消化系肿瘤增殖诱导配体高表达细胞株的筛选

目的 筛选出增殖诱导配体(APRIL)mRNA高水平表达的人消化系肿瘤细胞株,为进一步探讨APRIL基因在消化系统肿瘤发生、发展以及转移过程中的作用机制奠定基础.方法 选择2株人胃癌细胞(AGS、SGC7901)和3株人胰腺癌细胞(PANC1、CFPAC-1、BxPC3)培养提取mRNA后,逆转录成cDNA作PCR模板.以APRIL基因高保守区设计特异性的引物,以磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)为内参,PCR扩增目的片段,通过计算机图像扫描系统分析各株细胞的APRIL mRNA的表达量,以表达量最高的1株作为1,获得各细胞株的APRIL mRNA表达量的相对值.结果 5株细胞APRIL mRNA的相对值分别为:AGS,0.09;SGC 7901,0.61;PANC 1,0.45;CFPAC 1,1;BxPC3,0.57,按表达量高低顺序为:CFPAC 1 ＞ SGC 7901 ＞ BxPC3 ＞ PANC 1 ＞ AGS.结论 在不同肿瘤细胞中APRIL的表达有高有低,提示APRIL基因在肿瘤发生、发展过程中起一定作用.     

胰腺癌细胞株原钙黏附蛋白8基因的甲基化状态

目的 分析原钙黏附蛋白8(protocadherin 8,PCDH8)基因在胰腺癌细胞株的甲基化状态.方法 抽提6株胰腺癌细胞株PANC1、ASPC1、BxPC3、CFPAC、PaTu8988、SW1990和2例正常胰腺组织的总RNA,以甲基化特异性PCR(MSP)法检测PCDH8甲基化情况.应用DNA甲基化转移酶(DNMT)抑制剂5-氮杂2'-脱氧胞苷(5-Aza-dC)处理6株胰腺癌细胞株,采用实时定量PCR法检测处理前后细胞的PCDH8 mRNA表达.结果 2例正常胰腺组织PCDH8基因未发生甲基化,PANC1、BxPC3、CFPAC胰腺癌细胞株PCDH8基因部分甲基化,而PaTu8988、ASPC1、SW1990细胞完全甲基化.PCDH8mRNA在PANC1、SW1990、PaTu8988胰腺癌细胞株中有表达,表达的相对值(RQ)分别为1.576±0.648、0.013±0.008、0.002±0.001;BxPC3、CFPAC、ASPC1细胞株无PCDH8 mRNA表达.5-Aza-dC处理后,胰腺癌细胞株PANC1、ASPC1、BxPC3、CFPAC、PaTu8988、SW1990均有PCDH8 mRNA表达,表达量较处理前明显升高,相对表达量分别为7.463±2.628、10.696±1.539、7.852±2.762、421.815±1.493、118.595±4.089、6.690±1.884.结论 PCDH8基因启动子高甲基化是导致该基因在胰腺癌细胞株表达下降的主要原因之一.     

胰腺癌细胞株中Elastase 3B基因启动子异常甲基化研究

目的探讨Elastase 3B（ELA3B）基因在胰腺癌中低表达的分子机制。方法应用RT-PCR方法检测2例正常胰腺组织和BxPC、CFPAC、PaTu8988、PANC1、SW1990 5株胰腺癌细胞株ELA3B基因表达。利用去甲基化试剂5-氮-2′-脱氧胞嘧啶（DAC）处理细胞株,再检测ELA3B基因表达,并用甲基化特异性PCR检测和测序进行验证。结果ELA3B在正常胰腺组织中表达,而在BxPC、CFPAC、PaTu8988、PANC1和SW1990 5株胰腺癌细胞株中均无表达。DAC处理后,BxPC、PaTu8988、PANC1和SW1990 4株胰腺癌细胞株表达ELA3B,而CFPAC仍不表达。正常胰腺组织和PANC1 ELA3B基因部分甲基化,而其他4株胰腺癌细胞株则高甲基化。结论ELA3B基因启动子的高甲基化是导致该基因在胰腺癌中表达下降的主要原因之一。     

