组(P＜0.01).结论 甘氨酸对缺血缺氧心肌细胞具有抗凋亡作用,其机制可能与改变线粒体膜电位、减少mPTP开放、减轻钙超载、降低caspase-3活性有关.     

托烷司琼对缺氧复氧心肌细胞焦亡的影响：与α7nAchR的关系

目的:评价托烷司琼对缺氧复氧心肌细胞焦亡的影响及其与α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)的关系。方法:正常培养的H9C2心肌细胞,采用随机数字表法分成4组( n＝6)：对照组(C组)、缺氧复氧组(H/R组)、托烷司琼+缺氧复氧组(Tro+H/R组)和α7nAchR拮抗剂MLA+托烷司琼+缺氧复氧组(ML...     

舒芬太尼对高糖孵育下 H9c2细胞缺氧复氧损伤的影响

目的 评价舒芬太尼对高糖孵育下H9c2细胞缺氧复氧损伤的影响.方法 取H9c2细胞在含10%胎牛血清低糖DMEM/F12完全培养基中培养、传代,细胞接种于96孔(100μl/孔)和6孔(2ml/孔)细胞培养板,接种密度105/ml.采用随机数字表法,将细胞随机分为5组,每组12孔,正常糖对照组(NC组)用低糖培养基孵育细胞48 h;高糖对照组(HC组)用高糖(25 mmol/L)培养基孵育细胞48h;高糖+缺氧复氧组(HAR组)用高糖培养基孵育细胞48 h后,行缺氧3 h复氧3 h;高糖+舒芬太尼+缺氧复氧组(HSAR组)用高糖培养基孵育细胞48 h后加入舒芬太尼(终浓度为10-9mol/L),15min后行缺氧复氧处理;高糖+纳洛酮+缺氧复氧组(HNAR组)用高糖培养基孵育细胞48 h后加入纳洛酮(终浓度为10-6mol/L),10 min后加入舒芬太尼(终浓度为10-9mol/L),15 min后行缺氧复氧处理.各组处理后收集细胞,用MTT法测定细胞活力;收集细胞培养液测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量;超声破碎法采集细胞匀浆液,采用黄嘌呤氧化酶法测定细胞SOD活性.结果 与NC组比较,其余各组细胞活力和SOD活性降低,LDH漏出量增多(P＜0.01).与HC组比较,HAR组和HNAR组细胞活力和SOD活性降低,LDH漏出量增多(P＜0.01).与HAR组比较,HSAR组细胞活力和SOD活性升高,LDH漏出量减少(P＜O.01),HNAR组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).与HSAR组比较,HNAR组细胞活力和SOD活性降低,LDH漏出量增多(P＜0.01).结论 舒芬太尼可减轻高糖孵育下H9c2细胞缺氧复氧损伤,其机制可能与激活阿片受体有关.

Abstract：

Objective To investigate the effect of sufentanil on anoxia/rexogenation (A/R)-induced injury to H9c2 cells incubated in high-glucose culture medium. Methods The H9c2 cells were cultured in low-glucose DMEM/F12 culture medium supplemented with 10% fetal bovine serum. The cells were seeded in 96-well or 6-well plates and randomly divided into 5 groups ( n = 12 wells each): normal glucose control group (group NC),high-glucose control group (group HC), high-glucose + A/R group (group HA/R), high-glucose + sufentanil +A/R group (group HSA/R), high glucose + naloxone + A/R group (group HNA/R). The cells were exposed to 95 % N2-5 % CO2 in an incubator at 37 ℃ for 3 h followed by 3 h reoxygenation. In group NC, the cells were incubated in low-glucose culture medium for 48 h. In group HC, the cells were incubated in high-glucose culture medium for 48 h. In group HA/R, the cells were incubated in high-glucose culture medium for 48 h before anoxia.In group HSA/R, after the cells were incubated in high-glucose culture medium for48 h, sufentanil was added to the culture medium with the final concentration of 10-9 mol/L at 15 min before anoxia. In group HNA/R, after the cells were incubated inhigh-glucose culture medium for 48 h, naloxone was added to the culture medium with the final concentration of 10-6 mol/L, 10 min later sufentanil was added with the final concentration of 10-9 mol/L at 15 min before anoxia. The cell viability was measured by MTT assay. The amount of lactic dehydrogenase (LDH) released in the supernatant and superoxide dismutase (SOD) activity were measured. Results The cell viability and SOD activity were significantly lower, while the amount of LDH released was significantly higher in the other groups than in group NC, in groups HA/R and HNA/R than in group HC, and in group HNA/R than in group HSA/R (P ＜ 0.01 ). The cell viability and SOD activity were significantly higher, while the amount of LDH released was significantly lower in group HSA/R than in group HA/R ( P ＜ 0.01 ). There was no significant difference in the parameters mentioned above between group HNA/R and group HA/R ( P ＞ 0.05). Conclusion Sufentanil can attenuate A/R-induced injury to H9c2 cells with high-glucose incubation, and the mechanism may be related to the activation of opioid receptors.     

