约氏疟原虫约氏亚种的卵囊、成孢子细胞和子孢子扫描电镜观察(摘要)

<正> 本研究应用扫描电镜初次对约氏疟原虫约氏亚种(Plasmodium yoelii yoelii)的卵囊、成孢子细胞及子孢子的表面形态构造进行了详细观察,为对疟原虫蚊期生物学及抗疟药作用机理的研究提供了参考资料。     

疟原虫蚊期配子生殖及其生物学特性

<正> 为了防治疟疾,国内外已开展了疟原虫红内期、红外期和蚊期发育的体外培养及其生物学特性的研究。有关疟原虫(鸡疟原虫、鼠疟原虫、猴疟原虫及人间日、恶性疟原虫)蚊期早期发育——配子生殖的生物学特性已有不少的报道,现简要综述如下。 1 配子生殖各发育阶段的形态学 1.1 雄配子(microgamete) 游离的雄配子体呈细丝状,弯曲柔和。核为数块大小不等的染色质粒所组成,多呈念珠状,排列于中央,核所在处体膨大。在雄配子顶端常有一个红色点状的染色质粒。光镜下观察鼠疟原虫、间日疟原虫等,多数雄配子一端稍尖,一端稍纯。Sinden用扫描电镜观察鼠疟原虫(Pla-smodium yoelii nigeriensis))指出60％     

约氏疟原虫约氏亚种在斯氏按蚊体内发育及三种按蚊敏感性的观察

约氏疟原虫约氏亚种(Plasmodium yoelii yoelii)为国内外用于疟疾研究的较常见的一种实验动物疟原虫。但对其在蚊媒宿主体内的发育过程,迄今尚未见系统研究的资料,本文首次报道该种疟原虫在斯氏按蚊(Anopheles stephensi)体内发育过程,对其各发育阶段所出现的时间及形态特征作了较详细的描述;同时,对国内的大劣按蚊(A.duris)和中华按蚊(A.hyrcanus sinensis)与斯氏按蚊对该种疟原虫的敏感性作了初步比较。     

基于CRISPR/Cas9的PALM基因敲除约氏疟原单克隆虫株的构建

目的：基于CRISPR/Cas9技术构建并鉴定Plasmodium yoelii 17XNL PALM基因敲除单克隆虫株。方法：根据PlasmoDB数据库中的约氏疟原虫P.yoelii 17XNL PALM基因序列信息,设计引物与sgRNA。PCR扩增左、右同源臂,将同源臂和sgRNA与载体pYCm-golden-blue连接,构建用于基因敲除的CRISPR工具质粒pYCm-PALM KO。pYCm-PALM KO CRISPR质粒电转染至P.yoelii 17XNL裂殖体,尾静脉注射感染小鼠,24 h后采血查获疟原虫后,给予小鼠6 mg/mL乙胺嘧啶喂水进行药物压力筛选基因敲除疟原虫。此后每2天鼠尾采血涂片镜检疟原虫,喂药8 d时提取疟原虫基因组DNA进行PCR鉴定,最终经测序确定是否发生PALM基因敲除。将已证实存在PALM基因敲除疟原虫的鼠血采用有限稀释法接种小鼠,8 d后采血镜检疟原虫,PCR鉴定,筛选获取单克隆虫株。将获取的PALM基因敲除的单克隆虫株和P.yoelii 17XNL各接种至6只昆明小鼠体内,每只接种1×10⁵感染疟原虫的红细胞(iRBC)...     

约氏疟原虫红外期相关蛋白识别及质谱分析

目的对混和于宿主蛋白的约氏疟原虫红外期蛋白进行初步研究。方法制备针对疟原虫唾液腺子孢子的免疫血清,通过免疫印迹识别肝细胞内疟原虫裂殖体的相关蛋白,并对识别的蛋白进行肽指纹图谱分析。结果通过免疫印迹成功地识别了疟原虫相关的蛋白,经MALDI-TOF-MS获得肽指纹图谱,以Mascot软件分析并在疟原虫蛋白数据库中检索到了相匹配的多肽。结论应用免疫印迹与肽指纹图谱相结合的方法,可以对存在于复杂混和物中的红外期疟原虫蛋白进行初步分析。     

用DEAE纤维素粉柱清除疟原虫感染血中白细胞

随着对疟原虫生化代谢体外研究的日益增多,清除感染血中白细胞以提高结果的可靠性问题已引起越来越广泛的重视。我们通过借鉴同行的报道,摸索出了一种简便有效的方法。 1 方法 疟原虫(P.yoelii,yoelii,By265株)感染血中白细胞的清除采用纤维素粉柱过滤法加以改进,具体步骤如下: 取一直径为0.5cm之层析柱,将出口用少许脱脂棉堵塞以防漏出,然后将DEAE纤维素粉(DE 11型,     