胰腺癌细胞株HOXA7基因表达及其启动子区甲基化状态

目的 检测HOXA7 mRNA在胰腺癌细胞株中的表达及其启动子区的甲基化状态,探讨两者的相关性.方法 采用RT-PCR法检测人胰腺癌细胞株BxPC3、CFPAC1、PANC1和SW1990细胞的HOXA7 mRNA的表达水平.采用重亚硫酸盐测序PCR(bisulfite sequencing PCR,BSP)和结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法(combined bisulfite restriction analysis,COBRA)检测启动子区域甲基化状态.应用去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2-deoxycytidine,5-aza-dC)处理各细胞株,检测处理前后细胞HOXA7 mRNA表达和甲基化状态的变化.结果 胰腺癌细胞株BxPC3、CFPAC1和SW1990细胞均表达HOXA7 mRNA,而PANC1细胞不表达HOXA7 mRNA.CFPAC1、BxPC3、PANC1和SW1990中HOXA7启动子甲基化率分别为93.16%、90.65%、90.09%、52.30%,SW1990细胞的HOXA7甲基化率较其他三株细胞均明显降低(P值均＜0.01).经5-aza-dC处理后,PANC1细胞的HOXA7 mRNA重新表达,BxPC3的HOXA7 mRNA表达增强;而CFPAC1和SW1990细胞的HOXA7 mRNA在5-aza-dC处理前后无明显变化.结论 胰腺癌细胞株BxPC3和PANC1细胞的HOXA7mRNA表达与启动子区甲基化状态密切相关,而CFPAC 1和SW1990细胞两者无明显相关性.     

胰腺癌细胞株中Elastase 3B基因启动子异常甲基化研究

目的 探讨Elastase 3B(ELA3B)基因在胰腺癌中低表达的分子机制.方法 应用RT-PCR方法检测2例正常胰腺组织和BxPC、CFPAC、PaTu8988、PANC1、SW1990 5株胰腺癌细胞株ELA3B基因表达.利用去甲基化试剂5-氮-2'-脱氧胞嘧啶(DAC)处理细胞株,再检测ELA3B基因表达,并用甲基化特异性PCR检测和测序进行验证.结果 ELA3B在正常胰腺组织中表达,而在BxPC、CFPAC、PaTu8988、PANC1和SW1990 5株胰腺癌细胞株中均无表达.DAC处理后,BxPC、PaTu8988、PANC1和SW1990 4株胰腺癌细胞株表达ELA3B,而CFPAC仍不表达.正常胰腺组织和PANC1 ELA3B基因部分甲基化,而其他4株胰腺癌细胞株则高甲基化.结论 ELA3B基因启动子的高甲基化是导致该基因在胰腺癌中表达下降的主要原因之一.     