大鼠供肾转染反义ERK2基因减缓肾移植后慢性移植肾肾病的作用及机制

目的 研究腺病毒介导的反义ERK2(A-dant-ERl(2)基因转染供肾对减缓肾移植后发生慢性移植肾肾病(CAN)的作用及机制.方法 建立大鼠间肾移植模型.按供肾移植前处理方式的不同分为对照组、空载病毒组和基因转染组,每组6只.对照组供肾灌注无菌HTK液0.5 ml,空载病毒组供肾灌注含5x109>pfu LaeZ基因腺病毒(Ad-LacZ)的HTK液0.5 ml,基因转染组供肾灌注含5x 109>pfu Adanti-ERK2的HTK液0.5 ml.肾移植术后24周行移植肾的病理学观察,免疫组织化学法观察肾小管上皮细胞表面标志蛋白E-Cadherin、Vimentin、TβRⅠ的表达以及CD4+、CD8+T淋巴细胞和ED-1+细胞的浸润情况;酶联免疫法检测受者血清中转化生长因子β1>(TGF-β1>)的含量.结果 肾移植术后24周,对照组和空载病毒组移植肾呈CAN表现;肾小球硬化,肾小管萎缩明显,伴严重间质纤维化以及明显的CD4+、CD8+T淋巴细胞和ED-1+细胞浸润;病变区肾小管上皮细胞E-Cadherin表达减少,Vimentin、TβRⅠ表达显著增多.基因转染组移植肾间质内仅有少量CD4+、CD8+T淋巴细胞和ED-1+细胞浸润;肾小管上皮细胞E-Cadherin表达正常.对照组和空载病毒组血清中TGF-β1>,含量明显高于基因转染组.结论 Adanti-ERK2基因转染移植肾可减缓CAN的发生,对移植肾具有保护作用.这种保护机制可能与减少炎症细胞的浸润、下调TGF-β1>,等致纤维化因子的表达以及抑制肾小管上皮细胞向间充质细胞的转化有关.     

肌肉转录调节因子和连接蛋白43基因表达对大鼠成纤维细胞分化的生长特性及生物学功能影响

目的通过观察转染肌肉转录调节因子(myoblast determining,MyoD)基因和连接蛋白43(connexin43,Cx43)基因的大鼠成纤维细胞(fibroblast,FB)分化生长及生物学功能的改变,初步探讨MyoD和Cx43基因转染FB治疗缺血性心脏病(ischemic heart disease,IHD)的可能机制和途径。方法构建真核表达的质粒载体pLenti6/V5-DEST-MyoD和pLenti6/V5-DEST-Cx43,利用慢病毒表达系统,将MyoD和Cx43基因转入大鼠RFL-6FB;经终浓度为50μg/ml的Blasticidin进行筛选培养后,通过RT-PCR、Western blot等分子生物学手段确定MyoD和Cx43的转录和表达情况;借助免疫细胞化学、显微镜观察等手段对MyoD的肌肉特异性蛋白和Cx43连接蛋白进行检测,并观察转染后FB的生长情况。结果RT-PCR和Western blot检测出MyoD和Cx43基因转染后FB表达了相应mRNA及其蛋白,免疫细胞化学检测转染的FB细胞中Desmin、α-actin呈阳性表达。经分化培养基诱导,培养1周后,FB出现多细胞融合及肌管形成。结论MyoD及Cx43基因转染可改变FB的生物学特性,转向分化为成肌细胞,并能形成多核肌管及连接蛋白,形态学也得以证实,为进一步研究MyoD和Cx43基因转染FB治疗IHD提供了实验基础。     