人胚肺细胞系ELu8801的建立、生物学特性观察及初步应用

人胚胎肺细胞是一类用途广泛的二倍体细胞。八十年代初Hollingdale等发现其可作为伯氏鼠疟原虫(Plasmodiumberghei,P.b)红外期发育的适宜宿主细胞,在体外培养中支持P.b红外期发育成熟,从而开辟了它的新用途。我们在进行疟原虫红外期体外培养研究中,自建了人胚肺细胞系ELu8801,并对其生物学特性进行了观察。     

毫菊氯仿提取物对约氏疟原虫红外期的效应

从Wistar株大白鼠尾静脉注射子孢子后2h及16h，腹腔内注射毫菊氯仿提取物70mg／kg两次，42h时肝内红外期疟原虫数量明显减少，其形态大小、成熟度均受到影响，结果提示是菊氯仿提取物对肝内红外期疟原虫发育有明显抑制作用。     

疟疾疫苗

疟原虫生活史相当复杂,根据疟原虫与宿主的相互关系,一般将疟疾疫苗分成4种类型:子孢子疫苗(抗感染疫苗)、肝期疫苗(红外期疫苗)、无性血液期疫苗(红内期疫苗及裂殖子疫苗)和有性期疫苗(配子疫苗、传播阻断疫苗)。在感染人体的4种疟原虫中,以恶性疟危害最为严重,研究进展也最快。     

疟原虫子孢子侵入肝细胞的机制

疟原虫生活史复杂。完成整个生活史必颓涉及无脊椎动物及脊椎动物2个宿主，而在脊椎动物体内又有红内期与红外期之分。自Shortt和Cloinham(1948)在恒河猴的肝脏中发现食蟹猴疟原虫(Plasmodium cynomolgi)的红外期裂殖体以来，人们相继先后发现啮齿类，猴及人疟原虫的子孢子进入宿主的血循环后，主要滞留于宿主的肝脏中，     

肿瘤坏死因子对鼠疟感染过程的影响

已报道TNF对疟原虫有杀伤作用,此作用不但可因虫种不同而异,且可因使用时间不同而发生质的变化。为了研究TNF能否在疟疾的预防或治疗方面起一定作用,本文以重组肿瘤坏死因子(rTNF)对感染致死性约氏疟原虫(Plasmodium yoelii)的小鼠作不同时间的给药观察。脂多糖(LPS)可以刺激机     

芜荑抗疟作用实验研究：一,对疟原虫配子体的效应

在抗疟中药研究中发现芜荑具有抗疟作用,通过体内和体外试验证实其亲脂性提取物丙(C)是抗疟有效部位。获得国家自然科学基金会资助后,又进一步观察了对耐药疟原虫株、疟原虫配子体、红内期疟原虫及红外期疟原虫的效应。本文先报道对耐药疟原虫株的效应,其余内容将另文陆续报告。 1 材料及方法 1.1 实验用药:芜荑提取到亲脂性提取物丙(C)后,再用薄层及拄层层析进一     

恶性疟多表位疫苗在鼠疟的保护性试验

为寻找恶性疟原虫基因工程多表位疫苗保护性评价的模型动物,利用鼠约氏疟原虫（Plasmodium　yoelii）及伯氏疟原虫小鼠（Phasmodium　bergher）模型对本实验室构建的恶性疟原虫（Plasmodium　falciparum）多表位基因工程候选疫苗进行了体内保护性及免疫模式试验。结果在约氏疟原虫,先用该疫苗基因的大肠杆菌表达蛋白免疫、后用含同一基因的重组痘苗病毒加强免疫组与野生型痘苗病毒免疫组及空白对照相比,小鼠的死亡时间延长（P<0.01）。结果初步显示,约氏疟原虫鼠模可用作该基因工程多表位恶性疟原虫候选疫苗的保护性评价。     

两类(分裂的与不分裂的)红外期间日疟原虫的体外培养

<正> 虽然 Mazier 等用人体肝细胞在体外已初步成功地培养了间日疟原虫红外期裂殖体,但未观察到裂殖子或休眠子。本文作者利用人体肝癌细胞(HePG2-A16)体外培养间日疟原虫红外期成功,并观察到在 HepG2-A16细胞中疟原虫分化成两种类型:一种有分裂活性释放出裂殖子,另一种无分裂活性,作者认为是休眠子。     