amiRNA-Snail逆转人胃癌细胞株SGC7901／DDP对顺铂的耐药性及其机制研究

多药耐药是恶性肿瘤化疗失败的主要原因。研究显示锌指转录因子Snail介导肿瘤细胞发生上皮间质转化（EMT）可促成肿瘤对化疗耐药。目的：探讨人工合成microRNA．Snail（amiRNA．Snail）逆转人胃癌细胞株SGC7901／DDP对顺铂（DDP）耐药性的作用及其可能机制。方法：构建稳定转染amiRNA-Snail质粒或阴性对照质粒的SGC7901／DDP细胞株（SGC7901／DDP-amiRNA组和SGC7901／DDP-Mock组）,以蛋白质印迹法、免疫荧光法检测各组细胞中的Snail、耐药基因ERCCl、Snail下游靶基因E-cadherin蛋白表达,以CCK-8法检测各组细胞经不同浓度DDP（O．01、0．1、1．0、10．0mg／L）作用后的存活率,计算DDP对细胞的半数抑制浓度（IC。）。结果：DDP耐药SGC7901／DDP细胞中的Snail蛋白相对表达量显著高于DDP敏感亲本SGC7901细胞（尸〈0．05）。SGC7901／DDP-amiRNA组细胞Snail、ERCCl蛋白相对表达量显著低于SGC7901／DDP．Mock组细胞（P〈0．05）,荧光强度明显减弱：E-cadhehn蛋白相对表达量显著高于SGC7901／DDP-Mock组细胞（P〈0．05）．荧光强度明显增强。DDP对SGC7901／DDP．amiRNA组细胞的IC。值显著低于SGC7901／DDP．Mock组细胞（P〈0．05）。结论：以amiRNA-Snail沉默Snail基因表达可能通过下调ERCCl表达、上调E-cadherin表达而逆转人胃癌细胞株SGC7901／DDP对DDP的耐药性。     

胰腺癌CFPAC1细胞增殖诱导配体基因shRNA慢病毒表达载体的构建

目的 构建针对人胰腺癌细胞株CFPAC1增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)基因的shRNA慢病毒表达载体.方法 应用基因工程技术,筛选出针对APRIL基因的RNAi靶序列,与pGCL-GFP载体连接,构建慢病毒表达载体LV-shAPRIL;将连接产物转化到DHSα感受态细胞,经PCR筛选阳性克隆、测序鉴定.再用LV-shAPRIL、pHelper 1.0、pHelper 2.0共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒.重组慢病毒感染CFPAC1细胞,实时定量PCR和Western blotting检测CFPAC1细胞APRIL mRNA和蛋白的表达.结果 PCR和测序结果与构建的慢病毒载体的预期结果一致,经包装产生的病毒滴度为5×107TU/ml.构建的慢病毒载体感染CFPAC1细胞后第4天、第4周和第8周,APRIL mRNA表达量较空载体慢病毒感染组分别下降了73%、70%和71%;APRIL蛋白表达量分别下降了66%、63%和62%(P＜0.05).而各时间段未感染慢病毒的细胞组与空载体组相比无明显差异(P＞0.05).结论 成功构建了APRIL基因的shRNA慢病毒表达载体LV-shAPRIL.     

三氧化二砷协同肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体抗胃癌细胞的作用及其机制

目的研究三氧化二砷（As2O3）联合肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体（TRAIL）对胃癌细胞生长和凋亡的影响及其机制。方法人胃腺癌细胞株SGC7901以As2O3、rsTRAIL及两者联用处理；用MTT法检测细胞生长；用双染色流式细胞仪检测细胞凋亡；用间接免疫荧光染色结合流式细胞技术检测细胞表面TRAIL R1／DR4和TRAIL R2／DR5分子表达；RT—PCR方法检测TRAIL R1／DR4和TRAIL R2／DR5 mRNA表达。结果As2O3和rsTRAIL在单用或联用时均可以抑制胃癌细胞SGC7901生长，并在一定范围内呈时间、剂量依赖性；联合用药组抑制率显著高于单用As2O3或rsTRAIL组（P〈0．01），金正均方法分析提示两药联用有协同抑制细胞生长效应。As2O3和rsTRAIL在单用或联用时均可以诱导胃癌细胞SGC7901凋亡，联合用药组细胞凋亡率显著高于单用As2O3或rsTRAIL组（P〈0．01）。As2O3单独或联合rsTRAIL作用于SGC7901细胞24h后，死亡受体TRAIL R1／DR4和TRAIL R2／DR5在细胞表面的表达明显上调（P〈0．01），其mRNA表达水平亦相应增加（P〈0．01）。结论As2O3联合rsTRAIL可以协同抑制胃癌细胞SGC7901生长并显著增强两药诱导胃癌细胞凋亡的作用，其机制可能是As2O3增加细胞TRAIL R1／DR4和TRAIL R2／DR5 mRNA表达、上调细胞表面TRAIL死亡受体从而增加胃癌细胞SGC7901对rsTRAIL的敏感性。     