七氟醚处理后的低温缺氧-复氧心脏成纤维细胞培养液对心肌细胞的影响

目的 观察七氟醚对低温缺氧-复氧心脏成纤维细胞(CFs)培养液中心肌细胞搏动及缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响.方法 培养4 d的正常原代CFs随机分为三组:对照组(C组)、缺氧-复氧损伤组(IR组)和七氟醚组(Sev组),每组约5×105个细胞.C组CFs持续培养5 h;IR组和Sev组CFs低温缺氧1 h(4...     

ERK1/2 MAPK通路在TIMP-1抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡中的作用

目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2)丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)通路在基质金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡中的作用。 方法 将人正义、反义TIMP-1用脂质体法转染大鼠肾小球系膜细胞，并将细胞分为正常对照组、未转染组、空载体组、正义转染组和反义转染组。各组细胞分别用高糖(25 mmol/L)和(或)MEK(ERK1/2通路中的MAPK激酶)特异性抑制剂PD98059(50 μmol/L)刺激24 h。应用透射电镜观察细胞内部结构变化。Western 印迹观察磷酸化(p)的ERK1/2、P90rsk、Bad及总的P90rsk、Bad、Bcl-2蛋白的表达。 结果 加入PD98059后，各组细胞内可见凋亡小体形成、细胞皱缩、核固缩、染色体边集及膜泡样突变等现象，与未转染组比较，以反义转染组最明显，凋亡细胞数目最多；正义转染组细胞形态改变不十分明显，凋亡细胞数目相对较少。此外，加入PD98059后，ERK1/2、P90rsk、Bcl-2及Bad的磷酸化明显减少(P < 0.05)，ERK1/2和P90rsk的磷酸化以正义转染组最明显(P < 0.01)；总P90rsk、总Bad表达量在各组之间无显著差异。 结论 ERK1/2 通路在TIMP-1抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡过程中起重要作用。     

结缔组织生长因子影响体外培养瘢痕成纤维细胞ERK／MAPK信号通路活化及增殖的研究

目的探讨结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）诱导增生性瘢痕（hypertrophic scar,HS）成纤维细胞增殖的信号转导通路。方法采用。H-胸腺嘧啶核苷（^3H—TdR）掺入法观察不同浓度CTGF促HS成纤维细胞增殖的效应,以Western印迹法检测CTGF刺激HS成纤维细胞0、5、10、15、30、60min后,磷酸化及非磷酸化细胞外信号调节激酶1／2（extracellular-signal regulated kinase,ERK1／2）的表达,以两者的比值AI衡量信号通路活化程度;应用特异性阻断剂PD98059阻断ERK通路,MTT法检测CTGF诱导细胞增殖的变化。结果CTGF在一定浓度范围内呈浓度依赖性促HS成纤维细胞增殖,ERK1／2在无CTGF刺激时AI为0．0131±0．0036,CTGF刺激HS成纤维细胞5、10、15、30、60min后,AI值分别为0．0221±0．0033,0．1310±0．0361,0．2090±0．0201,0．1710±0．0379,0．0413±0．0036,在15min达高峰;采用PD98059选择性阻断ERK1／2通路后（A=0．420±0．046）与CTGF刺激组比较（A=0．660±0．035）,细胞增殖显著受到抑制（P〈0．01）。结论ERK1／2是CTGF诱导HS成纤维细胞增殖的主要活化的信号通路。