约氏疟原虫动力素蛋白(PyDyn)的基因克隆及其结构域的免疫特性

目的 分离、克隆约氏疟原虫动力素蛋白(Plasmodium yoelii dynamin-like proteon,PyDyn)基因,并用其在原核表达的蛋白结构域产物做候选疫苗,研究其免疫保护性。方法 应用约氏疟原虫基因组数据库,设计特异引物,用RT—PCR法从约氏疟原虫红内期mRNA扩增PyDyn基因编码区;分析其序列特性;原核表达约氏疟原虫动力素结构域蛋白、IPA分析其免疫原性。结果 从鼠约氏疟原虫mRNA扩增的PyDyn基因编码区是一个全长为2433bp的cDNA克隆,编码811个氨基酸的蛋白肤链,具有典型的动力素蛋白家族的结构特性。该基因GeneBank登录号为AF458071。IFA表明该虫源性结构蛋白(PyDyn)的第1、3、5结构域的抗血清可以识别约氏疟原虫感染的红细胞。结论 经分离、克隆和表达的新PyDyn有望成为疟疾疫苗的候选抗原分子。     

约氏疟原虫红外期发育相关基因的研究

目的 寻找约氏疟原虫红外期发育相关基因,进行序列分析并推测其功能.方法 分别提取约氏疟原虫感染大鼠(IL)和正常大鼠(UL)肝脏总RNA,根据疟原虫基因A T含量高(＞70%)的特点,设计可选择性扩增约氏疟原虫基因的G C含量为40%的引物,采用差异显示PCR(differential display RT-PCR,DD-PCR)技术进行扩增,筛选差异片段,经TA克隆后测序并进行序列分析.结果 找到6个与约氏疟原虫红外期发育相关基因(PyHs4、PyHs5、PyHs6、PyHs7、PyHs8、PyHs9);其中PyHs4与约氏疟原虫乙酰葡萄糖胺磷酸变位酶(phosphoacetylglucosamine mutase,AGM)具有相似性,PyHs5与约氏疟原虫红细胞膜蛋白3(erythrocyte membrance protein,PyHs5)具有同源性,PyHs6、PyHs7、PyHs8、PyHs9为功能未知基因.结论 应用DD-PCR技术成功扩增了与约氏疟原虫红外期发育相关基因,为进一步的重组表达进行功能和疫苗研究奠定基础.     

抗鼠疟iRNA体外传递疟原虫抗原特异性白细胞粘附抑制反应

疟疾免疫是一个复杂而重要的问题,其中细胞免疫的作用正受到越来越多的重视。免疫核糖核酸(iRNA)能够传递特异性免疫反应,并己开始用于某些疾病的预防和治疗。故本实验制备了抗约氏疟原虫(Plasmodium yoelii yoelii)iRNA,通过白细胞粘附抑制(LAI)试验,观察其体外传递特异性细胞免疫反应的效应,以期将iRNA用于疟疾免疫机理的探讨和实际应用。     

用死卡介苗保护小白鼠防止柏氏鼠疟原虫(P.berghei)感染

用卡介苗保护动物防止感染寄生原虫,如巴贝斯虫(Babesia)、弓浆虫(Toxopl-asma gondii)和锥虫(Frypanosoma)等曾先后有报告。Clark等(1976)用活卡介苗静脉接种小白鼠以保护小白鼠不感染柏氏鼠疟原虫约氏亚种(P.berghei yoelii)和芬氏疟原虫(P.vinckei)获得成功。1978年我们用死卡介苗经皮下、皮内不同途径接种小白鼠,然后用柏氏鼠疟原虫攻击,观察小白鼠能否受到保护。     

疟疾防治药物的研究——Ⅺ,2,4-二氨基-6-(N-取代-对氯苄氨基)喹唑啉衍生物的合成及基抗疟作用

合成2,4-二氨基-6-(N-取代-对氯苄氨基)喹唑啉衍生物33个,经伯氏鼠疟原虫(plasmodium berghei)抑制性治疗筛选,剂量20mg/kg×3d,有10个化合物(1,2,5～8,14,20,21,26)抑制率在90％以上。经约氏鼠疟原虫(P.yoelii)斯氏按蚊系统的病因性预防筛选,剂量5mg/kg×3d,有26个化合物(1～12,14,20～22,24～33)使小白鼠全部得     

不同品系小鼠对约氏疟原虫—斯氏按蚊系统敏感性研究

小鼠是深受欢迎的实验动物,应抗疟药模型的需要,我们特研究了8个品系小鼠对约氏疟原虫(plasmodium yoelii yoelii)子孢子感染的敏感性。从中发现C_(57)BL/6Jax和AMS两种纯品系小鼠比较敏感。每鼠腹腔接种子孢子25000条,前种出虫率95.24%;后种为89.58%。95%总体置信限分别为88.8～100%和80.9～98.2%。两种出虫率不受鼠龄和性别限制而受子孢子接种剂量的影响。