DNA甲基转移酶3b和microRNA-29b在胰腺癌细胞株中的表达及其相关性

目的 明确胰腺癌细胞株甲基转移酶( DNMT)3b和microRNA-29b(miR-29b)的表达,分析两者的相关性.方法 应用实时定量PCR法检测人胰腺癌细胞株PANC1、BxPC3、CFPAC、AsPC-1、Capan-2的DNMT3b mRNA和miR-29b表达.采用Pearson直线相关分析法分析两者表达量的相关性.结果 PANC1、BxPC3、CFPAC、AsPC-1、Capan-2的DNMT3b mRNA相对表达量分别为0.497±0.184、0.420±0.168、0.439±0.217、0.122 ±0.111和0.731±0.387;miR-29b的相对表达量分别为0.745±0.596、0.464±0.430、0.797±1.000、1.836±1.623和0.216 ±0.335,DNMT3b mRNA的表达量和miR-29b的表达量呈负相关关系(r=-0.922,P=0.026).结论 DNMT3b和miR-29b均参与了胰腺癌的发生发展,两者呈负相关关系.     

核糖核酸干扰下调骨桥蛋白表达对胃癌细胞生物学行为的影响

目的探讨骨桥蛋白（OPN）下调对胃癌细胞株MKN28和SGC7901生物学行为的影响。方法参考相关文献，设计并合成OPN的小干扰RNA（siRNA），通过荧光标记测定2株细胞的转染效率。Western印迹法检测OPN蛋白下调情况。实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测siRNA对OPNmRNA的下调率及随时间的变化。流式细胞仪检测转染前、后细胞周期和凋亡变化。四甲基偶氮唑蓝（MTT）法连续7d检测OPN干扰时肿瘤细胞增殖的变化，并采用混合模型进行统计分析。Transwell实验检测转染前、后细胞的运动侵袭能力并行t检验进行分析。结果2株细胞中OPN siRNA的转染效率均在90％以上。干扰后2株细胞中OPN蛋白表达均下调。SGC7901细胞在siRNA转染后72hOPN mRNA表达下降最低，达47％；MKN28细胞在siRNA转染后48hOPN mRNA表达下降最低，达40％。OPN被干扰后，SGC7901和MKN28细胞的增殖能力明显减弱（混合模型分析与未干扰组比较，P〈0．01）。OPN被干扰后MKN28和SGC7901细胞周期受到影响，其中SGC7901分裂期细胞比例由18．78％降至17．02％，MKN28分裂期细胞比例则由4．96％降至0．39％。2株细胞都未发现下调OPN后诱发细胞凋亡。OPN下调后2株肿瘤细胞的运动侵袭能力均下降，穿过人工基底膜的细胞数明显减少（SGC7901：t=5．172，P〈0．01；MKN28：t=11．365，P〈0．01）。结论siRNA能下调MKN28和SGC7901中OPN表达，OPN可能与MKN28和SGC7901细胞的增殖和运动侵袭相关。     

MUC2基因甲基化在胰腺癌细胞株、胰腺癌患者外周血中的检测及意义

目的 检测MUC2基因在胰腺癌细胞株、胰腺癌患者外周血中的甲基化情况,探讨MUC2基因甲基化对胰腺癌早期诊断的价值.方法 收集长海医院消化内科实验室保存的人胰腺癌细胞系SW1990、ASPC、PANC1、BxPC3、PaTu8988、CFPAC1及40例胰腺癌、15例慢性胰腺炎患者和25例正常对照者外周血标本,应用甲基化敏感性限制性内切酶(methylation-sensitive restriction endonuelease,MS-RE)为基础的PCR法检测MUC2基因甲基化.结果 人胰腺癌细胞系PANC1、BxPC3、PaTu8988未发生MUC2基因甲基化;ASPC、CFPAC1、SW1990胰腺癌细胞系发生MUC2基因甲基化.外周血标本中,40例胰腺癌标本甲基化率为40.0%(16例),15例慢性胰腺炎无甲基化,25例正常对照甲基化率4.0%(1例).胰腺癌与慢性胰腺炎、正常对照之间的甲基化率有显著差异(P＜0.01).外周血标本MUC2基因启动子CpG岛甲基化检测诊断胰腺癌的敏感性为40%、特异性为97.5%、诊断准确性68.8%、阳性预测值94.1%、阴性预测值61.9%.结论 用甲基化限制性酶切PCR法对外周血进行MUC2基因启动子区高甲基化检测可望成为新的胰腺癌诊断的重要实验室辅助手段.     

癌性锚蛋白重复序列在胃癌细胞凋亡中的作用

目的 探讨癌性锚蛋白重复序列(Gankyrin)在人胃癌细胞的表达,以及在尼美舒利诱导细胞凋亡过程中的改变.方法 培养不同分化程度的人胃癌细胞系[MKN28(高分化)、AGS(低分化)、MKN45(低分化)和SGC7901(中分化)],以尼美舒利处理细胞,应用四甲基偶氮唑盐试验和流式细胞术检测细胞活力及细胞凋亡,实时PCR和Western印迹法检测Gankyrin基因和蛋白表达.结果 在4种不同分化程度的人胃癌细胞系中,均存在不同水平的Gankyrin基因和蛋白表达.尼美舒利以时间-剂量依赖方式抑制AGS、FYGC7901细胞增殖.与对照组相比,尼美舒利400 μmol/L处理48 h可诱导AGS、SGC7901细胞显著凋亡(细胞凋亡率分别为0.57%±0.19%比23.30%±2.50%和0.88%±0.17%比16.80%±1.55%,P均<0.01).在AGS细胞凋亡过程中,Gankyrin基因和蛋白表达水平下降,以尼美舒利作用后24 h(0.0035±0.0014)和36 h(0.0980±0.0160)改变最为显著(对照组为0.4690±0.1190,P值均<0.01).结论 在人胃癌细胞中存在Gankyrin基因和蛋白表达.Gankyrin可能参与尼美舒利诱导的AGS胃癌细胞凋亡.     

稳定转染15-PGDH基因对人胃癌细胞生长和迁移的影响

背景：前期研究表明胃癌组织中NAD＋依赖性15-羟基前列腺素脱氢酶（15-PGDH）表达明显减低,瞬时转染15-PGDH对人胃癌细胞的生长和迁移有一定抑制作用。目的：建立稳定转染15-PGDH基因的人胃癌细胞株SGC7901．观察恢复15-PGDH表达对胃癌细胞生长和迁移的影响,探讨15-PGDH与胃癌发生、发展的关系。方法：以双酶切和质粒测序鉴定真核表达质粒pcDNA3／15-PGDH,采用脂质体法将质粒转染人SGC7901细胞,G418筛选稳定转染株．实时聚合酶链反应（PCR）和蛋白质印迹法鉴定。分别以甲基噻唑基四唑（MTT）实验和细胞划痕实验检测稳定转染15-PGDH基因的SGC7901细胞株的增殖情况和迁移能力。结果：经4周G418筛选以及实时PCR和蛋白质印迹法鉴定,得到4株可稳定、较高水平表达15-PGDH的SGC7901细胞株。稳定转染15-PGDH基因的SGC7901细胞株．细胞生长和迁移能力显著低于空质粒组（P〈0．01）。结论：成功建立了稳定转染15-PGDH基因的SGC7901细胞株．恢复15-PGDH表达可显著抑制人胃癌细胞的生长和迁移。15-PGDH表达减低或缺失与胃癌的发生、发展密切相关。     

Stat3活性降低对人胃癌5-氟尿嘧啶耐药细胞的影响

目的探讨Stat3信号在人胃癌5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药细胞及其亲本细胞中活化水平的差异与胃癌耐药机制的关系。方法分别采用凝胶阻滞电泳法和Western blot法检测人胃癌细胞株SGC7901及其5-Fu耐药细胞株SGC7901／R中Stat3-DNA结合活性的变化和磷酸化Stat3蛋白的表达;半定量逆转录-PCR法检测耐药细胞及其亲本细胞中Stat3和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达;免疫细胞化学染色法显示VEGF蛋白在2种细胞内的表达情况。结果耐药细胞及其亲本细胞中有不同程度的Stat3组成性激活和磷酸化Stat3蛋白的表达;与亲本细胞SGC7901相比,耐药细胞SGC7901／R中Stat3-DNA的结合活性水平较低,磷酸化Stat3蛋白的表达减少;耐药细胞中Stat3 mRNA的表达下降,核因子-κB1 mRNA的表达显著上升,而VEGF mRNA及其编码的蛋白水平却较其亲本细胞降低。结论人胃癌5-FU耐药细胞株SGC7901／R中Stat3活性水平降低与其耐药机制相关,且可能与耐药细胞中VEGF表达减少有关。     

Investigation of the sensitivities of distinct gastric cancer cells to parvovirus H‐1 induced cytotoxicity

OBJECTIVE: To investigate the sensitivities of distinct gastric cancer cells to parvovirus H‐1 induced cytotoxicity and the possible mechanism(s). METHODS: There were six distinct differentiated gastric cancer cell lines: HGC27 (undifferentiated), BGC823 (undifferentiated), MKN45 (poorly differentiated), AGS (poorly differentiated), SGC7901 (moderately differentiated) and MKN28 (well differentiated). The cell cycle distributions were measured by flow cytometry and the differential sensitivities of the six distinct gastric cancer cells after H‐1 virus infection were detected by MTT assay. RT‐PCR was used to detect viral NS1 gene expression in all six gastric cancer cell lines. RESULTS: The S phase ratios of HGC27, BGC823, MKN45, AGS, SGC7901 and MKN28 were 24.72%, 30.15%, 27.10%, 29.03%, 31.82% and 33.73%, respectively. HGC27 cells were sensitive to H‐1 virus induced cytotoxicity, followed by SGC7901 cells. MKN45 and AGS cells were moderately sensitive and MKN28 cells were insensitive. However, BGC823 cells were resistant to H‐1 virus induced cytotoxicity. The expressions of viral NS1 were higher in HGC27, BGC823, MKN45 and SGC7901 cells, and lower in AGS and MKN28 cells. CONCLUSIONS: The sensitivities of the distinct gastric cancer cells to H‐1 virus induced cytotoxicity were markedly different. In general, the poorly differentiated cells showed an enhanced sensitivity to H‐1 virus attack compared with well‐differentiated ones. The enhanced sensitivity of poorly versus well‐differentiated gastric cancer cells to H‐1 virus is related in part to the enhanced capacity of the former for NS1 protein production and accumulation. The undifferentiated BGC823 cells were resistant to H‐1 virus triggered cytotoxicity. It may further verify that not all tumor cells are sensitive to H‐1 virus lytic effects.     

H3K27me3在胃癌中的表达及其临床意义

目的:研究H3K27me3在胃癌细胞和组织中的表达,并分析与临床病理因素的关系,探讨H3K27me3在胃癌发生发展中的作用和意义.方法:应用Western blot方法检测胃癌细胞系SGC7901、BGC823、AGS和正常胃黏膜上皮细胞GES-1中H3K27me3的表达;免疫组织化学方法检测61例胃癌组织及20例正常胃黏膜组织中H3K27me3的表达.结果:与正常胃黏膜细胞GES-1相比,H3K27me3在胃癌细胞SGC7901、BGC823、AGS中高表达;H3K27me3在胃癌组织中阳性表达率为80.3%,并与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移、血管侵犯、临床分期、TNM分期有关(P=0.049,0.030,0.034,0.025,0.003,0.031),而与患者的性别、年龄、病变部位、分化程度、神经侵犯之间无相关性.结论:H3K27me3在胃癌中高表达,并与肿瘤的侵袭转移有关,可能是胃癌患者重要的预后因子.     

miR-449a Regulates Proliferation and Chemosensitivity to Cisplatin by Targeting Cyclin D1 and BCL2 in SGC7901 Cells

Background

Recently, several miRNAs have been determined as tumor suppressors in various cancers, such as microRNA-449a. However, the exact molecular mechanisms underlying miR-449a regulated cell proliferation and chemosensitivity in gastric cancer cells have not been well documented.

Aim

The present study was designed to test whether miR-449a mediates cell proliferation and chemosensitivity in gastric cancer cells via regulating cyclin D1 and BCL2.

Methods

In vitro, the ability of cell proliferation and cell viability were measured by MTT assay; cell cycle and cell apoptosis was detected by FCM. qRT-PCR was used to measure the expression of miR-449a. Western blot and real-time PCR assays were used to detect the expression of cyclin D1 and BCL2 in gastric cancer cell line SGC7901.

Results

miR-449a expression was downregulated in gastric cancer cell line SGC7901 and human gastric cancer tissues, compared to the gastric epithelial cell line GES-1 and matched non-tumor associated tissues. Upregulation of miR-449a reduced the proliferation of SGC7901 cells. Ectopic expression of miR-449a decreased the percentage of S phase cells, increased the percentage of G1/G0 phase cells and increased the apoptosis induced by cisplatin. Moreover, miR-449a inhibited SGC7901 cells proliferation and enhanced cisplatin chemosensitivity by downregulating expression of BCL2 and cyclin D1, respectively, via directly targeting the 3′-untranslated regions of BCL2 and cyclin D1 mRNA.

Conclusions

This is the first report to provide evidence that miR-449a could modulate cell cycle and apoptosis through regulating cyclin D1 and BCL2 expression in SGC7901 cells.     

RNAi‐mediated silencing of ezrin gene reverses malignant behavior of human gastric cancer cell line SGC‐7901

OBJECTIVE: To investigate the effects of ezrin targeting gene of RNA interference (RNAi) on human gastric cancer cell line SGC‐7901 in vitro. METHODS: The highly metastatic human gastric cancer cell line SGC‐7901 transfected with a small interfering (siRNA) lentivirus vector was selected for this research study. Expressions of ezrin mRNA and ezrin protein in the SGC‐7901 cells were detected using RT‐PCR and Western blot. Cell apoptosis was observed using flow cytometry. Transwell invasion and the cell adhesion test were used to verify the effect of RNAi on ezrin expression in the human gastric cancer cell line SGC‐7901 in vitro. RESULTS: Ezrin gene targeting via a RNAi‐mediated lentivirus vector had obvious inhibitory effects on ezrin expression in the human gastric cancer cell line SGC‐7901. The results of the RT‐PCR show the obvious inhibition of ezrin mRNA expression in Eai and Ebi groups (0.22 ± 0.01 vs 0.95 ± 0.04, P < 0.05; 0.31 ± 0.01 vs. 0.95 ± 0.04, P < 0.05). Western blot analysis revealed a 72.35 ± 3.74% reduction of the ezrin protein level after interference with the ezrin targeting gene. Moreover, the inhibition of ezrin expression clearly inhibited SGC‐7901 cell migration and invasion, and improved cell adhesion as well as increased sensitivity to camptothecin‐induced apoptosis. CONCLUSION: Ezrin gene targeting by RNAi can inhibit the metastatic growth and migration of SGC‐7901 human gastric cancer cells.